Microscopia y Tecnicas

Histología
M
OOM
Microscopia y Técnicas
..CC
DDDD
LLAA
FFII

Este archivo fue descargado de https://filadd.com

Histología
“Es el estudio de los tejidos y
Tejido órganos a nível microscópico” Estúdio
M
OOM
Microscopio
..CC
Instrumento utilizado por la histologia para analizar las estructuras menores
al límite de resolucion del ojo humano
DDDD
Compuesto Simples
LLAA
Solo un lente
Ej: Lupa
Fotónicos
Utiliza fotones de luz como Microscopio Óptico
fuente de energia
Microscopio de campo oscuro
FFII
Para formación de imagen

Microscopio de fluorecencia
Microscopio de polarización
Microscopio de contraste de fase

Microscopio de interferencia
Microscopio de luz ultra violeta
Microscopio
Electrónico(M.E)
Microscopio Electrónico de Transmisión
Utiliza bombeo de
electrones para la Microscopio Electrónico de Barrido
formación de imagenes
1
guiarpreparatorio@gmail.com +54 9 11 5721-1835 Guiarpreparatório
Microscopio Monocular
Y sus
Mecánica ÓPTICA partes.
1. Base 2. Columna 9. Espejo
3. Tornillo Macrométrico: 10. Condensador: Conjunto de lentes converjentes
Tornillo que mueve el tubo de que buscan concentrar los rayos lumínicos en el plano central
forma abrupta.
M
OOM
del portaobjetos.
4. Tornillo Micrométrico: 11. Ocular: Lente convergente que presenta un aumento
Tornillo que mueve el tubo de
forma muy fina y sensible, donde de 10x.
permite enfocar en detalles finos. Objetivo de campo
Aumento de 2,5x a 4,5x.
12. Objetivo:
..CC
5. Pinza: Chapitas de metal o Lentes fijas en el Objetivo seco débil
plástico que mueven el revolver, que son Aumento de 10x.
preparado en la platina. responsables por el
DDDD
Objetivo seco fuerte
6. Revolver: Pieza mayor aumento. Aumento de 40x.
arredondada en la
cual se acoplan los Objetivo de inmersión
objetivos 11-Ocular Aumento de 100x.
7. Platina: Superficie
LLAA
plana de forma circular o 7-Tubo

cuadrada en la que se
apoya el portaobjeto. 3-T.Macro
6-Revolver
FFII
8. Revolver: Pieza
redondeada donde se 4-T.Micro 12-Objetivos
fijan los objetivos
f
8-Platina

2-Columna
10-Condensador
5-Pinza 9-Espejo
1-Base
2
Microscopio Binocular
Y sus
partes.
M
OOM
..CC
Los demás microscópios...
DDDD
Microscopio de fondo oscuro
• El microscopio de fondo oscuro permite estudiar
y/o detectar el relieve y la estructura superficial de
LLAA
células y microorganismos en preparados frescos

sin colorear. Se usa para el estudio de
suspensiones celulares, líquidos con partículas,
sangre, serosidades, raspados de tejidos, etc. En
general, las células y los microorganismos se ven
FFII
brillantes sobre un fondo oscuro y no se observan

sus detalles internos.
Microscopio de fluorescencia

• Este microscopio permite observar sustancias

autofluorescentes de los tejidos o colorantes
fluorescentes (denominados fluorocromos) que,
ligados a anticuerpos o sondas de ADN o ARN,
se unen a sitios específicos en el interior de las
células y tejidos. Estas sustancias emiten un
color dentro del espectro visible cuando son
excitados por una luz de longitud de onda
muy corta (luz ultravioleta). Visão microscópica de fluorescência real de células de pele
humana na cultura. Núcleo está em azul, filamentos de actina
estão em vermelho, tubulina foi rotulada com verde
3
Microscopio de polarización
• El microscopio de luz polarizada se emplea en biología para estudiar la presencia de
moléculas o estructuras birrefringentes capaces de rotar el plano de la luz polarizada tales
como el colágeno y los microtúbulos, en los tejidos normales; o cristales de oxalato, cuerpos
extraños y sustancia amiloide en el medio extracelular de tejidos patológicos o anormales.
Cuando se coloca un preparado con sustancias birrefringentes sobre la platina, éstas
cambiarán el plano de la luz polarizada y se observarán oscuras en un campo iluminado o
con brillo sobre un campo oscuro
M
OOM
..CC
DDDD
Microscopio de contraste de fase
LLAA
• Los microscopios de contraste de fase e interferencia permiten el estudio de los tejidos

