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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

TESIS II

Evaluación de la actividad antioxidante y antimicótica del extracto hidroalcohólico de

las hojas de Bunchosia armeniaca (ciruelo cansa boca)

PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE

BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA

AUTORES : POMA AVILA, Oliver Pierre

MEDINA JUAREZ, Ruth Guadalupe

ASESOR : Dr. RUIZ REYES, Segundo Guillermo

TRUJILLO – PERU

2018

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DEDICATORIA

A Dios.

Por darme vida, salud, por fortalecer mi corazón e iluminar mi mente y por haber

puesto en mi camino a aquellas personas que han sido mi soporte y compañía.

A mis padres

Por ser una fuente de motivación e inspiración inagotable y de alegría, en mi día a día,

por estar a mi lado, por su apoyo moral y entusiasmo brindado para seguir adelante en

mis propósitos, por el tiempo que compartieron sus experiencias, conocimientos y

consejos, por todo su amor.

A mis Amigos(a)s

Porque siempre he contado con ellos para todo, gracias por la amistad y por

permitirme aprender más de la vida a su lado.

Ruth Guadalupe

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A Dios

Por darme la vida, por poner en mí camino a personas maravillosas y por las

bendiciones y los regalos que recibo día tras día. Y a su siempre apoyo incondicional

para proponerme y alcanzar mis objetivos.

A mis padres

Eugenio y Maximina, quienes permanentemente me apoyaron con su espíritu

alentador, me acompañaron a lo largo de mi camino, brindándome consejos,

orientación y fuerza en los momentos cruciales de mi vida, levantándome cuando me

caí y sosteniendo mi vuelo en los grandes momentos de mí existir.

A mi familia

Rocio y Dayiro, por siempre permanecer a mi lado dándome esa fuerza para seguir

adelante y ser mi compañía en todos los momentos de mi vida

A mis docentes

Quienes laboran con la materia más valiosa de nuestra patria, la mente, formando

hombres y mujeres del mañana, sobre la base de valores morales, éticos y

humanísticos.

Oliver Pierre

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AGRADECIMIENTO

Agradecemos a Dios Todopoderoso por estar con nosotros en cada paso que

dimos, por fortalecer nuestros corazones e iluminar nuestras mentes, y por haber

puesto en nuestro camino a personas que han sido de soporte y compañía, así como

habernos ayudado a culminar nuestros estudios.

Un agradecimiento especial a la cátedra de Farmacognosia y Farmacobotanica

a mis profesores y a nuestro asesor Dr. Segundo Guillermo Ruiz Reyes por su apoyo

constante y desinteresado, por su amistad, por sus enseñanzas y disposición en la

conducción del desarrollo de este trabajo de investigación.

Agradecemos también, a los respetables señores miembros del jurado por el

interés y sugerencias para la realización de este trabajo.

Ruth Guadalupe y Oliver Pierre

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PRESENTACIÓN

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:

En cumplimiento de las normas dispuestas en el reglamento interno de la Facultad de

Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, sometemos a su

consideración la Tesis II intitulado:

“Evaluación de la actividad antioxidante y antimicótica del extracto hidroalcohólico de

las hojas de Bunchosia armeniaca (ciruelo cansa boca)”

Con el Propósito de optar el Grado Académico de Bachiller en Farmacia y Bioquímica.

Dejamos a vuestra consideración señores miembros del jurado la calificación del

siguiente trabajo.

Trujillo, Setiembre del 2018

………………………………. ………..………………………

Medina Juárez Poma Ávila


Ruth Guadalupe Oliver Pierre

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JURADO CALIFICADOR

…………………………………….

Dr. QF. Francisco M. Abanto Zamora

PRESIDENTE

…..……….………………………… ……………………………………...

Dr. QF. Segundo G. Ruiz Reyes Dra. QF. Marilú R. Soto Vásquez

MIEMBRO MIEMBRO

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RESUMEN

En el presente trabajo se determinó la evaluación de la actividad antioxidante y

antimicótica del extracto hidroalcohólico de la hoja de Bunchosia armeniaca “ciruelo

de cansa boca”. Las hojas fueron recolectadas del Jardín Botánico de Plantas

medicinales “Rosa Elena de los Ríos Martínez” de la Facultad de Farmacia y

Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, Departamento de La Libertad.

Los extractos hidroalcohólicos fueron preparados mediante reflujo. Se determinó la

capacidad antioxidante mediante el método desarrollado por Brand-Williams, cuyas

lecturas espectrofotométricas se realizaron a 520 nm. Los resultados fueron

expresados en porcentaje de captura del radical 2,2-Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPHº)

a las concentraciones (0,02 Mm, 0,04 mM, 0,06 Mm, 0,08 Mm y 0,1 Mm.)

encontrando un IC50 de 0,4810 mg/mL teniendo capacidad antioxidante prometedora

comparado con los artículos hallados. El efecto antimicótico se realizó en cepas de

Cándida albicans ATCC 10231 empleando el método de Kirby-Bauer (difusión en

agar). Para el efecto antifúngico, el grupo experimental I (extracto hidroalcohólico al

25%) mostro un promedio de 7,176 mm de diámetro, para el grupo experimental II

(extracto hidroalcohólico al 50%) mostro un promedio de 7,836 mm de diámetro y

para el grupo experimental III (extracto hidroalcohólico al 75%) de mayor

concentración presento un promedio de 8,236 mm de diámetro.

