UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Per , Decana de Amrica

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA
Departamento Acadmico de Bioqumica
Escuela de Farmacia y Bioquimica

Anlisis cintico de la inhibicin

enzimtica, inhibicin competitiva,
no competitiva y acompetitiva,
inhibicin irreversible, frmacos
como inhibidores, antimetabolitos
Mg. Q.F. GLORIA GORDILLO ROCHA
26 de Abril del 2016
26/04/2016

3ra clase

FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

1) Irreversibles.
2) Reversibles.
i) competitivos
ii) no competitivos
iii) acompetitivos
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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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La inhibicin es la disminucin de la
actividad enzimtica por algn agente
qumico, un ligando, a diferencia de la
desnaturalizacin, que es el cese
permanente de la actividad
enzimtica por un agente fsico o
qumico.
La inhibicin reversible est
caracterizada por un equilibrio entre
la enzima y el inhibidor, definido ste
por una constante de equilibrio que
mide la afinidad de la enzima (E) por
el inhibidor (I).
La inhibicin reversible implica que
desaparece el efecto inhibitorio si se
remueve el inhibidor, y que va a existir
inhibicin en su presencia en un grado que
depende de la concentracin del I. La
Irreversibles:
Ocurre
lo contrario,
an
inhibicin puede
apreciarse
como una
quitando
al inhibidor
sistema,
disminucin
de VMAX del
o aumento
deno
Kmse
recupera
la actividad
solamente,
o por una enzimtica.
combinacin de 4
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efectos sobre ambos.

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Caractersticas
Disminuir o bloquear la velocidad de
reaccin, unindose a la enzima.
Son especficos.
Alteran grupos importantes para la funcin
cataltica, o Alteran ligeramente la
conformacin de la enzima sin llegar a
desnaturalizarla.

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Aplicacines
Permiten determinar qu
aminocidos estn presentes en
el sitio cataltico de la enzima y
su probable rol en la catlisis.
Son el fundamento de frmacos
Proteasa del HIV formando
antivricos, antibacterianos
y un
complejo con la proteasa inhibidora
antitumorales.
ritonavir. La estructura de la protesa
se muestra como una cinta roja, azul
y amarilla. La inhibidora se muestra
como una estructura de pequeas
bolas y varillas cercana al centro.

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Mediante el uso de inhibidores

enzimticos se ha obtenido informacin
muy valiosa sobre la conformacin del
centro activo de algunas enzimas.
Ciertos metales como el plomo, mercurio
y arsnico inhiben enzimas que tienen en
su centro activo grupos SH libres.
El proceso de inhibicin enzimtica es til
para comprender los mecanismos de
farmacolgica de algunos compuestos o
medicamentos.

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 Muchas molculas de medicamentos son

inhibidores enzimticos, por lo que su
descubrimiento y mejora es un campo de
investigacin activo en la bioqumica y la
farmacologa. Un inhibidor enzimtico
medicinal es juzgado a menudo por su
especificidad (su carencia de unirse a otras
protenas) y su potencia (su constante de
disociacin, la cual indica la concentracin
necesaria para inhibir a la enzima). Una alta
especificidad y potencia asegura que el
medicamento va a tener pocos efectos
secundarios y as su toxicidad baja.
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Inhibicin reversible
La unin del inhibidor a la enzima es
temporal. Al quitar el inhibidor del medio se
recupera la actividad.
Para distinguir si la inhibicin es reversible
o no, se somete a dilisis el complejo E-I; si
la actividad no se restablece, la inhibicin es
permanente.
Los inhibidores reversibles se unen a la enzima
con interacciones no covalentes tales como los
puentes de hidrgeno, interacciones hidrofbicas y
enlaces inicos.
Los enlaces dbiles mltiples entre el inhibidor y el
sitio activo se combinan para producir una unin
fuerte y especfica. Reversibles: El complejo EI se
forma por uniones no covalentes. Puede disociar
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 Inhibicin competitiva
a. Totalmente competitiva
En la Inhibicin competitiva el sustrato (S) y el I compiten por la
enzima libre, pudiendo unirse uno o el otro, pero no ambos
simultneamente, hay una interaccin mutuamente excluyente
del S y de I con la enzima. La unin de E a I conduce a la formacin
de un complejo no productivo.

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Aspectos cinticos de la inhibicin

competitiva
Los inhibidores competitivos, al
de
unin con
el sustrato, afectan el valor de
compartir
el sitio
Km, produciendo una mayor Km aparente, es
decir, menor afinidad. Dicho de otro modo, es
necesaria una mayor cantidad de sustrato para
alcanzar Vmx/2 (mitad de la velocidad
mxima).

