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Neurological disorders and the blood-brain barrier. Strategies and limitations

for drug delivery to the brain

Article in Revista de Neurología · March 2014

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Alazne Domínguez Blanca Suarez-Merino

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Felipe Goñi de Cerio

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 rEVISIÓN

Afecciones neurológicas y barrera hematoencefálica.

Limitaciones y estrategias para la liberación de fármacos
al cerebro
Alazne Domínguez, Antonia Álvarez, Blanca Suárez-Merino, Felipe Goñi-de-Cerio

Introducción. La incidencia de enfermedades del sistema nervioso central (SNC) aumenta a causa del envejecimiento de Centro Tecnológico GAIKER;
Zamudio, Vizcaya (A. Domínguez,
la sociedad. Desgraciadamente, los tratamientos clásicos para tratarlas no resultan efectivos debido a la presencia de la B. Suárez-Merino, F. Goñi-de-Cerio).
barrera hematoencefálica. Departamento de Biología Celular
e Histología; Facultad de Medicina
Objetivo. Abordar las propiedades de la barrera hematoencefálica que impiden el transporte de los fármacos al cerebro y y Odontología; Universidad del
las principales estrategias para tratar las afecciones neurológicas. País Vasco; Leioa, Vizcaya, España
(A. Álvarez).
Desarrollo. La barrera hematoencefálica está compuesta principalmente por un endotelio vascular especializado y las cé-
lulas de la glía. Ésta constituye una herramienta a disposición del organismo para aislar al SNC del resto del cuerpo. Sin Correspondencia:
Dr. Felipe Goñi de Cerio.
embargo, también supone un impedimento para que muchos fármacos alcancen su diana en el cerebro. Centro Tecnológico GAIKER.
Parque Tecnológico, ed. 202.
Conclusiones. Para poder tratar las afecciones neurológicas, los fármacos deben ser capaces de alcanzar el cerebro. Los E-48170 Zamudio (Vizcaya).
agentes terapéuticos pueden diseñarse para que sean capaces de atravesar esta barrera, o bien facilitar su entrada me-
Fax:
diante el uso de sistemas de liberación. Para evaluar la efectividad de los tratamientos dirigidos a enfermedades del SNC, +34 946 002 324.
se emplean los modelos animales de enfermedades neurológicas así como modelos in vitro de barrera hematoencefálica.
E-mail:
Palabras clave. Afecciones neurológicas. Barrera hematoencefálica. Células endoteliales. Permeabilidad. Sistemas de li- goni@gaiker.es
beración de fármacos. Uniones estrechas.
Agradecimientos:
O. Larrañeta, de Larrama Creativa,
por el desarrollo del diseño de las
Introducción A pesar del gran esfuerzo emprendido en la in- figuras de la revisión.

vestigación sobre la fisiopatología de las afecciones Financiación:

El sistema nervioso central (SNC) es el principal
responsable del funcionamiento correcto del orga-
nismo, ya que controla gran parte de las funciones
corporales. Por ello, una actividad incorrecta del
SNC provoca un deterioro funcional que conlleva
el desarrollo de enfermedades neurodegenerativas
y neuropatológicas [1].
Las enfermedades del SNC se caracterizan por
una alta prevalencia tanto en países desarrollados
como en países en vías de desarrollo e incluyen pa-
tologías tan diversas como son las enfermedades
neurodegenerativas, cerebrovasculares o los tumo-
res cerebrales. Además, implican un coste econó-
mico y social superior al de cualquier otro tipo de
enfermedad. Actualmente, 1.500 millones de per-
sonas en todo el mundo se ven afectados por algún
tipo de afección cerebral o mental. Sólo en Europa,
las afecciones neurológicas afligen a 300 millones
de personas y suponen un coste anual de 640.000
millones de euros [2] (Fig. 1). Esta alta prevalencia
se debe al aumento de la esperanza de vida y el en-
vejecimiento de la población, que están directa-
mente relacionados con el incremento de enferme-
dades degenerativas.
neurológicas y al desarrollo de nuevos fármacos Programas de investigación del
Gobierno Vasco (ETORTEK 2011).
para tratar dichas afecciones, el éxito obtenido es Trabajo realizado dentro del
limitado [3]. Esto se debe a que los fármacos cuya programa de becas de la Fundación
de Centros Tecnológicos-Iñaki
diana terapéutica se encuentra en el SNC se enfren- Goenaga.
tan, por un lado, a la compleja anatomía del cerebro
Aceptado tras revisión externa:
desde el punto de vista tanto fisiológico como pato- 08.11.13.
lógico, ya que los principales parámetros metabóli-
cos y de transporte cerebral varían significativa- Cómo citar este artículo:
Domínguez A, Álvarez A,
mente a lo largo de las diferentes regiones del cere- Suárez-Merino B, Goñi-de-Cerio F.
bro y, por el otro lado, al alto grado de protección Afecciones neurológicas y barrera
hematoencefálica. Limitaciones y
que presenta el cerebro gracias a la barrera hemato- estrategias para la liberación de
encefálica (BHE) [4]. Hasta el momento, se han de- fármacos al cerebro. Rev Neurol
2014; 58: 213-24.
sarrollado numerosas estrategias para tratar de sol-
ventar estos problemas [5]. © 2014 Revista de Neurología
Afecciones neurológicas
La naturaleza de las afecciones del SNC varía en
función del rango de edad. En ese sentido, el tipo de
patología predominante entre la población joven con
una afección neurológica es el trastorno psiquiátri-
co, incluyendo la depresión, ansiedad y esquizofre-
nia, mientras que en una población envejecida con