Palabras claves: Bunchosia armeniaca, Cándida albicans, extracto hidroalcohólico

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ABSTRACT

In the present work, the evaluation of the antioxidant and antifungal activity of the

hydroalcoholic extract of the Bunchosia armeniaca leaf "plum de cansa boca" was

determined. The leaves were collected from the Botanical Garden of Medicinal Plants

"Rosa Elena de los Rios Martinez" of the Faculty of Pharmacy and Biochemistry of the

National University of Trujillo, Department of La Libertad. The hydroalcoholic extracts

were prepared by reflux. Antioxidant capacity was determined by the method developed by

Brand-Williams, whose spectrophotometric readings were performed at 520 nm. The

results were expressed in percentage of capture of the radical 2,2-Diphenyl-1-

Picrilhidrazilo (DPPHº) at the concentrations of 0.02 mm, 0.04 mm, 0.06 mm, 0.08 mm and

0, 1 Mm. finding an IC50 of 0.4810 mg / mL having an improved antioxidant capacity with

the articles found. The antifungal effect was performed on strains of Cándida albicans

ATCC 10231 using the Kirby-Bauer method (agar diffusion). For the antifungal effect,

experimental group I (25% hydroalcoholic extract) showed an average of 7.176 mm in

diameter, for experimental group II (hydroalcoholic extract at 50%) it showed an average of

7.836 mm in diameter and for experimental group III (hydroalcoholic extract at 75%) of

higher concentration with an average of 8.236 mm in diameter.

Keywords: Armenian bunchosia, Cándida albicans, hydroalcoholic extract

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ÍNDICE

Pág.

DEDICATORIA i

AGRADECIMIENTO iii

PRESENTACION iv

JURADO CALIFICADOR v

RESUMEN vi

ABSTRACT vii

I. INTRODUCCION........................................................................1

II. MATERIAL Y METODO….......................................................7

2.1. MATERIAL..........................................................................7

2.2. EQUIPOS…..........................................................................8

2.3. METODO…..........................................................................9

III. RESULTADOS............................................................................17

IV. DISCUSION.................................................................................20

V. CONCLUSIONES........................................................................24

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.........................................25

VII. ANEXOS................................................................................................31

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I. INTRODUCCIÓN

Desde la antigüedad las plantas han sido un recurso al alcance del ser humano para su

alimentación y prevención de enfermedades; estas últimas llamadas plantas medicinales,

utilizada para diversas patologías, principalmente a partir de los extractos de las hojas

que tienen propiedades antibacterianas como antiinflamatorias. La organización

Mundial de la salud definió en China, en 1980, “planta medicinal” como todo

vegetal que contiene en uno o más de sus órganos, sustancias que pueden ser utilizadas

con fines terapéuticos, preventivos o que son precursores de hemisintesis farmacéutica,

dentro de las enfermedades más frecuentes tenemos a las crónico-degenerativas que son

las principales causas de muerte en el mundo 2,3.

En los últimos años, han surgidos diferentes teorías que pretenden explicar el proceso de

envejecimiento, entre estas hay una que tiene mayor aprobación cuya referencia es que

esta ocurre a consecuencia de los radicales libres. Esta teoría propone que, debido a la

variación de los mecanismos antioxidantes, genera y se acumulan los radicales libres

cuya consecuencia directa es la presencia de un estrés oxidativo que destruye estructuras

celulares, lo que conlleva luego a la muerte celular 4, 5, 6.

Los radicales libres es una especie química ya sea atómica o molecular, inestables de

alta energía capaz de existir independientemente y que contiene uno o más electrones

desapareados en el orbital más externo. Estos electrones generan un campo eléctrico

que no es anulado, lo que ocasiona que la especie

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química sea paramagnética y por ende altamente reactivo, capaz de actuar en los

sistemas biológicos del organismo causando daños irreversibles 7, 8.

Nuestro organismo está luchando contra los radicales libres cada momento del día. El

problema para nuestra salud se produce cuando nuestro organismo tiene que soportar un

exceso de radicales libres durante años, estos se forman de dos maneras: “De forma

exógena (contaminación atmosférica, el humo del cigarrillo, los alimentos y los

medicamentos) y de forma endógena (se da en la cadena respiratoria y en el sistema

inmune como también en enzimas oxidativas)”; estos contribuyen en un aumento de los

radicales libres en nuestro organismo, que significa la aparición de las enfermedades

como la arterioesclerosis, la artritis reumatoide, daños pulmonares, cerebrales y

cardiovasculares e incluso el envejecimiento 9,10.

