MEDIOS DE CULTIVOS

“Una regla de oro en la microbiología”

¿Cómo se cultivan las bacterias? Las bacterias pueden ser cultivadas en

laboratorios gracias a cultivos bacterianos.
 Un cultivo de bacterias es una técnica que aprovecha la capacidad de división
celular que tienen las bacterias para obtener gran cantidad de bacterias a partir de
unas pocas.
 Un medio de cultivo es una mezcla de nutrientes, azúcares, proteínas, sales,
vitaminas, agua, etc.*j
¿Qué son los medios de cultuvivos? Son
herramientas fundamentales para el crecimiento y
la identificación de microorganismos. Estos
proporcionan los nutrientes necesarios para
el crecimiento, la diferenciación y la
identificación de bacterias, hongos y virus, lo que
los convierte en una pieza fundamental para la microbiología.
Los medios de cultivos sólidos son aquellos en los que los nutrientes están formados
de forma sólida generalmente en forma de agar. El agar es una sustancia
gelatinas que utilizan para solidificar los medios de cultivo. Los medios cultivos
sólidos son utilizados para la observación macroscópica características de los
microorganismos como la forma el color y las colonias.

Las placas petri son cajas de vidrio o cristal, utilizado para los nutrientes del
medio solido.
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de
microorganismo es la observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y
el crecimiento de los microorganismos es el cultivo.

¿Qué es agar? Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de
cultivo. En el agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se
obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepción
de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-
2% se licua alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de
su grado de pureza.
Clasificación de los medios de cultivo basándose en su composición química
A. Medios sintéticos o químicamente definidos: Lleva fuente de carbono, fuentes de
nitrógeno, sales que suplan iones (P,K,Fe,Ca), otros elementos como estimuladores de

crecimiento pero siempre a concentraciones conocidas.

Son útiles para cultivar fotoautotrófos como sea cianobacterias y protistas

fotosintéticos.

B. Medios complejos o de composición indefinida: estos medios llevan ingredientes como

extracto de levadura, peptona, infusión de cerebro, extracto de carne, etc. Contienen

nutrientes en abundancia pero sin saber qué con exactitud la composición cualitativa ni

cuantitativa de estos nutrientes.

Se cultivan microorganismo exigente con requerimiento nutricional complejo.

C. Medios enriquecimiento: son medios complejos con aditivos adicionales para favorecer el
crecimiento de determinados microorganismo (particularmente heterótrofos exigentes).

D. Medios selectivos: son aquellos que favorecen por su diseño el crecimiento específico de
un microorganismo particular o grupo de microorganismo. Es de gran utilidad aislamiento

de microorganismo a partir de una población microbiana mixta.

 E. Medios diferenciales: Son aquellos destinados a facilitar la discriminación de

microorganismo de una mezcla por sus propiedad diferenciales a un crecimiento en dichos

medios.

Agar sangre diferencia a los hemolíticos de no hemolíticos; McConkey diferencia

lactosa + de lactosa -.

F. Medios de mantenimiento: Suele ser distintos a los de crecimiento óptimo ya que el

crecimiento rápido y prolífico suele ocasionar muerte rapida de las células.