www.neurologia.com Rev Neurol 2014; 58 (5): 213-224 213

A. Domínguez, et al
Figura 1. Coste de las afecciones neurológicas en Europa en el año 2010 en relación con el tipo de enfer-
medad y por paciente.
Figura 2. Prevalencias específicas por grupos de edad y sexo en la de-
mencia (enfermedad de Alzheimer) en Europa (http://ec.europa.eu/
health/index_en.htm).
Figura 3. Prevalencias específicas por grupos de edad y sexo en la en-
fermedad de Parkinson en Europa (http://ec.europa.eu/health/index_
en.htm).
214
afección neurológica predominan las enfermedades
neurodegenerativas y cerebrovasculares [6]. Duran-
te el último siglo, la longevidad de la sociedad ha au-
mentado de manera considerable; en los últimos 50
años, la esperanza de vida ha aumentado un 30% y
se espera que alcance el 50% para el año 2050. El
incremento de la esperanza de vida, unido al rápido
aumento de la población en la primera mitad del si-
glo xx, se traduce en un aumento del 300% en el
número de personas mayores de 60 años. Más en
concreto, se prevé que dentro de diez años este gru-
po represente el 15% de la población total [7].
Este cambio demográfico se refleja en un aumen-
to de las afecciones asociadas a la edad como son la
enfermedad de Alzheimer (EA) (Fig. 2) y la enfer-
medad de Parkinson (EP) (Fig. 3) [8]. Las enferme-
dades neurodegenerativas se caracterizan por un de-
terioro progresivo de las habilidades cognitivas [9]
y son una de las principales causas de enfermedad y
mortalidad en los países desarrollados [10]. Estas en-
fermedades, además de progresivas, son irreversi-
bles porque hasta el momento no se han consegui-
do tratamientos efectivos para ninguna de ellas [11].
La EA es responsable de en torno a la mitad de
los casos de demencia. En cuanto a la neuropatolo-
gía, se observan dos tipos de lesiones, las placas
seniles y los ovillos neurofibrilares compuestos de
la proteína β-amiloide. Curiosamente, aunque es-
tas lesiones parecen ser las características más des-
tacables de la patología de la EA, por sí solas no
son capaces de generar la tremenda pérdida neuro-
nal que acontece durante la enfermedad [12]. La
EP es la segunda enfermedad neurodegenerativa
más común. En cuanto a la patología, se caracteri-
za por la pérdida de las neuronas dopaminérgicas
de la sustancia negra, una pérdida de dopamina en
el cuerpo estriado y la presencia de inclusiones in-
tracitoplasmáticas llamadas cuerpos de Lewy. Como
en la EA, en la EP los síntomas aparecen de manera
gradual e incluyen dificultad para mantener la pos-
tura corporal, temblores, pérdida de flexibilidad,
rigidez de las extremidades y del tronco, así como
una marcada bradicinesia. Para cuando esta sinto-
matología aparece, la pérdida neuronal es mayor del
70-80% [13].
Otra enfermedad neurodegenerativa es la escle-
rosis múltiple, una enfermedad inflamatoria auto-
inmune crónica caracterizada por la destrucción de
las vainas de mielina por los linfocitos T reactivos.
La edad de mayor incidencia es entre los 20-40 años,
por lo que conlleva un importante impacto social,
económico y familiar [14]. Afecta a más de un mi-
llón de personas en el mundo, y los síntomas inclu-
yen debilidad, ataxia, cansancio, pérdida de visión y
www.neurologia.com Rev Neurol 2014; 58 (5): 213-224
 Afecciones neurológicas y barrera hematoencefálica

de tacto además de pérdidas de memoria. La atrofia

cerebral, que constituye un signo de neurodegene- Figura 4. Prevalencias específicas por grupos de edad y sexo en el ictus
en Europa (España) [17].
ración, aparece de modo precoz, incluso en pacien-
tes con menos de cinco años de evolución de la en-
fermedad [15].
Asimismo, las enfermedades cerebrovasculares
son la tercera causa de mortalidad en los países de-
sarrollados, tras las enfermedades cardíacas y el
cáncer, y la primera causa de invalidez en personas
adultas mayores de 65 años [16,17]. Las enfermeda-
des cerebrovasculares comprenden un conjunto de
trastornos de la vasculatura cerebral, aunque el ac-
cidente cerebrovascular o ictus es el más generali-
zado (Fig. 4). El ictus se caracteriza por un déficit
neurológico ocasionado por una disminución im-
portante del flujo sanguíneo cerebral de manera
transitoria o permanente que produce la muerte del
parénquima cerebral y un daño sostenido en las aé- Figura 5. Epidemiología de los tumores cerebrales en Europa. Inciden-
reas circundantes. Se produce de forma anormal- cia, mortalidad y prevalencia por sexo (http://globocan.iarc.fr/). Pre-
valencia a cinco años: sólo para población adulta (≥ 15 años). Los pa-
mente brusca (ictus isquémico) con una pérdida cientes que continúan vivos tras cinco años del diagnóstico se conside-
neuronal irreversible o bien por la hemorragia ori- ran curados.
ginada debido a la rotura de un vaso cerebral (ictus
hemorrágico) [18]. Los síntomas incluyen déficits
sensoriales y motores, como la hemiparesia/hemi-
plejía, afasia, pérdida de equilibrio o de coordina-
ción, entre otros. El pronóstico tras un ictus varía
en función del área cerebral afectada, el alcance de
éste, la edad del paciente y su estado previo.
Dentro de las diferentes afecciones del SNC en-
contramos también los tumores cerebrales (Fig. 5).
Éstos destacan por ser una de las enfermedades del
SNC con mayor coste por paciente. El término ‘tu-
mor cerebral’ hace referencia a un grupo heterogé-
neo de neoplasmas que se originan en los tejidos
intracraneales o las meninges y que comprimen al
cerebro. Los tumores cerebrales primarios repre-
sentan el 2% de todos los cánceres y son un grupo
diverso de tumores con marcadas diferencias tanto
en etiología como en tratamiento y pronóstico [19]. barrera hematoencefálica
Se pueden dividir en gliomas y meningiomas. Los
gliomas presentan una marcada agresividad, ya que Existen tres estructuras principales en el cerebro
la supervivencia media de los pacientes en estados adulto que protegen a las neuronas de las sustan-
avanzados de la enfermedad se reduce a 14,6 me- cias circulantes en el torrente sanguíneo, ayudan a
ses, mientras que los meningiomas tienen un diag- mantener la homeostasis y aportan el medio nece-
nóstico mucho más alentador [20]. sario para un correcto funcionamiento neuronal
Las afecciones del SNC mencionadas previa- [23]. Éstas son la barrera entre sangre-líquido cefa-
mente carecen de fármacos eficaces para su trata- lorraquídeo –formada por el epitelio del plexo co-
miento, ya que la mayoría de los tratamientos exis- roideo–, la BHE y la barrera entre líquido cefalorra-
tentes proveen de un alivio sintomático pero pre- quídeo-sangre, donde el epitelio vascular aracnoi-
sentan numerosos efectos adversos y no impiden la deo descansa sobre la duramadre. Además, en el
progresión de la enfermedad [21]. Por lo tanto, aun- estadio embrionario, las células ependimarias de la
que las técnicas de diagnóstico precoz mejorasen, zona ventricular se conectan entre sí para formar
con los tratamientos actuales, las expectativas del una cuarta barrera física que, sin embargo, desapa-
paciente no serían más alentadoras [22]. rece en el adulto (Fig. 6).