La protección que debemos tener para evitar el aumento de los radicales libres en

nuestro organismo que aceleran la rapidez de envejecimiento y degeneración de las

células de nuestro cuerpo es el consumo de antioxidantes naturales, para equilibrar o

neutralizar a los radicales libres se hallan algunos compuestos que son producidos de

forma endógena por las células obtenidos exógenamente, de manera exógena lo

encontramos en los compuestos con propiedades antioxidantes que son compuestos

fenólicos como los flavonoides (verduras, hortalizas semillas y legumbres) y

precisamente se necesitan para la protección del cuerpo humano en contra de

enfermedades degenerativas, que se requiere para prevenir la actividad de los radicales

libres y que aquel desequilibrio causa el estrés oxidativo 11, 12, 13 .

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Los hongos son agentes causantes de innumerables enfermedades en el hombre.

Cualquier tejido puede ser afectado por lo que se presentan diversos cuadros clínicos,

cada uno de ellos asociado directamente al estado inmunológico del paciente. El número

exacto de hongos Fitopatógenos se desconoce, pero se estiman en un número superior a

las diez mil especies, pertenecientes a diversas categorías taxonómicas 14, 15.

Para el manejo de enfermedades, se implementan controles químicos principalmente.

Los residuos tóxicos productos del uso continuo de pesticidas, afectan la salud de los

trabajadores y deterioran el ambiente. También se debe tener en cuenta que el problema

de la resistencia a fungicidas. Esto se traduce en la inefectividad de algunos de estos,

creando la necesidad de nuevos productos con modos de acción diferentes 16.

La búsqueda de alternativas de manejo como el desarrollo de variedades resistentes, el

control biológico y el uso de elicitores bióticos, se constituyen en campos de particular

interés investigativo para el adecuado desarrollo del cultivo 17.66

En la búsqueda de nuevos controladores de enfermedades, los productos naturales

pueden llegar a ser fuente de compuestos fungicidas o fungistáticos amigables con el

ambiente. Los extractos vegetales, aceites esenciales y metabolitos secundarios son una

fuente botánica de compuestos alternativos a los fungicidas usados actualmente 18.

Los extractos de muchas plantas contienen compuestos de bajo peso molecular, que

inhiben el crecimiento de hongos. Estos compuestos se pueden encontrar en plantas

sanas o se pueden encontrar en extractos de

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plantas que han estado expuestas a patógenos. Dichos compuestos están involucrados

en una multitud de funciones ecológicas entre ellas las interacciones planta

microorganismos 19, 20.

Teniendo en cuenta los problemas de resistencia a fungicidas que podrían resultar por la

biología del patógeno, por el mal manejo de estos productos y que la acción de los

extractos vegetales para el control de fitopatogenos ha sido demostrada ampliamente,

surge la opción de utilizarlos como una alternativa para el manejo de enfermedades

fungosas, diferente a los productos tradicionales 21.

Bunchosia armeniaca es un género botánico de plantas con flores de 131 especies

pertenecientes a la familia Malpighiaceae. Esta planta es originaria de América

conocida como “Cansa boca”, “cafezinho” o “falso – Guaraná”, es un árbol de tamaño

mediano que empieza sus ramificaciones a muy baja estatura teniendo así una copa

ancha. Sus frutos son de forma elipsoidal que cuando están maduros toman el color

rojizo además generalmente contiene dos semillas. Su clima es tropical, con una

temperatura relativa de 25 a 27°C y humedad entre 70 y 80 % 22, 23.

Cabe mencionar que actualmente el Perú tiene una gran diversidad de plantas y se usan

de forma empírica algunas de ellas, ya que esto viene de nuestros antepasados por sus

propiedades de sanar o prevenir enfermedades dada la capacidad que tienen para

sintetizar diversos metabolitos secundarios (como flavonoides, taninos, terpenos,

cumarinas, lignanos, etc.) por la cual constituye una buena alternativa el estudio de sus

diversas propiedades 24 - 27.

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La Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Organización de las Naciones Unidas

para la Agricultura y la Alimentación. (FAO) publicaron recientemente un informe

donde se recomienda la ingesta de un mínimo de 400 g diarios de frutas y verduras

(excluidas las patatas y otros tubérculos feculentos) para prevenir enfermedades

crónicas como las cardiopatías, el cáncer, la diabetes o la obesidad, así como para

prevenir y mitigar varias carencias de micronutrientes 28.

