CITOLOGÍA

POSGRADO
III CUATRIMESTRE
ARCHIVO 1
 Primera parte: Lesiones
pavimentosas
 HPV y cáncer uterino. Presentación
 Historia: Koilocito, Papanicolaou,Koss, Meissels
 Lesiones virales: condiloma
 Núcleos virales-disqueratocitos-queratinización-idea de
ASCUS-condiloma “atípico”-problemas diagnósticos
 Displasias, CIN y SIL
 Estructura de los núcleos “CIN”
 Progresión de las lesiones. Teorías sobre el origen de
los diferentes tipos de cánceres de cuello
 Células neoplásicas. Estructuras nucleares
 Citología de SIL y carcinoma pavimentoso. Correlación
con la Histología
 Citoqueratinas en las diversas patologías. CEA y EMA
 Marcadores de proliferación: K167, AgNOR,p16,
Proteínas early de HPV del alto riesgo
 ASCUS
 Patologías Border-Line y diagnósticos diferenciales:
Metaplasia Transicional y Metaplasia Atípica
 LESIONES PRE-NEOPLÁSICAS
DE CUELLO UTERINO

Desde lesión viral (HPV) hasta lesión

intraepitelial de alto grado
 Georges
Papanicolaou (1882-
1962) describió el
método citológico
para la detección
del cáncer de cervix
uterino
 Papanicolaou GN, Traut HF: Diagnosis of uterine
cancer by the vaginal smear. NY: Commonwealth
Fund; 1943.
 Atlas of exfoliative cytology. Cambridge,
Massachusetts: Harvard University Press; 1954
 Presentación
 El cáncer de cuello uterino se desarrolla en una serie
de etapas, a partir de una lesión producida por el
HPV.
 Desde la lesión más temprana (condiloma) hasta el
cáncer (invasor), transcurre un promedio de 15
años.
 El Condiloma, que puede ser acuminado a plano, se
caracteriza por la aparición en la superficie del EPE
de células con grandes halos perinucleares,
bautizadas como Koilocitos (Del griego: “koilos” =
“cavidad”)

(Nota: Seguimos nomenclatura en inglés: HPV=VPH y

Koilocitos=Coilocitos)
Koilocitos (Citología-Papanicolaou)
 Historia del Koilocito
 1949: Ayre describió los Koilocitos. Los relacionó
con lesiones pre-malignas
 1955: Koss describió los Koilocitos como células
“displásicas”
 1976: Meisels y Fortin: Establecen el origen viral del
Koilocito: Virus del Papiloma Humano (Por analogía
con los condilomas vulvares)
 1977: Purola y Savia: Confirman los hallazgos de
Meisels

 Koss LG, Durfee GR. Unusual patterns of squamous epithelium of the uterine cervix:
cytologic and pathologic study of koilocytic atypia. Ann NY Acad Sci. 1956;63:1245.
Meisels A, Fortin R. Condylomatosis lesions of cervix and vagina, Cytologic
patterns. Acta Cytol. 1976;20:505.
 “Precancer cell-complex”-Perinuclear halo (Ayre, JE: AN
ATLAS OF CERVICAL CYTOLOGY, Chicago, Illinois, 1948)
Ayre (An Atlas of Cervical Cytology-1948)
Precancer cell-complex
Ayre (An Atlas of Cervical Cytology-1948)
Precancer cell-complex
 1978: Della Torre y Laverty demostraron viriones de
HPV en las células provenientes de condilomas
planos
 1980: Jenson detecta antígenos de cápside de HPV
en núcleos de células provenientes de condilomas

