CURSO DE INTRODUCCIÓN A LA FITOPATOLOGÍA/2023

Dr. Edin Francisco Orozco Miranda

Práctica 2
COLECTA, TRASLADO Y PRESERVACIÓN DE MUESTRAS PARA ANÁLISIS
FITOPATOLÓGICO Y/O ELABORACIÓN DE HERBARIO
I. INTRODUCCIÓN

Esta práctica permite a los estudiantes, seleccionar material vegetal enfermo en el campo. Adquirir
criterios de colecta, determinar la cantidad necesaria de material enfermo para uso en el laboratorio y
para realizar el herbario fitopatológico que tendrán que presentar en el transcurso del semestre, entre
otros. Con fines de diagnóstico, se requiere de observación y descripción del problema en el campo,
de esta manera, se puede obtener parte de la información para este objetivo. El agricultor proporciona
datos del terreno, del cultivo y la enfermedad. Las observaciones en el campo, permiten determinar el
patrón de distribución de la enfermedad, área afectada y si las plantas enfermas están adyacentes a
otros terrenos con diferente manejo, etc.

Posterior a la obtención de información de campo del cultivo enfermo, se procede a colectar muestras
de material vegetal o sustrato que se desea analizar. Se recomienda llevar varias partes del vegetal
enfermo en diferente fase de desarrollo de la enfermedad (incluir partes sanas, término medio y
avanzado), de preferencia con signos del patógeno. El traslado del material vegetal enfermo colectado
en el campo para el laboratorio requiere cuidado, manipulación adecuada para evitar su deterioro y
requiere planificación. Si el objeto de estudio es suelo o raíces para determinación y cuantificación de
nematodos, el proceso de toma de muestras es diferente, se explica brevemente en esta práctica y será
ampliada en la práctica de nematodos.

En esta guía se describen recomendaciones para colecta, traslado y preservación de muestras de

material vegetal enfermo para diagnóstico fitopatológico. De la implementación y seguimiento
adecuado de los métodos, dependerá el logro de los objetivos deseados.

II. OBJETIVO

Que el estudiante aprenda a seleccionar, colectar material vegetal enfermo y obtener información en
el campo.

Aprenda a manipular y realizar el traslado adecuado de muestras de material vegetal enfermo al

laboratorio para análisis fitopatológico y/o para preservación.

III. REFERENCIAL TEÓRICO

TIPO DE MUESTRA POR COLECTAR

Las muestras de material enfermo por colectar dependen del objetivo deseado. Para los estudiantes de
Fitopatología, se recomienda que sean procedentes de cultivos de importancia económica en
Guatemala y con síntomas característicos de enfermedad y signos de fitopatógenos. También pueden
colectar muestras de suelo y raíces para estudio de nematodos. El material puede ser seleccionado a
partir de muestreo o inspección visual. Dependiendo del tipo de cultivo, el tejido o sustrato por
muestrear y el tiempo entre la toma de la muestra y su análisis en el laboratorio, pueden tomarse varias
decisiones que se describen a continuación.
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MUESTRAS DE TEJIDO VEGETAL

Hojas y tallos tiernos

a. Identificar y describir el síntoma característico de la enfermedad en el campo que se desea analizar
en el laboratorio de Fitopatología (problema por bacteria, virus, hongo, insecto, otro).

b. Colectar muestras de material enfermo con síntomas de la enfermedad con diferente grado de daño.
Tejido sano, daño inicial, intermedio, final y de preferencia con signos del patógeno.

c. Las muestras de tejido enfermo deben mantenerse frescas, envolverse en papel periódico húmedo
y colocarlas dentro de bolsas de nylon (colocar algodón o papel húmedo con agua estéril). Trasladar
en hielera y no exponer al sol. Se sugiere, no presionar las muestras para evitar daños mecánicos.
Toda muestra debe ser identificada. Al ingreso al laboratorio, colocarlas en un refrigerador en el
compartimiento para verduras, no las congele. También existen cámaras climatizadas donde se
puede regular la temperatura y la humedad relativa para guardar varias muestras.