El presente trabajo de investigación pretende evaluar la actividad antioxidante y

antimicótica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca

“Ciruelo cansa boca” del Jardín Botánico de Plantas Medicinales “Rosa Elena de los

Ríos Martínez” de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de

Trujillo, Departamento de La Libertad, lo cual sirve como aporte para avalar el uso de la

planta en medicina tradicional. De esta manera brindar a la población una alternativa

cercana y cómoda para su atención primaria con esta especie vegetal.

Bajo estas premisas y con el objetivo de contribuir al conocimiento científico de las

plantas medicinales de nuestro país es que el presente trabajo está orientado a estudiar la

especie Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca”.

Con los antecedentes citados los autores del presente trabajo nos planteamos el

siguiente problema:

¿Presentará actividad antioxidante y antimicótica el extracto hidroalcohólico de las

hojas de Bunchosia armeniaca “Ciruelo cansa boca”?

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1. OBJETIVOS:

1.1. Objetivo General:

- Evaluar la actividad antioxidante y antimicótica del extracto

hidroalcohòlico de las hojas de Bunchosia armeniaca “Ciruelo

cansa boca”.

1.2. Objetivos Específicos:

- Determinar la actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico de

las hojas de Bunchosia armeniaca “Ciruelo cansa boca”

frente al radical libre DPPHº

- Determinar la actividad antimicótica del extracto hidroalcohòlico

de las hojas de Bunchosia armeniaca “Ciruelo cansa boca” frente a

Cándida albicans ATCC 10231.

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II. MATERIAL Y METODO

2.1. Material De Estudio.

2.1.1. Material Biológico:

Se utilizó un cultivo puro estandarizado de Cándida albicans ATCC

10231, proporcionadas por el Hospital Referencial del Niño – Belén.

2.1.2. Material Botánico

Se utilizó 1 kilogramo de hojas de Bunchosia armeniaca "Ciruelo

cansa boca” procedente del Jardín Botánico de Plantas Medicinales

“Rosa Elena de los Ríos Martínez” de la Facultad de Farmacia y

Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, Departamento de

La Libertad.

2.1.3. Equipos:

- Balanza Analítica “Ohaus-Ga200”, (precisión 0.0001g)

- Refrigerador (Coldex Cool Style )

- Espectrofotómetro Heweltt Packard modelo 8452 A

- Autoclave Autester

- Balanza analítica Sartorius

- Estufa (memmert)

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2.1.4. Reactivos

– Agua destilada

– Alcohol 96° GL (Dropacksa )

– 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPHº)

– Dimetilsulfoxido

2.1.5. Medios de cultivo

– Agar Dextrosa Sabouraud al 4%

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2.2. MÉTODO

2.2.1. Preparación de la especie vegetal

2.2.1.1. Recolección, identificación y preparación del material

botánico.

Se recolectaron las hojas de Bunchosia armeniaca "Ciruelo cansa

boca” procedente del Jardín Botánico de Plantas Medicinales “Rosa

Elena de los Ríos Martínez” de la Facultad de Farmacia y

Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, Departamento

de La Libertad y fueron llevadas para su identificación taxonómica

al Herbarium Truxillense (HUT) de la Universidad Nacional de

Trujillo.

2.2.1.2. Procesamiento de las hojas de Bunchosia

armeniaca

Se procedió a seleccionar las hojas de B. armeniaca con el objetivo

de realizar la separación de las partes deterioradas y evitar la mezcla

con otra especie. La droga fue convenientemente lavada y desecada.

Las hojas se colocaron extendidas sobre papel kraft en un lugar

fresco y seco durante 24 horas. Luego fueron pasadas a bolsas

hechas de papel kraft y se llevó a estufa a temperatura de 40 ºC hasta

peso constante.

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2.2.2. Obtención del extracto hidroalcohólico de las hojas de B.

armeniaca.

Se colocó 150 g de la droga a un balón de 500 mL con 250 mL de

etanol 50% v/v. luego se llevó a reflujo durante 2 horas, se dejó en

reposo 30 min y se filtró. Se concentró en baño maría hasta obtener

150 ml del extracto hidroalcohólico.

2.2.3. Actividad Antimicótica 29, 30.

Se realizó empleando el método de difusión en discos según el

Método de Kirby-Bauer.

2.2.3.1. Preparación de las diluciones del extracto hidroalcohólico:

En crioviales de 2ml se colocó el extracto hidroalcohólico y se realizó las

siguientes diluciones:

25% 25 ul de extracto hidroalcohólico + 75 ul de Dimetilsulfoxido. 50% 50

ul de extracto hidroalcohólico + 50 ul de Dimetilsulfoxido. 75% 75 ul de

extracto hidroalcohólico + 25 ul de Dimetilsulfoxido.

Se utilizó Dimetilsulfoxido para luego sellar los crioviales y guardarlos en

refrigeración hasta realizar la prueba.

