Traducción. Destinos proteicos.

Regulación de la expresión
génica
Mariano Alberti
 A MODO DE EXPLICACION

¿Qué es este material?

Es una guía que permite remarcar los conceptos claves de cada uno de los temas
correspondientes a esta clase. Bajo ningún aspecto quiere reemplazar al libro. La finalidad
es poder acceder a la información contenida en los libros de manera más amena

¿Cuál es su finalidad?
Poder mostrar cuáles son los contenidos claves de cada tema, explicados de forma
simple.

¿Cuál es su beneficio?
Muestra una primera perspectiva a los contenidos para poder ser discutidos en la clase
presencial de los días viernes
OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Al terminar la clase, el alumno/a deberá estar en condiciones de:

 Describir los pasos de la traducción del ARNm
 Identificar los pasos previos a la síntesis de proteínas
 Enumerar los pasos de la síntesis proteica
 Valorar la importancia de las modificaciones postraduccionales para la
funcionalidad proteica
 Aprender los distintos niveles de regulación de la expresión génica
 LA TRADUCCIÓN DEL ARNm
 ¿De qué estamos hablando?
 Lectura del ARNm por partes de los ribosomas, y producción de la cadena polipeptídica

 ¿Qué requisitos tiene?

 ARNm maduro disponible
 Subunidades ribosomales
 Factores de traducción
 Activación de los ARNt
 ACTIVACIÓN DE LOS ARNt
 ¿De qué se trata?
 Agregado en CCA3´ del aminoácido
correspondiente

 ¿Cómo se produce?
 20 enzimas aminoacil ARNt sintetasa, una
por cada aminoácido, con gasto de ATP
 Presenta sitio de unión para cada molécula,
y cataliza la reacción de unión
 PASOS DE LA TRADUCCIÓN
¿Cuáles son los pasos de la traducción del ARNm?
 Iniciación
 Elongación
 Terminación
 INICIACION DE LA TRADUCCION

 ¿Cuáles son los pasos de la iniciación?

 Unión del 1er ARNt al sitio P de una subunidad
menor
 Unión de eIF3 (Complejo de preiniciación)
 Reconocimiento del cap 5´
 Búsqueda del codón de iniciación (de a un
nucleótido por vez)
 Alineación del codón de iniciación con ARNt del
sitio P (Marco de lectura)
 Unión de subunidad mayor
 ELONGACIÓN DE LA TRADUCCIÓN
 ¿Cuáles son los pasos de la elongación de la
síntesis proteica?
 Unión del siguiente ARNt de la secuencia (¿Quién define cuál
es el siguiente)
 Transferencia y unión del aminoácido unido al ARNt del sitio P
al aminoácido del sitio A (ribozima ARNr 28S)
 Traslocación ribosomal (¿como quedan ahora los ARNt en los
ribosomas?)
 Liberación del ARNt vacío del sitio E
 Repetir la secuencia
 Aparición de un codón mudo en sitio A
ELONGACIÓN DE LA TRADUCCIÓN
 TERMINACION DE LA TRADUCCION
 ¿ Cuáles son los pasos de la terminación de la síntesis proteica?
 Ocupación del sitio A por eRF-1
 Liberación del polipéptido
 Desensamblaje del complejo de síntesis
 LOS POLIRRIBOSOMAS
 ¿Qué son los polirribosomas?
 1 ARNm leído por ribosomas. Separación de 100 a 200
nucleótidos aproximadamente

 ¿Cuál es la importancia de los polirribosomas?

 Amplifica la producción proteica
 LAS CHAPERONAS
 ¿Qué pasa en la postraducción?
 Debe plegarse correctamente y llegar a su sitio de acción

 ¿Qué se requiere para un correcto plegamiento?

 Puentes de hidrógeno
 Atracción electrostática
 Fuerzas de Van de Waals
 Puentes disulfuro

 ¿Quiénes se encargan de plegarlas?

 Chaperonas moleculares (HSP) formadas por 3 familias: HSP90, HSP70 y HSP60
 Chaperoninas

 ¿Qué pasa si se pliega mal?

 Sistema Ubiquitin proteasoma
 SISTEMA UBIQUITIN PROTEASOMA (SUP)

 ¿Qué es el SUP?
 Sistema que permite eliminar de forma
selectiva y precisa proteínas señaladas

 ¿Sólo elimina proteínas mal plegadas o dañadas?