d. Si el análisis se va a efectuar en un período mayor a tres días, las muestras se pueden deshidratar
paulatinamente y se debe herborizar el material enfermo. Colocar las hojas, ramas y tallos menores
entre hojas de papel periódico, debidamente extendidas y separadas antes de prensarlas. Muestras
de material vegetal enfermo deshidratadas o secas se pueden trabajar posteriormente.

e. Toda muestra debe contar con una etiqueta o identificación escrita a lápiz. La información obtenida
en campo, abarca: nombre del agricultor, procedencia, datos geográficos del lugar, fecha de
muestreo o colecta, cultivo o nombre común de la planta, tipo de vegetación, entre otros. Dicha
información se registra en una hoja o libreta de campo. En el laboratorio, hay hojas de diferente
formato donde se registra la información de la muestra de material vegetal enfermo.

Ramas, tallos leñosos o suculentos

a. Colectar partes que incluya tejido sano y enfermo en el mismo tallo o rama.
b. Acomodarlos adecuadamente en forma paralela, envolver en papel periódico o nylon y sujetar con
una pita o lazo.
c. La muestra debe tener etiqueta, indicar procedencia, cultivo y fecha de la toma de muestra.
d. Los tallos muy carnosos o suculentos, deben de acomodarse en bolsas de nylon y trasladarlos
rápidamente al laboratorio para su análisis, dado que se contaminan con facilidad.
e. Si el objetivo es preservación, secar ese material en una caja de cartón o en una bandeja metálica,
en ambiente seco.

Raíces
a. Seleccionar raíces de diferente tamaño con síntoma inicial, intermedio y avanzado.
b. Colectar el suelo cercano a ellas y colocar en la misma bolsa, de preferencia de nylon.
c. Cuando sea posible tomar la planta completa.
d. En el laboratorio, las raíces deben procesarse rápido dado que se deterioran con facilidad.
Para mayor información relacionado al tema, consultar el vínculo,
http://www.fhia.org.hn/dowloads/proteccion_veg_pdfs/muestrasenfermedadesplantas.pdf

MUESTREO DE SUELO PARA ANÁLISIS DE NEMATODOS

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Campos cultivados
Ubicar las áreas donde se manifiesta el problema fitopatológico a estudiar. No existe recomendación
de número fijo de submuestras o muestras por área y se realiza basado en criterios del especialista.
Cualquier daño en el sistema radicular ocasionado por nematodos, gallina ciega, mal drenaje, daño
por labores culturales mal realizadas, se manifiesta en el follaje como síntoma secundario. Si el
problema se observa en parches que han ido aumentando año con año, se recomienda tomar muestras
de suelo dentro del sitio problema y fuera de él.

a. Obtener muestras de raíces y suelo a profundidad 20-30 cm, dependiendo del sistema radicular de
la planta. Si son cultivos herbáceos incluir las raíces con suelo. Si son arbustos como naranja, café,
limón etc., tomar las raíces y el suelo en la “zona de goteo”; es decir, en el perímetro abajo de la
punta de las ramas y donde existan raíces. La cantidad debe ser aproximadamente dos libras de
suelo y 50 g de raíz por muestra compuesta.

b. Las muestras deben colocarse en bolsas de nylon con una etiqueta similar a lo indicado
anteriormente. Si no hay síntomas y se desea saber si existen nematodos en un terreno, camine a
lo largo y ancho del campo en forma de zig zag, tomando muestras de suelo (submuestras) para
finalmente seleccionar una muestra compuesta. Ésta última, está formada por varias submuestras,
coloque el suelo y raíces en una cubeta, mezclar hasta lograr una homogenización y tomar de ahí
una muestra de dos libras de suelo. En cuanto a raíces, dependiendo de la planta, 50 g es suficiente.
El número de muestras compuestas dependerá de la extensión del campo de cultivo, especie
botánica, etc.

c. Si el terreno es ondulado, seleccione muestras de la parte alta, media y baja por separado,
siguiendo los pasos anteriores.

d. No olvide preservar las muestras en un lugar frío después de colectadas en el campo. Esto evitará
pérdida de las poblaciones de nematodos que se desean estudiar. Las muestras de raíces se deben
procesar rápido para evitar pudriciones.