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2.2.3.2. Ensayo de la actividad antimicótica por el Método de

Difusión en disco:

a. Preparación del Inóculo fúngico

Se tomó colonias del cultivo original del microorganismo (cepas) a ensayar

con el asa bacteriológica y se preparó una suspensión en 8 ml de solución

salina fisiológica estéril. Se comparó con el patrón de turbidez, ajustando la

densidad de la suspensión problema a la del patrón: 1 de la escala de

McFarland.

b. Preparación del Medio de Cultivo

Se utilizó como medio de cultivo para cepas de Cándida albicans,

Agar Sabouraud.

Para la preparación del medio se procedió a calentar el agar en la cocina hasta

su homogenización (mezcla con calor), posteriormente se enfrió y ajustó el

pH, se esterilizó en autoclave a 121 ºC x 1atm (45 min de pre esterilización y

15 min de esterilización).

Se agregó en placas Petri de 90x14 mm (15 mL c/u); hasta un grosor

homogéneo de aproximadamente 4 mm. Luego se dejó enfriar las placas a

temperatura ambiente por 40 minutos hasta que gelifique antes de proceder a

la siembra.

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2.2.3.3. Siembra en las placas:

Después de haber ajustado la densidad del inóculo en la escala de McFarland,

se tomó 100 µl de éste con pipeta estéril y se vertió en cada placa con agar

Sabouraud, luego se procedió a realizar el hisopado, finalmente se llevó a

incubar a temperatura 37 °C.

2.2.3.4. Preparación de los discos:

Se prepararón discos de 6 mm de diámetro empleando papel filtro Whatman

Nº 2, se esterilizó en estufa a 180 ºC durante 2 horas, se conservó en frascos

cerrados, luego se le colocó 10 µl por disco de cada una de las

concentraciones del extracto hidroalcohólico (25%,50%,75%).

2.2.3.5. Aplicación de los discos:

Sobre las placas sembradas se colocó los discos con las distintas

concentraciones del extracto hidroalcohólico y también el disco de

sensibilidad del antifúngico correspondiente presionando con suavidad sobre

la superficie del agar con una pinza estéril.

En una placa de 90 mm de diámetro se colocaron 3 discos que serán

distribuidos de manera que no se produzca superposición de los halos de

inhibición. Transcurrido 5 minutos, las placas se invirtieron y son llevadas a

incubar a 37 °C durante 24 horas.

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2.2.3.6. Medición de los diámetros de inhibición del crecimiento

micótico:

Pasado el tiempo de 24 horas de incubación, se midió el diámetro de cada

halo o zona de inhibición (incluido el diámetro del disco) se expresó en

milímetros. Las mediciones se realizarón colocando una regla sobre el

reverso de la placa.

2.2.4. Determinación de la capacidad antioxidante del extracto

hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca (ciruelo

cansa boca)

2.2.4.1. Fundamento del método:

El fundamento del método descrito por Brand Williams et al, consiste

en que el radical libre estable 2,2-difenil-1- picrilhidrazilo (DPPH°)

tiene un electrón desapareado y es de color azul-violeta,

decolorándose hacia amarillo pálido por reacción con una sustancia

capturadora de radicales libres; la absorbancia es medida

espectrofotométricamente a 517 nm. La diferencia de absorbancias,

permite obtener el porcentaje de captación de radicales libres 31 - 34.

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2.2.4.2. Preparación de la solución 2,2-difenil-1-picrilhidracilo

(DPPH°)

Se preparó una solución de DPPH° con etanol de 96° GL a una concentración de

DPPH° 0.1 mM 31 - 34.

2.2.4.3. Preparación de la recta de calibración para la solución de


31 - 34
radical DPPH° .

Procedimiento:

- De la solución de DPPH° 0.1 mM se midió volúmenes de 2; 4; 6; 8 y 10

mL; y se trasvasó a fiolas de 10 mL aforándolas con etanol de 96º GL.,

para obtener concentraciones de 0,02; 0,04;

0,06; 0,08 y 0.1 mM respectivamente. (Cuadro N° 1)

Concentración de Volumen de solución de


Volumen de etanol 96° GL c.s.p.
solución de PPH° DPPH° 0,1 mM
DE
0,02 mM 2 mL 10 mL

0,04 mM 4 mL 10 mL

0,06 mM 6 mL 10 mL

0,08 mM 8 mL 10 mL

0,1 mM 10 mL 10 mL

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Cuadro N° 1: Concentración de solución de DPPHº para obtener la recta de

calibración.

- Se realizó un barrido espectrofotométrico con la solución DPPHº

0.1 mM para encontrar la longitud de onda de máxima absorbancia

- Se realizó tres lecturas de absorbancias en el espectrofotómetro a 520 nm,

de las cuales se sacó un promedio, utilizándose un blanco que consiste en

etanol de 96 ºGL.

- Se graficó las concentraciones versus las absorbancias para obtener la recta

de calibración.

2.2.4.4. Determinación de los porcentajes de captura del radical

DPPH° 31 - 34.