 No. Es un sistema que permite controlar a las proteínas sanas y
defectuosas
 Proteínas dañadas: si son potencialmente tóxicas (bacterianas o virales), mal
plegadas o mal ensambladas (proteínas cuaternarias)
 Proteínas sanas: Controla niveles (demasiadas), actividad proteica, o para generar
cambios rápidos
 SISTEMA UBIQUITIN PROTEASOMA (SUP)

 ¿Quiénes son las encargadas de seleccionar proteínas a eliminar?

 Proteínas con actividad Ubiquitin ligasa

 ¿Cómo se marca una proteína a eliminar?

 Activación de la enzima Activadora de Ubiquitina (agregado de ubiquitina)
 Transferencia de Ubiquitina a enzima que va a ubiquitinizar
 Unión a lisina de proteína diana de la ubiquitina
 Repetición de pasos anteriores, pero ahora la nueva ubiquitina se une a última ubiquitina
unida (mínimo 4 ubiquitinas: Poliubiquitinización)
 EL PROTEASOMA

 ¿Qué es el Proteasoma?
 Complejo multienzimático de proteasas de
ubicación citosólica (sin membrana)

 ¿Cuál es su función?
 Degrada proteínas poliubiquitinizadas en liberando aminoácidos

 ¿El proteasoma es la única manera de eliminar proteínas?

 No. También se pueden eliminar por vía lisosomal (autofagia)
 DESTINOS PROTEICOS

 ¿Las proteínas se sintetizan en el lugar donde se encuentran?

 No. Todas las proteínas comienzan a sintetizarse en ribosomas libres del citosol

 ¿De qué depende que llegue a un destino definido?

 La presencia en el polipéptido que se está elongando de una secuencia específica de
aminoácidos: Péptido Señal (PS)

 ¿Todas las proteínas tienen PS?

 No. Las proteínas que se ubican en citosol no la necesitan
 Presentan PS: Proteínas sintetizadas en REG, nucleares, mitocondriales y peroxisomales
 DESTINOS PROTEICOS

 ¿Qué es necesario saber de los destinos proteicos?

 Quién reconoce al PS
 Que pasos sigue
 Que dato extra puede haber
 DESTINO REG
 ¿Quién reconoce al PS REG?
 Partícula de Reconocimiento de la Señal o PRS (Complejo
ribonucleoproteico de ARNpc + proteínas)

 ¿Qué pasos sigue?

 Reconocimiento de PS
 Detención de la síntesis
 Traslado del complejo de síntesis hacia la membrana del REG
 Unión al receptor de PRS y unión de ribosoma a Traslocón
 Ingreso de cadena polipeptídica al lumen del REG

 ¿Qué dato extra puede haber?

 Corte de PS por peptidasa señal en lumen
 Plegamiento por chaperona BIP
 DESTINO NÚCLEO
 ¿Quién reconoce al PS nuclear?
 Importina
 EL PS nuclear tiene nombre y se llama NSL

 ¿Qué pasos sigue?

 Reconocimiento de PS
 Deja que termine síntesis
 Lleva proteína a complejo de poro. Ingreso de
ambos al núcleo

 ¿ Qué dato extra puede haber?

 En núcleo se separa la Importina de la proteína por acción de proteína RAN GTP
 Ran GTP – Importina salen del núcleo juntas. Se separan al hidrolizar el GTP de Ran (via Ran GAP)
 Ran GDP vuelve al núcleo vía NTF2, y se transforma en núcleo en Ran GTP (vía Ran GEF)
 DESTINO MITOCONDRIAS
 ¿Quién reconoce al PS nuclear?
 hsp70

 ¿Qué pasos sigue?

 Reconocimiento de PS
 Deja que termine síntesis
 Lleva proteína sin plegar a complejo TOM de MME (contiene receptor para PS).
 Alineación TOM y TIM23 (comunicación citosol / matriz)
 Ingreso de la proteína sola, corte de PS por MPP y recepción via hsp70m (pliega y lleva a destino

 ¿ Qué dato extra puede haber?

