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Análisis Instrumental

1º Laboratorio de Análisis y de Control de Calidad

Estudios España

Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
 Calibración de técnicas instrumentales
Glosario*
❖ Ajuste del cero: ajuste de un sistema de medida para que este proporcione una indicación nula

cuando la magnitud a medir tenga valor cero.

❖ Ajuste de la ganancia, ajuste de amplitud de escala: permite establecer la relación de proporcionalidad

entre la señal que capta y mide el detector, y la señal que ofrece el instrumento.

❖ Extrapolación: operación que consiste en hallar un dato fuera del intervalo conocido, lo cual

produce resultados de mayor incertidumbre que en el caso de la interpolación.

❖ Interpolación: operación que consiste en hallar un dato dentro de un intervalo en el que se conocen

los valores en los extremos.

❖ Monocromador: dispositivo óptico que descompone una radiación policromática, dispersando las

diferentes longitudes de onda que la forman, a partir de las cuales se puede seleccionar una

radiación de la longitud deseada.

❖ Muestra: porción seleccionada de una sustancia o material objeto de estudio, que debe ser

representativa y ofrece información sobre una característica determinada de dicha sustancia.

❖ Muestra de ensayo: resultado del proceso de preparación al que se somete la muestra que llega al

laboratorio, de la que se toman porciones sobre las que se aplica el proceso de medida.

❖ Patrón primario: sustancia de alta pureza y composición definida de la que se puede conocer la

cantidad directamente por pesada.

❖ Patrón secundario: sustancia de la que se conoce alguna propiedad por contraste frente a patrones

primarios.

Métodos de análisis absolutos y relativos

Existen dos conceptos que son propios del resultado de una medida: la trazabilidad y la incertidumbre.
Un resultado analítico se debe expresar con su incertidumbre que acompaña a dicho resultado. La
incertidumbre recoge la influencia de errores sistemáticos y aleatorios que afectan al método analítico.
La trazabilidad está relacionada con la exactitud. La trazabilidad se define como la propiedad de un resultado
de medida por la cual dicho resultado puede relacionarse con una referencia, o patrón de medida, mediante
una cadena de calibraciones. La trazabilidad se consigue mediante la calibración que es la operación que
permite establecer la relación entre la indicación de un instrumento o sistema de medida, y el valor de la
magnitud que se desea medir, mediante el empleo de patrones.

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 Calibración directa
Tiene como objetivo hacer coincidir la lectura del instrumento con el valor de la magnitud característica del
patrón empleado. El resultado de esta calibración es la corrección o ajuste de la lectura del instrumento.

Calibración indirecta

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La magnitud medida por el instrumento es distinta de la correspondiente al patrón de calibración. Es una
operación rutinaria en los laboratorios de análisis químico, formando parte del propio método analítico.
Absorbancia es la atenuación de la intensidad de la radiación cuando ésta incide sobre una muestra.
No debe confundirse la calibración analítica con el ajuste del sistema de medida, que es el conjunto de
operaciones que se deben realizar para que el equipo esté en un estado operativo adecuado para su uso.
Ciertos instrumentos tienen una función de autocalibración.
Tampoco debe confundirse la calibración con la verificación, que consiste en la comprobación del
cumplimiento de unas determinadas especificaciones por parte de un instrumento. Esta verificación se
puede realizar mediante el empleo de patrones, muestras conocidas o materiales de referencia, pero a
diferencia de la calibración no genera ningún tipo de corrección, función de respuesta del instrumento o
estimación de la incertidumbre.

Preparación de disoluciones patrón*

Una calibración indirecta comienza con la preparación de disoluciones patrón de concentraciones conocidas.
Con la disolución patrón se realizan diluciones que se utilizaran en la calibración. A la solución de alta
concentración se la conoce como “madre”. Se puede preparar siguiendo:
A. Preparación directa a partir de un reactivo patrón primario. La concentración se calcula a partir de una
pesada del analito patrón sólido y del volumen en un matraz aforado. El material debe estar calibrado.
B. Preparación de una disolución de concentración aproximada, que posteriormente se contrasta frente
a patrones primarios, generalmente mediante volumetría o gravimetría. Una vez conocida su
concentración, esta disolución se considera patrón secundario. Esta opción se elige cuando no se tiene
un reactivo con las condiciones de ser patrón primario.
Una vez preparada la disolución patrón madre se llevan a cabo las diluciones adecuadas teniendo en cuenta las
siguientes consideraciones:
A. Todas las soluciones deben prepararse con agua destilada.
B. No es aconsejable preparar disoluciones con un factor de dilución inferior a 1/50.
C. Se deben preparar disoluciones patrón intermedias cuando no es posible preparar todos los patrones
de calibración a partir de una única disolucion madre.
D. Se debe preparar un blanco donde la concentración del analito es cero. Este blanco se utiliza como
referencia para ajustar el cero de la señal del instrumento.
E. En muchas ocasiones es necesario añadir a las disoluciones patrón. Los reactivos auxiliares tienen la
misma concentración en las disoluciones, por lo que es conveniente utilizar matraces aforados del
mismo volumen para todas las disoluciones que se deban preparar.

