UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

CENTRO UNIVERSITARIO DEL NORTE

COBAN, A. V.

MANUAL DE LABORATORIOS
FITOPATOLOGIA I

DOCENTE: ING. Rodolfo Reyes Villatoro

Auxiliar: Nestor Herrera Gómez

COBAN ENERO DE 2019

Rodolfo Reyes V.
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LABORATORIO No 1

OBSERVACION DE SINTOMAS, TOMA Y TRASLADO DE MUESTRAS

I. INTRODUCCIÓN

Las enfermedades producen importantes alteraciones en la fisiología de las plantas, cuyos efectos se observan como una
secuencia de modificaciones morfológicas visibles denominadas síntomas de la enfermedad. Estos están en relación con
la naturaleza del agente causal, con la especie y el cultivar de la planta hospedera y con las condiciones ambientales.
Además, pueden variar de acuerdo con la evolución de una enfermedad observándose síntomas iniciales y finales según
el momento en que aparezcan y primarios o secundarios cuando ocurren en el órgano invadido por el patógeno o a
distancia de éste respectivamente. El conjunto de síntomas representa el síndrome de la enfermedad.

El diagnóstico de la enfermedad se inicia en el campo, y cuando se tiene la suficiente experiencia y los síntomas de la
enfermedad son muy específicos es posible completar el diagnóstico en el campo mismo, sin embargo, la mayoría de las
veces, es necesario hacer un análisis más detallado de los signos del patógeno en el laboratorio para poder hacer un
diagnóstico acertado. En este caso, se deben tomar las muestras en el campo, y trasladarlas siguiendo un procedimiento
adecuado para que puedan llegar en buen estado al laboratorio.

A menudo, el diagnóstico se facilita si en el campo se han sabido escoger y tomar las muestras correctamente, de hecho
se dice que un cincuenta por ciento del diagnóstico depende de la forma correcta de tomar las muestras y trasladarlas al
laboratorio, por eso se hace énfasis en esta parte del diagnóstico.

II. OBJETIVOS

 Que el estudiante pueda observar y reconocer los síntomas que ocasionan los diferentes agentes
fitopatógenos.

 Realizar en forma correcta la recolección, traslado y preservación de las muestras fitopatológicas.

III. MATERIALES :

Plantas enfermas, suelo, cubetas, navaja, pala, bolsas plásticas, algodón, agua destilada, prensas, papel
periódico, frascos, cristalería, refrigerador, microscopios, estereoscopios, agujas de disección, hojas de afeitar y
libreta de campo

IV. PROCEDIMIENTO:

1. Siguiendo las indicaciones del instructor vaya al campo y busque diferentes cultivos (perennes y anuales)
y trate de identificar los síntomas que se le describen en esta guía

2. Tome algunas muestras de los síntomas observados en la parte aérea. Para esto asegúrese de tomar
follaje que contenga los síntomas en diferentes grados de desarrollo, especialmente en los casos en que
la enfermedad empieza a presentarse.

3. Coloque las muestras tomadas en bolsas plásticas de diferentes tamaños (dependiendo del tamaño de la
muestra) Asegúrese de colocar un trozo de algodón humedecido con agua destilada, para mantener una
atmósfera húmeda en la bolsa que garantice la supervivencia del patógeno hasta la llegada al laboratorio

4. Identifique la bolsa con un número correlativo de las muestras que está tomando

5. En su libreta de campo, anote el número de la muestra y registre información pertinente sobre las
condiciones del cultivo y características de la enfermedad que puedan ayudar para la identificación del
patógeno, por ejemplo: Si la enfermedad es localizada o generalizada, qué porcentaje de la plantación se

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ha visto afectada, qué manejo se ha dado a la plantación, si el cultivo está expuesto al sol o si se
encuentra bajo mucha sombra, etc.

6. Tome fotografías de la situación que observa en el campo para ayudar al diagnóstico que se haga en el
laboratorio

7. Coloque todas sus muestras debidamente identificadas dentro de una hielera con un poco de hielo para
ser transportadas al laboratorio. Si este se encuentra a poca distancia, puede colocarlas en bolsas
plásticas más grandes, mientras las lleva al laboratorio donde deberá colocarlas en un refrigerador hasta
que pueda identificarlas

8. Si en el campo observa síntomas de marchitez, es probable que el problema se encuentre en el suelo,

por lo tanto deberá tomar muestras de raíces y de suelo, en este caso proceda conforme las siguientes
instrucciones:

 Limpie la superficie del suelo en la zona de goteo (zona que cubre el área foliar en el suelo) proceda
a escarbar con ayuda de una pala o machete hasta una profundidad de 15 a 20 cm, tome una
muestra de suelo de más o menos una libra, representativa de todo el perfil del suelo desde la
superficie hasta los 15 o 20 cm de profundidad y colóquela dentro de una bolsa plástica, identifíquela
de la misma manera que las muestras anteriores.

 En el mismo agujero, tome una muestra de raíces de unos 400 gramos, identifíquela y colóquela en
una bolsa plástica. Si la planta es pequeña, puede arrancar completamente la planta y colocarla
dentro de la bolsa plástica.

9. Traslade con cuidado las muestras al laboratorio dentro de la hielera o las bolsas plásticas según sea el
caso.

10. Proceda a analizar los síntomas y clasifíquelos de acuerdo a la descripción que se incluye en esta guía.
De ser necesario utilice un microscopio estereoscopio para describir los síntomas. Lleve un registro
fotográfico de los síntomas identificados, que le serán de utilidad en laboratorios posteriores

11. En su reporte, responda a las preguntas que se le plantean

V. DESCRIPCIÓN DE SÍNTOMAS:

SÍNTOMAS NECRÓTICOS

a) Manchas foliares. Lesiones localizadas en las hojas del hospedante que constan de células muertas y
colapsadas.
b) Tizones: Coloración café general y extremadamente rápida de las hojas, ramas y órganos florales de una
planta que dan como resultado la muerte de estos órganos
c) Cánceres: Herida localizada o lesión necrótica, con frecuencia sumida bajo la superficie del tallo de una
planta leñosa
d) Pudriciones (blandas o secas): Desintegración (pudrición) o maceración total o parcial de cualquier órgano
de la planta
e) Mal del talluelo o Damping off: pudrición basal del tallo de plántulas de semillero o vivero que produce
muerte rápida o colapso
f) Antracnosis: Lesión necrótica que se semeja a una úlcera profunda y que se produce en el tallo, hojas,
frutos o flores de las plantas hospedantes
g) Sarna: Lesiones que se producen sobre el fruto, hojas, tubérculos y otros órganos de las plantas
hospedantes, por lo común ligeramente realzadas o bien profundas y agrietadas, lo cuál les da una
apariencia costrosa

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SÍNTOMAS ASOCIADOS A HIPERTROFIAS E HIPERPLASIAS

a) Hernias: Raíces agrandadas en forma de huso o mazo

b) Agallas: Porciones alargadas de las plantas que por lo común están llenas del micelio del hongo
c) Verrugas: Protuberancias en forma de verruga que se forman sobre los tubérculos y los tallos
d) Escobas de bruja: Ramificación profusa que se produce en ramas y raíces jóvenes
e) Acolochamiento foliar: Deformación, engrosamiento y acolochamiento de las hojas

OTROS SÍNTOMAS

a) Marchitamientos: Generalmente es un síntoma secundario generalizado en que las hojas o los retoños de
las plantas pierden su turgencia y se cuelgan debido a las alteraciones que sufre el sistema vascular de la
raíz o el tallo
b) Royas: Muchas lesiones pequeñas, por lo común de color rojizo aunque pueden ser de otros colores
brillantes como anaranjado o amarillo, que aparecen en las hojas o los tallos de las plantas
c) Mildiu: Zonas necróticas o cloróticas que aparecen sobre las hojas o tallos jóvenes y frutos, se semejan a los
tizones, pero presentan micelio en el envés que les da una apariencia de felpa.
d) Cenicillas: Manchas de color más o menos gris en el haz de las hojas que se cubren de un ligero polvillo
formado por las esporas de los hongos

VI. CUESTIONARIO:

1. ¿Cuáles son los síntomas más frecuentes que ocasionan los virus patógenos de plantas?
2. ¿Cuáles son los síntomas más frecuentes que ocasionan los nemátodos fitopatógenos?
3. ¿Cómo pueden diferenciarse los síntomas incitados por bacterias de los síntomas producidos por hongos en
plantas?
4. ¿Cuál es la razón de colocar las muestras recolectadas en lugares a baja temperatura cuando las mismas no se
van a examinar de inmediato? Refiérase a aspectos fisiológicos.
5. ¿Por qué es importante tomar muestras en diferentes estados de avance de la enfermedad?

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LABORATORIO No. 2

DIAGNOSTICO DE LAS ENFERMEDADES FUNGOSAS

I. INTRODUCCION

Los desórdenes fisiológicos de las plantas pueden ser incitados por agentes bióticos (hongos, bacterias, nemátodos, etc.)
y por agentes abióticos (heladas, granizo, deficiencias o exceso de minerales en el sustrato, vientos y otros). Debido a
estas alteraciones de la fisiología, la planta responde, manifestando uno o varios síntomas que varían desde ligeros
mosaicos, hasta deformaciones serias de órganos y tejidos e incluso la muerte parcial o total de la planta. Los síntomas
de la planta enferma son una valiosa orientación para el diagnóstico. En ocasiones, la presencia de síntomas y signos
son característicos e indican sin lugar a confusión al responsable de la enfermedad. Sin embargo, muchas veces un
mismo síntoma es incitado por varios agentes, aunque no necesariamente actúan a la vez o no hay signos visibles, por lo
que se complica conocer mediante simple observación el o los agentes responsables.

Cuando se sospecha que la enfermedad puede deberse a la presencia de un microorganismo fitopatógeno, además del
examen a simple vista deben hacerse observaciones bajo el microscopio estereoscopio, para observar mejor los signos
del patógeno o para escoger los tejidos más adecuados para continuar el estudio, siguiendo otras técnicas.

II. OBJETIVO:

Conocer los procedimientos necesarios para el diagnóstico de las enfermedades en las plantas, producidas por
microorganismos.

III. MATERIALES:

Muestras frescas de material vegetal enfermo, (todo tipo de cultivos), medios de cultivo (PDA) o bactoagar,
microscopio estereoscopio, microscopio óptico, hojas de afeitar, bicloruro de mercurio, formalina, alcohol etílico,
lactofenol, agua destilada estéril, otros.