Para profundizar el tema de recolección de muestras de suelo para diagnóstico nematológico, visite
los siguientes enlaces:
1. http://www.mag.go.cr/bibliotecavirtual/H10-10789.PDF
2. http://www.fhia.org.hn/dowloads/proteccion_veg_pdfs/muestrasanalisisnematodos.pdf
3. http://nemaplex.ucdavis.edu/Uppermnus/topmnu.htm

En campos no cultivados
El procedimiento es similar a lo mencionado anteriormente. Elaborar un croquis del área de muestreo.
Las muestras de suelo se trasladan en hielera portátil y al ingresar al laboratorio de Fitopatología, se
guardan en refrigerador a 5 0C.

INFORMACIÓN NECESARIA EN EL LABORATORIO

Datos sobre el agricultor, procedencia y cultivo
Incluye información relacionada al agricultor o interesado, datos del lugar, cultivar, fecha de siembra
o edad, tipo de síntomas y fecha de aparición de los primeros síntomas. Escribir si la enfermedad ha
sido observada en otro cultivo anteriormente, entre otros.
Datos sobre el manejo del cultivo
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Escribir el problema y sintomatología. Tipo de fertilización, riego, agroquímicos aplicados (biocidas,
herbicidas, insecticidas, fungicidas, nematicidas, otros), dosis utilizadas, describir si se observaron
cambios después de la aplicación. Efectos ambientales (lluvias, sequía, heladas, etc.).

PRESERVACIÓN DE LAS MUESTRAS

Preservación temporal
Frecuentemente se dificulta realizar el diagnóstico inmediatamente después que las muestras ingresan
al laboratorio. Entonces, deben ser almacenadas en un refrigerador o cámara climatizada. Éstas pueden
permanecer por 2 días, o más, dependiendo del tipo de material. Las muestras de suelo con nematodos
se conservan bien durante 8 días. En el caso de pudriciones blandas, de lesiones húmedas, daños en
la raíz y determinación o cuantificación de nematodos en raíces, las muestras deben procesarse lo
antes posible.
Preservación de material enfermo
Este proceso permite la conservación de material enfermo a largo plazo para varios fines: estudios
taxonómicos, estudios biológicos, docencia, herbarios de micología, entre otros. Es necesario
herborizar el material con enfermedad en el caso de hojas y ramas. Si se trata de madera o un sustrato
similar, cortar una porción representativa de la parte enferma. Los materiales deben tener ficha
descriptiva con anotaciones de campo, descripción a lápiz del lugar de colecta (hábitat: montaña,
campo limpio, cultivo, etc.) y tipo de planta donde fue colectado (árbol, arbusto, liana, tronco liso,
cáscara con estrías longitudinales, transversales o ambas). Este material puede colocarse en bandejas
metálicas para secado y posteriormente en cajas de cartón. En el caso de frutos y materiales similares,
pueden conservarse en frascos en soluciones.

Herborización de material vegetal

Prensado y secado (hojas, ramas)
Colectar material enfermo en el campo, hojas, ramas de una planta. Esto constituye una muestra
individual y no debe mezclarse con otra. No olvide identificar la procedencia y el hospedero (nombre
científico o nombre común con el cual se le conoce en el lugar de colecta). Para herborizar, se requiere
de una prensa de madera, papel, cartón y secador tal como el utilizado en el herbario de botánica. Se
puede llevar la prensa al campo para ubicar el material de inmediato. Si no es posible, el material
enfermo puede colocarse en bolsas y llevar al laboratorio para realizar el mismo proceso.
La prensa consiste en dos rejas de madera. Se coloca el material vegetal entre 2 o 3 hojas de papel
periódico y entre grupos de muestras se coloca un cartón acanalado para propiciar la aireación y mejor
secado de las muestras. Las rejas de madera de aproximadamente 30 X 40 cm se presionan, usar hule
o lazo. Estas prensas con las muestras, se pueden secar situándolas al sol o colocándolas en un cajón
de madera de 130 X 40 X 40 cm a la que se le adecuan 6 focos de 75W (3 de cada lado) dentro del
cual se colocan las prensas por espacio de 8 a 10 días. Se recomienda adicionar las etiquetas de
identificación, para cada una de las muestras. Lo importante de esta técnica es que puede ser usada
tanto para preservación del vegetal con los síntomas y el patógeno por mucho tiempo. En algunos
casos, hay cambios de coloración del tejido, este síntoma no permanece y es necesario usar otras
técnicas de preservación.
Todo material colectado o proveniente de campo puede traer ácaros, éstos se alimentan de hongos y
destruyen las muestras almacenadas. Este problema se puede evitar, colocar las muestras secas dentro
de bolsas de nylon y situarlas en enfriador a 0ºC por tres a cuatro días. Posteriormente, secar las
muestras por un periodo corto para eliminar la humedad y guardarlas.