vivos. En estos microscopios, el pequeño retardo de fase que experimentan las ondas al
pasar por regiones de las células con distintas densidades se utiliza para crear
interferencias constructivas o destructivas que producen un aumento o una disminución de
la amplitud de la onda, lo que se traduce en aumentos o disminuciones del contraste de la
FFII
imagen, respectivamente.
Este tipo de recurso óptico permite observar las células vivas sin teñir. En los microscopios
de contraste de fase e interferencia, las células se ven en sobrerrelieve sobre un fondo
transparente, de modo que permite apreciar las diferencias entre el núcleo y el citoplasma,
así como las especializaciones de membrana tales como microvellosidades, cilios,

flagelos.
4
Microscopio de luz ultravioleta
• Este se utiliza de luz ultravioleta y todas las lentes incluyendo el condensador son de
vidrio transparente a estos rayos. El imagen del objeto se obtiene por representación del
mismo en una película fotográfica sensible.
Microscopio Electrónico de Transmisión

• El funcionamiento del MET se fundamenta en la dispersión del haz de electrones por
M
OOM
estructuras de mayor densidad electrónica por contener átomos de mayor peso atómico.
Dado que los tejidos están constituidos por moléculas biológicas en cuya composición
intervienen átomos de bajo peso molecular, principalmente el carbono, el hidrógeno, el
oxígeno y el nitrógeno, con la finalidad de aumentar la densidad electrónica de las
estructuras biológicas (p. ej., membranas, proteínas fibrilares, cromatina, etc.), los tejidos
son fijados con tetróxido de osmio y tratados con sales de metales pesados como son el
acetato de uranilo y el citrato de plomo.
..CC
• Esencialmente, el MET consta de una columna de alto vacío que posee un filamento o
cátodo, en el extremo superior de la columna, alimentado por una fuente de alto voltaje,
que emite un haz de electrones que viaja por el vacío hasta el extremo inferior de la
columna, donde se encuentra una pantalla fluorescente que brilla o se ilumina al recibir el
DDDD
impacto de los electrones.
• El haz de electrones atraviesa la muestra biológica, pero los electrones se dispersan en
las membranas, en las zonas de heterocromatina y en todas aquellas estructuras del
preparado donde se depositan las sales de metales pesados (uranilo y plomo) durante la
preparación (las zonas denominadas electrodensas). Por el contrario, los electrones pasan
LLAA
fácilmente a través de las zonas libres de organoides del citosol sin dispersarse (zona
electrolúcida). Así se genera
una especie de «sombra china» de la célula que es proyectada por el haz de electrones
sobre la pantalla fluorescente que se puede digitalizar.
• Las imágenes obtenidas con el MET permiten el estudio de ultraestructuras celulares,
entre las cuales cabe mencionar todos los organoides celulares y sus detalles, los
FFII
elementos del citoesqueleto y las membranas biológicas.