IV. METODOLOGIA:

Para el diagnóstico de las enfermedades en las plantas en el laboratorio, se requiere la ejecución de varios pasos
consecutivos, que pueden variar según las circunstancias, pero generalmente se debe seguir el siguiente
procedimiento:

1. Tome una de las muestras de material vegetal enfermo, y observe los síntomas. Seleccione una de las
manchas, la que sea más característica de la enfermedad.
2. Coloque en un portaobjetos una gota de agua destilada
3. Tome un trozo de tape y presiónelo en la mancha que haya seleccionado procurando que entre en contacto
directo en la región donde se observa tejido sano y tejido enfermo (límite)
4. Retire cuidadosamente el tape procurando no extraer el tejido de la planta, se espera que los hongos (micelio
y esporas) queden adheridos al tape
5. Coloque cuidadosamente el tape en el portaobjetos procurando que la parte que se adhirió a la mancha
quede justo sobre la gota de agua
6. Sin ponerle un cubreobjetos, coloque el portaobjetos en el microscopio y proceda a enfocar en el lente de
menor aumento hasta enfocar el hongo.
7. Una vez que lo haya localizado, cambie lente de aumento hasta encontrar uno que le permita observar
perfectamente las estructuras reproductivas del hongo
8. Proceda a tomar una fotografía de las estructuras observadas y auxíliese de información bibliográfica para
identificar el hongo.
9. Reporte estas estructuras y el nombre del hongo en su informe de práctica
10. Si no puede encontrar las estructuras reproductivas del hongo, repita el procedimiento con otras manchas
similares en las muestras del mismo cultivo, hasta que pueda identificar el hongo

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11. Si luego de hacer varias veces el mismo procedimiento, no puede encontrar las estructuras reproductivas del
hongo, proceda preparar una cámara húmeda para inducir la esporulación del hongo, en este caso, siga el
procedimiento que se le detalla a continuación:
 Coloque en una caja de Petri o en un frasco de vidrio (puede ser plástico) debidamente esterilizado, una
muestra de material vegetal enfermo, y coloque dentro del frasco un trozo de algodón humedecido con
agua destilada, para formar un ambiente saturado de humedad.
 Cierre el frasco y colóquelo en un lugar seguro por tres días
 Al cabo de los tres días, repita el procedimiento con tape y observe las estructuras que ha producido el
hongo
 Si después de este procedimiento, no se observa que el hongo se haya reproducido, se debe preparar
medio de cultivo (PDA) para cultivar el hongo en medio artificial (sólo será posible si el hongo no es
parásito estricto)
12. Si después de haber intentado las técnicas anteriores, no se observa la presencia de signos característicos
de hongos, muy probablemente se trata de una enfermedad bacteriana, el diagnóstico en este caso se tratará
en otra práctica de laboratorio.
13. En ocasiones, no es posible distinguir ningún signo, ni de hongo, ni de bacteria, ni otro tipo de patógeno,
entonces podría tratarse una enfermedad abiótica. El diagnóstico se hace en base a los síntomas que
presenta la planta y la información obtenida en el campo.
14. Repita todo el procedimiento en otras dos muestras de material enfermo traído del campo y reporte en su
informe de laboratorio, los resultados obtenidos. No se olvide enriquecer sus observaciones con suficiente
información bibliográfica

DIAGNOSTICO PRELIMINAR:

Para la realización del diagnóstico preliminar se pueden seguir los siguientes pasos:

a. Observación de síntomas:
En muchas ocasiones, el diagnóstico de las enfermedades muy conocidas se hace sin reproducir
experimentalmente la enfermedad, pero la exactitud de este diagnóstico depende de la experiencia,
conocimiento y juicio de quien lo formula. En primera instancia el diagnóstico de una enfermedad se
basa en los síntomas y signos del patógeno, pero un diagnóstico concluyente se basa en la identificación
del agente o agentes que la origina. El diagnóstico de las enfermedades no descritas antes o
desconocidas, requiere la reproducción experimental de la enfermedad, bajo condiciones controladas.

b. Determinación de las circunstancias particulares del caso:

Condiciones climáticas, relieve del terreno, distribución de la enfermedad en el campo, historial de
cultivos previos, y aplicación de fertilizantes, insecticidas, fungicidas, nematicidas y herbicidas (estos
últimos dos años anteriores pueden tener efectos duraderos). Los factores del ambiente no bióticos en el
cual crecen las plantas, pueden afectarlas directamente o predisponerlas a agentes causantes de
enfermedades.

c. Causas abióticas:
La enfermedad puede resultar de temperaturas inapropiadas, exceso o falta de agua o nutrientes,
toxicidad por residuos de cultivos anteriores o productos químicos aplicados a éstos, toxicidad ambiental
y hasta la caída de un rayo. La distribución de la enfermedad en un campo puede ser la clave de algunas
de éstas.

d. Factores de predisposición:
Los factores ambientales que predisponen y por lo tanto favorecen la incidencia y afección por
patógenos son: temperaturas desfavorables a la planta, temperaturas favorables al patógeno, humedad
desfavorable a la planta, humedad favorable al patógeno, nutrición desfavorable al crecimiento de la
planta, nutrición favorable a la planta pero que favorece también al patógeno, almacenamiento
inadecuado, carencia de oxígeno (por exceso de agua o falta de aireación en el almacenaje), carencia de
luz, exceso de radiación solar, efecto residual de herbicidas usados para otros cultivos no susceptibles,
prácticas culturales inapropiadas (daño por control de malezas, riegos inadecuados o poda inoportuna y
suelos muy compactos).

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e. Observación de señas de patógenos:

El examen del material enfermo se hace bajo un estereoscopio en busca del organismo que está
causando la enfermedad. A través de este examen, los tejidos enfermos deben ser objeto de una
observación, cuidadosa en busca de señales de posibles organismos causales, para lo cual deben
seleccionarse aquellos tejidos que parecen haber sido los focos iniciales de la infección en las etapas del
comienzo de la enfermedad. Este examen permite detectar a veces la presencia de signos patológicos
bien característicos como para poder dar el diagnóstico definitivo, o en su defecto los tejidos adecuados
para continuar el estudio mediante el empleo de técnicas específicas.

La información anterior debe tomarse en cuenta a la hora de decidir si se hace un raspado superficial de
las lesiones, un corte perpendicular del tejido o un montaje directo de una porción de lámina foliar, para
hacer el examen más detallado bajo el microscopio compuesto. Se realiza lo anterior, cuando se
sospecha de hongos o bacterias como causantes de la enfermedad. Deben evitarse las áreas en las
cuales la enfermedad se encuentra ya en una etapa avanzada, especialmente en tejidos carnosos, donde
comúnmente predominan organismos saprofitos secundarios.

f. Correlación de lo observado con la bibliografía pertinente:

En todo proceso de diagnóstico, es necesario consultar diversas publicaciones. Es muy poco corriente
encontrar enfermedades nuevas a la ciencia; la gran mayoría ya se han descrito, de manera que una
buena revisión de literatura apropiada puede descubrir información específica sobre el problema. Aún
antes de diagnosticar una enfermedad, es de gran utilidad consultar descripciones de las enfermedades
del cultivo en cuestión. Esta información puede encontrarse en boletines o manuales técnicos publicados
por estaciones experimentales, ministerios de agricultura o universidades. Puede también encontrarse en
mayor detalle, en monografías, bibliografías o libros preparados por especialistas en las enfermedades de
determinados cultivos. A menudo esta literatura incluye detalles de la distribución geográfica de cada
enfermedad; de su patrón de diseminación local o regional, de los síntomas diferenciales de las
enfermedades; y de los signos característicos de los patógenos respectivos.

DIAGNOSTICO DEFINITIVO:

Generalmente el diagnóstico preliminar no es concluyente, por lo cual se hace necesario realizar una
comprobación fehaciente de que el microorganismo aislado es el incitante de la enfermedad. Esto se logra
cumpliendo lo mencionado en los “Postulados de Koch”. En síntesis los postulados de Koch son:

a. El microorganismo debe estar siempre asociado con la enfermedad, y a la vez la enfermedad no debe
aparecer sin que el microorganismo esté o haya estado presente.

b. El microorganismo debe aislarse en cultivo puro y deben estudiarse sus caracteres específicos.

c. El microorganismo debe ser inoculado en plantas de la misma especie y la misma variedad de la que se
extrajo originalmente, y se espera que reproduzca los mismos síntomas

d. El microorganismo debe ser reaislado del hospedante inoculado y debe mostrar las mismas
características en cultivo que el que se aisló anteriormente.

El fiel cumplimiento de los postulados de Koch ha servido para establecer la patogenicidad de muchas especies
de hongos y bacterias que crecen en medios de cultivo.

En el caso de parásitos obligados (virus, nemátodos, algunos hongos, etc.) que no crecen en medios artificiales
de cultivo, sino que solamente en tejido vivo, para establecer la patogenicidad de estos organismos, ha sido
necesario hacer adaptaciones a los postulados de Koch.

Para el caso de hongos que son parásitos obligados, como las royas, cenicillas y mildius vellosos, las
adaptaciones consisten en inocular hospedantes sanos, si se hacen suficientes repeticiones y se incluyen los
testigos adecuados, es posible determinar su patogenicidad en esta forma.

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Para la realización de los postulados de Koch en nemátodos fitoparasíticos, es necesario hacer una extracción de
una buena cantidad de ellos, de suelo o de tejidos afectados, e inocularlos directamente al suelo y/o a tejido
sano. La misma situación ocurre con micoplasmas, espiroplasmas, virus y viroides, en los cuales la dificultad de
cultivarlos en medios sintéticos, hace que tengan que ser inoculados directamente a tejidos sanos.

Tanto en hongos, nemátodos, como en los últimos organismos anotados, la reproducción exacta de la
sintomatología y el reaislamiento del microorganismo cuando es posible, garantiza la fidelidad del diagnóstico.

