EXTRACCIÓN RNA

RNeasy Micro Kit

1. Contar células en suspensión. Centrifugar 5min 300g y quitar todo el sobrenadante con
la pipeta.
2. Resuspender el pellet agitando el tubo y añadir Buffer RLT:
- 350 µL si nº céls > 1x105
- 75 µL si nº céls < 1x105

Y vortear.

3. Homogeneizar con jeringa y aguja de 20 (0,9 mm Ø).

4. Añadir 1 volumen de etanol 70% y mezclar con la pipeta.
5. Transferir la muestra a la columna y centrifugar 15’’ a ≥ 8000g. Desechar el eluido (el
RNA está en la columna).
6. Añadir 350 µL Buffer RW1 y centrifugar 15’’ a ≥ 8000g para lavar y desechar el
sobrenadante.
7. Añadir 10 ≥ DNasa a 70 ≥ Buffer RDD e invertir (ojo no vortear). Preparar el mix según
las muestras.
8. Añadir 80 µL de DNasa a la columna y dejarlo sobre la membrana. Dejar incubar en la
poyata 15’.
9. Añadir 350 µL Buffer RW1 a la columna y centrifugar 15’’ a ≥ 8000g para lavar y
desechar el eluido.
10. Pasar la columna a un tubo nuevo y añadir 500 µL Buffer RPE a la columna. Centrifugar
15’’ a > 8000g para lavar y desechar el eluido.
11. Añadir 500 µL de etanol 80% a la columna. Centrifugar 2’ a > 8000g. Desechar el eluido
y el tubo de colección (con cuidado de no tocar la columna).