Práctica 4.
Metabolismo
Carapia Vega Nancy; Avalos Otero Oliver Eduardo; Pérez Álvarez Emmanuel de Jesús;
Salazar Calderón Enrique Eduardo;
Laboratorio de Farmacología, Departamento de Farmacia, División de Ciencias Naturales y Exactas, Universidad de
Guanajuato, 23 de septiembre de 2024.
Objetivos
El alumno conocerá el funcionamiento del metabolismo de fármacos (barbitúricos), a través
de la administración de diferentes dosis de fenobarbital y pentoparbital en ratones BALB/c y
describirá sus efectos metabólicos progresivamente.
Introducción
Los barbitúricos son depresores no selectivos del sistema nervioso central (SNC) que derivan
del ácido barbitúrico (2,4,6-trioxohexahidropirimidina), un compuesto sin actividad
farmacológica. Estos fármacos causan una depresión generalizada de la actividad neuronal
en el cerebro, produciendo efectos que van desde la sedación y la reducción de la ansiedad
hasta la depresión respiratoria y la insuficiencia cardiovascular, en casos graves. Actúan
incrementando las corrientes del ion cloruro mediadas por el ácido γ-aminobutírico (GABA),
lo que genera inhibición sináptica. Las dosis elevadas pueden causar hipotensión debido a la
depresión del tono simpático central y la disminución directa de la contractilidad cardíaca.
El fenobarbital (ácido 5-etil-5-fenilbarbitúrico) es un fármaco introducido por sus
propiedades hipnóticas o sedantes para luego serle atribuida la capacidad como antiepiléptico
(reducción de la frecuencia y gravedad). En comparación con el fenobarbital, el pentobarbital
(ácido 5-etil-5-(1-metil-butil)-barbitúrico) tiene una penetración cerebral más rápida y una
vida media más corta. Sin embargo, debido a su solubilidad en lípidos, puede producirse una
acumulación con la administración prolongada. El pentobarbital está asociado con depresión
respiratoria, depresión miocárdica, hipotensión y bajo gasto cardíaco.
La administración de un compuesto puede inducir enzimas metabolizadoras de la fracción
microsómica en diversos tejidos. Estas modifican los sustratos directamente a través de la
oxidación, hidroxilación y desalquilación (enzimas de fase I) y mediante la conjugación de
fármacos con sulfato, glutatión o residuos de carbohidratos para facilitar su depuración
(enzimas de fase II). Existen los inductores de tipo fenobarbital, compuestos que inducen la
síntesis de citocromo P-450, citocromo P-450 reductasa y otras enzimas que participan en el
metabolismo. Esto se asocia con la proliferación del retículo endoplásmico liso. Aumenta
también la actividad enzimática de los microsomas, el peso del hígado, la circulación
sanguínea hepática, et flujo biliar y ciertas proteínas hepáticas. Sus efectos aparecen en 2-3
días. De hecho, experimentos realizados por E. Pantuck et. al. describen que el tratamiento
de ratas y conejos con fenobarbital aumenta la actividad de las enzimas microsomales
hepáticas, las cuales tienen la actividad de oxidar el pentobarbital.
1
Metodología
Materiales y reactivos
𝑚𝑔
▪ Solución de Fenobarbital 6 𝑚𝐿
𝑚𝑔
▪ Solución de Pentobarbital 6
𝑚𝐿
▪ Etanol 70° G.L.
▪ 3 jeringas de 1 mL.
▪ Caja de transporte con aserrín.
▪ Malla metálica de apoyo.
▪ Papel absorbente.
▪ 3 ratones de prueba BALB/c.
Resultados y discusión
2
Figura 1. (Miércoles 11 de septiembre de 2024). A la izquierda se aprecia la administración
de la primera dosis de fenobarbital (20 o 60 mg/kg) por vía intraperitoneal a uno de los dos
ratones de prueba (sin contar al control) de la especie BALB/c. A la derecha se encuentran
los ratones después de la administración de fenobarbital. Estos no demuestran algún efecto
apreaciable.
Figura 2. (Jueves 12 de septiembre de 2024). En la imagen de la izquierda se aprecia la
administración por vía intraperitoneal de la segunda dosis de fenobarbital (20 o 60 mg/kg) a
uno de los dos ratones (sin incluir al control) de prueba de la especie BALB/c. A la derecha
se observa uno de los ratones luego de la administración de fenobarbital (6 mg/mL). Los
ratones no demostraron ninguna condición alterada.