Para hacer el diagnóstico de la mayoría de las enfermedades de las plantas, que no se pueden diagnosticar sólo
por su sintomatología, ayuda mucho aplicar la siguiente clave:

CLAVE DE LOS PASOS PARA EL DIAGNOSTICO PRELIMINAR:

a. Manchas y Cánceres:

Señas de patógenos visibles con microscopio, estereoscopio.

a.1 Señas de hongos: realizar preparaciones microscópicas de las estructuras con tinción cuando
sea apropiado

a.2 Señas de bacterias (exudados o manchas húmedas): realizar preparación microscópica para
observar flujo bacteriano en campo oscuro, luego hacer tinción de Gram rápida

b. Ausencia de señas de patógeno:

b.1 Incubar la muestra en cámara húmeda (luego regresar a a.1

b.2 Mosaicos, amarillamientos, acolochamientos, enanismo, moteados, virosis

c. Marchitez:
Sistema radicular afectado.

c.1 Presencia de nemátodos o sus síntomas

c.2 Pudrición radicular, tratar como a.1

c.3 Prueba de flujo bacteriano en agua, luego tinción de Gram rápida

c.4 Ausencia de flujos, hacer cortes para observar hongos

d. Pudriciones:

d.1 Tallo o raíz, tratar como a. 1

d.2 Órganos de reserva (tubérculos, raíces):

d.2.1. Realizar preparación microscópica y observar para

hongos, con tinción cuando sea posible

d.2 Observar preparación en campo oscuro para observar bacterias, luego tinción Gram
rápida

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Los hongos se pueden identificar mediante comparación consultando libros especializados en taxonomía de hongos. Si
las características observadas del hongo y los síntomas coinciden con las que se encuentran en la literatura, el
diagnóstico se puede considerar completo.

Si el hongo es desconocido, se debe continuar el estudio de la etiología de la enfermedad. Cuando no hay micelio,
esporas del hongo en la planta enferma, la identificación del agente causal se dificulta. En estos casos, se debe inducir la
esporulación del hongo en cámaras húmedas o en medios de cultivo apropiados.

Las bacterias se identifican sobre la base de los síntomas de la enfermedad, la ausencia de otros microorganismos y la
presencia masiva de células y exudados bacteriales. Con esta información, se pueden hacer las tinciones diferenciales.

Los nemátodos se identifican por la presencia del estilete. Si están presentes en grandes cantidades, pueden ser la
causa de la enfermedad. La determinación del género se hace con el uso de claves taxonómicas, basadas en sus
caracteres morfológicos y anatómicos.

Los virus y micoplasmas, son difíciles de identificar, por su tamaño pequeño, pues no son visibles al microscopio óptico.
La identificación se basa en la sintomatología que producen cuando los síntomas son específicos, de lo contrario, se
deben descartar agentes abióticos y otros patógenos, mediante diferentes pruebas.

V. CUESTIONARIO:

1. ¿Cómo se pueden identificar, las bacterias si su tamaño es tan pequeño que no pueden apreciarse sus
características morfológicas?

2. ¿Cómo pueden usarse los antibióticos para determinar si una enfermedad es producida por virus, micoplasmas y
otros microorganismos?

3. Si al diagnosticar una enfermedad, usted encuentra más de un patógeno, ¿cómo determina cuál de ellos es el
causante de la enfermedad?

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Práctica No. 3 –Fitopatología I-

PREPARACIONES PARA OBSERVAR MATERIAL AL MISCROSCOPIO

I. INTRODUCCIÓN

La observación de los patógenos al microscopio, en general puede proveernos de un diagnóstico confiable, si se

hacen correctamente las preparaciones y se tiene experiencia para el reconocimiento de las estructuras
reproductivas características de cada microorganismo en particular. Las técnicas de observación pueden variar
dependiendo de los síntomas, del patógeno y del material vegetal, pero una primera técnica que se recomienda
siempre es la extracción de estructuras del hongo a través de cinta adhesiva (tape). Esta es una forma muy fácil
de preparar los montajes y si se utiliza correctamente puede permitir un diagnóstico adecuado.

En todo caso siempre es recomendable aplicar cualquier técnica de observación al microscopio antes de intentar
cualquier otra técnica de identificación que pueda resultar más costosa y tomar mucho más tiempo para su
ejecución.

II. OJETIVOS

1. Familiarizarse con las técnicas de observación de microorganismos con el uso del microscopio óptico
2. Aprender a extraer microorganismos usando las técnicas del tape, el rapado y cortes transversales de tejido
3. Identificar hongos por sus estructuras reproductivas

III. MATERIALES

Muestras de material vegetal enfermo (diferentes especies de cultivos), microscopio óptico, microscopio
estereoscopio, hojas de afeitar, agujas de disección, agua destilada, goteros, porta y cubreobjetos, cámara
fotográfica

IV. PROCEDIMIENTO:

A. RASPADOS:

Son preparaciones, en las cuales se colocan los signos del patógeno en una gota de agua o colorante
depositada sobre una laminilla portaobjetos, para luego realizar observaciones de éstas bajo el microscopio
compuesto, previa colocación de la laminilla cubreobjetos.

En general los signos, micelio y cuerpo fructíferos de los hongos, han sido anteriormente observados bajo el
estereoscopio, y son tomados mediante un “raspado” de la superficie del tejido enfermo, auxiliándose de una
aguja de disección o una asa. Efectúe un “raspado” y haga un dibujo de lo observado bajo el microscopio
compuesto.

B. CORTES

Se procede de igual forma que en el caso anterior, la única diferencia es que el material colocado sobre el
portaobjetos es tejido vegetal conteniendo las estructuras fungosas. Para el efecto, el tejido enfermo
seleccionado se coloca bajo el estereoscopio y con la ayuda de una hoja de afeitar se hace un corte, lo más
delgado posible del tejido, hacia abajo, siguiendo una trayectoria paralela a la dirección de la visual, es decir,
el corte debe ser de tal manera que en el microscopio se pueda observar el mesófilo de la hoja. Es
aconsejable presionar el tejido a cortar con un dedo, sin moverlo y usar la uña como guía durante el corte,
apoyando en ella “la cara” de la hoja de afeitar. Efectúe 3-4 cortes, colóquelos sobre un mismo portaobjetos
y luego dibuje lo observado bajo el microscopio. Tanto los raspados como los cortes, pueden guardarse por
corto tiempo, sellando las orillas del cubreobjetos con esmalte de uñas.

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C. EXTRACCIÓN CON TAPE

Coloque una gota de agua en un porta objetos, luego tome la muestra de material vegetal enfermo y presione
sobre la orilla de la mancha con un trocito de tape, asegúrese de presionar lo suficiente para extraer los
signos del hongo. Luego coloque el tape que contiene el material extraído de la mancha sobre la gota de
agua en el portaobjetos, elimine el excedente de agua y coloque en el microscopio óptico y observe

D. OBSERVACION DE FLUJO BACTERIANO

Las bacterias fitopatógenas causan daño por la interacción de sus productos extracelulares con el
hospedante, lo cual sólo ocurre cuando su presencia es numerosa. Por esta razón, cuando un síntoma es
causado por bacterias, su presencia puede diagnosticarse por el flujo que emana de los tejidos enfermos.

Las bacterias en manchas foliares deben observarse por medio de un corte en forma de banda de unos 2 – 5
mm de ancho, a través de la parte activa de la lesión (la frontera de avance entre tejido sano y obviamente
afectado). Se monta en agua para observar al microscopio de campo oscuro. Con aumentos de alrededor
de 100x las bacterias se verán como una nube blancuzca que se difunde del margen cortado de una zona del
tejido patógeno vascular, emanará en mayor concentración de las venas de la hoja. Se constata que el flujo
es bacteriano por tinción y observación a gran aumento.

Las bacterias vasculares pueden diagnosticarse por un flujo que se ve a simple vista. Córtese un trozo de
tallo o raíz de 1-2 cm. de largo de una planta con marchitez no muy avanzada (porque de lo contrario puede
haber presencia de bacterias secundarias a una causa no bacteriana).

Suspéndase ese trozo en posición horizontal y sumérjase en la parte superior de una columna de agua
quieta, en una probeta o vaso alto. Casi de inmediato, o a veces después de unos 5-10 minutos, comienza a
fluir un hilo de bacterias de uno o más vasos conductores del sistema vascular, que desciende dentro del
agua y disipa una nube lechosa. La tinción y la observación microscópica son esenciales para comprobar la
presencia de bacterias.

E. CAMARA HUMEDA:

El propósito de la cámara húmeda es el de crear condiciones favorables de humedad para el desarrollo

rápido de hongos o bacterias que pueden estar involucradas en la producción de síntomas de enfermedad,
pero cuya presencia no es conspicua en el momento de la primera observación. Como los saprófitos pueden
ser favorecidos por las condiciones creadas, debe procederse con cautela al interpretar los resultados.
Tómese un trozo de material vegetal enfermo y colóquese en una caja de Petri, limpia y esterilizada, coloque
una porción de algodón humedecido con agua destilada y cúbrase con la tapa. Deje por tres días y observe
después siguiendo alguna de las técnicas anteriores.

F. VIRUS:

Juntamente con los virus, podemos agrupar a otros microorganismos similares sintomatológicamente, tales
como viroides, micoplasmas y espiroplasmas. En estos casos, el diagnóstico preliminar se basa casi
únicamente en sintomatología, en ocasiones pueden detectarse inclusiones virales, haciendo observaciones
de preparaciones de tejido vegetal al microscopio compuesto.

G. NEMATODOS:

El diagnóstico preliminar en el caso de nemátodos, se limita más que todo a la observación al estereoscopio
del tejido enfermo (generalmente raíces, aunque también hojas, semillas, tubérculos, etc.) y la extracción
directa cuando es posible, de los individuos, usando una aguja. La observación detallada de los nemátodos
se realiza bajo el microscopio compuesto, haciendo las preparaciones en portaobjetos especiales que
impiden el aplastamiento de los individuos. Haga una extracción de nemátodos del material proporcionado y
efectúe una preparación para observar al microscopio. Tome fotografías de lo observado.

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V. CUESTIONARIO

1. Defina ¿qué es un síntoma y un signo en Fitopatología? Cite 5 ejemplos de cada uno.

2. ¿Por qué se recomienda hacer los cortes de tejido vegetal enfermo perpendicularmente (hacia abajo) y no
transversalmente?
4. ¿Qué es una inclusión viral? Presente evidencias.
5. ¿Que es serología?
6. ¿En qué difiere el microscopio óptico compuesto del microscopio electrónico?
Práctica No. 4 –Fitopatología I-
RECONOCIMIENTO E IDENTIFICACION DE ESTRUCTURAS CARACTERISTICAS DE HONGOS

I. INTRODUCCION

Los hongos poseen una morfología bien variada, la cual es utilizada para la clasificación y diferenciación de las
especies. Sin embargo, la expresión de la morfología está influenciada en gran parte por las condiciones
ambientales. La clasificación actual determina dos Divisiones para el Reino de los Hongos: Myxomicota y
Eumycota, en esta División se encuentran los hongos fitopatógenos. La División Eumycota presenta cinco
Subdivisiones: Mastigomycotina, Zygomycotina, Ascomycotina, Deuteromycotina y Basiomycotina.