Della Torre G, Pilotti S, et al. Viral particles in cervical condylomatosis lesions. Tumori.
1978;64:459.
Laverty CR, Beoth N, Hills E, et al. Noncondylomatous wart virus infection of the
postmenopausal cervix. Pathology. 1978; 10:373.
Jenson AB, Rosenthal JD, Olson C, et al. Inmunological relatedness of papilomavirus
from different species. J Natl Cancer Inst. 1980; 64:495.
Viriones de HPV (TEM)
Inmunomarcación: proteína de cápside de HPV
HPV y cáncer cervical
 1977: zur Hausen
(Freiburg) aisló ADN de
HPV tipo 6 de verrugas
genitales
 1983: aisló ADN de HPV
tipo 16 de tumores
cervicales
 1984: aisló ADN de HPV
18 de tumores
cervicales
 (zur Hausen: Premio Nobel de
Medicina 2008)
Colposcopía de Condiloma
EPE normal
Biopsia de Condiloma de cuello uterino
Koilocitos (Extendido cervical)
SEM de Koilocito (Palaoro-Universidad de
Morón- 1988-1990)
SEM: Panorámica de 2
Detalle de la zona del Halo
koilocitos
Grupo de células infectadas por HPV. La flecha
señala un koilocito (Glutaraldehído-Pap)

↑
SEM del grupo anterior. La flecha
Señala el koilocito

→
El koilocito es un volcán (Palaoro et al (2024) ABCL
El Halo del Koilocito tiene bordes
definidos (al menos en una parte
de su perímetro)
La máxima intensidad
de coloración del
citoplasma ocurre en
´las cercanías del halo
y decrece hacia el borde
celular.

→
El Halo es más claro que
el resto de la célula
¿Qué es?
Falso Koilocito
 Características de los Núcleos
Virales (HPV)
 Agrandamiento (>3 veces el tamaño del
núcleo de una célula intermedia)
 Cromatina borrosa
 Cromatina muy fina-Algunos cromocentros-
Membrana nuclear no visible – Rupturas de
membranas nucleares
 Hipercromatismo en general
 Efecto de “doble membrana nuclear”, muy
delgada
↓

Agrandamiento nuclear
Cromatina borrosa
 Efecto de “Doble membrana”

→
Hipercromatismo
Cromatina borrosa

→
Cromatina muy fina-Algunos cromocentros-
Membrana nuclear no visible –
→

Ruptura de Membranas
Nucleares
Otras características de los cambios
por efecto de HPV

 Disqueratocitos
 Células con inclusión disqueratócica (CID)
(Palaoro LA, Szulc M, Giongrande JC, Bariandaran P: Cells with
dyskeratotic inclusions in smears from cervix uteri infected by Human
Papillomavirus.Rev Bras Cancerol 45(2): 9-14, 1999

 Gránulos de “querato-hialina”
citoplasmáticos
Disqueratocitos: su presencia es relevante
si es acompañada por otros signos virales
Célula con inclusión disqueratósica (CID)
(Extendido cervical)
Célula CID
Gránulos de Querato-Hialina
(Deben acompañarse con otros
cambios para ser interpretados
como efecto de HPV)
 La única célula patognomónica de la
infección por HPV es el KOILOCITO. El
informe citológico dirá:
“Características propias de infección
por HPV”
 Los demás cambios descriptos se
informarán como “Anomalías de tipo
viral, compatibles (o sospechosas,
según el caso) de infección por HPV”
Correlación entre nomenclaturas
 BIOLOGÍA DEL HPV:
INFECCIÓN: DESDE CÉLULA BASAL O
CÉLULA DE RESERVA (ZT Ó POR LESIÓN
PROFUNDA)
UNIÓN A PROTEOGLICANOS DE LA ECM,
Y DE ALLÍ A LA INTEGRINA Α 6 DE LA
CÉLULA BASAL→ENDOCITOSIS
 Biología del HPV:
Infección: en Stem cell (ZT ó por lesión profunda)
1) Infección aguda:
Replicación en Stem cell del ADN viral. No se expresan sus
genes (CIF).
HPV Episomal.
Mínima expresión de E6/E7.
En células diferenciadas del EPE, expresión de L1 y L2
(Cápside) y formación de viriones.
Expresión de E4: koilocitos. LSIL.
Si es LR-HPV la lesión no pasará de LSIL y regresará.
Si es HR-HPV la lesión puede progresar en un bajo número
de casos.
E4 alta
 Progresión: (HR-HPV)
Pérdida de control de CIF en Stem cells.
Expresión aumentada de E6/E7: Interferencia con pRB y p53 –
Alteración de la síntesis de centrosomas (varios centríolos)→
Aneuploidía (Inestabilidad cromosómica)
Rupturas y fallas en la copia de ADN celular sin reparación:
Alteraciones estructurales en cromosomas→Activación de
oncogenes.
Integración de HR-HPV: Máxima expresión de E6/E7→
HSIL(la aneuploidía precede a la integración)
Disminución y ausencia de expresión de L1, L2 (ausencia de
cápside) y de E4 (ausencia de koilocitos)
Selección de clones con E6/E7↑: Carcinoma
wp53 → p21