Puntos importantes para la preparación de los medios de cultivos artificiales

 Preparación
 Esterilización
 Autoclave
 Tindalización
 Filtración
 Luz UV
 Estufa de 180 c
 Óxido de etileno
 Adición de sustancias termolábiles
 Vertido en placas de Petri (medidos solidos) o tubos (medios líquidos o medios sólidos).
Condiciones para el desarrollo de patógenos
Medios de cultivos deben ser adecuados para el crecimiento de patógenos
 Exigentes (ídem + sustancias complejas sangre, suero, huevo, patata, factor x, factor v,
vitaminas)
 No exigentes (C,N,S,P) sales tampón.
Las condiciones ambientales deben ser adaptas para el desarrollo de los microrganismos, puntos
importantes en el desarrollo son: atmósfera adecuada, temperatura adecuada, humedad, tiempo
incubación, pH, ausencia de factores inhibidores o antagonistas del crecimiento.
MEDIOS DE CULTIVOS
(NO SELECTIVO)
AGAR NUTRITIVO: Son utilizados para un propósito
general, para el aislamiento de microorganismos
poco exigentes en que se refieren al
requerimiento de nutrientes. Su uso está descripto en procedimientos para el análisis de
alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
La pluripeptona y el extracto de carne constituye la fuente de carbono, nitrógeno y aportan
nutrientes para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico y el agar es el agente solidificante.
DATO IMPORTANTE
Puede ser suplementado con sangre ovina desfibrinada estéril para favorecer el crecimiento de
microorganismos exigentes en sus requerimientos nutricionales y permite una clara visualización de
las reacciones de hemólisis.
Característica del medio
 Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogéneo, libre
deslizamiento.
 Medio de cultivo preparado: color ámbar claro ligeramente opalescente.
 Suplementado con sangre: color rojo cereza.
Preparación del medio agar nutritivo
 Suspender 31 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos.
Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 o 2 minutos hasta su disolución total. Distribuir en
recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
 Preparación de Agar Sangre: agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estéril (Britasheep)
al medio esterilizado, fundido y enfriado a 45-50 ºC. Homogeneizar y distribuir en placas de
Petri estériles.
(MEDIO ENRIQUECIDO, NO SELECTIVO Y DIFERENCIAL)
La identificación de patógenos clínicamente relevantes como Streptococcus pyogenes (β-
hemolítico) o Streptococcus pneumoniae (α-hemolítico).
BASE DE AGAR SANGRE: Son medios para propósitos generales, para el aislamiento y cultivos de
numerosos microrganismos. Puede ser suplementado con sangre ovina desfibrinada estéril para
favorecer el crecimiento de microorganismos exigentes en sus requerimientos nutricionales y permite
una clara visualización de las reacciones de hemólisis.
Este medio también puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate.
 La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que
permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos
nutricionalmente exigentes.
 El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
 El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes
para el crecimiento bacteriano, permite detectar hemólisis.
Preparación de Agar Sangre: agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estéril (Britasheep) al
medio esterilizado, fundido y enfriado a 45-50 ºC. Homogeneizar y distribuir en placas de Petri
estériles.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Observar las características de las colonias.
Para el medio de cultivo conteniendo sangre, observar las reacciones de hemólisis:
 Hemólisis alfa: Lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso
alrededor de la colonia en estudio. Es debido a la oxidación de la hemoglobina a
metahemoglobina (compuesto de color verdoso) por el peróxido de hidrógeno generado por
los microorganismos.
 Hemólisis beta: Lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante
alrededor de la colonia en estudio.
 Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El medio de cultivo no presenta
modificaciones de color y aspecto alrededor de la colonia en estudio.
CARACTERÍSTICAS DEL MEDIO
MEDIO DE PREPARADO: ÁMBAR
Suplementado con sangre: color rojo cereza. 5% de sangre.

E.M.B AGAR (Eosin azul de metilenio) SELECTIVO Y DIFERENCIAL

Es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y
escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae.
FUNDAMENTO
Es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano. La diferenciación
entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de
hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto
inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas. El agar es el agente
solidificante. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo
metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o
rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. También, pueden crecer especies de
Candida y se observan como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite
el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias
puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas se
observan como colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean
capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno
a sus membranas. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella
y Shigella.
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Medio de cultivo deshidratado: color púrpura,
homogéneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color púrpura
vinoso.
Nota: La esterilización del medio de cultivo
reduce el azul de metileno al color naranja. El
color púrpura se restaura por agitación. La
presencia de un precipitado en el medio
esterilizado es normal y no debe ser removido,
ya que es parte esencial del mismo.
INTERPRETACIÓN DE LOS
RESULTADOS
 Microorganismos fermentadores de
lactosa y / o sacarosa: colonias de color
negro azulado o amarronado. Pueden
tener centro oscuro y brillo metálico.
 Microorganismos no fermentadores de
lactosa y sacarosa: colonias del color
del medio, incoloras.
Mac Conkey
agar