 Si la proteína es de MME: Via chaperonas móviles Tim9 y 10, y luego a complejo SAM de MME
 Si la proteína es de MMI: Misma que matriz, pero TIM23 se abre y deja pasar proteína (si viene de
citosol), o via OXA (si viene de matriz mitocondrial)
DESTINO MITOCONDRIAS
 DESTINO PEROXISOMAS

 ¿Quién reconoce al PS nuclear?

 Presenta dos PS: PTS1 (reconocido por Peroxina 5 – Pex5) y PTS2
(reconocido por Peroxina 7-Pex7)

 ¿Qué pasos sigue?

 Reconocimiento de PS
 Deja que termine síntesis
 Lleva proteína sin plegar a complejo membrana de
peroxisoma
 Ingreso vía complejo Peroxina 2-10-12
 MODIFICACIONES POSTRADUCCIONALES

 ¿Cuáles son y para que sirven las modificaciones postraduccionales?

 Puentes disulfuro: Entre 2 cisteínas solamente. Acerca dos zonas proteicas y las mantiene estables
 Glicosilación: N en REG, O en Golgi. Para estabilizar, aumentar vida media, aumentar solubilidad en
medio acuoso
 Fosforilación: Dan carga negativa a una proteína. Puede activar o inactivar una proteína
 Acetilación: En histonas. Para cambiar afinidad con el ADN
 Adición de lípidos: N-miristoilación, prenilación y palmitoilación: anclaje a membrana
 Hidroxilación (en síntesis de colágeno, por ejemplo)
 Otros: Metilación, Carboxilación
 REGULACION DE LA EXPRESIÓN GENICA

 ¿Qué es la expresión de un gen?

 La expresión génica es la producción de la proteína que esta contenida como información
en un gen de ARNm

 ¿Dónde se puede regular la expresión de un gen?

 En la transcripción del ARNm
 En el procesamiento del ARNm
 En el transporte al citosol del ARNm
 En la traducción
 En el ARNm por interferencia de ARN
 En la actividad proteica
 CONTROL EN LA TRANSCRIPCIÓN
 ¿Cómo se puede regular la transcripción?
 Secuencias de Regulación (actúan sobre actividad de ARN
Polimerasa y sobre la forma de la cromatina)
 En promotor: CAAT o CCAAT y CG
 Enhancers o estimuladores y silencers o represores
 Alterando la compactación de la cromatina
 Acetilaciones de histonas: relajan la cromatina
 Metilaciones de histonas: compactan la cromatina
 Factores remodeladores de la cromatina: Alteran unión de histonas al
ADN
 Metilación de bases nitrogenadas: En citosinas que preceden
guaninas (CG o CpG). Compactan la cromatina
 ARNlnc: Marcan el ADN para metilaciones selectivas de citosinas
 LA INTERFERENCIA DEL ARN (iRNA)
 ¿Qué es la Interferencia del ARN?
 Mecanismo que impide la lectura de los ribosomas a un ARNm maduro en
citosol, por medio del uso de ARN de doble cadena.
 Se hace via:
 miARN
 siARN
 piARN (descripto en células germinativas, poca info)
 MICRO ARN (miRNA)
 ¿Qué son los micro ARN?
 ARN cortos (21 a 25 pb), bicatenarios, ubicados en genes anidados

 ¿Cómo es su procesamiento y mecanismo de acción?

 Transcripción del Pri – miARN ( es el transcripto primario, via ARN Pol II)
 Enzima DROSHA procesa inicialmente en Pre – miARN
 Salida via Exportina 5 a citosol.
 Procesamiento final via DICER (se obtiene miARN maduro
bicatenario)
 Argonauta separa doble cadena y transfiere una a complejo RISC
 Se une complementariamente al UTR 3´ del ARNm. 2 opciones
 Complementariedad total al ARNm que se quiere interferir: degradación por
nucleasas

 Complementariedad parcial al ARNm que se quiere interferir: Bloqueo de traslocación

ribosomal
 ARN PEQUEÑOS DE INTERFERENCIA (siRNA)
 ¿Qué son los ARN pequeños de
interferencia?
 ARN cortos (21 a 25 pb), bicatenarios, producidos
por la célula o creados en laboratorio

 ¿Cómo es su procesamiento y
mecanismo de acción?
 Dicer: procesa en citosol
 Argonauta: separa doble cadena
 Unión a ARNm diana de forma perfecta
complementaria
 Degradación por ARNasas