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FORMATO ÚNICO DE GUÍAS DE LABORATORIO 07/02/2020 FOR-PS-180 0.0

Facultad: Ciencias de la Saud

Programa: Fonoaudiología

Asignatura: Biología Celular y Molecular

Código de la asignatura: 101556

Créditos de la asignatura: 3

Nombre y Número de la práctica: Practica N° 2 Microscopia

Capacidad del laboratorio: 22 Estudiantes

Duración de la práctica: 2 horas

1. Introducción:
El microscopio es un instrumento óptico que aumenta la imagen de los
objetos. En los últimos tres siglos ha permitido ampliar el campo de las
investigaciones biológicas y se ha convertido el instrumento básico para
abrir nuevas fronteras en la ciencia. La LUPA es el microscopio más simple
y fue usada inicialmente por algunos investigadores para adquirir los
primeros conocimientos del mundo microscópico; posteriormente se
perfecciono y en la actualidad existen varios tipos, algunos de ellos
altamente especializados.

En las prácticas de este curso, se utilizará un microscopio compuesto

binocular, en el cual se combinan dos lentes: ocular y objetivo el fin de
aumentar la imagen.

2. Objetivos:
2.1 General:
• Conocer las diferentes partes del microscopio compuesto y sus
respectivas funciones.

2.2 Específicos:
• Aprender a manejar correctamente el microscopio compuesto,
adquiriendo habilidades en su manejo.
• Aprender a preparar muestras en fresco.

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3. Materiales, equipos y reactivos:

Microscopio compuesto
5 Laminillas portaobjetos
5 Laminillas cubreobjetos
Papel delgado con letras pequeñas impresas
Hilos de colores
Papel absorbente.

4. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA (Procedimiento):

1. Partes del microscopio compuesto binocular y sus funciones Diagrama

(figura 1)

DESCRIPCIÓN Y FUNCIONES
La mayoría de los microscopios compuestos tienen los mismos componentes
básicos. Sin embargo, la disposición de muchos de esos componentes varía
según el modelo y la marca.

Base parte inferior del microscopio, que hace contacto con la mesa. Es su punto
de apoyo. En su parte posterior hay un interruptor para prender y apagar el
bombillo.

Columna: estructura rígida ubicada en la parte posterior del microscopio, que

sostiene sus diferentes partes.

Tornillo macrométrico o ajuste grueso para subir y bajar la platina rápidamente

esta en la parte lateral inferior, tanto derecha como izquierda de la columna y se

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utiliza para acercar la platina al objetivo y para alejarla. Por medio de estos
movimientos se obtiene una imagen poco nítida de la muestra, o sea el “enfoque
grueso”.

Tornillo micrométrico: Esta unido al micrométrico en la parte externa de este.

Sirve para obtener “enfoque fino” o nítido de la imagen mediante movimientos
suaves de acercamiento o alejamiento de la platina.

Platina: lamina cuadrada con un orificio central en donde se coloca la muestra

que se va a observar.

Carro: Sistemas de pinzas ubicadas encima de la platina, que sirve para

desplazar la muestra en el eje de X (o sea izquierda derecha) y en el eje Y (o
sea adelante atrás) mediante los tornillos para tal efecto posee este.

Diafragma: (Iris) estructura con apariencia laminar que se emplea para regular el
cono de luz que pasa a través del condensador de abertura y llega a la muestra.

Condensadores: Hay uno de ellos, el de abertura esta debajo de la platina y es

un sistema de lentes convergente cuya función es concentrar los rayos de luz en
el centro de la platina. Por tanto, sirve para enfocarlos hacia la muestra que se
va ha examinar. El otro es el de campo, que está en la base del microscopio
para concentrar la luz que viene de la fuente y para dirigirla hacía el
condensador de abertura.

Revolver: Sistemas giratorio en el que están incorporados los objetivos.

Objetivos: Son sistemas de lentes que producen imágenes de la muestra,

aumentadas 3,2X, 10X, 40X y 100X veces según indiquen los mismos. Al mover
en forma circular el revolver se puede poner cualquier objetivo en posición
perpendicular a la platina, al hacerlo, se nota un tope indicativo de la posición
correcta de la lente (ver Fig 2).

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Normalmente, los objetivos tienen información inscrita sobre diversas

características propias de cada uno de ellos.