Procedimiento

- En un set de 10 fiolas (problema), se adicionó en cada uno de ellos 10 mL

de la solución de DPPH° 0,1 mM.

- Se tomó alícuotas de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mL del extracto

hidroalcohólico y se enfrentó a la solución de DPPH° 0,1 Mm.

- Se realizó tres lecturas de cada sistema a una absorbancia de 520 nm, al

minuto 30.

- Se preparó un control (que consiste en 10 mL de solución de DPPH° 0,1

mM) y se pasó a leer la absorbancia a 520 nm en el espectrofotómetro.

- Como blanco se utilizó etanol de 96° GL.

15

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- Posteriormente, se utilizó los valores de absorbancia de los tubos

problema y la absorbancia del tubo control, calculando el porcentaje de

radicales DPPHº capturado.

- Se calculó el porcentaje de radicales DPPHº capturados, con la siguiente

fórmula:

% de captura de radicales DPPHº = 𝐴𝑏𝑠. 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑚.−𝐴𝑏𝑠. 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 x 100


𝐴𝑏𝑠. 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑚.

2.2.5. Análisis estadístico

Los datos fueron procesados en el programa Microsoft Excel 2010.

Caracterizados mediante parámetros estadísticos descriptivos: Media

Aritmética (𝑥̃ ) y Desviación Estándar (∂).

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III. RESULTADOS

Tabla 01. Resultado de la capacidad antioxidante del extracto hidroalcohólico de las

hojas de Bunchosia armeniaca

Bunchosia armeniaca

Actividad antioxidante IC 50 0,4810 mg/mL

BIOQUI
Y

17

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Tabla Nº 02: Promedio de los halos de inhibición producidos por exposición del

extracto hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca”

frente a Cándida albicans ATCC 10231.

PROMEDIO

Control negativo (0%) DMSO 0

Grupo experimental I Extracto hidroalcohólico al 7,176 ± 0,2

25%

Grupo experimental II Extracto hidroalcohólico al 7,836 ± 0,2

50%

Grupo experimental Extracto hidroalcohólico al


Y 8,236 ± 0,2

III 75%

Leyenda:

 Incluye diámetro del disco.

18

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GRAFICO N 1: Promedio de los halos de inhibicion del


extracto hidroalcoholico de las hojas de Bunchosia armeniaca frente a Cándida albicans ATCC 10231

9000 8,236
7,836
8000 7,176
7000
6000
MILIMETR

5000
4000
3000
2000
1000
0 0

Control negativo Grupo experimentalGrupo experimentalGrupo experimental


(0%)IIIIII
PROMEDIO DE LOS HALOS DE INHIBICION

En el grafico Nº01, se aprecia que conforme aumenta la concentración del extracto

hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca” aumenta

el diámetro del halo de inhibición, es decir aumenta el efecto inhibitorio.

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IV. DISCUSION

Es ampliamente conocido que el consumo de frutas está asociado a una menor

incidencia de enfermedades crónicas no transmisibles y envejecimiento. Es así que, en

busca de nuevas fuentes naturales con propiedades antioxidantes, se ha realizado el

presente trabajo de investigación cuyo objetivo es evaluar la actividad antioxidante y

antimicótica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca

“ciruelo cansa boca”, un fruto nativo del centro de América35.

En el presente trabajo de investigación para medir la capacidad antioxidante de una

especie o sustancia se ha utilizado el método espectrofotométrico del DPPHº basado en

la estabilidad del radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPHº), la cual se atribuye a la

deslocalización del electrón desapareado, esta deslocalización también le otorga la

coloración violeta caracterizada por una banda de absorción en solución etanólica de

520 nm 36.

Se determinó la capacidad antioxidante del extracto hidroalcohólico de las hojas de

Bunchosia armeniaca la cual fue expresada como la concentración necesaria para

reducir al 50% la concentración inicial del DPPHº (IC50), la tabla 1 muestra los

valores obtenidos mediante la correlación lineal, encontrando un IC50 para extracto

etanolico de 0,4810 mg/mL.

Un estudio realizado por Udaweediye R. (2016) en el cual utiliza el extracto metanólico

del fruto de Bunchosia armeniaca, con su artículo Compuestos bioactivos y actividad

antioxidante de la Bunchosia armeniaca mostro un

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IC50 =0,981 mg/mL en la prueba de DPPHº, es decir mostro una actividad atrapadora

de radicales libres prometedora 37.

Realizando una comparación entre los extractos se observa un menor porcentaje de

captura de radicales libres de DPPHº y menor IC50 en nuestro proyecto que se utilizó

las hojas en vez del fruto, esto es posible a que en este extracto existen otras variedades

de Fitoconstituyentes presentes que le podrían estar dando esta capacidad antioxidante,

como la presencia de compuestos polifenólicos, taninos y alcaloides 38.

