Práctica 5.

“Síntesis Química de Nanopartículas de Oro (Método de

Turkevich)”

Castillo Corella Celeste Migdelina

Rubalcava Fermin Delgado
Vega Damian Jesus Manuel
Estrella Valdez Alejandro

INTRODUCCIÓN

Los puntos cuánticos de carbono son nanoestructuras con propiedades ópticas y electrónicas únicas.
Aunque son similares en tamaño a los puntos cuánticos tradicionales de semiconductores, como el
CdSe, su composición basada en carbono les confiere ventajas significativas. Estos puntos
cuánticos suelen tener diámetros inferiores a los 10 nanómetros y se caracterizan por su alta
estabilidad química, excelente biocompatibilidad y baja toxicidad. Además, presentan propiedades
fotoluminiscentes excepcionales, con una elevada luminosidad y una amplia gama de emisión que
abarca desde el ultravioleta hasta el infrarrojo cercano.

Por otro lado, las nanopartículas de oro son estructuras nanoescala compuestas principalmente por
átomos de oro. Su tamaño varía desde unos pocos nanómetros hasta varias decenas de nanómetros,
lo que les confiere propiedades físicas y químicas singulares. Las nanopartículas de oro exhiben
una fuerte interacción con la luz, especialmente en la región visible del espectro, lo que les otorga
un color característico que varía según su tamaño y forma. Además, son altamente estables,
biocompatibles y poseen una alta densidad de electrones en su superficie, lo que las hace útiles en
aplicaciones biomédicas, ópticas y catalíticas.

Ambos tipos de nanoestructuras, tanto los puntos cuánticos de carbono como las nanopartículas
de oro, son objeto de intensa investigación debido a su potencial en una amplia variedad de campos,
desde la electrónica y la optoelectrónica hasta la medicina y la energía. Su capacidad para
manipular la luz y la materia a escalas nanométricas las convierte en herramientas prometedoras
para el desarrollo de tecnologías innovadoras con aplicaciones prácticas en diversos sectores.
METODOLOGÍA
El método de Turkevich es un procedimiento clásico utilizado para sintetizar nanopartículas de
oro de forma relativamente sencilla y reproducible.

Materiales y Equipos:
 Precursor metálico, 1mM (15 ml) de Cloruro de Oro (III) (HAuCl4)
 Agente reductor, 78mM (1.5 ml) de Citrato de Sodio (Na3C6H5O7)
 Agua destilada o desionizada
 Matraz de fondo redondo
 Calentador o placa calefactora
 Agitador magnético
 Pipetas y matraces aforados para medir volúmenes precisos
 Espátula o varilla de agitación
 Utensilios de seguridad: guantes, gafas protectoras y bata de laboratorio

Procedimiento:
1. Preparación de la solución de cloruro de oro: Disuelve una cantidad conocida de cloruro
de oro (III) (HAuCl4) en agua destilada para obtener una solución de concentración
específica. La concentración típica de HAuCl4 varía según el tamaño deseado de las
nanopartículas, pero suele estar en el rango de 0.01 M a 0.1 M.

2. Preparación de la solución reductora: En otro matraz, disuelve una cantidad medida de

citrato de sodio (Na3C6H5O7) en agua destilada. La concentración de citrato de sodio es
crítica y suele estar en el rango de 0.01 M a 0.1 M. Esta solución actuará como agente
reductor en la síntesis.
3. Mezcla de las soluciones: Calienta la solución de cloruro de oro hasta que alcance una
temperatura cercana al punto de ebullición (en nuestro caso, 180°), posteriormente se
coloca un agitador magnético aproximadamente a 750 rpm durante 3 minutos. Luego,
añade la solución de citrato de sodio rápidamente asegurándose de seguir agitando la
mezcla vigorosamente.

