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SANGRE

MANCHAS BIOLGICAS
ASPECTO
- Vara con la antigedad y la superficie donde caen.

En superficies absorbentes y claras se presentan de color rojo oscuro que con
el tiempo se hacen ms negras.
Una mancha lavada se torna rosa (tener en cuenta para su futuro estudio y posibles
inconvenientes)

En superficies absorbentes y oscuras se visualizan mal y requiere entonces el
uso del rectivo LUMINOL. ste, torna luminiscente a la mancha SIN alterarla.

En superficies no absorbentes forman costras de escamas en agujas. Si son
recientes se presentan rojas, con el tiempo se hacen oscuras.
MECANISMOS DE PRODUCCIN
1- PROYECCIN
La sangre puede proyectarse describiendo una PARBOLA o una
PERPENDICULAR

ORIGEN: Arteria seccionada, elemento que se sacude, charco que se pisa,
cabeza que se golpea, reguero de sangre que cae desde cierta altura.

MORFOLOGA:
- Si cae PERPENDICULARMENTE es redonda, variando su aspecto segn
la altura ( a > altura, > dimetro, es irregular y con gotas satlites) y la
superficie donde cae ( si es lisa las gotas son homogneas; si es rugosa son
irregulares y con satlites; si es absorbente predomina la impregnacin y no
tiene satlites)
MECANISMOS DE PRODUCCIN
1- PROYECCIN

MORFOLOGA:
Si se proyecta OBLICUAMENTE, incide con ngulo agudo en el plano, se
alarga en el sentido de la direccin y en ocasiones dibuja una gota satlite en
su extremo (similar a un SIGNO DE EXCLAMACIN)

# Mltiples gotas pequeas a gran distancia entre s suponen gran
velocidad de proyeccin (ej. disparo a boca de jarro)
# Mltiples gotas pequeas con diversas direcciones arma ensangrentada
manejada violentamente
# Manchas que dejan espacio mudo o hueco indica posicin del
agresor


MECANISMOS DE PRODUCCIN
2- ESCURRIMIENTO


La sangre babea y al ir cayendo por accin de la gravedad forma
charcos o regueros.

Su uso: permite reconstruir cambios de posicin del cadver y
sobrevivencia de la vctima (seala recorrido) luego de la
agresin.
MECANISMOS DE PRODUCCIN
3- CONTACTO



Cualquier objeto ensangrentado al contactar con otro deja una
impresin.
Ej: Huellas de manos, pies, etc.
MECANISMOS DE PRODUCCIN
4- IMPREGNACIN



Imbibicin de un objeto (tejido) por la sangre.
Si ste es absorbente la misma lo empapa y d manchas
circulares y uniformes.
MECANISMOS DE PRODUCCIN
5- MIXTO

Combinacin de 3 y 4.
Es el origen de las manchas de limpieza.
Ej: al limpiar con un trapo un palo o cuchillo se producen
manchas rectangulares, con solucin de continuidad y trazos
transversos, y cuyo color decrece progresivamente.
INTERPRETACION GEOMETRICA DE LAS
MANCHAS DE SANGRE
LAS LEYES DE LA FISICA RESPECTO DE LOS
FLUIDOS:
Debido a la atraccion molecular llamada fuerza de cohercion,
una gota de sangre conserva su forma como si tuviera una
cobertura similar a la de un globo; esta cubierta esta dada por
la tension superficial, que tambien puede apreciarse en otros
liquidos como el agua
Esto es lo que le da la forma esferica a la gota de sangre en su
caida libre, y lo que determinara la forma al momento del
impacto sobre el piso u otras superficies.
INTERPRETACION GEOMETRICA DE LAS
MANCHAS DE SANGRE
Cuando a las manchas se las interpreta en contexto de las
caracteristicas fisicas de la sangre, el investigador podra
descubrir:

El origen de la sangre
La distancia entre el area de impacto y el origen, al momento
de la ocurrencia
Tipo y direccion del impacto
Posicion de la victima durante el ataque
Movimiento y direccion del sospechoso y de la victima
durante y despues de la efusion de sangre



ANLISIS DE LABORATORIO
Objetivos:
A) Dx genrico: Es una mancha de sangre?

B) Dx especfico: Es sangre humana o animal?