Por otra parte, dado que pueden ser

desplazados aumentando la concentracin
de sustrato, no afectan el valor de la Vmx, a
la que se llega a una mayor concentracin de
sustrato.
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As cuando se realizan distintos

estudios a varias concentraciones de
inhibidor, obtenemos, mediante la
representacin de dobles inversos,
distintas rectas que se cortan en el
mismo punto (para X=0), indicando
que la Vmax no se altera, pero la Km
(y
por
lo
tanto
la
afinidad)
aparentemente s, pues existen
varios puntos de corte para y=0, por
lo tanto aparentemente varias Km,
que adems van aumentando con la
concentracin del Inhibidor.

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Inhibicin no competitiva
Se unen en otro sitio
(regulacin alostrica),
cambiando la conformacin
del sitio activo, sin impedir la
unin de la enzima al
sustrato. Pueden unirse
tanto a la enzima (E-I) como
al complejo enzima-sustrato
(ES-I), formando complejos
catalticamente inactivos.

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Aspectos cinticos de la inhibicin

no
competitiva

Los inhibidores no competitivos,

al no compartir el sitio de unin
con el sustrato, no afectan el
valor de Km, dado que se unen
De
igualsitio
modo,
no pueden ser
en otro
independiente
sindesplazados
aumentando
la concentracin
afectar entonces
la afinidad. de sustrato.
Dado que no pueden ser desplazados
aumentando la concentracin de sustrato,
disminuyen el valor de la Vmx.
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Aspectos

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cinticos

de la

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Inhibicin acompetitiva
Se unen a otro sitio pero
nicamente al complejo
enzima-sustrato,
generando un complejo
catalticamente inactivo. No
se unen a la enzima libre.

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Aspectos cinticos de la inhibicin

acompetitiva

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 Inhibicin irreversible, el inhibidor no se encuentra en equilibrio

con el complejo enzima-inhibidor. Por lo tanto, no se reactiva la
enzima removiendo el inhibidor mediante dilisis, a diferencia de
lo que sucede con los inhibidores reversibles.
La inhibicin irreversible se caracteriza por un aumento
progresivo en el tiempo, llegando en ltima instancia a la
inhibicin completa, siempre que el inhibidor est en exceso con
respecto a la concentracin de enzima presente.
La efectividad del inhibidor no se expresa como una constante de
equilibrio, sino como una constante de velocidad, que determina
la fraccin de la enzima inhibida en un perodo determinado de
tiempo para una cierta concentracin de inhibidor
la inhibicin irreversible se diferencia de la reversible en la imposibilidad que presenta para
regenerar la actividad enzimtica. Esto se debe a la unin covalente que se crea entre el inhibidor y
la enzima. No necesariamente se dar esta unin en el centro activo, con unirse a un aminocido y
desconfigure el C.A. sera suficiente. El uso que se le da es:
La identificacin de la posicin relativa del C.A y de los aminocidos esenciales para la
catlisis. Lo que nos permitir elaborar un mecanismo de catlisis.
Como frmacos, insecticidas o plaguicidas.
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Inhibicin. Tipos
Inhibicin Permanente(irreversible)

Unin del inhibidor de manera irreversible por

enlaces covalentes, con la enzima provocando una
modificacin en su estructura qumica de los
residuos esenciales de los aminocidos de los
grupos ubicados en los centros de fijacin y sitio
activo. Ejemplo: el iodoacetato reconoce grupos
SH y OH y envenena la cistena.
Irrreversibles: se dan en los denominados zimgenos
o proenzimas, que son enzimas que se producen en
forma activa. Por hidrlisis parcial, se transforman en
forma activa. As sucede con las enzimas digestivas:
pepsina, tripsina y quimotripsina, que se secretan como
pepsingeno, tripsingeno y quimotripsingeno.
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Mecanismo de accin de la G3PDH

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Inhibicin irreversible por iodoacetato, bloqueo de grupo SH

en el sitio activo
de la enzima
FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I
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Emplearemos como modelo experimental la inhibicin de la

enzima xantina oxidasa por cianuro de potasio (KCN). La
xantina oxidasa (E.C. 1.2.3.2) cataliza la oxidacin de la
xantina a cido rico y la reduccin del oxgeno a perxido
de hidrgeno (H2O2) y superxido (O2.-), en proporciones
variables segn las condiciones del ensayo.