4. Observación y control del proceso: Durante la reacción, la solución cambiará de color,

pasando de amarillo claro a blanco (un minuto), de blanco a gris (un minuto), de gris a
negro (un minuto) y de negro a rojo violeta intenso (tres minutos), lo que indica la
formación de nanopartículas de oro. Controla la temperatura y la velocidad de agitación
para asegurar una síntesis uniforme por cinco minutos. En este último proceso no se ven
cambios en el color.
5. Enfriamiento y almacenamiento: Una vez completada la reacción, retira la solución del
calor y permite que se enfríe a temperatura ambiente. Las nanopartículas de oro se
estabilizarán en la solución y pueden almacenarse en condiciones adecuadas para su
posterior uso.
6. Análisis con espectrofotómetro: Solamente una pequeña cantidad será utilizada para
realizar una caracterización mediante espectroscopia UV-vis. Teniendo cuidado de sujetar
los contenedores de cuarzo por el lado opaco, se vierte dos mililitros de agua ultra pura y
un mililitro de la solución con micropipetas de nanopartículas de oro para evitar problemas
en la generación de una gráfica de absorción, sin olvidar agitar suavemente y con mucho
cuidado para homogeneizar el producto. Se limpia con papel especial para evitar dejar
huellas digitales que obstruyan el análisis, y se coloca en el espectrofotómetro de tal forma
que la sección que tiene letras quede del lado del láser. Se hace lo mismo para el otro
contenedor de cuarzo con tres mililitros de agua ultra pura.
Es importante tener en cuenta que las condiciones exactas, incluyendo concentraciones y
proporciones de reactivos, pueden variar según el protocolo específico y los objetivos de la síntesis.
Además, se deben seguir estrictas medidas de seguridad durante todo el proceso, especialmente al
manipular reactivos químicos y trabajar con calor

Las concentraciones:
Para obtener la cantidad en gramos de Citrato de Sodio a disolver para preparar la solución.

Para ello se partió del peso molecular del Citrato de Sodio

𝑔
𝑃. 𝑀. 𝐶𝑖𝑡𝑟 𝑁𝑎 = 258.06
𝑚𝑜𝑙
Tenemos que realizar una dilución 1:10

258.06 𝑔 − 1𝐿 − 1𝑀
Recorriendo el decimal

25.806 𝑔 − 1𝐿(1000𝑚𝑙) − 0.1𝑀 (100𝑚𝑀)

Repetimos para dos decimales más para que no sea un litro sino 10ml, pues no nos interesa un
volumen tan grande para nuestros propósitos

0.25806 𝑔 − 10 𝑚𝑙 − 100𝑚𝑀
Pero como nosotros queremos 78mM y no 100mM disueltos de 10ml, realizamos una última regla
de tres.

0.25806 𝑔 − 100𝑚𝑀

𝑥 = 0.2013 𝑔 − 78𝑚𝑀
Por lo que la cantidad de masa que necesitaremos es

𝑚𝐶𝑖𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 𝑑𝑒 𝑆𝑜𝑑𝑖𝑜 = 0.2013 𝑔

En la práctica, nosotros colocamos una cantidad de 0.1999g para preparar los 78mM.
Ahora para el caso del Cloruro de Oro, su peso molecular es
𝑔
𝑃. 𝑀. 𝐻𝐴𝑢𝐶𝑙4 = 339.785 𝑚𝑜𝑙

1𝑚𝑀 = 0.33978 𝑒𝑛 1 𝐿𝑖𝑡𝑟𝑜

0.33978 𝑒𝑛 0.1 𝐿 → 𝐶 = 10𝑚𝑀

RESULTADOS OBTENIDOS (ESPECTROS UVVIS Y NANO PARTICULAS DE ORO,

FOTOGRAFIAS DE MICOSCOPIO CONFOCAL)
Graficas de absorbancia contra longitud de onda de nanopartículas de Au y CQDs
Imágenes de CQDs (Puntos cuánticos a base de carbono)
Imágenes de DAPI
Imágenes NO DAPI
AuNPs T
CQDs termosíntesis
DAPI
DESCRIPCIÓN DEL PROTOCOLO, EXTRACCIÓN Y FIJACIÓN CELULAR &
PROCEDIMIENTO COLORACIÓN CON DAPI Y LOS PUNTOS CUÁNTICOS.
Precauciones