3
Figura 3. (Viernes 13 de septiembre de 2024). En la imagen de la izquierda se aprecia la
administración de pentobarbital (dosis 40 mg/kg) por vía intraperitoneal a uno de los tres
ratones (incluyendo al ratón control) de la especie BALB/c. A la derecha se aprecian los
ratones luego de la administración del fármaco. Los ratones presentaron condiciones
alteradas de acuerdo con la condición metabólica de cada uno.
En la siguiente tabla se describen las observaciones del comportamiento para cada uno de los
ratones de acuerdo con su condición metabólica.
Tiempo de Tiempo
Peso Fenobarbital Fenobarbital Pentobarbital (dosis
Espécimen latencia del efecto
(g) (1º dosis) (2º dosis) única 40 mg/kg)
(minutos) (minutos)
Somnolencia,
Ratón 1 contracciones,
(control/sin dosis 60 N/A N/A comportamiento 3 42
de fenobarbital) quiescente, mareo,
falta de equilibrio
Ratón 2 (dosis Somnolencia, falta de
46 Sin alteración Sin alteración 5 34
baja) equilibrio
Ratón 3 (dosis Aletargamiento, falta
43 Sin alteración Sin alteración 6 16
alta) de equilibrio
Una vez obtenidos los datos y revisada la bibliografía que considera que el comportamiento
que presentaron los ratones anteriormente fue el esperado. El primer ratón (control) presento
un gran número de condiciones adversas luego de la administración del pentobarbital:
somnolencia, contracciones musculares, comportamiento quiescente, mareos y falta de
equilibrio debido a la acción farmacológica del pentobarbital; siendo su tiempo de latencia
4
de tres minutos y un tiempo de duración del efecto de 42 minutos. Mientras que el ratón que
recibió dos dosis bajas (20 mg/kg) de fenobarbital luego de la administración de pentobarbital
solo presento somnolencia y falta de equilibrio, además un tiempo mayor de latencia de 5
minutos y un tiempo menor de duración del efecto de 34 minutos. Por otro lado, el ratón que
tuvo las dos dosis altas (60 mg/kg) de fenobarbital y luego la administración de pentobarbital
presento aletargamiento y falta de equilibrio, además de un tiempo de latencia mucho mayor
de 6 minutos y un tiempo mucho menor de duración del efecto de 16 minutos. Por lo que de
acuerdo a la bibliografía y a lo acontecido durante el experimento, consideramos que la razón
de la diferencia en los comportamientos de los tres ratones de prueba se debe a que la previa
administración de fenobarbital a los ratones dos y tres, sin incluir al ratón control que no
recibió dosis alguna, aumento la tasa de metabolización hepática microsomal por oxidación
del pentobarbital, lo que les permitió “resistir” a sus efectos de una mejor manera en el
siguiente orden ratón tres, ratón dos y ratón control.
Conclusiones
Se administraron dos diferentes barbitúricos en tres diferentes ratones BALB/c.
Pudimos observar que, dependiendo de la dosis administrada de fenobarbital, el efecto que
tendría el pentobarbital sobre los ratones era diferente, teniendo al ratón control, que no se le
había administrado dosis alguna, como el ratón que más efectos adversos tuvo. A su vez,
también observamos que al ratón que se le administró más dosis de fenobarbital tuvo efectos
menores al administrarse el pentobarbital en comparación con el ratón control y el ratón que
se le administró una dosis baja.
Estos datos nos hacen concluir que el fenobarbital ayudó a metabolizar de mejor manera el
pentobarbital, permitiendo resistir de mejor manera los efectos.
Finalmente, concluimos que se puede “preparar” a un organismo para recibir un tratamiento,
sin que los efectos sean tan intensos. Esto sirve, por ejemplo, con un fármaco que sus efectos
son muy fuertes, de esta manera podemos preparar al individuo para que sus efectos no sean
tan intensos.
Referencias
Abend, N. S., & Dlugos, D. J. (2008). Treatment of Refractory Status Epilepticus: Literature
Review and a Proposed Protocol. Pediatric Neurology, 38(6), 377-390.
[Link]
Trinka, E. (2023). Phenobarbital in Status epilepticus – Rediscovery of an effective drug. Epilepsy
& Behavior, 141, 109104. [Link]
5
Pantuck, E., Conney, A., & Kuntzman, R. (1968). Effect of phenobarbital on the metabolism of
pentobarbital and meperidine in fetal rabbits and rats. Biochemical Pharmacology, 17(7),
1441-1447. [Link]
Yamauchi, H., Andou, T., Watanabe, T., Gotou, M., & Anayama, H. (2021). Quantitative protein
profiling of phenobarbital-induced drug metabolizing enzymes in rat liver by liquid
chromatography mass spectrometry using formalin-fixed paraffin-embedded samples.
Journal Of Pharmacological And Toxicological Methods, 112, 107107.
[Link]
