MICROBIOLOGÍA

Profesor: M.C. Hugo Alvarado Díaz

 UNIDAD 1
Introducción, Estructura y Morfología
Microbiana
1. 1. Introducción a la microbiología.
2. 2. Procariotes, Eucariontes y Virus.
3. 3. Microbioma.
4. 4. Métodos para la observación microbiana.
5. 5. Estructura y morfología microbiana.
 TIPOS DE CONOCIMIENTO

- SIMPLE
CONOCIMIENTO
EMPIRICO - ADQUIRIDO Y ACEPTADO SIN > DISCUSIÓN

- COMPLEJO

- SE ADQUIERE A TRAVÉS DEL MÉTODO CIENTÍFICO

CONOCIMIENTO -BUSCA RESPONDER INTERROGANTES

CIENTÍFICO -INTERPRETAR LA REALIDAD

-MODIFICAR LA REALIDAD
 CIENCIA
Es el conjunto de conocimientos sistemáticos comprobables que estudian,
explican y predicen los fenómenos sociales, artificiales y naturales.

El objeto de las ciencias se constituye a partir de la

negación de los resultados de la intuición.
 • Pequeño.
Mikros

• Vida.
Bios

• Ciencia, tratado.
Logos
Microorganismo o microbio. Son organismos, no visibles a
simple vista, de tamaño microscópico, dotados de
individualidad, con una organización biológica elemental.

Los microbios corresponden a organismos tales como bacterias, hongos y

levaduras, que midan menos de una décima de milímetro.

Hongos.

Virus. Microorganismos que se comportan como

parásitos intracelulares estrictos.
 AÑO RESEÑA

1683 Antoni Van Leeuwenhoek, fue el primero en descubrir los organismos que observó con la ayuda de un microscopio
construido por el mismo.

1785 Eugenio Espejo, publicó importantes trabajos de medicina, como las reflexiones acerca de las viruela, el que se
convertiría en el primer texto científico que refería la existencia de microorganismos y definiría como política de
salud, conceptos básicos como la asepsia y antisepsia de lugares y personas.

Segunda mitad del siglo Pasteur estableció un principio de los conocimientos de la microbiología, avanzaron de una forma notable junto con
XIX Roberto Coch.

1864 Louis Pasteur establece un principio fundamental para el avance de las investigaciones: los microorganismos como
los restantes seres vivos, no aparecen de manera espontanea sino a partir de gérmenes, fue el final de la teoría de la
generación espontanea.

Finales del siglo XIX El biólogo Alemán Ernst Haeckel agrupó a las bacterias en un reino a parte, el reino monera.

Comienzos del siglo XX El Ruso Serguei Winogradsky emprendió las investigaciones sobre el metabolismo de las bacterias (Estudios iniciado
por pasteur).
 AÑO RESEÑA
1905-1930 Varios microbiólogos demostraban que las enfermedades víricas conocidas se debían a agentes patógenos
minúsculos y no a las toxinas, los virus siguieron siendo invisible y su naturaleza desconocida.

1935 El Bioquímico Estadounidense Wendell Stanley logró aislar y cristalizar un virus: el del Mosaico del tabaco.

1938 Se observaron por 1ra vez los virus gracias a la investigación del microscopio electrónico.

1690 - 1970 Se descubrieron números virus y se determinaron sus caracteristicas físicas y químicas.
1982 El descubrimiento de los priones por Stanley Prusier y su equipo abrieron una via de estudio dentro de la
microbiología.
1942 Delbruck y Luria realizaron un análisis de la mutación en bacterias el cual proporcionó la base técnica y conceptual
para el trabajo genético sobre estos microorganismos.
1940 - 1945 La influencia de la microbiología, la genética y la bioquímica, puso fin a largo aislamiento de la microbiología de las
principales corrientes del pensamiento biológico.

1970 Una serie de descubrimientos generaron un nuevo y poderoso conjunto de posibilidades conocido como tecnología
de DNA contribuyendo a una nueva era tecnológica.

Bibliografía Roger y Stanier. Microbiología. Segunda edición. Editorial Reverte, S. A:14 - 16

La célula es la unidad estructural y funcional básica de un organismo , y es también la unidad
genética y evolutiva de los seres vivos (Méndez et al., 2014)
• Unicelulares.

• Pluricelulares.

• Clasificación (Chatton en 1936)

 Los seres vivos están formados de una o más células, las cuales pueden ser de distintos tipos.

Las células realizan todas las funciones vitales y se clasifican según el grado de complejidad que
presentan en su estructura.
Los organismos están formados por células. Según el número de ellas que presenten pueden ser
de dos tipos:

● Organismos unicelulares: Son aquellos que están formados por una sola célula.
Ejemplo (bacterias, algas cianofíceas, protozoos y muchas algas eucariotas), A veces viven en
colonias y en este caso, unas células realizan un tipo de función y otras células otro. Sin
embargo, cada célula puede vivir de forma independiente.