Mastigomycotina:
Hongos con soma consistente en un talo redondeado u ovalado, cuando presentan micelio, este es cenocítico.
Se reproducen por zooporas. Son conocidos como mohos acuáticos. Dentro de este grupo se encuentran las
royas blancas (que no son verdaderas royas) y los mildius. Las esporas sexuales de reposo son las oosporas (se
reproducen por la fusión de gametos diferentes).

Zygomicotina:
Estos son hongos terrestres, producen esporas sexuales no móviles en esporangios (esporangiosporas). La
espora de resistencia es la zigospora (formada por la fusión de dos gametos indiferenciables). Todos producen
micelio cenocítico. En este grupo se incluyen muchos hongos micorrízicos.

Ascomycotina:
Son más conocidos como Ascomycetes. Los Ascomycetes pertenecen a una clase evolutiva más alta que los
anteriores. Excepto para organismos tales como las levaduras, los Ascomycetes poseen micelio tabicado, bien
desarrollado y generalmente unicelulado. La reproducción en estos hongos puede ser asexual por medio de
diferentes tipos de esporas asexuales y esporocarpos, o sexual a través de esporas sexuales y ascocarpos. Las
fases asexuales (imperfectas) de los Ascomycetes, son similares a las de los Deuteromycetes, en los cuales los
estados sexuales se desconocen. Respecto a la reproducción sexual, todos los miembros de esta clase
producen esporas sexuales conocidas como Ascosporas, las cuales se forman dentro de una estructura como
saco, llamada asca. Generalmente el número de Ascosporas por asca es de ocho; sin embargo, existen algunas
excepciones, (pueden ser menos de ocho, pero no más).

Los Esporocarpos o cuerpos fructíferos asexuales pueden ser conidióforos simples, sinema y esporodoquio,
éstos se encuentran superficialmente en el tejido, mientras que el acérvulo y el picnidio son generalmente
subcuticulares o están dentro del tejido.

Los Ascocarpos son: Cleistotecio, peritecio y apotecio. En los primeros dos, las ascas se encuentran
encerradas dentro del cuerpo fructífero, difiriendo entre sí, porque el peritecio posee una abertura de salida u
ostiolo y el cleistotecio no. En el apotecio las ascas se encuentran sobre el ascocarpo y no dentro de él. Las
ascas también pueden estar libres como ocurre en los Ascomicetos menos evolucionados. Cuando los cuerpos
fructíferos se localizan dentro de un estroma (Ascostroma) son conocidos como pseudotecios.

Basidiomycotina:

Aquí se agrupa una gran diversidad de hongos entre los cuales tenemos las Royas, los Carbones, las Setas y la
mayoría de hongos carnosos. Estos organismos poseen micelio tabicado como los Ascomycotina.

La reproducción asexual es por medio de esporas de diferentes tipos. En la reproducción sexual hay formación
de basidios, los cuales originan a las esporas sexuales o basidiosporas. En las royas se forman Aeciosporas,

Rodolfo Reyes V.
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Uredosporas y Teliosporas. En los carbones sólo Teliosporas. Los Basidiomicetos más desarrollados poseen
cuerpos fructíferos (Basidiocarpos) generalmente macroscópicos de diferente morfología, desde setas hasta
estructuras gelatinosas, papiráceas, esponjosas, corchosas, cartilaginosas o en forma de costra. Las royas y
carbones no forman basidiocarpos.

Deuteromycotina:
También conocidos como hongos imperfectos, debido a que no se les reconoce fase sexual. Constituyen la fase
conidial de muchos Basidiomicetos y principalmente Ascomicetos. El micelio es septado y generalmente
plurinucleado pudiendo producir estructuras de supervivencia conocidas como Clamidosporas o hifas
especializadas para la reproducción asexual conocidas como conidióforos, los cuales pueden estar individuales o
libres, o dentro de cuerpos fructíferos conocidos como: Acérvulos, Picnidios o Esporodoquios. Esto es de vital
importancia para la clasificación. Debido a la gran cantidad de conidios producidos y al número de fitopatógenos,
este grupo es de mucha importancia.

II. OBJETIVOS:

1. Conocer las estructuras morfológicas características de las principales clases de hongos fitopatógenos.
2. Asociar los síntomas detectados con las estructuras de hongos encontrados

III. MATERIALES Y METODOS:

Material vegetal con síntomas de enfermedad, cultivos puros de hongos, montajes permanentes, microscopio
compuesto, estereoscopio, hoja de afeitar, agujas de disección, agua destilada, goteros, porta y cubre objetos.

IV. PROCEDIMIENTO

1. Hacer preparaciones del material proporcionado (cortes, raspados o extracción con tape) en laminillas porta
objetos.

2. Observar al microscopio las preparaciones hechas, según el paso anterior.

3. Fotografiar las estructuras observadas. Y relacionarlas con un patógeno conocido

IV. CUESTIONARIO:

1. ¿Cómo diferenciaría un hongo de la Subdivisión Zygomicotina de uno de la Subdivisión Ascomycotina?

2. ¿Cuáles son las estructuras sexuales y asexuales características para cada Subdivisión? Presente dibujos.

3. Anote 5 enfermedades de importancia económica en nuestra región causadas por cada Subdivisión de
Hongos.

4. ¿Cuáles son las principales estructuras morfológicas de Basidiomycotina y Deuteromycotina? Demuéstrelo

con dibujos.

Rodolfo Reyes V.
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Laboratorio No. 5 –Fitopatología I-

CARACTERIZACION DE BACTERIAS FITOPATOGENAS

I. INTRODUCCION:

Un buen número de las plantas cultivadas es afectado grandemente por las bacterias. De las 1,600 especies conocidas
aproximadamente 200 especies son fitopatógenas. Cuando las condiciones ambientales son favorables, las bacterias
pueden ocasionar severas pérdidas. Como ejemplos se pueden mencionar: El tizón de fuego en Rosaceae producido por
Erwinia amylovora, el moko del banano y papa producido por Pseudomonas solanacearum y las pudriciones blandas de
frutos y hortalizas producidas por Erwinia spp., Corynebacterium spp., Pseudomonas spp. y Xanthomonas spp. Las
bacterias ocasionan manchas que afectan la calidad y el desarrollo de los cultivos, ocasionan también agallas y cánceres,
pudriciones y tizones pero sin duda el daño más grave es cuando producen marchitez vascular.

Las bacterias son microorganismos simples que normalmente están constituidos por células procarióticas simples, es
decir, células que contienen un solo cromosoma pero que carecen de membrana nuclear o de organelos internos
equivalentes a las mitocondrias y los cloroplastos. Pueden tener forma de bastón (bacilos), ser esféricas (cocos),
elipsoidales, espirales (espirilos) o en forma de coma (corineiformes) o filamentosas. Las etapas vegetativas de la
mayoría de los tipos de bacterias se reproducen mediante simple fisión binaria.

En los primeros sistemas de clasificación de los organismos, las bacterias comprendieron la clase Schizomycetes y todas
las bacterias que producían enfermedades de plantas pertenecían a los órdenes: Pseudomonales (Fam.
Pseudomonadaceae), Eubacteriales (Fam. Rhizobiaceae, Enterobacteriaceae y Corynebacteriaceae) y Actinomycetales
(Fam. Streptomycetaceae).

CARACTERISTICAS DE BACTERIAS FITOPATOGENAS

Las principales características de los géneros de bacterias fitopatógenas son las siguientes:

Agrobacterium: Forma de bastón, sus dimensiones son de 0,8 x 1,5 a 3 Um. Se desplazan por medio de 1 a 4 flagelos
perítricos. Cuando presentan un solo flagelo, éste con frecuencia es más lateral que polar. Cuando crecen en medios
que contienen carbohidratos, estas bacterias producen abundante mucílago polisacárido. Las colonias no presentan
pigmentación y usualmente son lisas. Estas bacterias son habitantes del suelo y de la rizósfera. Gram negativas.

Corynebacterium: Bastones rectos o ligeramente curvos y con dimensiones de 0,5 – 0,9 x 1,5 – 4 um. En ocasiones,
presentan segmentos irregularmente teñidos o gránulos e hinchamientos en forma de masa. Por lo general las bacterias
son inmóviles, pero algunas spp. producen enfermedades en el hombre y los animales.

Erwinia: Bastones rectos, con dimensiones de 0,5 – 1,0 x 1,0 – 3,0 Um. Se desplazan por medio de varios o muchos
flagelos perítricos, únicas bacterias fitopatógenas que son anaerobias facultativas. Algunos autores prefieren utilizar el
nombre de Erwinia para las que producen necrosis o marchitamientos (por ejemplo: Erwinia amylovora y Erwinia
tracheophila), pero consideran a las Erwinias de las pudriciones blandas (por ejemplo: Erwinia carotovora) en un nuevo
género, Pectobacterium. Gram negativa.

Pseudomonas: Bastones rectos o curvos, con dimensiones de 0,5 – 1 x 1,5 – 4 Um. Se desplazan por medio de uno a
muchos flagelos polares. Muchas spp. son habitantes comunes del suelo o de ambientes marinos y de agua dulce. La
mayoría de las spp. patógenas de este género infectan a las plantas y solo algunas de ellas a los animales y al hombre.
Gram negativas.

Xanthomonas: Bastones rectos, con dimensiones de 0,4 – 1,0 x 1,2 – 3 Um. Se desplazan por medio de un flagelo
polar. Cuando se desarrollan en un medio de agar, a menudo son de color amarillo. La mayoría de ellas crecen muy
lentamente. Todas las spp. son fitopatógenas y se encuentran sólo en asociación con plantas o con órganos de éstas.
Gram negativas.

Rodolfo Reyes V.
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Streptomyces: Hifas delgadas y ramificadas que carecen de pared celular con dimensiones de 0,5 – 2 um en diámetro.
Al llegar a la madurez, el micelio aéreo forma cadenas de más de 3 esporas. Cuando crecen en medio de cultivo, las
colonias son pequeñas (de 1 – 10 mm. de diámetro) y al principio su superficie es lisa, pero después forman un tejido de
micelio aéreo que puede tener aspecto granular, polvoriento o aterciopelado. Las distintas spp. y cepas del organismo
producen una amplia variedad de pigmentos que le dan color al micelio y al substrato, producen 1 o más antibióticos
activos contra bacterias, hongos, algas, virus, protozoarios o tejidos tumorales. Todas las spp. habitan en el suelo.