C) Dx individual: ante sangre humana determinar a qu individuo
corresponde.

D) Dx de sexo y regin anatmica.

E) Data de la mancha de sangre
DIAGNSTICO GENRICO
2 tipos de pruebas:

I- de Orientacin (gran sensibilidad)

-En la sangre existen peroxidasas que descomponen un perxido (H2O2) liberando
oxgeno que oxida a su vez una leucobase, que cambia de color.

-Tiene valor si es NEGATIVA:ratifica la negatividad de las pruebas de certeza.

-Si es positiva no ayuda ya que d positiva en vegetales y otros fludos orgnicos.

DIAGNSTICO GENRICO
2 tipos de pruebas:

II- de Certeza ( gran especificidad)

-Se empieza por stas!!

-Ponen de manifiesto elementos caractersticos de la sangre (elem. formes o
Hemoglobina) usando tcs. microscpicas, microqumicas (cristalogrficas),
espectroscpicas y cromatogrficas.




PRUEBAS DE CERTEZA
T. Microscpicas

Anlisis de elem. formes :

DIRECTO. Con M.O. de reflexin ( ej. ULTROPACK) se observan cuerpos opacos.
Tiene mayor rdito en manchas que asientan sobre superficies planas
( ej armas blancas).

INDIRECTO. Como los elem. formes se rompen en las manchas, es necesario aislar y
regenerarlas (con lq. isotnico o suero del grupo AB) para luego teir
la muestra (H-E, Giemsa, Feulgen, Knol para leucocitos)
Marcoux propone colocar la muestra aislada y regenerada en filtro
MILLIPORE para su tincin directa.
PRUEBAS DE CERTEZA
T. Microqumicas
Analizan los derivados de la Hg que tienden a cristalizar: sales halogenadas
de la hematina y el hemocromgeno.

I ) Cristales de Teichman
Consiste en tratar a la Hg en caliente (60C) con c. actico, as se desdobla en Hem y
globina. El hierro del Hem se oxida en presencia de sales halogenadas de CL-, Br o I
formndose los cristales.
- Los cristales son prismticos, alargados, pardos oscuros y con ngulo de 45
- Si en 4 ebulliciones no aparecen cristales es NEGATIVA: o no es sangre, o es
sangre pero de larga data o bien fue tratada con cido/lcalis.




PRUEBAS DE CERTEZA
T. Microqumicas

I I ) Cristales de hemocromgeno
Utiliza una base nitrogenada-piridina- + un agente hematinizante-sosa- + un reductor
+ agua destilada.
De ordinario se usa la frmula de Takayama (usa Glucosa como reductor).
No necesita ebullicin.
- Los cristales obtenidos son en forma de hojas de pino, entrelazadas y de color
naranja.
- D mejores resultados que la tc. anterior
- Se usa ante negatividad de la tcnica de Teichman

PRUEBAS DE CERTEZA
T. Espectroscpicas

Se basa en obtener el espectro de absorcin de la Hg y alguno de sus
derivados ante la exposicin a un rayo de luz blanca, obtenindose 2 bandas
(verde-amarillo) que pueden visualizarse en un ESPECTOFOTMETRO

T. Cromatogrficas

Se basa en la propiedad de movilidad cromatogrfica de la Hg ante un
solvente adecuado (sc actica+H2O2) en papel Whatman o Placa fina de
slice (resultado + rpido).
Las manchas que contiene Hg aparecen AZULES.



DIAGNSTICO ESPECFICO
1) Hemates: por las pequeas diferencias y la gran deformacin de stos en las
manchas NO APORTAN CONCLUSIONES.

2) Hg: Anlisis de la secuencia de aminocidos de la cadenas y de la globina.
Permite establecer especie, edad y caractersticas patolgicas.
Requiere laboratorios especializados mediante el mtodo de diferencias
antignicas.

3) Suero: Anlisis de las protenas que lo constituyen mediante el estudio de
reacciones Antgeno-Anticuerpo.
Es la BASE DEL DX ESPECFICO.



DIAGNSTICO ESPECFICO
3) Suero: (cont)

* Antgeno. Si est depositado en 1 soporte no absorbente se raspa y se disuelve
en sc. fisiolgica; si est en un tejido se recorta y se macera; si est
en la tierra debe purificarse el macerado con Tc. de Kirk.