↓-
CDK

↓ +(Fosforilación de pRB)

Ciclo celular
wp53 → p21

┬ ↓-
E6 CDK

↓ +(Fosforilación de pRB)

Ciclo celular
CDK fosforila a pRB, que libera a E2F.
(Mecanismo normal)

En presencia de HR-HPV, E7 se une a

pRB, liberando a E2F.

E2F activa a genes que codifican proteínas para

síntesis de ADN (DNA polimerasa, Timidinaquinasa,
Dehidrofólico reductasa, Ciclina E,etc).
También activa a c-myc.
 Efecto de E5 sobre la ATPasa vacuolar:
 La acidificación de endosomas es inhibida por la proteína
E5 de HR HPV, al unirse a la subunidad V-ATPasa. Este
proceso lleva a la inhibición de la degradación del receptor
de EGF, que aumenta su número en la membrana.
(Oncogene 2001)
Otro efecto de E5: inhibe el transporte de MHC1 a la
superficie celular
E5 y transformación celular
 La expresión de E5 se extingue durante la
integración de HR HPV al genoma celular.
 Por lo tanto, la actividad de esta proteína en
la carcinogénesis se desarrollaría en los
estadios iniciales.
 Las células del cáncer uterino expresan gran
número de EGFR.
Acción de EGF en la progresión epitelio-mesénquima
(EMT) en células neoplásicas de cuello uterino
 Otros efectos de E6 y E7:

 E7 activa a α-Glucosidasa, produciendo reducción

de glucógeno: se aprovecha para realizar test de
Schiller.
 E6 induce expresión de la unidad de telomerasa
hTERT: promueve inmortalización de la célula
 Las modificaciones del genoma producidas por las
oncoproteínas virales no desencadenan apoptosis
por estar inactiva la p53 por efecto de E6.
Mitosis anormales
Condiloma de cuello uterino
(Hematoxilina-Eosina)
Condiloma de cuello: Hidridación positiva
Para HPV 6/11
Pasos de la Hibridación
in situ
HPV de bajo riesgo (6,11):
 Producen condilomas acuminados.
Estado físico del virus: episomal
 Se detecta Ag de Cápside
(Inmunomarcación)
 Pueden observarse viriones por TEM
 ADN viral presente
HPV de Alto riesgo:
 Producen condilomas planos (en un
principio pueden ser acuminados).
Estado físico del virus: integrado
 No se detecta Ag de cápside (o con
baja expresión)
 No se observan viriones por TEM
 ADN viral presente
 Colposcopía: Leucoplasia-Mosaicos
Mosaico de cuello uterino
Biopsia de exocervix: Condiloma - HSIL
LSIL HSIL
HSIL (Hematoxilina-Eosina)
La muestra anterior positiva para
HPV 16/18 (Hibridación in situ)
Condiloma: Hibridación in situ para HPV 16/18
HPV episomal e integrado
 30: HIS para HPV
31/33/35 episomal en
núcleos de células de
EPE de cuello uterino
(CIN 2)

 31: HIS para HPV 16/18

integrado en células de
EPE de cuello uterino
(CIN 3)
Shulzhenko N et al: Trends in Microbiology 22: 345-353,2014
Shulzhenko N et al: Trends in Microbiology 22: 345-353,2014
 Proteínas tempranas de HPV16-
Inmunomarcación-Expresión simultánea

E2 de HPV16 en LSIL E7 de HPV16 en LSIL

Ramirez, Guerra, Burger, Quintana, Díaz, Cúneo, Villacorta, Prat Gay, Camporreale, Tatti, Palaoro .Expression
of the E2 and E7-HPV16 proteins in pre-malignant and malignant lesions of the uterine cervix.
Biotech & Histochem. 2015 Jun 8:1-8.
)