II. OBJETIVOS

1. Familiarizarse con las principales características de las bacterias fitopatógenas

2. Practicar los diferentes métodos de tinción para el reconocimiento de bacterias
3. Reconocer algunos géneros de bacterias por su desarrollo en medios artificiales de cultivo diferenciales

III. MATERIALES:

Zanahorias y tubérculos de papa con pudriciones bacterianas, plantas de tomate y papa atacadas con marchitez y
vascular, plantas de arroz atacadas por necrosis bacteriana, frutos atacados por bacterias, otras plantas y frutos con
síntomas de bacteriosis. Bactoagar, agua destilada, agujas de disección, goteros porta y cubreobjetos, diferentes
colorantes para hacer tinciones.

IV. PROCEDIMIENTO

a) TINCION SIMPLE DE BACTERIAS:

1. Tinción con Rojo Congo:

Preparar una solución acuosa de rojo congo al 2%

 Deposite una gota de la solución de rojo congo en un portaobjetos limpio y agregue una pequeña cantidad de
la muestra que contenga bacterias: material vegetal o colonias. Mezcle el material con el colorante y
distribúyalo por toda la cara superior del portaobjetos, utilizando el borde de un portaobjetos o el asa.
 Deje secar la preparación sin calentarla.
 Una vez seca la preparación, agréguele unas cuantas gotas de alcohol acidificado (3 gotas de HCl
concentrado en 30 ml. de alcohol etílico al 95%). Esto hace cambiar el color de la preparación de rojo a azul.
Deje que el alcohol se evapore.
 Observe la preparación al microscopio con el lente de inmersión.

Las bacterias aparecen incoloras en un fondo azul.

2. Tinción con Azul de Metileno:

Fórmula para la solución colorante:

Azul de Metileno: 0.3 gr.

Alcohol Etílico: 30.0 ml.

 Disuelva el colorante en el alcohol y agregue 100 ml. de agua destilada.

 Haga una suspensión diluida de las bacterias y coloque una gota sobre un portaobjetos limpio.
 Extienda la gota sobre el portaobjetos y cubra la cara superior, según se explicó en el método anterior. Deje
secar la solución.
 Fije las bacterias al vidrio, pasando la preparación rápidamente unas 5 veces sobre la llama de un mechero
de alcohol. Asegúrese que la llama pase por el lado opuesto a la cara donde se hallan las bacterias.
 Aplique una gota del colorante a la preparación y déjela reposar por unos minutos: lave el exceso de
colorante con agua destilada y deje secar.

Observe la preparación al microscopio con el lente de inmersión.

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b) TINCION DIFERENCIAL DE BACTERIAS O TINCION DE GRAM:

MATERIALES:

Solución A: Violeta Genciana

Violeta Genciana........................................... 0,5 g.

Alcohol Etílico 97%....................................... 20,0 ml.
Cristales de fenol.......................................... 2,5 g.
Glicerina........................................................ 80,0 ml.
Agua destilada.............................................. 100,0 ml

Solución B: Solución de Yodo

Yodo............................................................. 1,0 g.
Yoduro de potasio........................................ 2,0 g.
Agua destilada............................................. 100,0 ml.

PROCEDIMIENTO:

Se prepara y se fija la preparación en igual forma que en el caso de la tinción como azul de metileno, sin agregar
ningún colorante. Manteniendo el portaobjetos caliente, agregue:

1. La solución A y mantenga el portaobjetos con esta solución por 1 minuto.

2. Elimine el exceso al cabo de este tiempo; no lave en agua.
3. Añada la solución B y mantenga el portaobjetos cubierto con esta solución por 1 minuto.
4. Elimine el exceso al cabo de este tiempo; no lave en agua.
5. Lave con alcohol etílico puro, agitando el portaobjetos todo el tiempo, hasta que no se desprenda más
colorante. Esto se comprueba al colocar la preparación sobre un fondo blanco.
6. Agregue la solución C de safranina y agite la preparación por 30 segundos.
7. Lave con agua, seque el exceso con papel absorbente y por último a la llama.
Las bacterias GRAM POSITIVAS aparecen AZULES y las GRAM NEGATIVAS aparecen ROSADAS

c) CARACTERISTICAS DE BACTERIAS FITOPATOGENAS:

MATERIALES Y PROCEDIMIENTO:

Agar infusión de carne.

Hierva 250 ml. de agua destilada en un recipiente apropiado. Cuando el agua comience a hervir, agregue 4 gr.
de agar y agite la mezcla hasta que el agar se haya disuelto. Poco antes de retirar el líquido del calor, agregue
0,8 gr. de extracto de carne y disuélvalos bien. Lleve el volumen del líquido a 250 ml de agua. Ajuste el pH a 7,2
agregando soda 0,1 N.

Vacíe el medio en tubos de ensayo, procurando dispensar más o menos 4 ml. en cada tubo. Tape los tubos con
tapones de algodón y colóquelos en canastillas. Luego introdúzcalos en el autoclave y antes de que el medio se
solidifique, verifique que el pH se mantenga alrededor 7,2 y coloque los tubos inclinados de modo que el nivel del
agar quede a unos 3 cm. del tapón. Una vez que el agar se haya solidificado, con el asa tome una pequeña
porción de la colonia en observación y siémbrela en el medio.

Agar glucosa infusión de carne:

 Prepare 250 ml de este medio en la misma forma que preparó el anterior, pero al agregar el extracto de carne
agregue también 2,5 gr. de glucosa.
 Siembre en los tubos la bacteria en observación.

Rodolfo Reyes V.
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Cilindros de papa esterilizada:

 Lave las papas cuidadosamente y trátelas con una solución de cloro (Magia blanca) al 10% por espacio de 15
minutos, luego lávelas con agua destilada. Con un bisturí (navaja u hoja de afeitar) haga cilindros de papa de
7 cm. de largo por 1,5 cm. de diámetro. Obtenga cuantos cilindros sea posible de cada tubérculo. Luego parta
cada cilindro en 2 diagonalmente.
 Cada mitad se coloca con la base hacia abajo en un tubo de ensayo. Agregue 1,5 ml de agua a cada tubo y
tápelo con un tapón de algodón. Los tubos deben esterilizarse a 10 libras de presión por 15 minutos. (en
autoclave)
 Siembre la bacteria en observación en la superficie inclinada de los cilindros de papa.
 Producción de ácido y gas en salicina:

Medio sintético: (NH4) H2PO................................... 0.1 gr.

KCl................................................... 0.2 gr.
MgSO4 7H2O.................................... 0.2 gr.
Salicina............................................. 10.0 gr.
Agua destilada.................................. 1000.0 gr.

 Agregue a este medio bromocresol púrpura en la proporción de 2 ml. de la solución preparada por la casa
manufacturera por cada 100 ml. del medio.
 Ajuste el pH a 7,0 agregando soda 0,1N. Dispense el medio en tubos de ensayo a los cuales se les ha
incorporado un tubo de fermentación Durham. Esterilice el medio.
 Siembre la bacteria en observación directamente en el medio líquido.

Producción de ácido y gas en lactosa:

 Igual al anterior, pero sustituyendo la salicina por 10 gr. de lactosa.
 Siembre la bacteria en observación directamente en el medio líquido.
 Espere 8 días, observe y anote las características observadas

CARACTERISTICAS DE ALGUNOS GENEROS DE BACTERIAS FITOPATOGENAS GRAM NEGATIVAS.

MEDIO DE CULTIVO Erwinia o Pectobacterium Pseudomonas Xanthomonas

Agar infusión de carne. Flagelos perítricos. Flagelo polar. Flagelo polar. Crecimiento
Crecimiento blanco, sucio Crecimiento blanco con amarillento.
o gris pálido. fluorescencia verde.
Agar glucosa. Infusión de Crecimiento blanco o gris Crecimiento blanco Crecimiento amarillo,
carne. brillante. brillante. Nunca gris. abundante y mucoso.
Cilindros de papa Crecimiento cremoso o Crecimiento cremoso, Crecimiento amarillo
esterilizada. blanco sucio, más tarde luego amarillo ligero o abundante, mucoso, papa
amarillento. púrpura. digerida.
Salicina con bromocresol Producción rápida de No produce ácido. No produce ácido.
púrpura. ácido o ácido y gas.
Lactosa con bromocresol Ácido o ácido y gas, o no No produce ácido. Ácido solamente.
púrpura. produce ácido.

V. CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es la función del mordiente lugol en la tinción diferencial de Gram?

2. ¿Cuál es la función del agar en los medios de cultivo?

3. ¿Cómo podrían observarse los flagelos de las bacterias?

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Práctica No. 6

TECNICAS PARA EL AISLAMIENTO, OBSERVACION Y FIJACION DE NEMATODOS FITOPATOGENOS

I. INTRODUCCION

Los nemátodos (Gr. nema = filamento, toid = parecido) son generalmente organismos filiformes, aunque hay
especies que en un momento de su vida tienen forma de saco, riñón o pera. Varían en tamaño desde 0,3 mm
como es el caso del fitoparásito Paratylenchus nanus, pasando por el fitoparásito más grande que se conoce:
Paralongidoras maximus que mide 12 mm., hasta Placentonema gigantísima que es un parásito de las ballenas
que mide hasta 9 m de largo. Recordemos que Ascaris lumbricoides, parásito del ser humano, también es un
nematodo, lo mismo Dracunculus medinensis, el emblema de los médicos es un nemátodo y no una serpiente.
Este nemátodo penetra los pies, brazos y piernas del ser humano.

Los nematodos son un grupo zoológico muy antiguo. El nematodo más antiguo que se conoce fue encontrado por
el Dr. Poinar en Chiapas, México. Lo encontró embebido en ámbar, y había tanto adultos como larvas, así como
esporas y micelio del hongo que supuestamente le servía de alimento. Le calculan a este fósil 25 millones de
años.

El número de especies descritas varía con el autor; Croll dice que existen 27 000 especies, Andrasy menciona
que existen 20 000, Manggeti habla de 11 000. Lo cierto es que sólo son superados por los moluscos (un poco
más de 11 000) y los artrópodos (765 000 especies descritas). Los encontramos sólo en ambientes húmedos.