5
Microscopio Electrónico de Barrido
• Los MEB o scanning permiten obtener información de la morfología de la superficie
celular con un alto grado de resolución. En este caso, los electrones son producidos
también por un filamento incandescente en una columna con alto vacío. Los electrones
son acelerados y concentrados por bobinas electromagnéticas; la última de estas
bobinas, denominada de barrido, hace que el delgado haz de electrones barra, recorra o
escanee la superficie de la célula o estructura del objeto de estudio. Los electrones
chocan con la superficie de las células, que está cubierta por una delgada película de
M
OOM
carbón o metales como el oro, y se dispersan perdiendo energía (electrones
secundarios) o se reflejan (backscattered electrons). Los electrones denominados
secundarios
son recogidos por un detector generando fotones que son amplificados y
enviados a un osciloscopio
para obtener la imagen. Las
imágenes se muestran en
..CC
forma tridimensional y la
superficie de las estructuras
biológicas estudiadas se ven
en blanco y negro.
DDDD
Tabla de comparación MO vs ME
LLAA
FFII

Importante
6
Conceptos de microscopía
Abertura Numérica (A.N)
“ Es la cantidad de rayos lumínicos que emergen de un preparado y son captados por
el objetivo para formar el imagen.”
Se calcula:
M
OOM
AN = ƞ.sen α
Seno del semiángulo
del feche de luz que
ingresa al objetivo.
..CC
Índice de refracción del
Ìndice de refracción
medio interpuesto entre el
preparado y el objetivo. 1 Aire: 1
DDDD
2 Agua:1,33
3 Aceite: 1,51
Poder de Resolución (P.R)
4 Vídrio: 1,52
“Es la capacidad del objetivo de dar mayor claresa
de detalles sobre el objecto de estudio.”
LLAA
Se calcula:
P.R = A.N
λ
FFII
Longitud de
onda de la luz.

Límite de resolución
Límite de Resolución (L.R) Ojo humano: 0,2mm
“Es la mínima distancia que hay que tener entre dos
puntos para que se pueda distinguirlos entre si.” M. óptico: 0,25µm
Se calcula: M. de luz UV: 0,10µm
L.R = λ .0,61 M. electrónico: 3 a 10A
A.N
7
Entonces…
!!!El L.R es inversamente proporcional al P.R!!!
Al P.R = A.Nconsecuentemente L.R = λ .0,61

λ A.N
Como puedo aumentar el P.R?
M
OOM
•Modificando el medio interpuesto entre objetivo
y preparado, o sea: indice de refracción.
P.R = A.N Ej: Agua, Aceite, etc…
λ •Utilizando una luz de menor longitud de onda.
Ej: Luz ultravioleta.
..CC
DDDD
LLAA
FFII

8
Técnicas histológicas
Para analizar las estructuras del cuerpo en el microscópio, debemos
seguir una série de passos, desde la obtención de la muestra de estúdio
hasta la análisis en el microscópio.
Técnicas
M
OOM
Métodos Inmediatos
Se da por el corto tiempo entre
la obtención de la muestra y la Sin coloración Supravital
visualización.
Se aplica el colorante
..CC
sobre un cultivo de
Coloreado células. IN VITRO
Colorantes no mortales
Verde jano= Mitocóndrias Se basa en los índices de
Azul de metileno refracción del preparado.
DDDD
Rojo neutro= Macrófagos Intravital
Tinta china= Macrófagos Se introduce el colorante al
organismo por via
nasogástrica o por sangre, el
Métodos Mediatos cual es fagocitado por
(Técnica de rutina) células(Macrófagos). IN VIVO
LLAA
Tardan más y son más complejos para (Ej: Tinta china)

realización. Principal forma de estúdio. Biópsia
1)Obtención de la muestra Autopsia

Física
FFII
Extendido
2)Fijación Química
Deshidratación

3)Inclusión Aclaración
Inclusión
4)Corte
Aclaración
5)Coloración Rehidratación
Coloración
6)Montaje final
9
Passos de la Técnica de rutina
1)Obtención de la muestra
•Para el estúdio de una determinada estrutura necesita obtener una
fracción de esta para la análisis:
Biópsia: Retirada de la muestra de organismos vivos.
M
OOM
Necrópsia: Retirada de la muestra de organismos muertos.
2)Fijación
•Paso fundamental en la técnica que tiene por objetivo preservar la
estructura y ultraestructura de los componentes tisulares de la muestra,
evitando la:
..CC
A. Autólisis del tejido.
B. Evitar la contaminación
C. Aparición de estructuras no deseadas
DDDD
Calor: Se da al pasar repetidas veces el machero sobre el portaobjetos.
Ej: Frotis de sangre
Física Frio: Se mantiene la muestra a bajas T° para evitar que se reanude los
procesos de autólisis. Ej: Carne en la heladera.
LLAA
Congelación: La congelación, la cual se puede realizar en nitrógeno