* Anticuerpo.2 tipos: Polivalente o MONOVALENTE (frente a 1 sola fraccin
del antgeno) Ej: suero antiHG, suero anti IgG

* Tcs. para revelar reaccin.
In Vivo
In Vitro: la ms usada es la reaccin de precipitacin en medio gelificado
Agar-Agar por doble difusin (Test de Ouchterlony) o
inmunoelectroforesis (Grabar).
DIAGNSTICO ESPECFICO
3) Suero: (cont)

* Interpretacin de las reacciones
A) Una reaccin de identidad completa determina que la mancha es de sangre
humana.
B) Una reaccin de identidad parcial con cruces entre bandas indica que no es
humana.
C) Una reaccin de identidad parcial con unin de bandas en espoln indica que
la mancha es de mono o se trata de protenas degeneradas.
D) Ante reaccin negativa hay 2 posibilidades:
- No es humana si la tasa proteica medida es suficiente y el espectro
hemoglobnico no detecta desnaturalizacin por cidos/lcalis.
- Puede ser humana si la tasa es dbil y el espectro detecta desnaturalizacin.



DIAGNSTICO ESPECFICO
Inhibicin de la antiglobulina

Frecuente su uso en laboratorios de Medicina legal

Basado en la Prueba de Cooms: dentro del sist. RH existen anticuerpos bloqueantes
(aglutininas incompletas) que se unen a los hemates bloquendolos, sin aglutinar. Si
agrego suero antiglobulina (de Cooms) se produce la aglutinacin. Pero si ste fue
sensibilizado previamente agotar su capacidad de aglutinar.

El dx ser POSI TI VO respecto a la ESPECIE cuando la reaccin es negativa, es decir,
la no aglutinacin: evidencia que el suero de Cooms y su capacidad de aglutinacin
qued absorbido por las globulinas de la mancha y,por tanto, eran manchas
HUMANAS.

Coobms negativa prueba positiva para sangre de origen humano
DIAGNSTICO INDIVIDUAL
- Usualmente estos mtodos no individualizan, solo agrupan por clase.
- Investigan los Sist. ABO, RH, Mn, Kidd, Duffy y Keli

1) Estudio de aglutingenos
Basado en la propiedad de las aglutininas de fijarse a sus respectivos
aglutingenos ( las aglutininas se unen a los hemates A; las a los B; y
los hemates O no fijan aglutininas)
Los 2 mtodos empleados son:
- Imbibicin de la aglutinina (Holtzer), en DESUSO
- Absorcin-elucin, estudia la aglutinina liberada tras calentamiento.
Si a 1 tubo se agrega hemates A y aglutina, entonces la sangre es grupo A
Si coloco hemates H, entonces ser O.

DIAGNSTICO INDIVIDUAL
2) Estudio de grupos plasmticos
Se divide en 2 grupos:

A) No inmunolgicos (Gisbert): estudia haptoglobinas.
Usado en Criminalstica y en investigacin de paternidad
Tiene limitacin cronolgica, aunque si a las manchas viejas se las trata
con extracto de cloroformo pueden ser utilizadas con ste mtodo
Cuando son positivas aportan dx genrico, especfico e individual

B) Inmunolgicos: estudia los grupos G de las Ig 1-2-3.
No tiene limitacin cronolgica
Facilidad de obtener los antisueros correspondientes
Se usa de RUTINA en Medicina Legal

DIAGNSTICO INDIVIDUAL
3) Estudio de grupos enzimticos eritrocitarios

- Estudia gr. enzimticos de los GR: fosfatasa cida, glioxalasa, glucosa 6-P
deshidrogenasa, esterasa, adenosindesaminasa, fosfoglucomutasa y
adenilatoquinasa.

- Requiere laboratorio de alta tecnologa

- El uso de electroforesis en acetato de celulosa (aceler tiempos de
resultados) y el uso de sustancias rejuvenecedoras (permite analizar
manchas de varias semanas) permitieron superar los 2 inconvenientes ms
importantes del mtodo.


DIAGNSTICO INDIVIDUAL
4) Estudio de grupos leucocitarios


- Los leucocitos presentan grandes cantidades de antgenos para estudiar.