El trabajo realizo por Jan Tauchen et al. (2015) en su artículo Composición

fenólica, actividades antioxidantes y antiproliferativas de plantas comestibles y

Y
medicinales de la Amazonía peruana, en el cual utilizo 23 extractos de plantas

medicinales entre ellas la Bunchosia armeniaca determinando su actividad

antioxidante del pericarpio de esta planta mediante el método DPPH en medio

metanolico encontrando un IC50 de 1,5 ± 0,1 mg/mL 39.


FARMA
En esta investigación se realizó el estudio en extracto metanólico del pericarpio
DE
se sabe por cantidad de compuestos antioxidantes difieren de acuerdo a la

parte de la planta y el medio en el cual se utiliza, en nuestro estudio se utilizó

etanol y las hojas de la planta, por ende, comparándolo con este articulo

BIBLIOT
nuestro proyecto tendría menor IC 50.

En la investigación de Sara de Fraga (2015) en su título Compuestos bioactivos y

actividad antioxidante de la Bunchosia glandulifera, utilizo la pulpa de esta planta

mediante el método DPPHº para determinar la capacidad antioxidante en cual fue

IC50 0,27 mg/mL DPPHº el cual presento actividad antioxidante tanto por los

compuestos bioactivos que encontró y mediante su IC 50 que comparado con las

investigaciones anteriores presenta una actividad

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prometedora falta realizar más estudios para poder tener más información, de acuerdo a

estos artículos nuestros valores encontrados estarían dentro del rango de actividad

antioxidante 40.

Un trabajo realizado por Vanesa P. en el 2017 con el título “Estructura química de

algunos componentes del extracto etanólico del fruto Bunchosia Armeniaca (Cansa

boca) con actividad antioxidante y antimicrobiana” evaluó la actividad antioxidante del

extracto etanólico de la cansa boca aplicando el método DPPHº obteniendo IC 50 de

2,963mg/ml, como resultado, que es levemente inferior comparado con el estándar

Vitamina C (IC 50 = 3,275 mg/ml) 41.

Con respecto a la determinación de la actividad antimicótica, en la tabla 2 se muestran

los resultados de los diámetros de los halos de inhibición de las diferentes

concentraciones del extracto hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca

“ciruelo cansa boca”; así tenemos, para el grupo experimental I (extracto

hidroalcohólico al 25%) un promedio de 7,176 mm de diámetro y para el grupo

experimental II (extracto hidroalcohólico al 50%) 7,836 mm de diámetro y para el grupo

experimental III (extracto hidroalcohólico al 75%) registro un promedio de 8,236 mm

de diámetro.

Se encontró que para el grupo control negativo no se obtuvo halos de inhibición. Es así

que el promedio del halo de inhibición del grupo experimental III (extracto

hidroalcohólico al 75%) fue mayor que el de los otros grupos (a mayor concentración

del extracto los halos de inhibición fueron mayores).

Si bien es cierto no hay trabajos previos, en la especie B. armeniaca, con los cuales se

pueda contrastar el trabajo realizado; existen investigaciones sobre la familia

Malpigiácea, como el trabajo realizado por Mijail y Ali, se encontró que

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la actividad antimicótica del extracto etanólico de Byrsonima crassifolia (Indano)

sobre cepas de Cándida albicans y Trichophiton rubrum donde se obtuvo CMI de 8

mg/mL frente a Cándida albicans mas no se obtuvo actividad frente a Trichophiton

rubrum, concluyendo que el extracto etanolico de B. crassiflolia tiene actividad

antifúngica. 42.

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V. CONCLUSIONES.

1. Se demostró la capacidad antioxidante del aceite esencial de las hojas de B.

armeniaca según el método con DPPHº, encontrando un IC50 de 0,4810 mg/mL

2. El porcentaje de captación de DPPHº por las hojas de B. armeniaca es mayor a

medida que se aumenta la concentración del extracto.

3. El extracto hidroalcohólico obtenido de las hojas de Bunchosia armeniaca

“ciruelo cansa boca” posee una actividad antimicótica mínima frente a Cándida

albicans a medida que aumentan las concentraciones del extracto hidroalcohólico

(25%, 50%, 75%) se obtiene un mayor diámetro del halo de inhibición de Cándida

albicans ATCC 10231.

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ANEXOS

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I. IDENTIFICACION TAXONOMICA

BIOQUIMI
CA Y

FARMACI
A DE

Fig. 1: Identificación y clasificación taxonómica.

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II. PREPARACION DE LA ESPECIE VEGETAL

Recoleccion y preparacion de las hojas de Bunchosia armeniaca

OBTENCION DEL EXTRACTO HIDROALCOHOLICO

FARMAC
DE

Fig. 2: Recolección, preparación y obtención del extracto hidroalcohólico de las hojas

de Bunchosia armeniaca.