● Organismos pluricelulares: Son los organismos formados por muchas células. Todas las
células presentan la misma información genética, aunque no la expresen de la misma manera.
Las células no sobreviven aisladas, ya que pierden algunas capacidades, con el fin de
especializarse en una función concreta. Ejemplo (animales, incluido humanos, plantas, hongos
y muchas algas eucariotas).
 Las células de acuerdo a la complejidad que presentan en su estructura se clasifican en:

● Célula procariota: Son aquellas cuyo material genético no está

protegido por una membrana y el citoplasma no está
compartimentado. Es el tipo celular más sencillo.

● Célula eucariota: Son aquellas cuyo material genético se

encuentra en el interior de una estructura, el núcleo, protegido por
una membrana. El citoplasma está compartimentado. Es el tipo
celular más complejo.
ESTRUCTURA DE LA CÉLULA PROCARIOTAS
 CARACTERÍSTICAS DE LAS CÉLULAS PROCARIOTAS
pro, antes Karyon, nucleo

Clasificación Estructura Organelo

Archeas Nucleoide Ribosoma

Bacterias Citoplasma

Membrana
celular

Pared celular

Capsula

Flagelo
Escherichia coli. Micrografía de barrido. Racimo
de bacterias. Foto: Eric Erbe; coloración:
Pili
Christopher Pooley. USDA, ARS, IS Photo Unit.

Gama, 2010
CÉLULA EUCARIOTAS
 CÉLULA EUCARIOTAS
Eu, verdadero Karyon, núcleo

Tipos Estructura Clasificacion

Vegetal
Sistemas y organelos Sistemas no Protistas
Animal membranales membranosos
Membrana Fungi
Fungica Citoesqueleto
plasmática
Nucleo Plantas
Centriolos
Mitocondria Animales
Undulipodios
Retículo
endoplasmatico
Aparato de
Golgi
Lisosomas

Peroxisomas

cloroplastos

Frías, 2005
 DIFERENCIAS ENTRE LAS CÉLULAS EUCARIOTAS Y
CÉLULAS PROCARIOTAS
● La célula procariota no tiene núcleo protector del material genético.

● La célula eucariota sí presenta núcleo limitado por una estructura membranosa.

● El citoplasma de la célula eucariota se encuentra compartimentado, presentando orgánulos, mientras que en la procariota no

aparece esta compartimentación.

● La célula procariota está protegida por una pared bacteriana distinta a la que envuelve a las células vegetales.

● Las células procariotas son organismos más primitivos que las células eucariotas.

● El ADN de células procariotas es circular, mientras que el ADN de eucariotas es lineal.

● Cuando presentan flagelos, la estructura es diferente en procariotas y eucariotas.

● La membrana plasmática de procariotas contiene más cantidad de proteínas que la membrana de las eucariotas.

● La célula procariota tiene invaginaciones en su membrana, denominadas mesosomas.

 LOS VIRUS ¿Son o no células?

Debido a que no pueden reproducirse por sí mismos (sin un hospedero), los virus no se consideran vivos.
Los virus tampoco tienen células: son muy pequeños, mucho más pequeños que las células de los seres
vivos; básicamente son solo paquetes de ácido nucleico y proteínas.
 BACTERIÓFAGOS

Virus parásitos de bacterias POSEEN:

CABEZA: Región icosaédrica donde se aloja el material genético.
COLA: formada por una banda de simetría helicoidal en cuyo interior se encuentra un eje tubular.
PLACA BASAL: con fibra y espinas que constituyen el sistema de anclaje del virus a la bacteria que infecta.
 FORMAS Y TIPOS DE VIRUS

Carecen de orgánulos y estructuras celulares necesarias para llevar a cabo la vida celular.

Para su reproducción el virus necesita introducir su ácido nucleico en una célula viva , donde se podrá
expresar dentro de la nueva estructura celular. Por esta razón son parásitos obligados.
 MICROBIOMA

• Microbiota hace referencia a la comunidad de

microorganismos vivos residentes en un nicho ecológico

determinado, como el intestino (colon) humano.

• El microbioma es el conjunto formado por los

microorganismos, sus genes y sus metabolitos en un nicho

ecológico determinado.
 MICROBIOMA
Los prebióticos son sustancias no digeribles para los humanos que se encuentran en
ciertos alimentos pero que si lo son para los microorganismo benéficos del tracto
digestivo, por lo que promueven su crecimiento y la actividad.