- Actualmente se estn estudiando los antgenos A1 del locus A.

- Por las dificultades tcnicas no se usan de rutina.

SEXO Y REGIN ANATMICA
SEXO

Se tie la porcin distal del cromosoma Y con quinacrina dando fluorescencia


REGIN ANATMICA

Por anlisis citolgico con tincin PAP o Thiery de las clulas de
descamacin tpicas de cada regin.



DATA DE LA MANCHA DE SANGRE

Se establece con grandes mrgenes de error

Solo informa si es reciente o antigua

Se estudia por velocidad de degradacin de las fracciones
proteicas de la mancha.
LA PRUEBA DE LUMINOL
El Luminol qumicamente denominado como: 3 aminophtalahidrazida (5-
amino-2, 3-dihidro-phthalazino-1,4-diona) fue sintetizada por Smicthz en el
ao de 1902, comprobando a la vez, que esta sustancia produce una brillante
quimioluminiscencia (produccin de luz por reaccin qumica: Una fuerte luz
fluorescente azul en soluciones cidas con pH menor de 7).

Posteriormente, en el ao de 1927 otro investigador de apellido Lommel
observ dicha quimioluminiscencia despus de la oxidacin del compuesto en
medio alcalino (Soluciones con pH mayores de 7). En 1934 el investigador
Albrecht denomin a este compuesto LUMINOL , por las propiedades
quimioluminiscentes que presentaba. Adems descubre que la reaccin
quimioluminiscente se da en presencia del perxido de hidrgeno. En 1936
Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol presentaba luminiscencia en
presencia de sangre . Esto es debido a la capacidad peroxidsica de la
hemoglobina .

LUMINOL
En el ao de 1939, los investigadores Moody y Proescher , basndose en la
investigacin de Specht , aplicaron el Luminol, en papel, tela y piezas de
hierro que contenan manchas de sangre de tres aos de antigedad,
obteniendo resultados satisfactorios. En 1942, McGrath , recomend el uso de
la prueba de Luminol , para la deteccin de sangre, l not que las manchas
de sangre viejas, daban respuestas ms fuertes y prolongas, debido a que en
estas, hay una mayor concentracin de metahemoglobina y hemtica.

Los investigadores Lytle y Hedgecock , en el ao de 1978 estudiaron los
efectos del Luminol en solucin alcalina, en la sangre detectada por la prueba,
concluyendo que no afectaba la actividad enzimtica de los eritrocitos, pero
no reportan los efectos del reactivo en la determinacin de grupo ABO en las
manchas, ni anlisis de marcadores genticos ( ADN) . La prueba de
Luminol es extremadamente sensible en la deteccin de sangre. En 1986
Thornton y colaboradores detectaron luminiscencia, a simple vista,
proveniente de sangre que fue diluida 1:10000 partes .

LUMINOL
En el ao de 1939, los investigadores Moody y Proescher , basndose en la
investigacin de Specht , aplicaron el Luminol, en papel, tela y piezas de hierro
que contenan manchas de sangre de tres aos de antigedad, obteniendo
resultados satisfactorios. En 1942, McGrath , recomend el uso de la prueba de
Luminol , para la deteccin de sangre, l not que las manchas de sangre viejas,
daban respuestas ms fuertes y prolongas, debido a que en estas, hay una mayor
concentracin de metahemoglobina y hemtica.

La prueba del Luminol emplea: el Carbonato de Sodio para crear una solucin
alcalina de pH 10.4-10.8, Perborato de Sodio como agente oxidante, y el Luminol
como la sustancia a ser oxidada con la subsecuente emisin de luz. La sangre es el
sistema peroxidasa que cataliza la reaccin . Fundamento terico de la prueba de
luminol

1. Carbonato de Sodio 2. Perborato de Sodio Trihidratado 3. Luminol (5-amino-
2,3-dihydrophthalazine 1,4-dione) Reactivos utilizados para la prueba de luminol

LUMINOL
1. Pesar 3,5 gramos de Perborato de Sodio en una balanza analtica.
Depositar la medida en un beaker de 1.000 ml de volumen. 2. Pesar 25
gramos de Carbonato de Sodio y 0,5 gramos de Luminol en una
balanza analtica y colocarlos juntos en un recipiente limpio. 3.
Medir un volumen de agua destilada de 500 ml con una probeta de
1.000 ml de capacidad. Preparacin del reactivo