(DIFERENCIAL Y SELECTIVO)
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios
y anaerobios facultativos a partir de muestras clínicas, aguas y alimentos. Todas las especies de la
familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
FUNDAMENTO
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano,
la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta
son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. El
agar es el agente solidificante. Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la
colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las
colonias, y la precipitación de las sales biliares. Los microorganismos no fermentadores de
lactosa producen colonias incoloras.
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
 Medio de cultivo deshidratado: color beige rosado, homogéneo, libre deslizamiento.
 Medio de cultivo preparado: color rojizo púrpura
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
 Microorganismos fermentadores de lactosa:
colonias rosadasrojizas. Puede observarse halo
de precipitación biliar.
 Microorganismos no fermentadores de lactosa:
colonias del color del medio, incoloras.
Estafilococo 110 Agar
Agar Estafilococos No. 110 es un medio selectivo y diferencial para el
cultivo y aislamiento de Staphylococcus. En base a la producción de
pigmentos, la fermentación de manitol y hidrolisis de gelatina, a parti de
alimentos o otras muestras.
Fundamento
Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicación
alimentaria, y para su aislamiento, pueden usarse distintos medios sólidos
selectivos: Baird Parker Medio, Manitol Salado Agar, o Estafilococo
Medio 110.
En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la tripteina aportan los nutrientes para el desarrollo
de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La lactosa y el manitol son
los hidratos de carbono fermentables. El cloruro de sodio, se encuentra en alta concentración, para
inhibir el desarrollo de la flora acompañante excepto Staphylococcus spp., lograndose asi un medio
selectivo para el desarrollo de estos microorganismos. Las ventajas de este medio por sobre los
otros mencionados anteriormente, es que permite, en la misma placa, obtener pruebas de
identificación presuntiva de especie como ser: desarrollo de pigmentos, fermentación de manitol
e hidrolisis de la gelatina.
Observar las características de las colonias y realizar las pruebas de identificación de
microorganismos.
 Fermentación de manitol: agregar unas gotas de púrpura de bromocresol a las zonas donde se
encuentran las colonias sospechosas y en una zona de la placa donde no hay desarrollo
bacteriano. Comparar el color desarrollado entre estas dos zonas.
 Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento bacteriano.
El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio.
 Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento bacteriano y la
zona sin inocular.
 Hidrólisis de la gelatina: cubrir la placa 5 ml de una solución saturada de sulfato de amonio y
colocar en estufa, a 35-37 °C, en aerobiosis durante 10 minutos.
Positiva: halo transparente alrededor de las colonias.
Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las colonias.
Caracteristicas del medio: preparado es ámbar claro, opalescentes con precipitado.
SAL Y MANITOL AGAR
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el
aislamiento y diferenciación de estafilococos a partir de
diversas muestras.
FUNDAMENTO
En el medio de cultivo, el extracto de carne, la peptona de
carne y la tripteína, constituyen la fuente de carbono,
nitrógeno, vitaminas y minerales que promueven el
desarrollo microbiano. El manitol es el hidrato de carbono
fermentable. El cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el
desarrollo de la flora acompañante, el rojo fenol es el indicador de pH y el agar es el agente solidificante. Se
trata de un medio altamente selectivo por la alta concentración salina y diferencial debido a la capacidad de
fermentación del manitol por los microorganismos. Las bacterias que crecen en un medio con alta
concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira
el indicador de pH del color rojo al amarillo. Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y
pueden o no fermentar el manitol. Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan
como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color. Los estafilococos que no fermentan el manitol,
se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o púrpura. Este medio de cultivo es
recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos,
productos farmacéuticos, cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria. También puede utilizarse
para el cultivo de especies halófilas de Vibrio si no se dispone de TCBS Medio ( ) aunque algunas especies
pueden no desarrollar.
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
 Medio de cultivo deshidratado: color beige rosado, homogéneo, libre deslizamiento.
 Medio de cultivo preparado: color rojo.
RESULTADOS
o Microorganismos fermentadores de manitol:
colonias de color amarillo rodeadas o no de un
halo amarillo.
o Microorganismos no fermentadores de manitol:
colonias del color del medio, rojas rodeadas o
no de halo rojizo-púrpura.
SALMONELA SHIGELLA AGAR
Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el
aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de
Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros
materiales en los cuales se sospeche su presencia.
FUNDAMENTO
En el medio de cultivo la pluripeptona y el extracto de
carne aportan los nutrientes para el desarrollo microbiano.
Las sales biliares y el verde brillante inhiben el desarrollo
de una amplia variedad de bacterias Gram positivas, de la
mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. La lactosa es el hidrato de carbono
fermentable. El tiosulfato de sodio permite la formación de SH2 que se evidencia por la formación de
sulfuro de hierro. El rojo neutro es el indicador de pH y el agar es el agente solidificante. Los pocos
microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar
al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella,
Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen adecuadamente en el medio
de cultivo, y producen colonias transparentes. La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como
colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Medio de cultivo deshidratado: color rosado, homogéneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color naranja ligeramente opalescente.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
o Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias rosadas o rojizas.
o Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio, incoloras.
o Microorganismos productores de SH2 : colonias con centro negro
 o MULLER HINT AGAR

