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Maitane Arrondo
Xabier Egiluz
Andrea Muñoz
Peio Del Hoyo
*
* Presente en el intestino de los animales.
* Reservorio: Bacilos anaerobios facultativos que no
forman esporas ni contienen cápsula.
* Resistente a ambientes poco favorables para el
crecimiento de otras bacterias.
* Vías de transmisión: A través del consumo de alimentos
contaminados con dicha bacteria, vertical, zoonótico,
nosocomial.
* Alimentos a considerar: leches no pasteurizadas,
vegetales crudos…
* Produce la enfermedad listeriosis.
*
* OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA:
1.Identificar la presencia de Listeria monocytogenes en un
alimento.
2.Recuento de mesófilos aerobios totales.
3.Aislar la Listeria monocytogenes en un alimento.
4.Realizar diferentes pruebas bioquímicas para la
confirmación de las colonias.
* MATERIALES:
1.Autoclave
2.Tubos de ensayo con tapón
3.Gradilla
4.Micro pipeta
5.Puntas para micro pipeta
6.Asas de siembra drigalsky
7.Asa de siembra de platino
8.Mechero Bunsen
9.Estufa incubadora
* REACTIVOS:
•Caldo selectivo Fraser
•Placas ALOA
•Placas PCA
•Placa con inoculo de una cepa de Listeria monocytogenes
* MUESTRA:
•Zanahoria con piel
* MATERIAL:
1.Portaobjetos
2.Pipeta Pasteur
3.Asa de siembra
4.Mechero Bunsen
* REACTIVOS:
•Peróxido de hidrógeno al 3%
•Placas PCA con cultivos puros
* PROCEDIMIENTO:
1.Se toma una colonia de las placas PCA de cultivos puros y
se coloca sobre un portaobjetos.
2.Sobre ella se deja caer unas gotas de peróxido de
hidrógeno con la ayuda de una pipeta Pasteur.
3.Se detecta la formación de burbujas, si el resultado es
positivo.
* RESULTADOS:
Las tres muestras de colonias, han dado catalasa +. Se
observan burbujas de aire.
* OXIDASA:
MATERIAL:
1.Tiras Oxidasa
2.Asa de siembra
3.Mechero Bunsen
REACTIVOS:
•Placas PCA con cultivos puros
PROCEDIMIENTO:
1.Se coge una colonia de las placas PCA con cultivos puros y
con la ayuda de un asa de platino, se extiende la colonia por
la zona reactiva de la tira.
2.Se observa si la zona impregnada vira a un color azul
violeta.
* RESULTADOS:
* Las tres muestras de colonias, han dado oxidasa -. No hay
cambio de color a azul violeta.
* API:
MATERIAL:
1.Mechero Bunsen
2.Asa de platino
3.Agua destilada
4.Pipeta
5.Pro pipeta
6.Micro pipeta
7.Puntas para micro pipeta
8.Incubadora
9.Fondo y tapa de cámaras de incubación
10. Galerías
11.Hojas de resultados
REACTIVOS
•Placas PCA con cultivos puros
•API Suspensión Medium (2 ml).
•ZYM B
* PROCEDIMIENTO:
* Preparación de la galería
1.Se reúnen fondo y tapa de una cámara de incubación y con
una pipeta se reparte aproximadamente 3 ml de agua
destilada en los alveolos del fondo para crear una atmósfera
húmeda.
2.Se escribe la referencia de las muestras en el lateral de la
cámara.
3.Se saca una galería de su envase individual.
4.Se coloca la galería en la cámara de incubación.
* Preparación del inóculo
1.Se abre una ampolla de API Suspensión Medium (2 ml).
2.Con la ayuda de un asa de platino, se coge una cantidad de
masa bacteriana.
3.Se deposita dentro de la ampolla hasta realizar una
suspensión de turbidez igual a 1 de Mc Farland.
* Inoculación de la galería
1.Se reparte la suspensión bacteriana precedente en los
tubos:
a.Se llena el tubo y la cúpula del ensayo DIM
(100 μL aprox.).
b.Se llena solamente la parte del tubo de los ensayos
ESC a TAG (50 μL aprox.).
2.Se cierra la cámara de inmediato.
3.Se incuba a 37ºC durante 24h.
* Lectura de la galería
1.Se agrega una gota de reactivo ZYM B al ensayo DIM.
2.Pasados 3 minutos se leen todas las reacciones haciendo
referencia a la Tabla de Identificación de la ficha técnica.
3.Se anotan las reacciones +/- en la hoja de resultados.
* Interpretación
* La interpretación se obtiene a partir del perfil numérico.
* 1.Se determina el perfil numérico: en la hoja de resultados
los test se separan en grupos de 3 y se asigna para cada uno
un valor 1, 2, 0, 4. Se suman en el inferior de cada grupo
los números que corresponden a reacciones positivas y se
obtienen 4 cifras que constituyen el perfil numérico.
MUESTRA NEGATIVO
PROBLEMA
COLONIA
VERDE
MUESTRA NEGATIVO
PROBLEMA
COLONIA
BLANCA