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A. Domínguez, et al
Figura 6. Barreras cerebrales que impiden el paso libre de sustancias al sistema nervioso central, en las
que se describen la barrera hematoencefálica, la barrera aracnoidea, la barrera sangre-líquido cefalorra-
quídeo y la neuroepéndima.
De las tres barreras del SNC, la BHE es la que
mayor superficie presenta, al crear un entramado
capilar extremadamente denso a través del parén-
quima cerebral con una longitud de unos 600 km y
una superficie de unos 20 m2 [24]. La homeostasis
en el microambiente del SNC, esencial para su fun-
cionamiento correcto, se mantiene gracias a la BHE,
cuyas características estructurales únicas le hacen
mínimamente permeable al agua y los solutos, aís-
lan y protegen al tejido nervioso cerebral y contro-
lan el paso de sustancias xenobióticas [25].
Componentes celulares de la BHE
La BHE está compuesta por un endotelio microvas-
cular, astrocitos, lámina basal, pericitos y neuronas.
Todos ellos son elementos de la unidad neurovas-
cular funcional.
La células endoteliales microvasculares cerebra-
les (CEMC) llevan a cabo funciones biológicas esen-
ciales como son el transporte de nutrientes, la seña-
lización mediada por receptores y la osmorregula-
ción. A diferencia del resto de células endoteliales,
las CEMC carecen de fenestraciones y tienen una
cantidad mínima de vesículas de endocitosis [26].
216
Además, las CEMC expresan uniones estrechas (TJ)
y varios transportadores ABC que impiden el paso
paracelular a los compuestos hidrofílicos, formando
una barrera homogénea que protege al cerebro y
crea un ambiente único. Las CEMC cubren la su-
perficie luminal de la microvasculatura cerebral y
yacen en su lado abluminal sobre una lámina basal,
que está recubierta al 99% por los pies astrocitarios
y pericitos. Así, aunque estructuralmente la BHE
está constituida por las células endoteliales, funcio-
nalmente está regulada por células de la glía [27].
Entre los constituyentes celulares de la unidad
neurovascular se encuentran los astrocitos, que
proceden del ectodermo del tubo neural y se sitúan
en el parénquima cerebral. Los procesos astrocita-
rios cubren los capilares cerebrales y ayudan a man-
tener la integridad de la BHE sintetizando y secre-
tando factores de crecimiento solubles esenciales
para que las células endoteliales desarrollen las ca-
racterísticas de la BHE. La interacción de los astro-
citos con las CEMC no sólo produce un incremento
notable de las TJ de las células endoteliales sino
que, de manera recíproca, también produce un au-
mento de la densidad astrocitaria y de sus factores
de crecimiento. Junto con los astrocitos, los peri­
citos son células perivasculares multifuncionales
contráctiles situadas en la proximidad a las células
endoteliales con las que comparten membrana ba-
sal [28]. Se piensa que desempeñan un papel im-
portante en el mantenimiento de la integridad es-
tructural de la BHE.
Integridad estructural de la BHE
La estructura de la BHE viene definida por las ca-
racterísticas del endotelio de la microvasculatura.
Este endotelio tiene al menos tres tipos de unión
célula-célula: las uniones en hendidura, las uniones
adherentes o de anclaje y un tercer tipo de unión y
más importante, las TJ.
Las TJ de la BHE son las principales responsa-
bles de la restricción al transporte paracelular de
iones, solutos y macromoléculas desde la sangre
hacia el cerebro. Están constituidas por tres proteí-
nas integrales de membrana: la ocludina, la claudi-
na y las moléculas de adhesión celular (MAC), que
están unidas a diferentes proteínas accesorias cito-
plasmáticas incluyendo las proteínas zonula oclu-
dens (ZO) y la cingulina. Funcionalmente, constitu-
yen la frontera para la difusión proteica y lipídica a
través de las membranas, confieren polaridad a las
células endoteliales y sellan la vía paracelular para
forzar que la sustancias atraviesen las membranas y
el citosol de las células endoteliales [29].
www.neurologia.com Rev Neurol 2014; 58 (5): 213-224