Medio de cultivo nutritivo no selectivo que promueve el desarrollo microbiano.

Por su composición, ha sido recomendado por el Clinical and Laboratory Standards Institute
(CLSI) para ser utilizado sólido, debido a sus múltiples ventajas y a una gran cantidad de
presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en
inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, -la mayoría de los
patógenos microbianos crece satisfactoriamente. Cuando se suplementa con sangre de
carnero al 5%, permite realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de
estreptococos. También, con el
agregado de sangre puede
utilizarse para el cultivo y
aislamiento de microorganismos
nutricionalmente exigentes.

Caracteristicas del medio

 Medio de cultivo color ámbar claro.
 En caso de ser suplementado con sangre
ovina: color rojo cereza

RESULTADOS
Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar signicativamente y si las bacterias no crecen
adecuadamente, las zonas de inhibición en las pruebas de difusión son generalmente másgrandes, quedan
fuera de los límites de control de calidad y pueden llevar a resultados erróneos.
 • Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el efecto
inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo así zonas de inhibición mas pequeñas y
por lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de timidina del lote de agar
Mueller Hinton, se utiliza la cepa de control de calidad: Enterococcus faecalis ATCC 29212 frente a
discos de TMS. En un medio satisfactorio, se produce una zona clara de inhibición del desarrollo de
diámetro 20 mm o mayor.
• Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el Agar Mueller Hinton es que las variaciones en
cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los resultados con tetraciclina,
polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas de Pseudomonas spp. Por tal motivo, se deben
cumplir los límites de control de calidad publicados por el CLSI.
• Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de control para evitar
datos aberrantes debido al medio de cultivo. Para aquellas cepas que no puedan crecer
satisfactoriamente en el Agar Mueller Hinton no suplementado, se nada de carnero al agar fundido y
enfriado, en concentración final al 5% (V/V).

