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“Fundamentos de la
Cromatografía de Líquidos” Sala de Cursos

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Clasificación
de acuerdo al estado de la
fase móvil.
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Cromatografía de Gases: la fase móvil es un gas y Especializado

pueden ser dos sistemas:

• Gas-liquido
• Gas-sólido

Cromatografía líquida: la fase móvil es un líquido

y puede ser:
• Liquido-liquido
• Liquido-sólido
• De exclusión
• De intercambio iónico
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1ª Etapa
Las muestras se disuelven en una fase
móvil (FM) líquida que se hace pasar a
través de una fase estacionaria (FE)
inmiscible, la cual se mantiene fija en
una columna o lecho cromatográfico
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2ª Etapa
• Los componentes de la muestra se
distribuyen de modo distinto entre la
FM y la FE dependiendo de la
afinidad por ambas fases,
desplazándose a velocidad distinta.
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3ª Etapa
• Debido a la distinta movilidad, los
componentes se separan en bandas
discriminadas que pueden analizarse
cualitativamente y/o cuantitativamente
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INSTRUMENTACION
Sistemas De Inyección

Columnas Detectores

Sistema de Registro
Sistema de suministro de
disolventes
BOMBA
Filtración y Desgasificación de solventes
Métodos para Filtrar
• Filtro a la Entrada del Solvente
• Filtración al Vacío
• Filtración en Línea
Métodos para Desgasificar
• SONIFICACION
• BURBUJEO CON HELIO
• DESGASIFICACION ELECTRONICA
EN LA LINEA DE FLUJO
• DESGASIFICACION AL VACIO
• TEMPERATURA
Suministro de solventes. bombas
• Debe producir presiones estables hasta 6000 psi.
• Mantener el flujo libre de pulsaciones
• Generar intervalos de caudales de flujo (0,1 a 10 ml/min)
• Control y reproducibilidad del flujo de solvente
• Componentes de la bomba resistentes a la corrosión
• Las bombas que se usan en HPLC se pueden clasificar según su
funcionamiento y diseño en:
• Mecánicas
• Recíprocantes
• De desplazamiento continuo
• Neumáticas
Suministro de solventes. bombas

• Existen dos métodos de programación de Solvente en HPLC:

• Isocrático
• Gradiente de Elución. Es un término que se utiliza para describir el proceso
mediante el cual se cambia la composición de la fase móvil. Pueden efectuarse de
dos maneras:
• A baja presión
• A alta presión
• Cuando se desarrolla un análisis usando el método de gradiente se debe
tener presente dos objetivos:
• Obtener la mejor resolución de los componentes de la muestra en el menor tiempo posible.
• Asegurar alta precisión y exactitud.
Características del solvente

• Alta solubilidad para los componentes

de la muestra
• No corrosivo para los componentes
del sistema HPLC
• Alta pureza, bajo costo,
compatibilidad con el Detector
• Baja viscosidad, baja toxicidad, no
inflamable
Solvent Strength se refiere a la capacidad de un disolvente para eluir solutos de una columna

27/05/2022 ING. CLAUDIA HERNANDEZ 15

Factores que influyen

Control de pH
• importante cuando se usan
analitos ácidos / básicos separados
en RP
• analitos débilmente ácidos
pH bajo
• analitos débilmente básicos
pH alto
• Fase Estacionaria estable con pH
entre 2 y 10
Solventes mas usados
Disolventes que pueden provocar corrosión del instrumento
Burbujas de aire

Para evitar que entre aire en el sistema y asegurarse de que las fluctuaciones de
presión no ocurran, observe las siguientes precauciones:
• Asegúrese de que el filtro de entrada de disolvente de la bomba esté por debajo del
nivel de disolvente en el recipiente del disolvente.
• Si la bomba no se ha utilizado durante un período de tiempo prolongado, elimine las
burbujas de aire de la siguiente manera:
Conectar una jeringa a la válvula de drenaje de la bomba, abrir la válvula de
drenaje, y lavado rápido del sistema para purgar la bomba. Después de purgar la
bomba, cierre la válvula de drenado completamente.
Sistema de inyección

• INYECTOR MANUAL
• AUTOMUESTREADOR
DETECTORES

Detección
• Un buen detector debe ...
La eficiencia de un detector cromatográfico depende de la relación entre la • Tener alta sensibilidad
cantidad física medida y la composición del efluente, así como también de
las características de las señal de transferida. • Responder a todos los
analitos, o tener
especificidad predecible
Los tipos de detectores en HPLC se clasifican en:
• Ser fiable y conveniente de
Detectores basados en una propiedad de la fase móvil . Ejemplo: Detector usar
de Índice de Refracción • Tener una respuesta que
aumenta linealmente con la
Detectores basados en una propiedad de la sustancia a separar. Ejemplo: cantidad de soluto
Detector de Fluorescencia, Detector Ultravioleta • Ser no destructivo del soluto
DETECTORES

La eficiencia de un detector cromatográfico depende de la relación entre la cantidad

física medida y la composición del efluente, así como también de las características
de la señal transferida.

Los tipos de detectores en HPLC se clasifican en:

Detectores basados en una propiedad de la fase móvil . Ejemplo: Detector de Indice

de Refracción

Detectores basados en una propiedad de la sustancia a separar. Ejemplo: Detector de

Fluorescencia, Detector Ultravioleta
Tipos de detectores
Detector UV. D
• Detector de Longitud de Onda Fija
• Detector de Longitud de Onda Variable
• Detector de Arreglo de Diodos

Detector de Índice de Refracción.

Detector de Fluorescencia.
• Este detector solamente puede detectar compuestos que tengan fluorescencia nativa o inducida por derivatización .

Evaporative Light Scattering Detector

Detectores Electroquímicos.
• Detector Amperométrico
• Detector Conductimétrico
• Detector Potenciométrico

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