Xantina

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cido rico

FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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Inhibicin Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
qumico de la enzima, modificndola covalentemente
- Su accin no se describe por una constante de equilibrio Ki,
sino por una constante de velocidad ki:

E+I

- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los

inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuacin
del inhibidor.
- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente
txicos.
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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo
(DFP)
Acetilcolina

Acetilcolinesterasa

Acetato + Colina

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Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo
(DFP)

Acetilcolinesterasa
Tripsina
Elastasa
Fosfoglucomutasa
Cocoonasa (larvas de
gusanos de seda

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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

Malatin
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Algunos tipos de inhibidores irreversibles

1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfricos
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados
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Reactivos de grupos -SH, 1

(a) Agentes alquilantes
Yodoacetato

ICH2 COO-

SH

IH

S CH2 COO-

(b) Compuestos insaturados

E

SH

N CH2 CH3
O

N CH2 CH3

N-Etil maleimida (NEM)

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Reactivos de grupos -SH, 2

(c) Formadores de mercptidos
HOHg

SH

COO-

p-Hidroximercuribenzoato

S Hg

COO-

(d) Oxidantes
Promueven la oxidacin de dos tioles a un disulfuro

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Organofosfricos

Ser CH CH2

H3 C

OH

Ser CH CH2
H3 C

CH3
CH

P O

CH
H3 C
CH3

DFP:
diisopropil
fluorofosfato

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CH3
CH

O P O
CH
H3 C
CH3

- Actan sobre enzimas sernicas

- nicamente sobre la Ser activa
- Insecticidas: Parathion, Malathion
- Inhibidores de la Acetilcolinesterasa
- Neurogases

FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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Ligandos de coordinacin de metales

Es el caso del ion cianuro, CNSe fija con gran afinidad a la sexta posicin de coordinacin
del Fe hemnico, impidiendo toda modificacin posterior.
Por ello acta sobre sistemas de Fe hemnico con la sexta
posicin de coordinacin libre, como la citocromo oxidasa,
de lo que deriva su elevadsima toxicidad

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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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Substratos suicidas (Inhibidores activados enzimticamente)

-Son inhibidores irreversibles, poco reactivos hasta que se
unen al sitio activo de un enzima especfica.
Se usan para obtener nuevos agentes farmaceuticos,
en el llamado el diseo racional de frmacos
Suelen ser muy efectivos y con pocos efectos secundarios
Se trata de molculas que se unen al centro activo de manera
especfica, igual que el substrato o los inhibidores competitivos
- Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la
molcula en una especie qumica muy reactiva que modifica
covalentemente a la enzima, inactivndola
- Tienen por tanto (a) la especificidad del inhibidor competitivo
y (b) la potencia de los inhibidores irreversibles
Ejemplo: difluorometilornitina para tratar la enfermedad
del sueo africana (tripanosomiasis africana)
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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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Modo de accin de los inhibidores suicidas

E+I

EI

EI*

E + I*

1. El inhibidor se fija a la enzima igual que el substrato o un

inhibidor competitivo convencional
2. La accin cataltica de la enzima convierte al inhibidor I
en una especie altamente reactiva I*
3. I* modifica covalentemente a la enzima, inactivndola
de forma definitiva al igual que un inhibidor irreversible.
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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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Ejemplos de inhibidores suicidas, 1

- Sistema de la -lactamasa bacteriana
La utilizacin masiva de antibiticos -lactmicos (penicilinas,
sus derivados semisintticos y cefalosporinas) ha conducido a
la aparicin de resistencias a los mismos.
Los microorganismos resistentes a estos antibiticos lo son por
producir una enzima, la -lactamasa, que inactiva a los antibiticos -lactmicos.

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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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Penicilina (activa)
S

R CO NH

CH3
CH3

N
O

COO-

-Lactamasa

R CO NH
O C HN
O26/04/2016

CH3
CH3

COO-

c.peniciloico (inactivo)
FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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Muy a menudo los preparados de penicilinas o penicilinas

semisintticas se formulan aadiendo un inhibidor suicida
de la -lactamasa, el cido clavulnico
O
C

N
O

CH2OH
H

-Lactamasa

O
O-

C
HN

COO

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H
COO-

c.clavulnico

CH CH2
Ser

CH2OH

HN

CH2OH
H

COOFARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

Esta molcula
reacciona con la
serina activa de la
-lactamasa,
produciendo su
inactivacin
38