Cerebro Corazón Infusión Agar (NO

SELECTIVO)
Medio sólido apropiado para el cultivo de bacterias y
hongos, incluyendo los de difícil desarrollo. Es un medio
muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado
desarrollo microbiano. La infusión de cerebro de
ternera, la infusión de corazón vacuno y la peptona, son
la fuente de carbono, nitrógeno, y vitaminas. La glucosa
es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico y el fosfato disódico
otorga capacidad buffer. El agar es el agente
solidificante. El agar cerebro corazón mantiene los
mismos principios que el caldo para el cultivo de
estreptococos y otras bacterias exigentes. Puede ser
suplementado con sangre ovina desfibrinada estéril o
con sangre equina desfibrinada estéril, permitiendo así el desarrollo de hongos de difícil crecimiento.
Con el agregado de 10% de sangre de caballo desfibrinada, fue utilizado para el crecimiento de
Histoplasma capsulatum y de hongos patógenos. Por tratarse de un medio que contiene glucosa, no
es un agar sangre apropiado para la observación de reacciones de hemólisis. Con el agregado de 20
Ul de Penicilina y 40 µg/ml de estreptomicina, se utiliza este medio para el aislamiento selectivo de
hongos
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
 Medio de cultivo deshidratado: color beige, homogéneo, libre deslizamiento.
 Medio de cultivo preparado: color ámbar claro.
 Suplementado con sangre: color rojo.
MEDIOS CROMOGÉNICOS (DIFERENCIALES)
Es un medio sólido diferencial que permite simultáneamente el recuento, aislado e identificación
directa de las principales bacterias productoras de infecciones del tracto urinario.
es que son mucho más específicos y diferenciales que los medios clásicos, ya que sólo la colonia (y
no el medio) se colorea del cromógeno, de modo que distintas colonias solapadas de diferentes
microorganismos se distinguen perfectamente. Los cromógenos son mucho más específicos que los
colorantes clásicos.
Detección de actividades enzimáticas características de determinados géneros o especies de
bacterias
ß- galactosidasa
B- glucosidasa
B- glucuronidasa
Producción de un color
característico - identificación

MEDIOS DIFERENCIALES CROMOGÉNICOS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS EN

MUESTRAS DE ORINA
E. coli (característica, colonias rosadas)
Klebsiella pneumoniae (colonias azul puro)
Enterococcus fecalis (Colonias celestes)
Psudomonas aeroginosa (Colonias chocolate)
MEDIOS DE CULTIVOS PARA LEVADURAS
ChromAgar Candida
Permite diferenciar e identificar tres especies de géneros (colonias verdes, azules y transparentes).

Candida albicans Candida tropicalis

Candida glabrata malva Candida krusei rosa, rizado

TETRATIANATO DE CALDO
Base de Caldo Tetrationato es utilizada como un medio de enriquecimiento selectivo para especies de
Salmonella que pueden estar presentes en pequeñas cantidades y que compiten con otras bacterias de la
microbiota intestinal. Las especies de Salmonella pueden ser dañadas durante el procesamiento de los
alimentos, sometiéndose a bajas temperaturas, calor desecación, radiación de conservadores. Sin embargo,
aun cuando las células dañadas no se desarrollen en medios de cultivos selectivos, al estar presentes pueden
causar daño al ser ingeridas con los alimentos. Mueller demostró la efectividad del Caldo Tetrationato para el
enriquecimiento de Salmonella y la inhibición de coliformes. Esta base está especificada en los métodos
estándar para las pruebas de Salmonella.
En el medio la peptona provee la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y aminoácidos. Las sales biliares
inhiben microorganismos Gram-positivos. El tetrationato es formado por la adición de la solución yodo-
yodurado que inhibe organismos de la flora normal o fecal. El carbonato de calcio neutraliza y absorbe los
metabolitos tóxicos.
Para evitar la proliferación de especies de Proteus spp., se recomienda agregar 40 mg/l de Novobicina antes de
la solución iodada.
PREPARACIÓN
Método Suspender 46 gramos del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su
completa disolución y hervir durante un minuto. No esterilizar en autoclave. Adicionar 20 mL de solución de
yodo-yodurada (6 g de yodo en cristales y 5 g de yoduro de potasio en 20 mL de agua) antes de utilizarse.
Dispensar en tubos estériles y utilizar inmediatamente.
Procedimiento
 Inocular las muestras de acuerdo a los procedimientos internos de laboratorio o normas aplicables.
 Incubar en condiciones aeróbicas a 35 + 2°C por 24 horas.
 Previo a incubar (Tiempo 0 h) y después de incubar (Tiempo 24 h), sembrar en medios selectivos o
diferenciales como por ejemplo Agar MacConkey, Agar Salmonella Shigella, Agar Entérico Hektoen o
Agar XLD e incubar nuevamente para confirmar.
 STUART MEDIO DE TRANSPORTE
Medio de Transporte Stuart es un medio semisólido utilizado
para la transportación y preservación de microorganismos
como gonococos, estreptococos, Enterobacterias, etc.
En 1948 Moffet, Young y Stuart describieron un medio para
el transporte de gonococos. Toshach y Patsula mejoraron la
formulación obteniendo lo que hoy se conoce como el
medio de transporte Stuart. La capacidad del medio de
mantener la viabilidad de gonococos durante su transporte,
dirigió las investigaciones para explorar su uso con varios
especímenes. Actualmente este medio es recomendado
para exudados faríngeos, vaginales y muestras de heridas.
En este medio el cloruro de calcio junto con el glicerofosfato
de sodio actúan como un buen agente amortiguador y
también mantiene el equilibrio osmótico en el medio. El
tioglicolato de sodio evita los cambios oxidativos y provee
una atmósfera reducida. El azul de metileno es un
colorante indicador del estado de óxido-reducción. El agar
bacteriológico es adicionado como agente solidificante.
Cultivos mixtos y puros.
Métodos para alisar cultivos puros:
 Siembras por estrías en placas
 Siembra por difusión en placa
 Placa vertida
 Enriquecimiento del cultivo
 Diluciones seriadas
 Aislamiento de una sola célula
El recuento de patógenos mediante la técnica de estrías en placas se
utiliza para la cuantificación de resultado: estimación del número
microorganismo en la muestra original en función del crecimiento.
 CRECIMIENTO ESCACESO
 CRECIMIENTO MODERADO
 CRECIMIENTO ABUNDANTE
RECUENTO DE PATÓGENOS MEDIANTE EL USO DE ASA CALIBRADA también se utiliza para el recuento de
microrganismos mediante siembra con asa calibrada, recuento de unidades formadora de colonias por mililitro
(UF/mL).