líquido o por medio de mezclas refrigerantes con hielo seco y acetona. Los
bloques de tejido se mantienen en congeladores (freezers) y se cortan en
secciones utilizando un equipo denominado crióstato. La congelación no
desnaturaliza las proteínas, y muchas de sus propiedades reaparecen
al hidratarse el tejido. Ej: Tejido adiposo
FFII
Formol: Se utiliza formol al 10% y es el método de rutina. Conserva las

macro moléculas.
Alcohol metílico: Fija proteínas.

Química
Tetróxido de osmio: Se fija grasa, mielina, fibras.
10
3)Inclusión
•Conjunto de pasos que visa incluir la muestra en sustancias que le
concedan firmeza suficiente para el corte en el micrótomo.
Deshidratación: Es la completa eliminación del agua del tejido para luego poder
embeberlos en medios de inclusión no hidrosolubles. Se pasa la muestra por
concentraciones crecientes de alcohol (50%, 70%, 80%, 95% y 100%) para eliminar
lentamente el agua y evitar la retracción del tejido.
M
OOM
Aclaración: El tejido se sumerge en un solvente orgánico, generalmente xileno o
tolueno, que desplaza al alcohol y que es solvente de la parafina. Durante este paso, el
tejido se vuelve translúcido, razón por la que esta fase se conoce como aclaración.
Inclusión: Tiene como objetivo endurecer la muestra para permitir su corte
..CC
posterior. El medio de inclusión más utilizado en MO es la parafina. Para muestras
destinadas a microscopía electrónica se utilizan resinas epoxi.
DDDD
LLAA
Concentraciones crescientes de alcohol y

FFII
inclusión en xilol.

Bloques de las muestras incluidas en

parafina.
11
4)Corte
• Se realiza con instrumentos especiales llamados micrótomos. Éstos varían
si el corte es para microscopia óptica (secciones de micrómetros, μm, de
espesor) o electrónica (secciones de nanómetros, nm, de espesor).
M
OOM
..CC
Micrótomo cortando laminas del bloque..
Micrótomo y sus partes.
DDDD
LLAA
5)Coloración Laminas del preparado sobre el cubre objetos..

• Conjunto de pasos que visan
impregnar el colorante con el
objeto en estudio.
FFII
5.1) Desparafinización/ Aclaración: Se sumerge la muestra en xilol para

retirar la parafina.
5.2) Rehidratación: debido a que los colorantes son hidrosolubles. Se pasa la muestra

por concentraciones decrecientes de alcohol (100%, 95%, 80%, 70%,50%) y luego por agua.
5.3) Coloración: Primero se colorea con hematoxilina( donde se sumerge el preparado

en el colorante), al transcurso de 3min se lava el portaobjetos con agua corriente para sacar el
exceso y luego se sumerge con eosina para concluir la tinción.
12
6) Montaje
•Ultimo paso de la técnica, que se da al cerrar o cubrir la muestra para el análisis.
Deshidratación: para preparar los preparados por tiempo prolongado.