4. Agregar los 500 ml de agua destilada al beaker con los 3,5 gramos
de Perborato de Sodio . 5. Agitar hasta disolver por completo. 6.
Agregar a esta solucin la medida de Carbonato de Sodio y Luminol .
7. Agitar hasta disolver por completo. 8. Verter la solucin disuelta en
el atomizador. Preparacin del reactivo

LUMINOL
Antes de la aplicacin del reactivo el personal debe vestir prendas que lo
protejan del contacto directo con el Luminol . Es imprescindible la utilizacin
de mascarillas que impidan la inhalacin del atomizado. Se debe procurar una
completa oscuridad para la aplicacin del reactivo. Aplicar el reactivo por
aspersin, en las zonas del escenario en donde se sospecha la presencia de
sangre. Cmo se aplica la prueba

37. En un lapso no menor de 10 segundos debe aparecer una reaccin
lumnica que evidencia la actividad peroxidasa que posee la sangre entre otras
sustancias. Despus de localizar los diferentes focos lumnicos se procede a
evaluar la naturaleza de estos. De sospechar que los focos lumnicos se
deben a la presencia de sangre (manchas de color y aspecto caracterstico), se
debe delimitar el rea de reaccin positiva con cinta adhesiva o con un
marcador a base de agua, esto con el objetivo de facilitar el levantamiento de
muestra y el registro fotogrfico. Cmo se aplica la prueba


- Procurar en la medida de lo posible no entrar en contacto directo con la sustancia. Es
necesario asegurarse de que todo el personal presente este debidamente protegido. La vida
media del Luminol ya preparado, es de 8 horas, por lo que debe tenerse la precaucin de no
exceder este tiempo en su aplicacin. La prueba de Luminol es presuntiva para detectar la
presencia de sangre, esto significa que requiere de otras tcnicas como la determinacin de
especie para afirmar la presencia de sangre.
-Esta sustancia no es corrosiva y no mancha Se ha observado que no tiene efectos
destructivos e inhibitorios sobre la sangre, permitiendo la realizacin de anlisis posteriores
de ABO y ADN . Una desventaja de esta tcnica es que por ser basada en la actividad
peroxidasa y esta estar presente en muchas sustancias tales como ciertos metales, jugo de
fruta, detergentes y productos de limpieza en general, es comn obtener reacciones
inespecficas. Cuidados que se deben tener al aplicar la prueba
.-Antes de la aplicacin de la prueba se debe realizar un ensayo previo con controles
positivos, falsos positivos y negativos, para evaluar la efectividad del reactivo. El reactivo
de Luminol muestra una alta sensibilidad ante la presencia de sangre, se observan
reacciones positivas en muestras diluidas, hasta diez mil veces y capaz de detectar manchas
de 25 aos de antigedad

CUIDADOS QUE SE DEBEN TENER AL
APLICAR LA PRUEBA

Varios estudios han demostrado que el luminol provoca la prdida de diversos
marcadores genticos. Debido a que el luminol es hidrosoluble, tambin puede
diluir una muestra ya diluda. Esto coloca al indicio por debajo de los lmites de
deteccin .
-La fotografa en la Prueba del Luminol es de suma importancia para la
investigacin criminalstica, ya que ella muestra toda la labor realizada por el
equipo de aplicacin, como a la vez permitir al juzgador en el proceso del
debate, como se manifestaron las manchas de sangre, su dinmica, arrastre, etc.
Fotografa de la prueba luminol
- Fijar fotogrficamente escenarios reactivados con Luminol, depende de varios
factores: ISO de la pelcula Tiempo de exposicin Duracin de la luminiscencia
del qumico Intensidad de la luminiscencia Tomas en total oscuridad Para obtener
imgenes positivas de la escena se deben de controlar varios factores, sujetos
algunos a variaciones como el tiempo de exposicin, espacio y luz. Fotografa de
la prueba luminol
Comparacin con reactivos para pruebas de campo de sangre - Fluoresceina -
Bluestar - Luminol



FIN

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