Obtención de cultivos puros

Siembra de agotamiento
En las técnicas de agotamiento, se dispersa el inóculo sobre la superficie
del medio de cultivo a lo largo de una serie de pasos, intentando que
cada vez haya menos bacterias para distribuir, por lo que quedarán más
separadas en el medio.
Existen distintas modalidades de agotamiento: Técnica de cuatro
cuadrantes: Esta técnica distribuye a las bacterias del inóculo en los
cuatro cuadrantes de la placa, que se siembran en orden, realizando con
el asa de siembra un zigzag sobre la placa. Conforme transcurre el
proceso de siembra, el número de bacterias que van quedando en el asa
es menor, por lo que en el último cuadrante tendremos más posibilidades
de encontrar colonias aisladas.
Técnica de estría múltiple: Es el método más utilizado en los laboratorios
de microbiología para obtener colonias aisladas. Se puede realizar en varios pasos entre 3 y 5.
DILUCIONES SERIADAS
CARÁCTERISTICAS DEL CULTIVO
COLOR (CROMOGENESIS)
 Pigmentadas
 No pigmentadas
ABUNDANCIA DE CRECIMINETO
OLOR
ASPECTOS DEL CULTIVO
COLONIAS EN PLACAS DE AGAR
TAMANÓ
 Muy pequeñas o muy grandes.
Margen o Borde
Diferencia según la especie:
 Circulo perfecto o salientes redondos
 Hendiduras irregulares
 Proyecciones filiformes o proyecciones en forma de raíz.
Elevación
 Finas aplanadas
 Gruesas elevadas
Características ópticas
 Opacas
 Transparentes
 Opalescentes

Características en agar inclinado

a. Cantidad
ESCASO
MODERADO
ABUNDANTE
b. Margen
Uniforme
Con irregularidad
c. Consistencia
Mantecosa
Fácilmente removible
Viscosa
Filamentosa
Seca
Brillante
d. COLOR (CROMOGENESIS)
Pigmentadas
No pigmentadas
DESARROLLO EN CALDO NUTRITIVO
A. Cantidad de desarrollo
ESCASO
MODERADO
ABUNDANTE
B. Distribución del desarrollo
Uniforme
Nata
 Pelusa
Sedimento granular
Viscoso
C. Olor
Pútrido
A frutas o aromático
Imperceptible
Desarrollo en gelatina por picadura
Desarrollo sin licuefacción a lo largo de la línea de inoculación.
Licuefacción de la gelatina