Se sumerge el preparado en soluciones de etanol de graduación crecientes (70%,
80%, 96%, 100%).
Aclaración: se utiliza xilol o benzol, y sirve para diluir la resina
M
OOM
adhesiva utilizada para pegar el cubre objeto.
Montaje final: Se aplica una gota de bálsamo de Canadá o de un medio de

montaje sintético (DPX® o Histomount®) e inmediatamente se deposita una delgada
lámina de vidrio —denominada cubreobjeto— sobre la sección evitando la formación
de burbujas de aire. Una vez que el medio de montaje se solidifica, el preparado está
..CC
listo para su observación al microscopio sin riesgos de que se mueva el cubreobjeto.
DDDD
LLAA
FFII

13
M
OOM
..CC
DDDD
LLAA
FFII

14
Conceptos clave
Fundamento de la técnica de Rutina
“Es la interacción entre cargas de un colorante y
su respectivo sustrato.”
M
OOM
• Los fundamentos de la coloración con hematoxilina y eosina se basan en principios
químicos, en los cuales una sustancia básica(Hematoxilina) es aquella capaz de aceptar o
captar protones y que, después de aceptarlos, queda con una o más cargas positivas;
mientras que una sustancia ácida( Eosina) es aquella capaz de liberar o ceder protones y
que, después de liberarlos, queda con una o más cargas negativas.
• En los tejidos existen moléculas anfóteras capaces de comportarse como sustancias ácidas
o básicas dependiendo del pH del medio. Entonces por lo general, el pH del citoplasma
..CC
celular y su matriz extra celular(MEC), permite que ciertas macromoléculas se comporten
como Ácidas, como por ejemplo los “Ácidos” nucleicos(ADN y ARN), y que otras se
comporten como Bases(Proteinas).
DDDD
• Como el fundamento de la técnica de rutina es “La interacción entre cargas de un colorante
con su sustrato”, la Hematoxilina(Básico+) va interactuar específicamente con moleculas con
carga negativa como el ADN y ARN, coloreando de color azulado violeta a estas zonas. La
interacción de las zonas en donde se presenten moléculas con carga negativa con colorantes
básicos recibe el nombre de “Basofília”, que es la afinidad del sustrato por un colorante
básico. Por esto las estructuras que se colorean con el colorante básico reciben el nombre de
LLAA
“Basófilas”; Ejemplos: Núcleo, Retículo endoplasmático rugoso(REG).
• El mismo sistema se aplica a la

Eosina(Àcido-), que ahora interactua con las
moléculas de carga positiva como las pH del Básico Ácido
PROTEÍNAS, coloreandolas de rojizo o colorante
FFII
rosado. La interacción de las zonas en donde Colorante Hematoxilina Eosina

se presenten moléculas con carga positiva con
Colorea Citoesqueleto
colorantes ácidos se llama “Acidofília”, que es Núcleo, Mitocóndrias
intracelular
la afinidad del sustrato por un colorante ácido. REG Lisosomas y

Por esto las estructuras que se colorean con el Grupos Vesiculas de

colorante ácido reciben el nombre de sulfato secreción
“Acidófilas”; Ejemplos: Citoesqueleto, proteica
Mitocóndrias, lisosomas, vesículas de Colorea Fibras de la
secreción proteica. extracelular GAG´s MEC
Colorantes Como se
Colorantes básicos llaman las
Basófila Acidófila
Ácidos Hematoxilina estructuras
Eosina teñidas
Azul de toluidina
Naranja G Azul de metileno
Fucsina Ácida Verde de metilo
15
Ácido nucleico(-) Proteína(+)
+ +
Hematoxilina(+) Eosina(-)
= =
Basofília Acidofília
M
OOM
..CC Núcleo Mitocondria
DDDD
Ribosomas Siempre Basófilo: Desarrolla en células Lisosomas
Compartimenta con alto gasto Comporta muchas
libres el ADN(-) energético: contine enzimas(+)
Llevan ARNm(-) mucha proteína(+)
REG
Desarrollado en células Citoesqueleto
Esta compuesto por
LLAA
secretoras de proteina:
presenta ribosomas (-) proteína(+)
aderidos
Los tres aportan basofília Los tres aportan acidofília a

a la célula. la célula.
FFII
M.E.C acidófila
Citoplasma acidófilo

Núcleo basófilo
M.E.C basófila
16
Metacromasia
“Ciertos colorantes básicos reaccionan con los componentes del tejido que cambian
su color normal de azul a rojo o púrpura; este cambio de la absorbancia/color se
llama metacromásia.”
Sustratos
M
OOM
metacromáticos
• Matriz amorfa del
cartílago hialino
• Gránulos de los
mastocitos y basófilos
..CC
Colorantes
metacromáticos
• Azul de toluidina
DDDD
• Azul de metileno
• Metil violeta
• Tionina
Cartilago. Matriz Piel. Sustancia fundamental de la

cartilaginosa dermis metacromática.
LLAA
metacromática.
Ortocromasia
Propiedad por la cual el tejido/célula presenta una coloración semejante a la del
colorante.
FFII
Artificios de Técnicas