La primera proteína integral de membrana en
ser descubierta fue la ocludina. Parece ser que su
función es reguladora y puede influir en el trans-
porte paracelular. En las células endoteliales de ori-
gen no cerebral, el contenido en ocludina es mucho
menor, lo que sugiere que tiene un papel activo en
la función de la BHE. Por otro lado, las claudinas
son el mayor componente de las TJ. En la BHE, pa-
rece ser que las responsables de la baja permeabili-
dad son las claudinas 3 y 5. Por último, las MAC son
proteínas transmembrana pertenecientes a la su-
perfamilia de las inmunoglobulinas [30].
Regulación del transporte de la BHE
La BHE, más que una capa pasiva de células, es un
complejo metabólico activo que direcciona el trans-
porte de solutos a la vía transcelular, ya sea por di-
fusión pasiva, por transporte mediado por proteí-
nas transportadoras, por transcitosis mediada por
receptor o mediante los transportadores ABC. Por
su parte, la vía paracelular es prácticamente inexis-
tente debido a las fuertes uniones entre las células
endoteliales.
La difusión pasiva puede ocurrir bien entre célu-
las adyacentes por vía paracelular o a través de las
células por vía transcelular. Teniendo en cuenta que
las TJ bloquean la ruta paracelular a través de la
BHE, únicamente los solutos capaces de penetrar a
través de la membrana de la célula endotelial son
capaces de atravesar la BHE por difusión pasiva.
El transporte mediado por proteínas trasportado-
ras mueve pequeñas moléculas hidrofílicas como los
aminoácidos o la glucosa [31]. Estos sistemas trans-
portadores se expresan en las membranas luminal y
abluminal del endotelio capilar y ejercen un trans-
porte bidireccional entre la sangre y el cerebro a tra-
vés de gradientes químicos o eléctricos para trans-
portar las moléculas a través de las membranas celu-
lares. Por otro lado, compuestos con alto peso mole-
cular, como los péptidos y las proteínas, son dema-
siado grandes para ser transportados por proteínas
transportadoras, por lo que atraviesan la BHE me-
diante transcitosis mediada por receptores. Estos re-
ceptores se internalizan en vesículas de clatrina que
forman endosomas primarios que se transportan a
los lisosomas donde se degradan. Las células endote-
liales expresan receptores específicos para ciertos li-
gandos como son la transferrina o la insulina.
Los transportadores ABC, entre los que se en-
cuentran la glicoproteína-p (P-gp), proteínas resis-
tentes a múltiples fármacos (MRP) y la proteína re-
sistente al cáncer de mama (BCRP), tienen un am-
plio rango de sustratos y una gran influencia en la
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Afecciones neurológicas y barrera hematoencefálica
Tabla I. Sistemas de liberación de fármacos divididos en métodos invasivos y métodos no invasivos.
Administración intraarterial
Inyección intracerebroventricular en el líquido cefalorraquídeo
Métodos Infusión intracerebral mediante la técnica CED
invasivos
Implantes intracerebrales
Disrupción de la integridad de la barrera hematoencefálica
(mediante métodos químicos, choque osmótico o el uso de ultrasonidos)
Ruta nasal
Bombas con dominio de unión a ATP
Métodos
Liberación sistémica Transcitosis mediada por receptor
no invasivos
Péptidos penetrantes de células
Transportadores coloidales Micemas, liposomas y nanocompuestos
ATP: adenosín trifosfato; CED: liberación mejorada por convección.
farmacocinética del fármaco. Son proteínas inte-
grales situadas en la membrana de las células endo-
teliales y utilizan la energía de la hidrólisis de ATP
para el transporte contragradiente de sustratos. Su
función principal es la protección frente a toxinas
naturales o xenobióticos [32].
La P-gp es una glicoproteína de membrana con
actividad ATPasa que actúa como una bomba mul-
tiespecífica e impide la entrada de fármacos al cere-
bro. Tiene afinidad por un gran número de sustra-
tos incluyendo fármacos anticancerígenos, antipsi-
cóticos y antiepilépticos, agentes inmunosupreso-
res, inhibidores de proteasas del VIH, entre otros.
Otro tipo de transportador abc son las MRP y la
BCRP. En la BHE, se expresan fundamentalmente
en la membrana basolateral y también limitan la
permeabilidad de los fármacos. Comparten especi-
ficidad de sustrato con la P-gp, por lo que varios fár-
macos son sustratos para ambos [33].
Rutas de liberación de fármacos al cerebro
La BHE constituye un gran obstáculo en la admi-
nistración de fármacos al cerebro debido a su gran
impermeabilidad. Para lograr atravesar la BHE y li-
berar agentes terapéuticos al cerebro se emplean
dos tipos de estrategias (Tabla I), los métodos inva-
sivos y los métodos no invasivos [34]. Estas estrate-
gias se vienen empleado de manera experimental
217
A. Domínguez, et al

Tabla II. Ejemplos de sistemas de liberación de fármacos más prometedores empleados en varias patologías del sistema nervioso central [35-41].
Se describen las estrategias empleadas y el fármaco aplicado para cada patología.

Enf. Alzheimer Enf. Parkinson Ictus Tumor cerebral Esclerosis múltiple

Inyección intra- Péptido Factor neurotrófico Genes codificantes Células del estroma
Neurotrofina
cerebroventricular β- amiloide derivado del cerebro de interferón-β de médula ósea

Liberación mejorada Factor neurotrófico Ácido dietilentriamina

Neprilisina Topotecán –
Invasivos

por convección derivado de la glía pentaacético

Implantes Factor de
– Ciclosporina A Gliadel –
intracerebrales crecimiento nervioso

Disrupción BHE – – – Bevacizumab –

Inhibidores de Factor de Agentes

Intranasal α-sinucleína Interferón-β 1b
la colinesterasa crecimiento insulínico neurotróficos
No invasivos

Factor de crecimiento
Sistémica Clioquinol Neurregulina-1β1 Dasatinib Cavtratín
endotelial vascular