Abertura numérica (AN) es la capacidad que tiene el objetivo para recibir el cono
de luz que pasa a través de la muestra, procedente de la fuente de luz. La
abertura numérica es directamente proporcional al índice de refracción del
medio en que se propaga la luz (aire, agua, vidrio, aceite de inmersión>), pues
mientras mayor sea el índice de refracción, mayor será el cono de luz, lo cual
origina un mayor poder de resolución (aspecto que se explicará en la segunda
práctica de laboratorio).

Aumento cada objetivo tiene un número especifico (3,2, 20, 40,100) que indica
cuantas veces. Se aumenta la imagen del objeto observado. En microscopia se
utiliza la letra X para indicar “veces” y por eso se acostumbra, el referirse a un
aumento particular escribir o decir 3,2 X 10X, etc.

Oculares son sistemas de lentes cuya función es aumentar la imagen

procedente del objetivo tantas veces como indique el número escrito en ellos, 1
= en este caso. Los dos oculares pueden moverse hacia los lados y hacia el
centro de manera que se ajusten a la distancia interpupilar de quien esté
utilizando el microscopio. Hay microscopios que poseen una sola lente ocular, y
por eso se les llama monoculares.

Fuente de luz proporciona la iluminación necesaria para la observación de la

muestra. Algunos microscopios no tienen incorporada a fuente de luz y se valen
de un espejo que proviene del bombillo o de una lámpara.

Cuidados que se deben tener con el microscopio.

• Cuando transporte el microscopio cójalo siempre con las dos manos (ver
Figura 3)

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• Al poner el microscopio sobre la mesa, colóquelo a unos centímetros de

la orilla.
• Para girar el revólver, utilice la rosca estriada de su parte superior. No lo
haga tirando los objetivos hacia la izquierda o hacia la derecha, pues de esta
manera se van desajustando los sistemas de lentes y la propiedad para focal,
que es la propiedad de mantener una muestra más o menos enfocada y en el
mismo campo focal al pasar de un objetivo a otro.

Al terminar la práctica del laboratorio siga las siguientes instrucciones:

• Retire la preparación de la platina
• Apague el microscopio. Desconecte del tomacorriente el cable de la luz y
deje enfriar el bombillo antes de mover al microscopio.
• Limpie bien todas las partes del microscopio Acerque al máximo el tubo
ocular y la platina.
• Deje el objetivo de menor aumento en posición de enfoque.
• Deje centrado el carro
• Cisne el diafragma
• Guarde el microscopio en su sitio.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

1. Para un montaje se utilizan láminas portaobjetos, laminillas cubreobjetos

y el material a observar; en ocasiones se usan colorantes. La laminas coge por
los extremos entre el índice y el pulgar de la mano derecha, de esta manera es
fácil llevar la laminilla, sobre la lámina.
Antes del montaje, lámina y laminilla deben estar completamente limpias, sin
grasa de lo contrario la humectación (dispersión) del agua no es uniforme que
dando burbujas entre lámina y laminilla.
2. Con un gotero coloque una gota de agua sobre la lámina, a continuación

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coloque la laminilla sobre la lámina. Para esto se procede así:

Coloque el cubreobjetos sobre el portaobjetos formando un ángulo y poco a

poco déjela caer hasta quedar una sobre la otra y distribuirse homogéneamente
el material de la muestra (ver Figura 4).
3. Un buen montaje debe tener la cantidad de agua apropiada, ni mucha ni
poca, que cobra apenas la superficie de la laminillas. En caso de sobrar por los
lados, debe absorberse con un papel o toalla, si falta con el gotero se deja caer
góticas de agua muy cerca de la laminilla y por capilaridad penetra hasta cubrir
la superficie. En casos de utilizar colorante se puede proceder de la última forma
una vez que ya se haya hecho el montaje.
4. La presencia de burbujas impedirla buena observación, por lo tanto es
necesario desaparecerlas lo cual se puede lograr. Presionando suavemente
sobre la laminilla con el borrador de un lápiz en los sitios donde se encuentran
burbujas. Si persiste el problema, debe ser, que están sucias la laminilla o la
lámina con grasa, y comience nuevamente el proceso.

OBSERVACIÓN DE UNA MUESTRA.

De la forma como usted utilice el nivel depende el éxito de la observaciones,

por lo tanto se le recomienda seguir siempre el procedimiento que a
continuación
Se explica.

1. Tome el microscopio con ambas manos una mano sostiene el brazo y la

otra la base, coloque el instrumento suavemente y oriéntelo de tal manera que el
brazo mire hacia usted.
2. Gire suavemente el revólver hasta colocar el objetivo de menor aumento
3,2X (el mas pequeño) en la posición vertical, un mido al cazar con una pestaña
indica que ha llegado a la posición correcta.
3. Observe a través del ocular si la luz es muy intensa, gradué el diafragma,
la luz debe ser homogénea.