Son todas las alteraciones que se producen en los preparados histológicos por
defectos o fallas en una o más de las etapas de la técnica.
•· Defectos de fijación, deshidratación, inclusión, pueden causar desgarros y

retracciones.
•· Si la acidez del formol no fue neutralizada, pueden aparecer gránulos
coloreados por interacción del ácido fórmico con la hemoglobina.
•· Durante el corte pueden aparecer desgarros por melladuras en la cuchilla.
•· Si el corte no es cuidadosamente extendido pueden aparecer pliegues o arrugas.
•· Defectos en la coloración son inherentes a la calidad y preparación de los
colorantes así como insuficiente coloración.
17
Técnica de Glúcidos: Ácido periódico de Schiff (PAS)
La utilidad de la reacción de PAS consiste en que permite visualizar glúcidos de todo tipo,
glucógeno y glucoproteínas en los tejidos a los que tiñe de color magenta.
Se visualizan:
• Membranas basales de los tejidos epiteliales.

• La mucina de las células caliciformes.
• El glucocáliz de las células epiteliales.
• Las inclusiones de glucógeno de los hepatocitos.
M
OOM
..CC
Pasos:
1) En la reacción se somete al tejido a una
oxidación con ácido peryódico (HIO4), lo
cual rompe los anillos de las hexosas y crea
grupos aldehído en los grupos glucólicos 1
DDDD
y 2 a partir de los grupos oxidrilo(-OH).
2) Luego se incuba el tejido con el reactivo PAS

de Schiff (fucsina básica decolorada), el
cual adquiere el típico color magenta en
presencia de los grupos aldehído que se
LLAA
formaron a partir de los glúcidos en el

tejido.
PAS+ H&E H&E

FFII
Técnica de ADN: Feulgen

La reacción de Feulgen permite la demostración de ADN en el núcleo de las células.
Se visualizan:

• Tiñe los núcleos de color magenta.

• Tiñen o visualizan los núcleos de las células en interfase.
• Tiñe los cromosomas de las células en división.
Pasos:
1) En esta reacción, el tejido se somete a
una hidrólisis suave con ácido clorhídrico
(HCl) que extrae los ARN y las bases púricas del ADN. El HCl produce la
apertura de los anillos de las desoxirribosas y, al reaccionar con éstas, origina
grupos aldehído.
2) Luego se realiza lo mismo que en la técnica de PAS.

18
Técnica de Lípidos: Sudán
Las técnicas de sudán permiten la demostración de lípidos (triglicéridos, colesterol,
fosfolípidos y todo tipo de esteroides) en los tejidos.
Tipos de sudán:
• Sudán Black B (negro).
• Sudán III (rojo escarlata).
Se visualiza:
• Inclusiones de lípidos en
M
OOM
células de la corteza
suprarrenal.
• Tejido adiposo uni o
multilocular.
Sudan rojo; Tejido adiposo. Técnica de H&E; Tejido adiposo.
..CC
Pasos:
1) En la fijación pueden ser necesarios fijadores especiales (mezclas para fijar lípidos) o hacer
los cortes por congelación, debido a que se pierden los lípidos de la realización de la técnica
de rutina.
DDDD
2) El principio por el cual tiñen a los lípidos es un principio físico. El colorante se solubiliza en
los medios que contiene lípidos, así logran diluirse y colorear específicamente a estos.
Tricrómico de Mallory
LLAA
Esta es una técnica que emplea tres colorantes:

fucsina ácida, azul de anilina y Naranja G; para
visualización de várias estructura de una sola vez.
Tiñe: • Fibras colágenas, reticulares,
FFII
la matriz extracelular del cartílago y el

hueso de color azul.
• Citoplasmas, núcleos y músculos,
en distintas tonalidades de rojo.
• Fibras elásticas y hematíes, de color

amarillo.
Tricrómico de Masson
El tricrómico de Masson emplea hematoxilina de
Mayer, fucsina Ponceau y azul de anilina.
Tiñe: • Núcleos de color azul.
• Citoplasmas rojos.
• Fibras colágenas de color celeste.
•Glóbulos rojos y el músculo de
color fucsia .
19
Técnica de InmunoHistoquímica
Conceptos prévios:
Antígeno(Ag): Es cualquier molécula que en contacto con el organismo pueda activar
una respuesta del sistema inmune.
Anticuerpo(Ac): Es una proteína plasmática específica, producida por células plasmáticas

(Plasmocitos) que reconoce a un antígeno en particular.
Fluorocromo: Elemento que reluce ante la exposición a la luz fluorecente.
Técnica de inmunoperoxidasa
M
OOM
En estas técnicas se utilizan anticuerpos que son de animales para identificar moléculas
próprias especificamente.
Directa
1) Se incuban muestras que se desea estudiar con el anticuerpo primario (p. ej., anticuerpo de
conejo contra Antígeno: «X») unido con peroxidasa. El inmunocomplejo queda unido al sitio
donde se encuentra Ag«X».
..CC
2) La presencia del inmunocomplejo se revela por medio de una técnica enzimática. Para
esto, se incuba el tejido con DAB, que es oxidado por la peroxidasa en presencia de H2O2,
originando un precipitado insoluble de color marrón exclusivamente en los lugares donde
DDDD
están los inmunocomplejos.
Indirecta
1) Se incuban mustras que se desea estudiar con el
anticuerpo primario (p. ej., anticuerpo de conejo
contra Antígeno: «X»).
2) Luego se lavan para retirar el excedente de
LLAA
anticuerpos y eliminar aquellas moléculas que no

están unidas de forma específica al tejido.
3) A continuación, las secciones se incuban con un
anticuerpo secundario (IgG de cabra contra IgG de
conejo) unido con peroxidasa. El inmunocomplejo
FFII
queda unido al sitio donde se encuentra Ag«X».

4) La presencia del inmunocomplejo se revela por
medio de una técnica enzimática. Para esto, se
incuba el tejido con DAB, que es oxidado por la
peroxidasa en presencia de H2O2, originando un

precipitado insoluble de color marrón exclusivamente

en los lugares donde están los inmunocomplejos.
• El resultado mostrará la presencia de color marrón
en las partes del citoplasma celular donde se
encuentre Ag«X» al microscopio óptico, y se
observará como un precipitado electrónicamente
denso al microscópio electrónico.
A) Técnica inmunocitoquímica de peroxidasa-antiperoxidasa (PAP). Se muestran neuronas
dopaminérgicas de la sustancia negra teñidas empleando un anticuerpo que reconoce la enzima
tirosina hidroxilasa. Las neuronas muestran inmunorreactividad en sus somas y en sus
prolongaciones. Los núcleos neuronales son negativos.
20
Técnica de inmunofluorescencia
Directa
1) Análogamente a lo comentado para las técnicas de inmunoperoxidasa, las secciones
se incuban con el anticuerpo primario (p. ej., anticuerpo de conejo contra Ag«Y»).
2) Después de los lavados que remueven el exceso de anticuerpo y aquellas moléculas
que se unan de forma inespecífica.
3) El inmunocomplejo fluorescente quedará unido de forma específica en el sitio donde se
encuentre Ag«Y».
M
OOM
Indirecta
1) Análogamente a lo comentado para las técnicas de inmunoperoxidasa, las secciones
se incuban con el anticuerpo primario (p. ej., anticuerpo de conejo contra Ag«Y»).
2) Después de los lavados que remueven el exceso de anticuerpo y aquellas moléculas
que se unan de forma inespecífica, las secciones se incuban con un anticuerpo
secundario marcado con fluoresceína (IgG de cabra contra conejo unida con
..CC
fluoresceína).
3) El inmunocomplejo fluorescente quedará unido de forma específica en el sitio donde se
encuentre Ag«Y».
4) Al visualizar el preparado en el microscopio de fluorescencia con el filtro adecuado, se
DDDD
observará una fluorescencia verde en el sitio del citoplasma celular donde se encuentre
Ag«Y».
LLAA
FFII