Transportadores Liposomas Nanoemulsiones NP de superóxido Doxorrubicina NP de óxidos

coloidales de rivastigmina de ropinirol dismutasa liposomal pegilada metálicos

BHE: barrera hematoencefálica; NP: nanopartículas.

para tratar varias patologías del SNC. Las estrate-
gias aplicadas varían significativamente según la pa-
tología que se vaya a tratar (Tabla II) [35-41].
Métodos invasivos
Los métodos invasivos utilizados en la administra-
ción de fármacos al cerebro, aunque eficaces, requie-
ren de cirugía y por lo tanto entrañan un alto riesgo
para el paciente. Las técnicas invasivas convencio-
nales incluyen la inyección intracerebroventricular
(ICV) en el líquido cefalorraquídeo, la infusión in-
tracerebral mediante la técnica de liberación mejo-
rada por convección (CED), los implantes intracere-
brales y la disrupción de la integridad de la BHE.
La liberación local incluye la inyección ICV en el
líquido cefalorraquídeo, desde donde el fármaco
penetra en el parénquima cerebral. Asimismo, la
infusión intracerebral mediante la técnica CED
consiste en una infusión intraparenquimal de la so-
lución del fármaco en el parénquima cerebral con la
ayuda de un catéter de pequeño calibre [42]. Den-
tro también de las técnicas invasivas, los implantes
intracerebrales requieren de una inyección suma-
mente precisa para conseguir la eficacia y evitar los
problemas asociados a la difusión de fármacos en el
parénquima cerebral. Las técnicas descritas son re-
lativamente costosas, ya que requieren anestesia y
hospitalización.
Además, poseen muchas limitaciones asociadas
a la administración y difusión en el cerebro. En el
caso de la ICV, su difusión es muy baja. Sólo una
pequeña concentración del fármaco puede alcanzar
su diana, ya que el líquido intersticial juega en con-
tra de la difusión del fármaco y el líquido cerebroes-
pinal se está renovando constantemente devolvien-
do el fármaco al torrente sanguíneo; sin comentar
las dificultades que conlleva una intervención qui-
rúrgica [43]. Del mismo modo, en la técnica CED
hay regiones del cerebro que son complicadas de
saturar mediante la infusión, concretamente los te-
jidos infiltrados que rodean una cavidad, por lo que
la liberación del fármaco está supeditada al posicio-
namiento correcto de los catéteres. En todos los ca-
sos, habrá que tener en cuenta que el efecto del fár-
maco disminuirá exponencialmente según la dis-
tancia que hay entre la región de interés y el lugar
de liberación del fármaco, por lo que la precisión en
la inyección y liberación es decisiva para un trata-
miento correcto. A pesar de sus desventajas, estas
técnicas son a veces la única alternativa para evitar
los fuertes efectos adversos que se producen con la
liberación sistémica de los fármacos más agresivos.
Por todo ello, se ha probado otro tipo de aproxi-
maciones invasivas consistentes en la alteración de la
BHE como medio para aumentar su permeabilidad.
La ruptura de la BHE abre un acceso directo al cere-
bro para los compuestos circulantes en la sangre y