El 50% de las especies son marinas, 15% parásitos de los animales, incluyendo al ser humano, 10% fitoparásitos
y el 25% de vida libre en el suelo. Estos últimos alimentándose de la materia orgánica del suelo, de hongos,
otros nematodos, etc. Nos interesan en particular aquellos parásitos de las plantas, es decir, aquellos que se
alimentan de las plantas pero que no necesariamente tienen que ser patógenos.

Los fitoparásitos tienen dos nichos ecológicos: El suelo y la planta. En el suelo son semiacuáticos, necesitan de
una película de agua. Por lo que la textura y estructura del suelo que determinan la retención de agua, afectarán
su vida. Los nemátodos se mueven en el suelo por sí mismos activamente, otros casi no tienen movimiento.
Pero en forma pasiva se mueven en corrientes de agua, aire y otros organismos o materiales que se trasladan.

Las partículas de suelo finas como arcillas afectan el movimiento de los nematodos, pero en suelos arenosos no
existe el problema, aunque si el suelo es bien drenado se seca fácilmente al grado que puede ser detrimental a
las poblaciones. La materia orgánica le confiere a los suelos propiedades que son detrimentales para los
nematodos puesto que aumenta la población de enemigos naturales y cambia el microclima del suelo. La
mayoría son activos a partir de los 5° C hasta los 35° C, y mueren a los 48° C si se exponen durante 30 minutos.
La luz es poco importante. En el suelo compiten con individuos de la misma especie por sitios de penetración y/o
alimentación o bien tienen enemigos naturales como bacterias, rickettsias, hongos, protozoarios, virus, tisanuros,
y nematodos nematófagos.

En las plantas encontramos los nematodos principalmente afectando las raíces, pero existen unas especies que
afectan tallos, hojas, flores, frutos y semillas, es decir, nematodos de las partes aéreas. Por su hábito de
alimentación en la planta los nematodos se agrupan en diferentes categorías.

CLASE
Secernentea Adenophorea
1. Parásito de raíces:
a. Ectoparásitos + +
b. Ecto-endoparásitos + +
c. Parásitos migratorios + +
d. Endoparásitos sésiles + +

2. Parásitos de partes aéreas:

a. Ectoparásitos + -
b. Endoparásitos + -

Rodolfo Reyes V.
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Los ectoparásitos se alimentan dejando el cuerpo fuera, se aproximan a los tejidos al azar o localizan sitios donde
fijan los labios y encajan el estilete (estomatoestilete u odontoestilete) y absorben el alimento, mediante
contracciones del esófago. Ejemplo: Trichodorus, Longidorus, Paralongidorus.

Los ecto-endoparásitos o semiendoparásitos: son aquellos que parte de su vida permanecen fuera y pueden
penetrar y salir o no, ejemplo: Pratylenchus.

Los parásitos migratorios: Se caracterizan porque migran dentro y fuera de la planta. Ejemplo: Radopholus
similis, Dytilenchus, Aphelenchoides, Rhadinaphelenchus cocophilus.

Endoparásitos sedentarios: Permanecen una pequeña parte de su vida fuera de la planta, pero una vez dentro
de la planta se vuelven sedentarias para completar su desarrollo y presentan polimorfismo sexual, por ejemplo: el
género Meloidogyne.

Existen nemátodos en los que las hembras hinchadas al realizar la cuarta muda emigran a la superficie de la raíz,
sacan todo su cuerpo globoso, se adhieren a ella, las fecunda el macho filiforme que en esos momentos está
afuera de la raíz, la hembra fecundada muere y su cutícula se seca y encierra los huevecillos. A la hembra
muerta y seca es lo que se le conoce como quiste que es una forma de sobrevivir por muchos años y los huevos
permanecen en buen número viables. Estos géneros de nematodos son Heterodera, Globodera, Puntodera y
Sarisodera.

Existen también nematodos con una cutícula muy ornamentada y a la vez son muy lentos, casi no se mueven
activamente, son los del grupo de los Criconemátidos.

II. OBJETIVOS

1. Familiarizarse con los procedimientos de extracción, fijación, conteo e identificación de nematodos

fitopatógenos
2. Practicar la extracción y pesca de nematodos para su observación al microscopio
3. Reconocer nematodos fitopatógenos por sus características morfológicas

III. PROCEDIMIENTO

PARA LA EXTRACCION DE NEMATODOS FITOPATOGENOS:

El método de extracción de nemátodos a emplear dependerá de, si se trata del suelo o material vegetal, si se
trata de hembras sedentarias, nemátodos poco activos, muy activos o si son ornamentados, si forman quistes,
del equipo que dispongamos, si deseamos tener resultados rápidos, etc.

Existen varios métodos utilizados en función de las anteriores características. Pero los más comunes son.

a. Método del embudo de Baermann

b. Método tamizado, también llamado de gravedad o de Cobb.
c. Método tamizado y embudo.
d. Método centrifugado.
e. Método tamizado centrifugado.
f. Método de incubación.
g. Método de Fenwick
h. Disección.

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a. Método del embudo de Baermann:

Este método tiene la ventaja que es sencillo, es el más utilizado, no requiere de equipo sofisticado. Tiene
la desventaja de que toma mucho tiempo, se necesitan 2 días para obtener los resultados, además por
este método no se pueden extraer aquellos nemátodos sedentarios, formadores de quistes o los poco
activos y ornamentados como los Criconemátidos (géneros: Criconema, Diiscoordiconemella,
Hemicriconemoides, Criconemoides, Hemycycliophora, etc.). De los sedentarios, formadores de quistes
sólo se podrán extraer larvas o machos.

Con este método se pueden hacer extracciones tanto del suelo como de partes vegetativas.
Pasos:

 De la muestra del campo perfectamente homogenizada, extendida sobre una superficie, tome al azar
porciones de suelo que completen ya sea 50, 100 o 200 gramos del mismo. En lugar de suelo
pueden ser raíces.
 Llenar el embudo de agua hasta el nivel donde está la malla metálica con el papel sanitario, papel
“Kleenex” o papel mayordomo
 Colocar el suelo o raíces sobre la malla.
 Purgar el embudo a través de las pinzas que se encuentran en la manguera de hule.
 Restablecer el agua en el embudo de manera que el suelo o las raíces queden completamente
húmedos. En este paso se debe tener el cuidado de que al llenar el embudo, la operación se haga
por las orillas para no romper el papel ubicado sobre la malla. Mantener el cuidado de que el suelo o
raíces estén siempre húmedas.
 Los nemátodos pueden ser recolectados pasadas 24 – 48 horas, abriendo las pinzas. La recolección
puede hacerse en frascos de 5 o de 8cc. (caja de Petrí)
 Hacer las observaciones en el microscopio estereoscopio y su posterior pesca e identificación en el
microscopio compuesto.
 Si queremos cuantificar los nemátodos contenidos de los 5 u 8 cc, que corresponderán a los activos
contenidos en los 50, 100 o 200 gr. iniciales, tomamos varias alícuotas de 0,1 cc., se cuantifican en
un vidrio Siracusa cuadriculado.

b. Tamizado de Cobb:

Este es un método rápido, se extraen todos los nemátodos aunque no tengan movimiento, pero tiene la
desventaja que las muestras salen sucias, dificultando a veces la observación.

Pasos:

 Los 50, 100 o 200 gramos de suelo, se mezclan perfectamente en unos 2 litros de agua, contenidos
en una cubeta, se dejan reposar unos 5 segundos y se decanta, a través del tamiz número 10 o 20.
Cuando el suelo tiene mucha materia orgánica o bien por el de 80 o 100 en caso contrario.
 El agua, nematodos y suelo tamizado se recolectan en otra cubeta, se mezclan perfectamente y se
decantan en un tamiz como el No. 200.
 Se lava la primera cubeta y en ella se reciben los nemátodos, agua y suelo tamizados nuevamente.
 La operación se repite en el tamiz No. 325, y de ser posible en uno No. 500 en el que se interceptan
muchas larvas.
 El material interceptado en los tamices Nos. 100, 200, 325 y si se tiene el No. 500, se pueden
analizar por separado si queremos separar nemátodos de diferentes tamaños o juntarse en un solo
recipiente auxiliándose de una pizeta.

c. Tamizado y embudo:

Si queremos las muestras más claras, es decir sin sedimentos de tierra que las enturbie, se puede pasar
el material interceptado en los tamices a los embudos de Baermann y procesarse por el procedimiento ya
descrito para este método.

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d. Centrifugado:

Este método es más rápido, saca las muestras limpias y el mayor número de nemátodos.

Pasos:

 La cantidad de suelo a procesar se revuelve en un vaso de precipitado y con esta suspensión se

llenan los tubos de la centrífuga, mezclando en cada tubo aproximadamente 0,1 gr. de caolín.
 Todos los tubos de la centrífuga con el caolín deben de tener el mismo peso.
 Centrifugar a 2 – 3 mil Rpm. durante 3 o 5 minutos, después de los cuales se desecha el
sobrenadante.

 Resuspender el precipitado (suelo, caolín y nemátodos) en una solución azucarada al 46% (1

libra/litro de agua) de manera que todos los tubos pesen lo mismo.
 Centrifugar por 3 minutos a 2500 Rpm.
 El sobrenadante se vierte inmediatamente en el tamiz No. 325 ó 500 y se enjuaga inmediatamente,
sumergiendo y levantando el fondo del tamiz en una cubeta de agua.
 Después de eliminada la solución azucarada de la superficie del cuerpo de los nemátodos, se
encuentran en un vaso de precipitado, auxiliándose para la operación de una pizeta con agua.
 Por este método se pueden extraer nemátodos de partes vegetativas, previamente cortados en
trozos de ½ cm. y licuados.

e. Tamizado – centrifugado:

En lugar de utilizar el suelo, a veces con partículas muy grandes, es como el método anterior, se tamiza y
el material interceptado en los tamices 100, 200, 325 y 500 se mezcla en un vaso de precipitado y se
procesa como el método de centrifugado.

f. Método de incubación:

Muchas veces disponemos de material vegetativo (tallos, ramas, flores o frutos y queremos saber si
tienen nemátodos y qué tipo de los mismos, o bien suelo con los mismos fines. El material se puede
colocar en cajas de petrí con agua o bien envuelto en papel Kleenex sumergido en agua. Después de un
día se analiza el agua.

g. Método de Fenwick:

Este método se usa para extraer quistes de suelo, mediante el aparato llamado Flotador de Fenwick.

h. Disección:

Cuando queremos extraer hembras de nódulos, los hacemos disectando el nódulo bajo el microscopio
estereoscopio, con el auxilio de agujas de disección. Esta operación se hace con sumo cuidado para
evitar destruir a las hembras.