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4. Tome una lámina coloque una gota de agua y sobre ella un pedacito de
papel periódico, luego la laminilla y fije la lámina en la platina y movilícela con el
tronillo del carro, haga coincidir la muestra de papel con la luz y la lente del
objetivo a utilizar.
5. Para enfocar mueva el tornillo micrométrico hasta que el objetivo este
muy cercano a la lamina. Al efectuar esta operación hágalo con sumo cuidado
evitando romper la lámina, por lo tanto mueva el micrométrico viendo de lado
como se va acercando el objetivo, tenga presente que esto le evitará romper
láminas y rayar los lentes. Ahora mire a través del ocular y con el micrométrico
gire hacia atrás lentamente hasta que la imagen aparezca bien clara. Sil la
imagen no está dentro del campo óptico (el iluminado), es necesario correr la
lámina hasta lograr la imagen, mueva hacia adelante y hacia atrás el
micrométrico.
6. Siempre se comienza observando con menor aumento (el objetivo más
corto), luego se pasa a mayores aumentos. Rote el revólver y páselo a un
objetivo de mayor aumento, estos son más largos, tengo cuidado que al girarlo
no rompa la lamina o raye las partes del microscopio, si esto ocurre mueva el
micrométrico para separar un poco nuevamente acerque la lámina. Observe si
aparece la imagen o si no gradúe la distancia focal retirando poco a poco el
objetivo, de nuevo utilice el micrométrico para dar nitidez a la imagen. Si no se
consigue la imagen se procede de nuevo, acercando y alejando el objetivo.
7. No olvide graduar la cantidad de luz apropiada, recuerde que el espejo, el
condensador cerca o lejos y el diafragma sirven para regular la luz. Si el material
a observar es translucido o es delgado se utiliza poca luz, si el material es
espeso coloreado o grueso se requiere mayor cantidad de luz. La cantidad
apropiada de luz se logrará al tratar de conseguir una imagen clara.
8. Al mover la lámina en un sentido tratando de conseguir nuevas imágenes
tenga presente que en el microscopio lleva el sentido “Contrario” lo mismo que
la imagen es invertida; posteriormente debe familiarizarse con este efecto para
la búsqueda rápida de las imágenes.
¿Qué relación encuentra entre la imagen obtenida en menor aumento 3,2X y la
obtenida en mayor aumento 40X?

ACTIVIDAD

A cada grupo de estudiantes se le entregara un microscopio, de tal forma que

puedan identificar las partes referidas en el aspecto teórico, relacionando su
función.

Elaborar además un esquema grafico del microscopio, de acuerdo con sus

observaciones sobre las distintas partes del mismo.

Efectué un montaje en fresco de una letra asimétrica (no sirve O, X, S, I)

porque?. Siguiendo las técnicas anteriormente descritas enfoque en un menor
aumento efectué esquemas de lo observado. Cómo ve la imagen con relación a
la posición de la letra en el portaobjetos? Porque? Enfoque luego la misma

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muestra en 3,2X y usted observa con relación a la obtenida con el objetivo de

10X? ¿Por qué? Hacía la derecha y mire a través del ocular. En qué dirección
se mueve la imagen? Luego repita el procedimiento desplazando la muestra a la
izquierda. ¿En qué dirección se mueve la imagen?.
Luego mueva la muestra hacia arriba y hacia abajo en qué dirección se
desplaza la imagen?.

Luego realice otro montaje con hilo y otro con cabello de acuerdo a lo planteado
anteriormente.

5. Cuestionario/preguntas:

1Consultar a que es igual:

Un milímetro, una micra, un micrómetro, un amstrong, un nanómetro. Y
luego analiza el siguiente cuadro:

Los límites de resolución comparativos son:

Ojo humano 0.1mm aproximadamente

Microscopio óptico 0.1um
Microscopio electrónico 1 nm

2. Clases y tipos de microscopios, relacionando los aspectos

fundamentales, de su estructura y función:
Microscopio Simple
Microscopio de luz polarizada
Microscopio de campo oscuro
Microscopio de contraste de fases.
Microscopio electrónico (clases y tipos actuales).

6. Bibliografía:
• Curtis Helena, 198g, Biología. Editorial Medica Panamericana, 4ta
Edición.
• Gemis, J. M. Atlas de microscopia.
• Healey, Petcr. 1980 Microscopio y vida microscópica Editorial Mandadori
España.

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