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puede llevarse a cabo empleando métodos químicos
o, temporalmente, mediante un choque osmótico o
el uso de ultrasonidos [44]. Estas técnicas son muy
eficaces en términos de transporte al cerebro, ya que
no dependen de las propiedades de los agentes tera-
péuticos, aunque entrañan numerosos riesgos y cau-
san efectos secundarios, entre los que se incluye el
estrés fisiológico y el aumento transitorio de la per-
meabilidad paracelular. El aumento incontrolado y
prolongado de la permeabilidad en la BHE puede lle-
gar a ser letal, ya que conlleva un aumento de la pre-
sión intracraneal, así como la liberación de constitu-
yentes neurotóxicos al plasma del tejido cerebral
[45], como es la entrada al SNC de la albúmina, sus-
tancia neurotóxica para los astrocitos y que en situa-
ciones no patológicas se encuentra en el líquido in-
tersticial del SNC en concentraciones muy bajas.
Métodos no invasivos
Los métodos no invasivos incluyen la ruta nasal, la
liberación sistémica y el uso de transportadores co-
loidales. El empleo de la administración intranasal
para dirigir agentes terapéuticos al SNC tiene mu-
chos beneficios en el tratamiento de las afecciones
neurológicas. Esta técnica ofrece una rápida absor-
ción a la circulación sanguínea sistémica y evita el
primer cribado metabólico en la pared intestinal y
en el hígado [46]. Además, no requiere necesaria-
mente de ninguna modificación del agente terapéu-
tico. Así, sustancias tales como las neurotrofinas,
los neuropéptidos, los polinucleótidos o los qui-
mioterápicos pueden alcanzar el SNC en concen-
traciones efectivas [47].
Asimismo, la administración a través de la circu-
lación sistémica es una estrategia no invasiva para
la liberación de fármacos. Los fármacos que se ad-
ministran por esta vía (oral, gastroentérica, sublin-
gual) deben poseer unas características fisicoquí-
micas óptimas que les permitan atravesar la BHE
por difusión pasiva a través de la vía transcelular o
bien tener las propiedades estructurales necesarias
para ser sustrato de uno de los sistemas de trans-
porte existentes en el endotelio capilar cerebral, co­
mo las proteínas transportadoras. Sin embargo, es-
tos sistemas de transporte no siempre sirven de
ayuda para el paso de los fármacos a través de la ba-
rrera. La BHE contiene varias bombas con dominio
de unión a ATP (transportadores ABC) que devuel-
ven al torrente sanguíneo una multitud de fármacos
desde el cerebro, por lo que gran cantidad del fár-
maco que atraviesa la BHE a través de la circulación
sistémica se expulsa rápidamente del SNC a través
de los transportadores ABC. Debido a ello, se han
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Afecciones neurológicas y barrera hematoencefálica
desarrollado varias estrategias para evitar que, una
vez el fármaco atraviesa la BHE, sea devuelto de
nuevo al torrente sanguíneo, ya sea empleando in-
hibidores específicos o bien desarrollando análogos
de los fármacos eficaces pero sin reactividad con los
transportadores [48]. La P-gp es el transportador
ABC más estudiado. Un gran número de quimiote-
rápicos son sustratos para este transportador, por
lo que su inhibición puede mejorar la permeabili-
dad de muchos compuestos.
Dentro de las estrategias no invasivas desarrolla-
das en las últimas décadas se encuentra el empleo
de transportadores coloidales. Estos compuestos es-
tán en auge, ya que combinan una alta eficacia al
atravesar la BHE y una mínima alteración de las ca-
racterísticas de la misma [49,50]. Se caracterizan
por aumentar la especificidad en torno a células y
tejidos, mejorar la biodisponibilidad de fármacos al
aumentar su difusión a través de membranas bioló-
gicas y proteger a su vez a los fármacos de la inacti-
vación enzimática [51]. Los sistemas coloidales per-
miten el acceso a fármacos no transportables a tra-
vés de la BHE, enmascarando sus características fi-
sicoquímicas a través de la encapsulación en estos
sistemas. En general, este tipo de transportadores
incluye micelas, liposomas y nanocompuestos.
Las micelas poliméricas son sistemas de trans-
porte de fármacos termodinámica y cinéticamente
estables en solución acuosa con un tamaño similar
al de los virus y las lipoproteínas (50-100 nm). Es-
tán formados por una monocapa lipídica con una
estructura en dos bloques: polímeros hidrofílicos
en la envuelta e hidrofóbicos en el interior [52]. Sin
embargo, su mayor desventaja radica en una libera-
ción temprana del fármaco, antes incluso de haber
alcanzado la diana terapéutica.
Los liposomas y las nanopartículas (NP) se han
explotado ampliamente para la liberación de fár-
macos al cerebro debido sobre todo a que los méto-
dos requeridos para su preparación son, en general,
sencillos y escalables. Son construcciones comple-
jas que pueden alcanzar los 200 nm de diámetro y
en cuyo interior pueden incorporarse cantidades
relativamente grandes de fármaco. Los liposomas
son pequeñas vesículas artificiales de forma redon-
deada constituidas por un interior acuoso rodeado
por una bicapa lipídica [53]. El interior acuoso per-
mite incorporar un fármaco que sea soluble en
agua, mientras que la membrana crea un espacio
protector que evita la liberación de su contenido y
lo protege de la degradación.
Por otra parte, las NP poliméricas son partículas
sólidas constituidas por polímeros o lípidos. Sus
principales ventajas sobre otros transportadores co-
219
A. Domínguez, et al
loidales son el bajo número de excipientes requeri-
dos para su formulación, una alta estabilidad física
en contacto con los fluidos biológicos, la simplici-
dad de los procesos requeridos para su formulación
y la capacidad para liberar fármacos de una manera
controlada y sostenida en el tiempo [54]. Tal es el
caso del desarrollo de nanopartículas de quitosano
para la liberación de dopamina en el SNC, que im-
plicaría un mantenimiento constante de los niveles
de dopamina en el cerebro y conllevaría una mejora
de la respuesta terapéutica para la EP [55].
Cabe destacar que, dentro de las NP, hay otro
tipo de sistemas no poliméricos, como pueden ser
las NP metálicas, magnéticas o cristalinas. El princi-
pal uso de estas NP es el de marcadores de diagnós-
tico para la realización de imagen molecular a través
de resonancia magnética o tomografía de emisión
de positrones. El uso de estas NP aumenta la sensi-
bilidad de las técnicas utilizadas en el procesado de
imagen en el diagnóstico de cáncer y otras enferme-
dades neurológicas y cardiovasculares del SNC.
Modelos in vivo de la BHE
y enfermedades neurológicas
Para poder conocer mejor la fisiopatología de las
diferentes afecciones neurológicas, así como para
investigar los mecanismos por los que la BHE man-