TECNICAS PARA LA FIJACION DE NEMATODOS:

La preparación de montajes (temporales o permanentes) de nemátodos, requiere del uso de técnicas especiales
debido a la naturaleza de este tipo de microorganismos (movilidad y fácil descomposición).

Suponiendo que se parte de la suspensión de nemátodos obtenidos por cualquiera de los métodos de extracción
descritos anteriormente, se tendrán entonces nemátodos vivos, difíciles de observar por sus movimientos. Para
facilitar la observación de los mismos, se procede en primer lugar a matarlos y fijarlos luego, cuando se quieren
conservar.

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1. Matado: Los nemátodos son sensibles a las altas temperaturas, por lo que los métodos utilizados para
matarlos requieren de la aplicación de temperatura, la cual no debe ser tan alta que les cause deformaciones,
ni tan baja que permita su recuperación. Comúnmente se recomiendan temperaturas que oscilen alrededor de
los 70 a 80° C y para lograr esto, podemos utilizar las siguientes técnicas:

a) El frasco donde se tienen los nemátodos en suspensión, es tomado con la ayuda de una pinza y
colocado en baño María. El frasco debe moverse en forma circular y horizontal para permitir que la
temperatura de la suspensión de nemátodos se distribuya uniformemente. Esta operación no debe
exceder de los 5 minutos.

b) En un vaso de precipitado se coloca un volumen de agua igual al de la suspensión de nemátodos y se

pone a calentar hasta que llega a una temperatura de 70 a 80° C. Luego se vierte el agua a esta
temperatura en el recipiente que contiene la suspensión de nemátodos.

2. Fijación: Con este tipo de procesos se pretende preservar a los especímenes cuando se desea estudiar su
morfología con fines de identificación. Para la fijación de nemátodos se emplea una serie de sustancias y
compuestos entre los cuales los más usados son la formalina al 5% y el fijador conocido como TAF. Para la
preparación de este fijador puede procesarse de la siguiente manera:

Trietanolamina............................................................. 2 ml.
Agua destilada............................................................. 91 ml.
Formaldehído (40%)................................................... 7 ml.

3. Combinaciones Matado-fijado: Los nemátodos recogidos en un frasquito de 10cc. se dejan reposar por
espacio de 4 a 6 horas, luego de lo cual se elimina la mitad del agua de la suspensión y se le agrega en
caliente (70 a 80° C) formalina al 5% o fijador TAF. Se pueden usar otros fijadores pero estos se
necesitan más para montajes permanentes.

OBSERVACION Y CONTEO DE NEMATODOS FITOPARASITICOS:

Los nemátodos recogidos en un frasquito de 10 cc. se vierten en un vidrio de Siracusa y se observan en un

microscopio binocular (estereoscopio) con luz directa. El vidrio de Siracusa puede cuadricularse en el fondo o
bien puede colocarse debajo del mismo un acetato con divisiones de ¼ de centímetro para facilitar el conteo de
los nemátodos fitoparasíticos.

Debe quedar claro que los nemátodos fitoparasíticos se van a diferenciar de los no parasíticos únicamente por la
presencia de un estilete, el cual va a variar de acuerdo al género de nemátodos que se estén observando.

En cuanto al conteo, es necesario obtener un número promedio de nemátodos fitoparasíticos por los 10 cc. de
suspensión y relacionarlo con el volumen inicial de suelo infestado, (Ej. 150 cc. de suelo), posteriormente se
obtiene en forma aproximada la población de nemátodos fitoparasíticos en un área determinada para un cultivo
cualquiera, simplemente relacionando la población de nemátodos obtenida por cualquiera de los métodos de
extracción.

TECNICAS DE MONTAJE DE NEMATODOS:

Se usan para el efecto portaobjetos de gota pendiente o pueden prepararse los mismos usando portaobjetos
corrientes, haciéndoles un anillo que provoque una cavidad que permita a los nemátodos permanecer en el fondo
de la misma sin ser dañados al colocar el cubreobjetos. El anillo puede hacerse con esmalte de uñas. Algunas
veces, en lugar de anillos se colocan en cuatro esquinas de un cuadro imaginario, puntos de pintura de uñas. En
todos los casos lo que se pretende es dejar cavidades para evitar el aplastamiento de los ejemplares.

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Rodolfo Reyes V.
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Las preparaciones para uso inmediato, se hacen colocando los nemátodos en una gota de agua destilada.
Puede hacerse preparaciones útiles por varias semanas o meses, sustituyendo el agua destilada por una
solución de formalina al 5%.

El procedimiento a seguir para efectuar este tipo de preparaciones es el siguiente:

 Se coloca una gota de agua o formalina al 5% en el centro de un portaobjetos preparado en la forma

anteriormente descrita.
 Se localizan los nematodos en un vidrio de Siracusa con la ayuda de un binocular estereoscópico, utilizando
aumentos de 15 a 45X.
 Luego se levantan los nemátodos cuidadosamente hasta la superficie del agua con el auxilio de una aguja
especial (hecha de bambú, eliminando la parte interna de la caña y dejando solo la epidermis bien afinada; o
también se puede preparar con una aguja de disección, a la cual se adhiere en la punta una pestaña con
parafina derretida o pegamento). Mientras se realiza esta operación se debe mantener el nemátodo bajo
observación con el microscopio.
 Para sacar el nemátodo se le forma un pequeño remolino alrededor y cuando está justo bajo la superficie del
agua se levanta con la aguja y se lleva al portaobjetos.
 Debe observarse la preparación bajo el binocular para asegurarse de que el nemátodo fue depositado en el
portaobjetos. Luego se coloca a la preparación un cubreobjetos.
 Si los nemátodos se mueven en el agua, se calienta el portaobjetos por 5 – 6 segundos sobre la llama de un
mechero para matarlos y reflejarlos.
 Se elimina el exceso de agua o formalina con la ayuda de papel absorbente y la preparación estará lista para
observarse al microscopio.
 La preparación en solución de formalina puede sellarse colocando esmalte de uñas en las orillas del
cubreobjetos.

VI: C U E S T I O N A R I O:

1. ¿Por qué los Chriconemátidos no pueden ser extraídos por el método del embudo de Baerman?

2. Usted notará que los tamices que se usan para extracción de nemátodos tienen un número (800, 100, 250, 325, etc.).
¿Cuál es su significado?

3. ¿Qué función tienen el uso de caolín y glucosa al 46% en la extracción de nemátodos en el método de la centrifuga?

Rodolfo Reyes V.
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Práctica No. 7

MORFOLOGIA E IDENTIFICACION DE NEMATODOS FITOPARASITOS

I. INTRODUCCION:

Todos los nemátodos en alguna etapa de su ciclo son filiformes y cilíndricos, con los extremos generalmente
redondeados. En algunos géneros la hembra adquiere una forma globosa o forma de pera (piriforme) como
sucede en el caso de nemátodos del género Meloidogyne.

Generalmente los nemátodos fitoparasíticos tienen una longitud que oscila alrededor de 0,5 a 2 mm. Sin
embargo, existen otros que pueden llegar a medir hasta 4 mm de largo.

En un nemátodo típico, la boca se localiza en la parte anterior, constituida de diferentes estructuras, como el
estilete en el caso de los nemátodos fitoparasíticos. Inmediatamente se encuentra el esófago al cual le sigue el
intestino que termina en el recto, desembocando al exterior por el ano que se haya situado en la parte ventral. La
parte comprendida entre el ano (parte final del intestino) y el extremo posterior del cuerpo se denomina “cola”.

En las hembras, la vulva se encuentra situada ventralmente. Algunas poseen un solo ovario (monodélfico) y
otras poseen dos (didélfico).

Los machos en la parte posterior poseen un par de estructuras conocidas como “espícula”, la cual usan para la
copula y es llevada al exterior a través del ano. Generalmente se encuentra conectada con los testículos, los
cuales por lo general están representados por uno solo y raras veces pueden ser dos testículos.

En general, las hembras y los machos son muy parecidos excepto que los machos son ligeramente más
pequeños y que además en la espícula a veces tienen una bolsa cuticular o “ala caudal” (bursa) en la porción
distal del cuerpo, que cubre parte de los órganos reproductores. En cuanto al sistema nervioso, forma un anillo
guía que se encuentra situado alrededor del esófago en la región conocida como istmo.

El tipo de esófago también es importante en la clasificación de los nemátodos, principalmente la sobreposición de

las glándulas esofágicas, el bulbo medio, etc.

Las principales características morfológicas usadas para la clasificación de los nemátodos fitoparasíticos son:

a) Región cefálica.
b) Estilete.
c) Tamaño y ornamentaciones del cuerpo.
d) Cola
e) Esófago.
f) Órganos reproductores (tipo ovario, posición de la vulva, tipo de espículas, presencia de “ala caudal” o “bursa”,
etc.)

II. OBJETIVOS:

Conocer los principios básicos de identificación de los géneros de nemátodos fitopatógenos de mayor
importancia en el país. Reconocer las principales características anatómicas y morfológicas de los nemátodos
parásitos de las plantas.

III. MATERIALES:

Montajes temporales y permanentes, formalina al 5%, porta y cubreobjetos, esmalte de uñas, pescador de
nemátodos, lactofenol, suspensión de nemátodos, microscopio compuesto y microscopio estereoscopio, etc.

Rodolfo Reyes V.
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IV. PROCEDIMIENTO:

 Previamente deberá dejar muestras de suelo para extraer nematodos por el método embudo de Baerman
 Durante el laboratorio deberá pescar nematodos y colocarlos en el portaobjetos de gota pendiente siguiendo
los procedimientos aprendidos en el laboratorio anterior
 Observar los nematodos puestos en el montaje bajo el objetivo de menor potencia en el microscopio
compuesto.
 Observar con el objetivo de potencia media (10X) la forma y tamaño del nematodo.
 Determinar la presencia de estilete para confirmar que se trata de un nematodo fitoparásito
 Luego observar la región cefálica y las estructuras de la cavidad bucal (estilete, dientes, etc.) y su
configuración.
 Debe determinarse la forma del esófago y tratar de observar su traslape con el intestino.
 Luego localizar los órganos sexuales (vulva o espícula) si fuesen hembras o machos respectivamente. Debe
tratarse de determinar su posición y características.
 Observar la forma de la cola y su longitud así como el anillo guía y su posición.
 Este procedimiento debe repetirse para cada espécimen, tratando de identificarlo y ubicarlo
taxonómicamente.