Ejemplos de inhibidores suicidas, 2

- Sistema de la monoamino oxidasa (MAO) cerebral
Los estados depresivos, en general, estn relacionados con un
descenso en la concentracin de neurotransmisores adrenrgicos
(dopamina, noradrenalina, etc.) en determinadas regiones del
cerebro.
Una de las enzimas encargadas de la degradacin de estos
neurotransmisores es la monoamino oxidasa (EC 1.4.3.4).
Por tanto, la inhibicin de la monoamino oxidasa se emplea como
teraputica de los estados depresivos. Se han desarrollado muchos
inhibidores suicidas de la MAO
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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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HO
HO

Noradrenalina
CHOH CH2 NH2

O2 + H 2 O

Monoamino
oxidasa
NH3 + H2O2
HO
HO

CHOH CHO

La MAO es una flavoprotena:

tiene un grupo prosttico
flavnico (FAD) fundamental
para la catlisis. Los inhibidores
suicidas de la MAO inactivan
al cofactor FAD.

Dihidroxifenilglicol
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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

40

O
H 3C

E S H 2C

N,N dimetil
propargilamina
(pargilina)

NH
N

Flavina

HC C CH N

CH3

H3C

Inhibicin suicida de la
MAO mediante Pargilina

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CH3

N+

CH CH

H3C

CH

H 3C

E S H 2C

Flavina modificada

FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

O
NH
NH

R
41

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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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Bioqumica Mathews, van Holde y Ahern. Addison Wesley 2002

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FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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INHIBIDORES: FARMACOS
Estos compuestos entre ellos muchos frmacos prolongan la
accin farmacolgica de las drogas y aumentan su vida
media en el plasma.
Las enzimas biotransformantes poseen baja especificidad de
sustrato
Ellas pueden metabolizar varios sustratos con distinta
eficiencia y ser inhibidas por diversos compuestos entre
ellos los frmacos, de acuerdo a las leyes de la inhibicin de
enzimas.

26/04/2016

FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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INHIBICION COMPETIVA

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El agente inhibidor de la
actividad
enzimtica en este caso puede ser:
Sustrato
de
la
enzima
(morfina
y
diazepam).
Compuesto que se une al sitio activo del
sustrato pero no es metabolizado por la
enzima (anfetamina no es metabolizada por
la MAO pero inhibe el metabolismo a travs
de la MAO de tiramina).
Este tipo de inhibicin puede ser superada,
aumentando la concentracin del sustrato.
La estatinas son ejemplos de inhibidores
competitivos. Son anlogos estructurales
del sustrato de la HMG Co A reductasa
FARMACIA Y BIOQUMICA
- UNMSM.
BIOQUMICA I del
45
enzima reguladora
de la
sntesis

 El plomo es un ejemplo de inhibidor

no competitivo. Forma enlaces
covalente con los grupos
sulfhdrilos de la cisteina en las
protenas. Reacciona con la
ferroquelatasa, enzima que
incorpora hierro a la sntesis del
grupo hemo de la hemoglobina y
otras hemoprotenas.

26/04/2016

FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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CONSECUENCIAS CLNICAS DE LA INHIBICIN METABLICA

La inhibicin provoca un aumento de la vida media del

frmaco o del compuesto endgeno cuyo metabolismo es
inhibido, lo cual conlleva a un aumento de la actividad
farmacolgica.
La
administracin
de
frmacos
inhibidores
del
metabolismo de compuestos endgenos, produce las
respuestas farmacolgicas correspondientes a:
La acumulacin de tales compuestos endgenos,
como es lo que ocurre con los inhibidores de la
acetilcolinesterasa, la MAO y la dopadescarboxilasa.
La falta de formacin del producto final: inhibidores
26/04/2016
FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I
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de la xantina-oxidasa.

 5 de las 10 mas utilizadas drogas

medicamentosas son inhibidores
enzimticos.
La penicilina y la amoxicilina inhiben la
sntesis de las paredes bacterianas.(Beta
lactamasa)
El captopril, enalapril y el lisinopril
(hipotensores) inhiben la enzima
convertidora de angiotensina impidiendo la
formacin de angiotensina II a partir de la
angiotensina I.
26/04/2016

FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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1 Cuales son las principales formas de

inhibicin enzimtica? Describa cada
una de ellas con grficos y ecuaciones.
2 Que caractersticas tendra un
inhibidor competitivo? Y uno nocompetitivo?
3 Mencione la importancia biolgica
del fenmeno de la inhibicin
enzimtica.
4 Esquematice un protocolo para
evaluar
a) la presencia de un inhibidor
FARMACIA Y BIOQUMICA - UNMSM. BIOQUMICA I

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