tiene y regula su permeabilidad, se han empleado
varios modelos in vivo e in vitro. Las técnicas in
vivo aportan información sobre la naturaleza de las
diferentes afecciones, así como información sobre
la distribución y posibles efectos de los agentes te-
rapéuticos en todo el organismo. Sin embargo, los
modelos in vivo presentan una serie de inconve-
nientes como un bajo rendimiento o el requerimien-
to de equipamiento costoso, además de los proble-
mas éticos derivados de la necesidad de emplear
una gran cantidad de animales a los que se somete a
experimentos de naturaleza muy invasiva, sin olvi-
dar que las técnicas in vivo tienen una aplicación
limitada en los humanos y, en consecuencia, se han
de extrapolar los resultados de los ensayos preclíni-
cos a la especie humana con las diferencias que ello
conlleva [56].
El desarrollo de modelos animales que buscan re-
producir los síntomas, lesiones o causas de la enfer-
medad supone un gran avance para el estudio de las
enfermedades del SNC. Las afecciones neurológicas
pueden reproducirse en modelos animales para re-
crear procesos patogénicos y cambios de comporta-
miento. Por desgracia, la mayoría de los modelos
sólo son capaces de reproducir ciertos aspectos de
220
las enfermedades. Hay dos aproximaciones para re-
producir modelos animales con una afección neuro-
lógica [57]. Por un lado, la aproximación genotípica,
que depende del conocimiento del gen de interés, y
su posterior manipulación en el animal para crear
el modelo apropiado y, por otro lado, la aproxima-
ción fenotípica, que es independiente de un deter-
minado gen pero que emplea el mapeo genético es-
tándar y técnicas de clonación para identificar el
cambio genético causal en un fenotipo de interés.
Como modelos animales de la EA se han descri-
to líneas de ratones transgénicos que reproducen
características de la enfermedad. Por ejemplo, los
modelos animales basados en el metabolismo de la
proteína precursora amiloide (PPA), en la presenili-
na (PS) y en la proteína tau, involucrada en la for-
mación de los ovillos neurofibrilares, así como los
triple transgénicos PS/PPA/tau [58]. Referente a la
EP, hay una variedad de modelos desarrollados que
se dividen en los que emplean neurotoxinas sintéti-
cas o naturales y los que usan la expresión in vivo
de mutaciones relacionadas con la EP [59]. Tradi-
cionalmente, se han empleado los modelos tóxicos,
que buscan reproducir los cambios patológicos y de
comportamiento de esta enfermedad en roedores o
primates empleando agentes farmacológicos (neu-
rotoxinas) que inducen la degeneración selectiva de
las neuronas de la parte compacta de la sustancia
negra [13]. Por otro lado, el principal modelo ani-
mal de la esclerosis múltiple consiste en la inducción
de una encefalomielitis autoinmune experimental,
normalmente en ratones o ratas. Si estos modelos
se emplean de modo adecuado, pueden reproducir
muchas de las características de la esclerosis múlti-
ple [60].
Respecto al ictus, se utilizan principalmente dos
tipos de modelos isquémicos, la isquemia focal y la
global. En la isquemia global, lo normal es que se
interrumpa la circulación de dos a cuatro vasos
sanguíneos de manera transitoria, mientras que en
la isquemia focal se ocluye la arteria cerebral media
ya sea de manera temporal o transitoria. Además
de estos dos modelos, están los modelos de ictus
que llevan a cabo una oclusión arterial mediante la
formación de un trombo [61].
Los modelos de tumor cerebral pueden clasificar-
se en modelos inducidos químicamente, modelos tu­
morales de trasplante de xenoinjertos o modelos de
formación tumoral espontánea inducida en ratones
modificados genéticamente [62]. Los xenoinjertos
se obtienen inyectando subdérmicamente células
tumorales en el animal. Éstos se caracterizan por la
reproducibilidad, el rápido desarrollo tumoral, la fá-
cil visualización del tumor y su alta penetración. Por
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otro lado, los ratones manipulados genéticamente
nacen con una mutación en un determinado gen que
provocará la formación espontánea de un tumor a
las pocas semanas de vida del animal [63].
Modelos in vitro de la BHE
Los modelos in vitro están adquiriendo en los últi-
mos años una mayor importancia debido al princi-
pio de las tres erres, enfocado hacia el reemplazo, la
reducción y el refinado de las técnicas experimen-
tales en animales. El objetivo del principio es reem-
plazar las técnicas que usan animales de experi-
mentación por métodos que no requieran el uso de
animales, como son los modelos in vitro [64].
El principal objetivo de un modelo in vitro de
BHE es emular la barrera in vivo y predecir su per-
meabilidad [65]. Hay grandes diferencias cuantita-
tivas y cualitativas entre los distintos modelos celu-
lares si bien comparten unos mínimos requerimien-
tos para ser útiles:
– Estructura celular similar.
– Presencia de uniones estrechas.
– Reproducibilidad en la permeabilidad a los solutos.
– Expresión funcional de los mecanismos de trans-
porte presentes in vivo.
– Expresión de marcadores enzimáticos de BHE.
– Facilidad de manejo.
– Bajo coste.
Hasta la fecha, no se ha desarrollado un modelo que
consiga reproducir todas las características funcio-
nales y estructurales que correlacionen al 100% in
vitro e in vivo para los compuestos destinados al
SNC. Los modelos celulares desarrollados hasta el
momento pueden constituirse a partir de cultivos pri-
marios de CEMC o líneas inmortalizadas.
Los cultivos primarios de células endoteliales mues-
tran una gran similitud con el fenotipo de la BHE in
vivo y poseen excelentes características de BHE en
pases tempranos [66]. Las células pueden proceder
de varios orígenes e incluyen el origen murino [67],
porcino [68], bovino [69] y humano. Los orígenes
porcino y bovino suelen ser los más empleados de-
bido a que su tamaño y disponibilidad permiten ob-
tener las cantidades requeridas para los experimen-
tos de permeabilidad. Sin embargo, tienen un eleva-
do coste, se requiere de muchas habilidades técni-
cas para la extracción del tejido cerebral y posterior
manipulación, tienen una expresión de transporta-
dores reducida y se contaminan con facilidad por
otros tipos celulares de la unidad neurovascular
[70], todo ello junto al hecho de que no son capaces
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Afecciones neurológicas y barrera hematoencefálica
de retener sus características de BHE a lo largo de
los subcultivos, los hace susceptibles de ser descar-
tados para ensayos de múltiples fármacos que re-
quieran numerosos ensayos.
Por otro lado, se vienen empleando varias líneas
inmortalizadas de origen cerebral procedentes de
varias especies, como GPNT, RBEC1 (rata), bEnd.3,