Existen claves para la identificación de nemátodos, las cuales utilizan una serie de características morfológicas y
anatómicas para tal fin. En primer lugar se debe indagar si el nemátodo pertenece a la clase Phasmidia o
Aphasmidia, pudiéndose determinar por la forma del esófago. En la clase Phasmidia el esófago puede ser de
tipo: Rhabidotoide, Diplogasteroide, Tylenchoide, Aphelenchoide y Neotylenchoide.

Los últimos tres se caracterizan por la presencia de estilete, fácil de observar, el cual puede tener cualquiera de
las formas que se muestran en la figura 1. Los machos de algunas especies poseen una bolsa cuticular bursa en
la porción distal del cuerpo, que cubre parte de los órganos reproductores. Las hembras de algunos géneros son
filiformes o de formas caprichosas.

En la clase Aphasmidia, los tipos de esófago más comunes son los Plectoide, Cilíndrico y Dorylaimoide.

Si el nemátodo pertenece a la clase Phasmidia y posee estilete, se ubica en el orden Tylenchida y si el estilete
está ausente pertenece al orden Rhabditida. Los géneros que pertenecen al orden Tylenchida se separan en las
superfamilias: Tylenchoidae y Aphelenchoidea. Cuando los nódulos del estilete están bien desarrollados,
pertenece a la superfamilia Tylenchoidae. El tubo esofágico de este grupo comúnmente posee una curvatura
abrupta detrás del estilete.

En este punto se logra ver un brazo o bifurcación muy corta que es la abertura de la glándula dorsal esofágica.
Si está presente la bifurcación y los nódulos del estilete ausentes, el nemátodo tendrá una cola muy larga. Por
otro lado, si el nemátodo posee un bulbo esofágico (bulbo medio y el estoma es cilíndrico), se ubica en la familia
Cephalibidae (ejemplo: Cephalobus, Acrobeles). Los géneros que pertenecen a la clase Aphasmidia y que
poseen un esófago cilíndrico, se ubican en la familia Monchidae. Si el esófago es Dorylaimoide, se ubica en la
superfamilia Dorylaimoidea.

¿CÓMO DISTINGUIR UN NEMATODO PARASITICO?

Los nemátodos parasíticos de los vegetales siempre poseen estilete. Pertenecen al orden Tylenchida de la clase
Phasmidia o a la clase Aphasmidia, superfamilia Dorylaimoide, algunos géneros: Xiphinema, Trichodorus y
Longidorus.

V. CUESTIONARIO:

1. Existen ornamentaciones en la cutícula de algunos nemátodos, ¿En qué grupo se incluyen estos nemátodos?
Dibuje los tipos de ornamentaciones.

2. ¿Qué partes constituyen el esófago de los nemátodos y qué función tienen?

3. Anote 5 géneros importantes de nemátodos y su principal hospedante en cada caso.

Rodolfo Reyes V.
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Práctica No. 8

DEFICIENCIAS NUTRICIONALES DE LAS PLANTAS

I. INTRODUCCION:

El diagnóstico de las enfermedades causadas por alguna deficiencia nutricional en la planta se dificulta sobre todo
cuando no se tiene suficiente experiencia sobre los síntomas que se presentan. Estas se pueden confundir fácilmente
con los síntomas producidos por algunos virus y otros patógenos e incluso por síntomas producidos por otros factores
ambientales. En todo caso, es necesario primero tener pruebas de que las plantas se encuentran libres de patógenos que
pudieran causar la enfermedad.

Los síntomas que presentan las deficiencias de un determinado elemento, dependen de las funciones que desempeñe en
la planta. En algunos casos, los síntomas son los típicos de la deficiencia de ese elemento, pero en otros casos, los
síntomas son más bien los de la deficiencia de otro elemento. Esto se debe a que la deficiencia de un nutriente puede
afectar la disponibilidad de otro.

II. OBJETIVO

Que los estudiantes reconozcan algunos de los síntomas producidos por la deficiencia de algunos nutrientes en los
cultivos más importantes de la región.

III. MATERIALES Y EQUIPO

Muestras de cultivos que presenten síntomas de deficiencia de diferentes elementos

Estereoscopios

IV. DESARROLLO

 Tome una muestra de planta enferma y observe los síntomas que presenta
 Haga los análisis necesarios para asegurar que no se trata de algún patógeno (montaje directo, cámara húmeda
para esporulación, cultivo en medios artificiales)
 Cuando esté seguro de que no se trata de una enfermedad infecciosa, entonces proceda a comparar los
síntomas con los que se detallan en la tabla siguiente.
 Compare síntomas con los que reportan en diferente bibliografía

SINTOMAS DE DEFICIENCIAS NUTRITIVAS EN LAS PLANTAS

NUTRIENTE FUNCIONES DEL ELEMENTO SINTOMAS

Nitrógeno Presente en la mayoría de las Las plantas muestran crecimiento deficiente y un color
substancias celulares verde claro.
Las hojas de la parte inferior de la planta adquieren un
color amarillo o café claro
Los tallos son cortos y delgados.
Fósforo Forma parte del ADN, ARN, Las plantas muestran crecimiento deficiente y sus
fosfolípidos,(a nivel de las hojas son de color verde azuloso con matices
membranas) ADP y ATP. púrpuras.
En ocasiones, las hojas de la parte inferior de la planta
adquieren un color bronce claro con manchas café o
púrpura.
Rodolfo Reyes V.
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Los retoños son cortos y delgados, rectos y espigados

Potasio Funciona como catalizador de Las plantas forman retoños delgados los cuales en
muchas reacciones. casos severos muestran muerte descendente.
Las hojas más viejas muestran clorosis con
empardecimiento de sus puntas.
Chamuscado de los bordes y muchas manchas cafés
casi siempre cerca de los bordes.
Los tejidos carnosos muestran necrosis final
Magnesio Forma parte de la clorofila y es Las hojas, (primero las senescentes y después las
componente de muchas enzimas. jóvenes), toman una apariencia moteada o clorótica y
más tarde rojiza.
En ocasiones aparecen manchas necróticas.
Las puntas y bordes de las hojas pueden doblarse
hacia arriba y adquirir la forma de una copa.
Las hojas pueden entonces desprenderse de la planta.
Calcio Regula la permeabilidad de las Las hojas jóvenes se deforman, sus puntas se doblan
membranas. hacia atrás y sus bordes aparecen.
Forma sales con las pectinas. Las hojas pueden tener forma irregular y estar
Afecta la actividad de muchas maltratadas con manchas o bien con chamuscados
enzimas. cafés. Como consecuencia, las yemas terminales,
mueren.
Las plantas desarrollan sistemas radiculares pobres y
simples.
Ocasiona la pudrición del extremo del brote de muchos
frutos.
En manzana incrementa la producción frutal, recae en
el almacenamiento
La causa de estas afecciones puede deberse a la
exposición a altas temperaturas (24-30° C)
Boro Aún se desconocen sus funciones. Las bases de las hojas jóvenes de las yemas
Afecta la traslocación de los terminales adquieren una tonalidad verde claro y
carbohidratos y la utilización del finalmente se separan.
calcio en la formación de la pared El tallo y las hojas se deforman.
celular. Las plantas se atrofian.
El fruto, los tallos y las raíces carnosas pueden
agrietarse en la superficie y pudrirse en la parte
central.
Produce muchas enfermedades de las plantas, entre
ellas la pudrición del corazón de la remolacha, el
corazón pardo de los nabos, el empardecimiento o
tallo hueco de la coliflor, el tallo agrietado del apio, la
mancha corchosa, muerte descendente y roseta de la
manzana, el fruto endurecido de los cítricos, la
enfermedad de la copa del tabaco
Azufre Forma parte de algunos Las hojas jóvenes tienen un color verde pálido o
aminoácidos y coenzimas amarillo claro y no presentan manchas.
Los síntomas se asemejan a los producidos por
deficiencia de Nitrógeno.
Hierro Catalizador de la síntesis de la Las hojas jóvenes sufren clorosis severa, pero las
clorofila. nervaduras principales siempre se mantienen verdes.
Forma parte de muchas enzimas. En ocasiones se forman manchas cafés.
Hojas completas o parte de ellas pueden secarse y
posteriormente desprenderse.
Zinc Forma parte de las enzimas que Las hojas muestran clorosis intervenal,
participan en la síntesis de las Posteriormente sufren necrosis y muestran una
auxinas y en la oxidación de pigmentación púrpura.
carbohidratos Las hojas escasas y pequeñas.
Los entrenudos son cortos y los retoños forman
rosetas.
Rodolfo Reyes V.
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La producción de los frutos es baja.

Las hojas se desprenden progresivamente desde la
base hasta la punta.
Ocasiona “hoja pequeña” del manzano, vid, frutas de
hueso y cítricos”.
Produce la “hoja de hoz” en cacao, la “punta blanca”
del maíz.
Cobre Forma parte de muchas enzimas Las puntas de hojas jóvenes de los cereales se
oxidantes marchitan y sus bordes sufren clorosis.
Las hojas pueden desarrollarse y tienden a
marchitarse.
Disminuye la formación de cabezuelas y estas
permanecen enanas y deformadas
Los frutales de hueso y de pepita, así como los
cítricos muestran muerte descendente de sus ramas
durante el verano, chamuscado del borde de sus
hojas, clorosis y desarrollo en forma de roseta.
Los cultivos de hortalizas no llegan a desarrollarse
Manganeso Forma parte de muchas enzimas Las hojas sufren clorosis, pero sus nervaduras más
que participan en los procesos de pequeñas se mantienen verdes y producen un efecto
respiración, fotosíntesis y obturador.
utilización del Nitrógeno. Puede aparecer sobre las hojas manchas necróticas
distribuidas sobre su superficie.
Las hojas que son afectadas severamente se
empardecen y marchitan.
Molibdeno Es un componente esencial de la El cultivo de melón y quizá el de otras plantas,
enzima Nitrato reductasa muestran amarillamiento y enanismo severo y no
producen frutos.

RRV/ 2,019

Rodolfo Reyes V.