Al momento de entrar a la sala en donde se encuentra el microscopio que funciona con láseres, es
imprescindible tener mucha precaución con la visión. No mirar hacia donde están los láseres
porque podría provocar ceguera. Algunos utilizan gafas de protección, en nuestro caso particular
no fueron utilizadas. La luz de la habitación debe apagarse y encontrarse lo que más se pueda a
oscuras para evitar la contaminación lumínica de la luz artificial.

Utilización del microscopio: Para analizar cuatro soluciones (AuNPsT., SAPI, CQDs
Electrosíntesis y CQDs Termosíntesis), con ayuda de una micropipeta se coloca una gota de cada
solución con cuidado de no derramarlos en unas placas tal como se muestra en la imagen.
Posteriormente, con ciertos cuidados es colocado en el microscopio confocal y se realiza una toma
de imágenes relevantes en distintos formatos y ajustes.

El microscopio utilizado es microscopio confocal de barrido láser.

Lo que hace el microscopio confocal es utilizar un láser para excitar una delgada capa de la muestra
para recolectar solo la luz emitida por la capa del objetivo, esto hace que se produzca una imagen
nítida sin interferencia de las moléculas fluorescentes en las capas de los alrededores.

La microscopia confocal ha permitido estudiar sistemáticamente muchos aspectos estructurales y

funcionales de las partículas seccionando ópticamente la muestra y generando imágenes que
corresponden a los diferentes planos de foco.

La fijación es un proceso que conserva la estructura de las células y evita los procesos de
autolisis y destrucción celular. Un fijador ideal es aquel que:

 Previene la autolisis celular

 Preserva la estructura celular y tisular
 Preserva el epítopo a estudiar

Algunos ejemplos de reactivos fijadores serían el formol, ácido acético, alcohol etílico o
metílico, el bicromato de potasio, ácido pícrico, acetona, paraldehído, etc. Estos son muy usados
en el área de la biología, medicina, etc., y se encuentra información en lecturas relacionadas con
métodos histológicos.
En el protocolo las muestras deben colocarse entre portaobjetos y cubreobjetos para su análisis
microscópico. Para ello, es necesario utilizar un medio de montaje de fluorescencia adecuado
para fijar las muestras en el portaobjetos y evitar su deshidratación. Además, los medios
de montaje aumentan el índice de refracción.

Algunos medios de montaje contienen aditivos como el DABCO, un agente antidecoloración que
protege la muestra contra el fotoblanqueo. Además, también existen medios de montaje que
contienen colorantes de ADN (como DAPI). Gracias a estos medios de montaje, es posible
colorear los núcleos durante el montaje. Los medios de montaje capaces de polimerizar son
muy importantes para la microscopía de fluorescencia. Gracias a estos medios de montaje es
posible conservar las muestras durante mucho tiempo si se protegen de la luz, el único factor
que determina la vida útil es el fluorocromo utilizado cuya intensidad de fluorescencia disminuye
con el tiempo.

(https://www.clinisciences.com/es/comprar/cat-medios-de-montaje-para-microscopia-3873.html)

Procedimiento para colorear o teñir con DAPI

Preparación de la solución de trabajo de DAPI:

 Añade 300 microlitros de la solución de trabajo de DAPI a tu muestra.

 Incuba durante uno a cinco minutos.
 Enjuaga el portaobjetos con PBS (solución salina tamponada con fosfato).

Observación:

 Utiliza un microscopio de fluorescencia para examinar la muestra de diapositivas

montadas.
 Los núcleos teñidos con DAPI se identificarán por su fluorescencia azul.
Imágenes del proceso