cEND (ratón), SV-BEC (bovino), PBMEC/C1 (por-
cino) y hCMEC/D3 (humano). Las ventajas sobre
los cultivos primarios incluyen la capacidad para
mantener las características de la BHE a lo largo de
muchos subcultivos así como su fácil crecimiento y
un reducido coste [71]. Recientemente, se ha exten-
dido el empleo del modelo in vitro compuesto por
la línea endotelial cerebral de ratón bEnd3. Estas
células expresan las proteínas de unión estrecha
ZO-1, ZO-2, ocludina, claudina-5 y MAC. También
mantienen la funcionalidad de los transportadores
facultativos estereoespecíficos dependientes de so-
dio e insulina glut-1, de los transportadores ABC
como la P-gp y responden como los cultivos prima-
rios a los estímulos disruptivos [72].
La línea inmortalizada cerebral endotelial de ori-
gen murino, la cEND, es una de las líneas inmorta-
lizadas más prometedoras para la modelización de
la BHE junto con la línea humana hCMEC/D3. En
cuanto a las cEND, un aporte del glucocorticoide
hidrocortisona mejora sus características de BHE al
inducir un cambio morfológico en la célula endote-
lial junto a una sobreexpresión de ocludina. Sin em-
bargo, otras líneas endoteliales microvasculares de
cerebro inmortalizadas con el mismo virus que para
las cEND, el antígeno medio del polioma T, mues-
tran una localización incorrecta de las TJ [73].
El modelo óptimo para el estudio de la permeabi-
lidad de la BHE en humanos sería un modelo bien
caracterizado compuesto por un cultivo primario de
células endoteliales humanas. Sin embargo, obtener
tejido cerebral sano de manera rutinaria es extrema-
damente complicado. Para superar las dificultades
que supone un cultivo primario y reducir las varia-
ciones en la composición y expresión de los niveles
de transportadores, se han desarrollado varias lí-
neas celulares inmortalizadas humanas (hCMEC/D3,
BB19, NKIM-6). La hCMEC/D3 es el primer ejem-
plo de línea humana ampliamente caracterizada. Se
desarrolló por infección de cultivos endoteliales pri-
marios con vectores lentivirus que codificaban para
el hTERT y el antígeno largo T-SV40. Esta línea re-
tiene la mayor parte de las características morfoló-
gicas y funcionales de la BHE in vivo y no muestra
una pérdida fenotípica con los subcultivos. Expresa
las TJ ZO-1, MAC y claudina 5, así como transpor-
tadores ABC funcionales [74]. Sin embargo, su re-
221
A. Domínguez, et al
sistencia transepitelial alcanza valores muy limita-
dos comparados con los que se obtienen in vivo.
La correcta puesta a punto de las técnicas y con-
diciones de cultivo puede ayudar a mantener las ca-
racterísticas de BHE de las células endoteliales. La
implementación de los cultivos incluye su cocultivo
con astrocitos, con medio condicionado de los mis-
mos o con pericitos, así como la suplementación de
los medios y la reducción del suero en el medio. Los
pies astrocitarios forman parte de la BHE, por ello
se emplean en cocultivos con las células endotelia-
les. La astroglía induce y mantiene las propiedades
de barrera de las células endoteliales de cerebro y
mejora los modelos in vitro de BHE. Por ello, el co-
cultivo junto con células de la glía aumenta la ex-
presión de las TJ, las enzimas endoteliales de cere-
bro, los transportadores y ayuda a inducir un feno-
tipo más similar al existente in vivo [75]. También
están los tricultivos, que incorporan pericitos, otro
componente de la BHE. Su función no está del todo
determinada y, aunque hasta el momento se pensa-
ba que su única función era de sostén, hay una idea
cada vez más generalizada de que participan en el
mantenimiento de la BHE.
Por último, en los últimos años se vienen desa-
rrollando modelos dinámicos denominados DIV-
BHE [76]. Estos modelos pretenden reproducir el
medio fisiológico de la BHE in vivo. En éste, se crea
una tensión superficial o tensión de cizalladura, ge-
nerada por la circulación sanguínea desde la super-
ficie apical que afecta a la estructura y función de
las células endoteliales [77]. Se trata de un sistema
tridimensional en el que las células se cultivan imi-
tando las vesículas capilares. En estas construccio-
nes, las células endoteliales se exponen a un flujo
pulsátil que produce una presión comparable a la
que se produce in vivo y desarrollan un fenotipo si-
milar al de las CEMC in vivo [78].
Conclusiones
Las afecciones neurológicas generan un fuerte im-
pacto sociosanitario en todo el mundo. El trata-
miento de las enfermedades del SNC se ve limitado
por la falta de conocimientos de la fisiopatología de
éstas, así como por los efectos secundarios que ca-
racterizan a los fármacos desarrollados hasta el mo-
mento y sus problemas para atravesar la BHE.
Por lo tanto, es imprescindible desarrollar nue-
vas estrategias para la liberación de fármacos al ce-
rebro. En la actualidad, se están siguiendo dos es-
trategias bien diferenciadas y complementarias. Por
un lado, se está tratando de mejorar la eficacia de
222
los sistemas de liberación de fármacos al cerebro y,
por el otro lado, se pretende mejorar los modelos
para probar su eficacia y seguridad.
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Neurological disorders and the blood-brain barrier. Strategies and limitations for drug delivery to the brain

Introduction. The incidence in the central nervous system diseases has increased with a growing elderly population. Un­
fortunately, conventional treatments used to treat the mentioned diseases are frequently ineffective due to the presence
of the blood brain barrier.
Aim. To illustrate the blood-brain barrier properties that limit drug transport into the brain and the main strategies
employed to treat neurologic disorders.
Development. The blood-brain barrier is mainly composed of a specialized microvascular endothelium and of glial cells. It
constitutes a valuable tool to separate the central nervous system from the rest of the body. Nevertheless, it also represents
an obstacle to the delivery of therapeutic drugs to the brain.
Conclusions. To be effective, drugs must reach their target in the brain. On one hand, therapeutic agents could be designed
to be able to cross the blood brain barrier. On the other hand, drug delivery systems could be employed to facilitate the
therapeutic agents’ entry into the central nervous system. In vivo models of neurological diseases, in addition to in vitro
models of the blood brain barrier, have been widely employed for the evaluation of drugs utilized to treat central nervous
system diseases.
Key words. Blood-brain barrier. Drug delivery systems. Endothelial cells. Neurological disorders. Permeability. Tight junctions.

224 www.neurologia.com Rev Neurol 2014; 58 (5): 213-224

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