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 Metodologias de calibrado
Curva de calibrado mediante patrones externos*
Se basa en la determinación de la señal analítica de una serie de patrones de calibración de concentración
conocida y la representación gráfica de los pares de valores concentración/señal analítica para obtener la curva

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de calibrado. Estos patrones se preparan de forma independiente a la muestra de ensayo, por lo que reciben el
nombre de patrones externos.
a) Los patrones deben cubrir el intervalo completo de trabajo.
b) El número de patrones varían en función del grado de exactitud y precisión requerido.
c) Se debe incluir en la curva el valor del blanco.
d) La concentración del analito se representa en el eje x y la señal analítica en el eje y.
e) El intervalo de trabajo se limita a la zona de relacion lineal entre señal analitica y concentracion, por lo
que se obtiene una ecuación de primer grado mediante el método estadístico de regresión lineal por
mínimo cuadrados:
𝑦 = 𝑎𝑥 + 𝑏 a = pendiente b = ordenada en el origen
2
r , denominado coeficiente de correlación da idea de la bondad de ajuste. Para rectas de calibrado
adecuadas, es habitual encontrar valores de r2 del orden 0,99 y mayores.

f) La curva se representa gráficamente para evitar malas interpretaciones del coeficiente de correlación.
g) La concentración de las muestras se determina por interpolación. La muestra de ensayo debe tener los
reactivos auxiliares en la misma concentración que los puntos.
h) Es aconsejable preparar dos muestras de ensayos con factores de dilución distintos para evitar
posibles errores y facilitar la obtención de una medida dentro del intervalo de trabajo.

La principal ventaja de este método es su sencillez y rapidez. Como inconveniente principal hay que destacar
que el efecto de la matriz interfiere de manera crítica: en los patrones de calibrado la matriz está ausente, con
lo que es posible que se produzcan errores si existe este efecto de la matriz.

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 Adición estándar
Es un método adecuado para el análisis de muestras en las que existe efecto de la matriz. Consiste en
incorporar la matriz a los patrones de calibración. Se realiza añadiendo cantidades diferentes de patrón a unas
alícuotas de la muestra con el mismo volumen. Cada patrón tendrá una cantidad idéntica de muestra, estará
expuesto al efecto de la matriz. La concentración de analito en la muestra se calcula por extrapolación. La
ventaja es que permite contrarrestar el efecto de la matriz. El inconveniente es que es un método más
laborioso y más lento que el anterior, ya que cada determinación exige la realización de varias adiciones, por lo
que se requiere más cantidad de muestra. Se trata de un método de extrapolación por lo que se presenta
menor precisión que en el anterior.

Patrón interno
Se aplica cuando la señal analítica depende de factores sometidos a cierto grado de variabilidad no controlable.
El método más habitual consiste en la adición de una cantidad conocida de un compuesto, el patrón interno
(PI), que no debe estar presente en ninguna de las muestras que se vayan a analizar. La segunda variante
consiste en utilizar como PI un compuesto que ya estuviera presente en la muestra, o bien que se trate de un
constituyente principal de muestras y patrones, presente en cantidad suficiente de tal modo que se pueda
suponer que su concentración es la misma en todos los casos. En ambos casos el PI no debe interferir en el
proceso analítico. Se miden las señales correspondientes al analito y al PI a partir de su relación, y por
interpolación en la curva de calibrado construida, se calcula la concentración de analito en la muestra. Este
método de calibrado proporciona resultados de elevada exactitud y precisión. La principal dificultad de este
método es la de disponer de una sustancia adecuada que sirva como patrón interno.

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