21
Incidencia de corte
“Es la variedad de imágenes que se puede obtener dependiendo
de la forma o ángulo con en que se corte la muestra.”
•Entonces, dependiendo de la forma que corte una célula o tejido, se podrá

visualizar de forma: Transversal, Longitudinal u Oblícuo.
M
OOM
Corte transversal Corte longitudinal Corte oblícuo
..CC
DDDD
LLAA
FFII

22

Microscopia y Tecnicas

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Microscopia y Tecnicas

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Histología

Este archivo fue descargado de https://filadd.com

Para formación de imagen

plana de forma circular o 7-Tubo

células y microorganismos en preparados frescos

brillantes sobre un fondo oscuro y no se observan

• Este microscopio permite observar sustancias

• Los microscopios de contraste de fase e interferencia permiten el estudio de los tejidos

Microscopio Electrónico de Transmisión

elementos del citoesqueleto y las membranas biológicas.

Se calcula: M. de luz UV: 0,10µm

L.R = λ .0,61 M. electrónico: 3 a 10A

Al P.R = A.Nconsecuentemente L.R = λ .0,61

Tardan más y son más complejos para (Ej: Tinta china)

1)Obtención de la muestra Autopsia

Congelación: La congelación, la cual se puede realizar en nitrógeno

Formol: Se utiliza formol al 10% y es el método de rutina. Conserva las

Inclusión: Tiene como objetivo endurecer la muestra para permitir su corte

Concentraciones crescientes de alcohol y

Bloques de las muestras incluidas en

5)Coloración Laminas del preparado sobre el cubre objetos..

5.1) Desparafinización/ Aclaración: Se sumerge la muestra en xilol para

5.3) Coloración: Primero se colorea con hematoxilina( donde se sumerge el preparado

Deshidratación: para preparar los preparados por tiempo prolongado.

Aclaración: se utiliza xilol o benzol, y sirve para diluir la resina

Montaje final: Se aplica una gota de bálsamo de Canadá o de un medio de

“Basófilas”; Ejemplos: Núcleo, Retículo endoplasmático rugoso(REG).

• El mismo sistema se aplica a la

rosado. La interacción de las zonas en donde Colorante Hematoxilina Eosina

Por esto las estructuras que se colorean con el Grupos Vesiculas de

Los tres aportan basofília Los tres aportan acidofília a

Cartilago. Matriz Piel. Sustancia fundamental de la

•· Defectos de fijación, deshidratación, inclusión, pueden causar desgarros y

• Membranas basales de los tejidos epiteliales.

2) Luego se incuba el tejido con el reactivo PAS

formaron a partir de los glúcidos en el

PAS+ H&E H&E

Técnica de ADN: Feulgen

• Tiñe los núcleos de color magenta.

2) Luego se realiza lo mismo que en la técnica de PAS.

Sudan rojo; Tejido adiposo. Técnica de H&E; Tejido adiposo.

Esta es una técnica que emplea tres colorantes:

la matriz extracelular del cartílago y el

Anticuerpo(Ac): Es una proteína plasmática específica, producida por células plasmáticas

anticuerpos y eliminar aquellas moléculas que no

queda unido al sitio donde se encuentra Ag«X».

precipitado insoluble de color marrón exclusivamente

•Entonces, dependiendo de la forma que corte una célula o tejido, se podrá

También podría gustarte