La Organización Mundial de la Salud (OMS) define los

probióticos, como "microorganismos vivos (bacterias) que,
cuando se administran en cantidades adecuadas, confieren
un beneficio para la salud del huésped".
 El término «simbióticos» se refiere a los productos que contienen tanto probióticos como
prebióticos y de esta manera, consiguen llegar al intestino y llevarle sustancias que son benéficas
para la microbiota intestinal.
Éste no solo se refiere a los microorganismos involucrados sino que también engloba su teatro de actividad, lo que resulta en la
formación de nichos ecológicos específicos.
 MÉTODO DE OBSERVACIÓN MICROBIANA
Un microscopio es un instrumento óptico que permite observar objetos pequeños con una gran
acercamiento y que no son visibles a simple vista.

El término microscopio es la
conjunción de dos
conceptos, por un lado
micro “pequeño” y “scopio”
que significa “observar”, en
suma se refiere a la
observación de partículas
pequeñas.
 MÉTODO DE OBSERVACIÓN MICROBIANA
Debemos distinguir entre las técnicas para observación de microorganismos vivos y
las preparaciones para tinción.

Las tinciones ofrecen una información adicional

a la simple observación de la morfología, ya que

ponen de manifiesto características de la pared

celular o la existencia de estructuras especiales,

como las esporas bacterianas.

 ESTRUCTURA Y MORFOLOGÍA DE COLONIAS
La morfología colonial bacteriana son aquellas características descriptivas que ayudan a los microbiólogos a
determinar y completar el “perfil” de una especie bacteriana cultivable.
Según su forma general:

•Puntiformes: aquellas que crecen como pequeños agregados de puntos cercanos entre sí.
•Circulares: son colonias muy uniformes, completamente redondas.
•Filamentosas: las colonias que crecen como filamentos que se proyectan desde una región
central o núcleo.
•Irregulares: esas colonias que no tienen formas definidas y que son más bien amorfas.
•Rizoides: como su nombre lo indica, estas colonias crecen de forma semejante a las raíces de
una planta.
•Fusiformes: aquellas colonias que presentan una forma alargada, como si se tratase de una
elipse cuyos bordes han sido estirados longitudinalmente.
Según su elevación:

•Planas: las que tienen poca o ninguna elevación.

•Elevadas: se proyectan ligeramente sobre la superficie, pero lo hacen de manera regular, es
decir, la elevación es uniforme en todo el diámetro de la colonia.
•Convexas: las que elevan más notoriamente en el centro, pero cuyos márgenes permanecen
más bien adosados a la superficie.
•Pulvinadas: las que se asemejan a un “domo” que sobresale de la superficie prominentemente.
•Umbonadas: aquellas colonias que presentan bordes elevados, pero que se caracterizan por
“proyectar” una mayor masa de células hacia el centro, adquiriendo una forma similar a una
mama (“mamiliforme”).
Según textura
Además de las características mencionadas, las colonias bacterianas también
pueden presentar texturas diferentes que pueden ser apreciadas a simple vista, de
modo tal que se han definido las colonias
•Suaves y brillantes.
•Rugosas.
•Arrugadas.
•Secas o con aspecto polvoriento.
 MÉTODO DE OBSERVACIÓN MICROBIANA
Para observar al microscopio se utiliza el objetivo de inmersión (máximo aumento). Para ello se coloca sobre la
muestra una gota de aceite de inmersión, se coloca la preparación con el aceite en la platina del microscopio, se
aproxima con el tornillo macrométrico para enfocar y se observa, hasta que el objetivo toque el aceite.

Posteriormente, ya mirando por el ocular, hacer un enfoque grosero con ayuda del mismo
tornillo. Cuando se aprecie una imagen más o menos clara, ajustar el enfoque con el tornillo
micrométrico.
 Observación en fresco
Material A partir de cultivos en medio líquido: Cargar el asa bacteriológica con una gota de
• Cultivo puro cultivo y depositarla en un portaobjetos limpio. Colocar un cubreobjetos (evitar
• Portaobjetos
burbujas de aire). Si la cantidad de cultivo es muy pequeña se carga 2 o 3 veces.
• Cubreobjetos
• Microscopio
• Aceite de inmersión

Observación en fresco de un cultivo Bacilus spp sin movimiento

bacteriano

A partir de cultivos en medio sólido: Se coloca una gota de agua en el portaobjetos, a continuación se carga el asa
con una pequeña cantidad de bacterias de una colonia del cultivo y se resuspende en la gota de agua. Colocar el
cubrebjetos. La preparación se observa al microscopio pudiendo determinar su morfología y movilidad.
 Fijación al calor
A partir de cultivos en medio líquido: se carga el asa con una gota de cultivo y se deposita en un portaobjetos realizando una
extensión de la muestra hasta conseguir una capa fina (frotis).
A partir de un cultivo en medio sólido: disponer de una gota de agua en el portaobjetos. Se carga el asa con una pequeña
cantidad de bacterias de una colonia del cultivo y se resuspende en la gota de agua, tras lo cual realizaremos el frotis.

