TEMA 4.

CRECIMIENTO MICROBIANO y FACTORES QUE

AFECTAN A LA SUPERVIVENCIA

4.1. Crecimiento microbiano

4.2. Efecto del medio ambiente sobre el
crecimiento
4.3. Cultivo de microorganismos
4.4. Medición del crecimiento
4.5. Control del crecimiento por agentes
antimicrobianos
4.6. Antibióticos

“El autor se acoge al artículo 32 de la Ley de Propiedad

Intelectual vigente respecto al uso parcial de obras ajenas,
como imágenes, gráficos u otro material contenido en las
diferentes diapositivas., dado el carácter y la finalidad
exclusivamente docente y eminentemente ilustrativa de las
explicaciones en clase de esta presentación.“
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.3. Cultivo de Microorganismos

CULTIVO: sistema donde se produce la multiplicación de una población microbiana
para obtener una densidad de población elevada

Componentes de un cultivo:
Nutrientes Tipos de cultivo:
Inóculo • Puros (o axénicos)
Ausencia de contaminación • Mixtos

En base a las categorías metabólicas: Preparación

• Fuente de carbono
• Fuente de energía
• Macronutrientes (N, O, P, S, sales, vitaminas, etc.) Esterilización
• Micronutrientes (contaminantes de sales)
• H2O
• pH adecuado (tampones)
• Auxótrofos vs prototrofos Inoculación

Autoclave
Tipos de medios de cultivo:
Líquidos / sólidos
Definidos o sintéticos Incubación
Complejos
Selectivos
“Test”…
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.3. Cultivo de Microorganismos

DIVISIÓN CELULAR Y REPARTO DE COMPONENTES
INCREMENTO EN EL NÚMERO DE CÉLULAS
(NO se refiere al tamaño o la biomasa de las células)

“turbidez”
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.3. Cultivo de Microorganismos

Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.3. Cultivo de Microorganismos

CULTIVO EN MEDIO SÓLIDO
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.3. Cultivo de Microorganismos

CULTIVO EN MEDIO SÓLIDO
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.3. Cultivo de Microorganismos

4.3. CULTIVO EN MEDIO SÓLIDO
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.3. Cultivo de Microorganismos

4.3.2. CULTIVO CONTINUO:

4.3.1. CULTIVO DISCONTINUO
ESTADO ESTACIONARIO
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.3. Cultivo de Microorganismos

4.3.1. CULTIVO DISCONTINUO

• Sistema cerrado en el que sólo se intercambia con el exterior energía y, a veces,

gases. No entran ni salen células ni productos disueltos.
• Presenta una curva de crecimiento característica con cuatro fases:

Fase de latencia – Crecimiento exponencial – Fase estacionaria – Muerte celular

La fase exponencial
se detiene porque el
sustrato es limitante
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.3. Cultivo de Microorganismos

4.3.1. CULTIVO DISCONTINUO

Tg = tiempo de generación (horas)

2n

El intervalo que transcurre en la

formación de dos células a partir
de una célula se llama
generación y el tiempo
requerido para esto es el tiempo
de generación.
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.3. Cultivo de Microorganismos

4.3.1. CULTIVO DISCONTINUO

Haloquadratum walsbyi 25ºC mes!

Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.3. Cultivo de Microorganismos

4.3.2. CULTIVO CONTINUO: ESTADO ESTACIONARIO

Permite mantener cultivos durante largos períodos de tiempo. El volumen

es constante, aunque se va añadiendo medio y se va eliminando cultivo.

Si el medio entra a velocidad constante, la cantidad de nutrientes es constante, por lo que la

concentración de bacterias es constante. Si cambia, µ varía y se alcanza una nueva
concentración celular.
TEMA 4. CRECIMIENTO MICROBIANO y FACTORES QUE
AFECTAN A LA SUPERVIVENCIA

4.1. Crecimiento microbiano

4.2. Efecto del medio ambiente sobre el
crecimiento
4.3. Cultivo de microorganismos
4.4. Medición del crecimiento
4.5. Control del crecimiento por agentes
antimicrobianos
4.6. Antibióticos