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Preservación de material suculento y/o con síntomas de VIRUS
Para este fin se utiliza una solución basada en acetato de cobre; este compuesto preserva el color de
la muestra. Durante el proceso, el pigmento del vegetal no se destruye. El procedimiento para procesar
estas muestras es el siguiente:
a) Mezclar 500 cc de ácido acético con 500 cc de agua destilada. A esta solución se le agrega
gradualmente acetato de cobre hasta que la solución quede saturada.
b) Preparar la solución de la siguiente manera: una parte solución saturada de acetato de cobre y tres
partes de agua destilada.
c) Colocar las muestras que se desean preservar en esa solución. Llevar al punto de ebullición por
uno o dos minutos. Observe que las muestras se decoloran, es decir, pierden su color natural, por
lo que se deben dejar en la solución de ebullición por unos minutos hasta que recupere su color.
Posteriormente, el material vegetal que fue hervido debe sacarse de la solución y lavarse con agua
destilada. Colocar las muestras en recipientes destinados para su conservación, los cuales deben
contener solución de formalina al 10%. Usar frascos con tapaderas de plástico y las muestras
preparadas se identifican.

Preservación de raíces
Las raíces que presentan agallas, nódulos u otro síntoma, pueden conservarse en frascos que contengan
solución de formalina al 10%.

Preservación de material leñoso

Secar el material y guardar tal como viene del campo. Si se quiere preservar para exposición se le
puede aplicar barniz transparente e incoloro, para estudios de micología no se recomienda.

IV. MATERIAL Y MÉTODOS

El encargado de laboratorio realizará una gira al campo para mostrar la selección de material enfermo.
Indicará la cantidad de material vegetal necesario por colectar y otras recomendaciones para tal
proceso. De acuerdo al objetivo de estudio, antes de salir al campo planificar y llevar todos los
materiales necesarios. Por ejemplo: lápiz, libreta para anotar, marcadores, cubeta, navaja, tijeras de
podar, pala, bolsas plásticas, cartón, algodón, agua estéril, prensa, periódico, frascos, cristalería,
hielera, alcohol y calzado adecuado si se internará en el bosque.

Durante la gira, deberá colectar material vegetal y suelo. Utilice las recomendaciones descritas en este
documento. Trasladar lo colectado al laboratorio de Fitopatología. La colecta de muestras de material
enfermo y/o suelo debe de realizarse con cuidado. Las herramientas y el material por utilizar (bolsas
plásticas, navaja, pala, etc.) deben estar libres de contaminantes que pueda inducir error en el
diagnóstico.

V. CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es la razón de colocar las muestras colectadas a baja temperatura cuando las mismas no se
van a examinar inmediatamente?.
2. ¿Por qué se obtiene el historial de campo a la hora de hacer un muestreo o toma de material enfermo
en un cultivo, con el objetivo de realizar diagnóstico fitopatológico?
3. ¿Por qué es importante tomar muestras en diferentes estados de desarrollo de la enfermedad?
VI. BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA

AGRIOS, G.N. 1997. Plant Pathology. 4th ed. Academic Press. 635p.

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FRENCH, E.R. y HERBERT, T.T. 1980. Métodos de investigación fitopatológica. IICA, Costa Rica. 289 p.

GONZALEZ L. C. Introducción a la Fitopatología. IICA, Costa Rica, 1989. 146p.

Instructivo utilizado en la disciplina de Micología, 1996. ACTIVIDAD: COLECTA DE HONGOS PARA HERBARIO
MICOLÓGICO. UNIVERSIDAD DE BRASILIA, BRASIL.

MANUAL DE FITOPATOLOGÍA. 2011. Edición de Lilian Amorim, Jorge Alberto Marques Rezende y Armando
Bergamin Filho. Volumen I, 4a. Ed.Piracicaba: Agronômica Ceres, 704p.

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