Posteriormente debemos secar la preparación acercándola a la llama del mechero evitando que se caliente demasiado
(comprobar con el dorso de la mano que no quema). Una vez seca, se procede a la fijación, haciendo pasar la preparación 3-4
veces por la llama del mechero (la llama debe tocar la parte inferior del portaobjetos). A partir de este momento la preparación
está lista para teñir y el procedimiento a seguir depende del tipo de tinción.

La tinción Gram es la técnica
de coloración más sencilla y
útil en microbiología para
identificar bacterias. Esta fue
creada por el médico danés
Christian Gram (1884), quien
clasificó las bacterias en
grampositivas (color morado)
y gramnegativas (color
rosado), de acuerdo a la
coloración de la pared celular.
Tinción de Gram
Material
• Portaobjetos con muestra fijada al calor
• Batería de colorantes. Cristal-Violeta y Safranina
• Solución de decoloración de Alcohol-Acetona
• Pinzas metálicas
• Cronómetro
Procedimiento
• 1.Sumergir el portaobjetos en cristal-violeta de genciana y mantener
durante 1 min.
• 2.Lavar con agua y dejar escurrir
• 3.Sumergir en lugol. Dejar actuar 1 minuto.
• 4.Lavar con agua y dejar escurrir
• 5.Decolorar con alcohol-acetona durante 15 segundos.
• 6.Sacarlo e inmediatamente sumergirlo en safranina para contrastar.
Dejar actuar 1 min.
• 7.Lavar con agua y secar con papel de filtro.
 La tinción de Gram es una prueba que detecta bacterias en el lugar donde se sospecha una infección, como la
garganta, los pulmones, los genitales o las lesiones en la piel. Esta técnica también se pueden usar para detectar
bacterias en ciertos fluidos corporales, como la sangre o la orina.

En la observación microscópica las bacterias Gram-positivas aparecen

teñidas de color violeta, y las Gram-negativas de rosa.

Cocos gram negativos Cocos gram positivos Cocos gram positivos y bacilos gram negativos
 Tinción de esporas
Material
•Portaobjetos con muestra fijada al calor En la observación microscópica las

•Batería de colorantes. Verde Malaquita y Safranina esporas aparecen teñidas de verde y las

•Hisopo para flamear células vegetativas de rosa.

•Pinzas metálicas
•Cronómetro

Procedimiento

1.Cubrir el portaobjetos con verde malaquita.

2.Calentar hasta la emisión de vapores. Mantener durante 3
minutos.
3.Lavar con agua.
4.Cubrir del portaobjetos con safranina para contrastar. Dejar
actuar 1 minuto.
5.Lavar con agua y secar con papel de filtro.
 Tinción de Ziehl-Neelsen
Zielh-Nelseen negativa
La Tinción de Ziehl-Neelsen es
una tinción para micobacterias
 Tinciones para hongos
Tinción con azul de lactofenol.

Es una tinción convencional para observar la morfología y gemación de las células.

Se procede a colocar una gota de azul algodón en el portaobjetos. A continuación se

carga el asa con una pequeña cantidad de células de una colonia del cultivo y se
resuspende en la gota de colorante. Colocar el cubreobjetos y observar al
microscopio

Tinción con tinta china

El procedimiento es igual al anterior pero las células se

resuspenden en tinta china.

Microcultivo con azul de lactofenol

A partir del microcultivo extraer el sistema portaobjetos-cultivo-cubreobjetos de la placa de
Petri. Se puede observar directamente al microscopio o teñirlo con azul de lactofenol. Para
montar una preparación teñida, colocar una gota de azul de lactofenol en un portaobjetos y
con ayuda de unas pinzas, extraer cuidadosamente el cubreobjetos del microcultivo con los
filamentos del hongo adheridos en la cara inferior. Colocar sobre la gota de colorante y
llevar al microscopio. Observar con los objetivos de 10x, 20x y 40x.
 Observación microscópica de parásitos

La observación de detalles morfológicos y de la histopatología

de las las lesiones producidas en las parasitosis, son la técnica
diagnóstica más importante en este conjunto de
enfermedades.

No es necesario realizar ninguna manipulación previa porque se dispone de preparaciones

ya montadas para observación directa al microscopio. Visualizar comenzando con el objetivo
de menor aumento, pasando progresivamente a mayor aumento dependiendo del tipo de
parásito a visualizar.

Para cada parásito a observar se dispone de una ficha impresa, al lado del microscopio, en la
que se describe el ciclo biológico con sus fases más importantes y la morfología que adopta
el parásito en cada una de ellas, especialmente la que tenéis en el microscopio