“El autor se acoge al artículo 32 de la Ley de Propiedad

Intelectual vigente respecto al uso parcial de obras ajenas,
como imágenes, gráficos u otro material contenido en las
diferentes diapositivas., dado el carácter y la finalidad
exclusivamente docente y eminentemente ilustrativa de las
explicaciones en clase de esta presentación.“
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.4. Medición del Crecimiento

1. Estimación de la masa celular (peso seco, absorbancia)

2. Medición de componentes celulares (ácidos nucleicos, proteínas, actividades enzimáticas)
3. Determinación del número de células:

métodos directos
cámara de recuento recuento en placa
tinción DAPI

Viables
cultivables

Totales
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.4. Medición del Crecimiento

1. Estimación de la masa celular (peso seco, absorbancia)

2. Medición de componentes celulares (ácidos nucleicos, proteínas, actividades enzimáticas)
3. Determinación del número de células:

métodos indirectos
Métodos ópticos, turbidimétricos
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.4. Medición del Crecimiento

Problemática asociada al recuento de viables:

‘La Gran Anomalía del Recuento en Placa’
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.4. Medición del Crecimiento

Problemática asociada al recuento de viables:

1. Observamos al microscopio 0,1 2. Sembramos 0,1 ml de muestra

ml de muestra en un medio de cultivo
3. Incubamos (esperamos a que
Primer el crecimiento sea visible)
caso

Contamos 13 microorganismos en 0,1 ml de Contamos 4 colonias (cada colonia viene de un

muestra: hay 130 microorganismos por cada microorganismo o UFC = unidad formadora de colonia)
mililitro de muestra natural tras sembrar e incubar 0,1 ml de muestra: hay 40
microorganismos (UFCs) por cada mililitro de muestra
natural

Posible explicación: una parte de los microorganismos ‘rojos’ están muertos o son viables pero no
cultivables.
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.4. Medición del Crecimiento

Problemática asociada al recuento de viables:

1. Observamos al microscopio 0,1 2. Sembramos 0,1 ml de muestra

ml de muestra en un medio de cultivo
3. Incubamos (esperamos a que
Segundo caso el crecimiento sea visible)

Contamos 13 microorganismos en 0,1 ml de Contamos 4 colonias (cada colonia viene de un

muestra: hay 130 microorganismos por cada
mililitro de muestra natural
microorganismo o UFC = unidad formadora de colonia)
tras sembrar e incubar 0,1 ml de muestra: hay 40
microorganismos (UFCs) por cada mililitro de muestra
natural
‘Gran anomalía del recuento en placa’
No crece todo lo que observamos

Posible explicación: una parte de los microorganismos ‘rojos’ están muertos o son viables pero no
cultivables. Los microorganismos ‘verdes’ pueden estar muertos o puede que estén vivos pero no
puedan crecer en el medio de cultivo (son ‘UNCULTURED’)
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.4. Medición del Crecimiento

Problemática asociada al recuento de viables:

1. Observamos al microscopio 0,1 2. Sembramos 0,1 ml de muestra

ml de muestra en un medio de cultivo
3. Incubamos (esperamos a que
Tercer caso el crecimiento sea visible)

Contamos 2 colonias (cada colonia viene de un

microorganismo o UFC = unidad formadora de colonia)
Contamos 13 microorganismos en 0,1 ml de
tras sembrar e incubar 0,1 ml de muestra:
muestra: hay 130 microorganismos por cada
hay 20 microorganismos (UFCs) por cada mililitro de
mililitro de muestra natural
muestra natural

‘Gran anomalía del recuento en placa’

No crece todo lo que observamos, ni siquiera los microorganismso más abundantes
Conclusión: aunque pueda haber un porcentaje de microorganismos muertos, y de
microorganismos viables no cultivables, la mayoría de microorganismos del planeta son
‘uncultured’!!!!!!
Tema 4. Crecimiento Microbiano

4.4. Medición del Crecimiento

Problemática asociada al recuento de viables:

Se recuperan más de medios con más

nutrientes
Ej: por cada 1000 bacterias que
vemos al microscopio del agua de mar, sólo
1. Están muertos
2. Son viables no cultivables (VBNC)
3. Son ‘uncultured’ (No crecen en los medios
de cultivo tradicionales)

crece UNA colonia.