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III. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE

IV. ACTIVIDAD ANTIMICOTICA

FARMA
CIA DE

Fig. 3: Determinación de la actividad antimicótica frente a Cándida albicans

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CAPACIDAD ANTIOXIDANTE

Tabla 03. Muestras problema del extracto hidroalcohólico de las hojas de

Bunchosia armeniaca.

Cc extracto (ppm) Abs ̅𝒙 Abs % captura

P 0 0.50046 0.5003 0.0000

0.5005

0.49994

M-1 20000 0.41816 0.4182 16.4048

0.41849

0.41803

M-2 40000 0.33216 0.3322 33.6018

0.33291

0.3315

M-3 60000 0.25879 0.2588 48.2777

0.25899

0.25852

M-4 80000 0.13422 0.1404 71.9437

0.13353

0.153347

M-5 100000 8.97E-02 0.0896 82.0981

8.94E-02

8.96E-02

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Grafico 02. Capacidad antioxidante expresado como “Concentración necesaria del

antioxidante para reducir en un 50% la concentración inicial del DPPHº (IC50)” dele

extracto hidroalcoholico de las hojas de Bunchosia armeniaca (cansa boca).

Determinacion deIC50
90.0000
80.0000
70.0000
60.0000 y = 0 0008x - 0.4533
50.0000 R² = 0.9895
% captura

40.0000 .
30.0000
20.0000
10.0000
0.0000
020000400006000080000100000120000
[] extracto (ppm)
IC50= (50 - b)/0.0103

IC50 0,4810 mg/mL

Imagen 01. Espectrofotometría del extracto realizando el IC 50

36

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Tabla 04. Curva de calibración del extracto hidroalcoholico de las hojas de

Bunchosia armeniaca

Cc (ppm) X Cc Abs (nm) X Abs

(ppm) (nm)

st0 4 4 5.95E-02 5.90E-02

4 5.87E-02

4 5.87E-02

st1 8 8 9.77E-02 0.1003

8 0.10179

8 0.10138

st2 16 16 0.19981 0.1999

16 0.1996

16 0.20024

st3 24 24 0.29559 0.2949

24 0.29507

24 0.29417

st4 32 32 0.39723 0.3972

32 0.39703

32 0.39719

st5 40 40 0.50046 0.5003

40 0.5005

40 0.49994

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Grafico 03. Curva de calibración del extracto hidroalcoholico de las hojas de

Bunchosia armeniaca.

DPPH curva de calibracion


6.00E-01

5.00E-01

4.00E-01
Absorbanc

y = 0.0123x + 0.0044
3.00E-01 R² = 0.9995

2.00E-01

1.00E-01

0.00E+00
0 10 20 30 40 50
Concentración (ppm)
Y
Imagen 02.

DE

BIBLIOTEC

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ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA

Anexo 2.- Halos de inhibición (mm) del extracto hidroalcohólico de las hojas

Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca” frente a Cándida albicans ATCC

10231

TABLA Nº1: Halos de inhibición por primera exposición del extracto hidroalcohólico

de Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca” frente a Cándida albicans ATCC

10231

Grupo Grupo Grupo

Control negativo experimental experimental experimental

(0%) (25%) (50%) (75%)

0 0 0 - - - 1 2 1 - 3 -

0 0 0 1 - - - 2 - 1 3 1

0 0 0 - - 1 - 2 - - 2 3

TABLA Nº2: Halos de inhibición por segunda exposición del extracto hidroalcohólico

de Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca” frente a Cándida albicans ATCC

10231

Grupo Grupo Grupo

Control negativo experimental experimental experimental

(0%) (25%) (50%) (75%)

0 0 0 - 1 - - - 1 2 1 1

0 0 0 - 2 1 - 2 2 2 3 3

0 0 0 - - 1 - - 2 3 2 3

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TABLA Nº3: Halos de inhibición por tercera exposición del extracto hidroalcohólico

de Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca” frente a Cándida albicans ATCC

10231

Grupo Grupo Grupo

Control negativo experimental experimental experimental

(0%) (25%) (50%) (75%)

0 0 0 1 - 1 2 2 - 2 3 2

0 0 0 2 - 1 - 2 - 3 2 2

0 0 0 1 2 1 3 2 2 2 2 3

TABLA Nº4.- Promedio por repetición de los halos de inhibición producidos por

exposición del extracto hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca “ciruelo

de cansa boca” frente a Cándida albicans ATCC

10231

REPETICION DIAMETROS (mm)

Control (-) Gi Gii Giii

1 0 1 1,6 2,16

2 0 1,25 1,75 2,22

3 0 1,28 2,16 2,33

Leyenda:

Control (-): DMSO q.p.

Gi: Extracto hidroalcohólico al 25%, Gii: Extracto hidroalcohólico al 50%,

Giii: Extracto hidroalcohólico al 75%.

º Incluye diámetro del disco

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