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autor manuscrito
Bioquímica

Bioquímica
. Manuscrito del autor; disponible en PMC 2012 04 de octubre.
Publicado en forma editada final como:
. 4 de octubre de 2011; 50(39): 8264–8269. doi:10.1021/bi201284u.

La constante de Michaelis original: traducción de la de 1913

Papel Michaelis­Menten

Kenneth A. Johnson1 y Roger S. Goody2

Kenneth A. Johnson: kajohnson@mail.utexas.edu; Roger S. Goody: roger.goody@mpi­dortmund.de

1Profesor de Bioquímica, Instituto de Biología Celular y Molecular, 2500 Speedway, Universidad de

Texas, Austin, TX 78735 EE. UU.

2Director del Departamento de Bioquímica Física, Instituto Max­Planck de Fisiología Molecular,

del
Otto­Hahn­Strasse 11, 44227 Dortmund, Alemania

Abstracto
Hace casi 100 años, Michaelis y Menten publicaron su ahora clásico artículo (Michaelis, L., and
Menten, ML (1913) Die Kinetik der Invertinwirkung, , 333–369), en Biochemische Zeitschrift 49
que muestran que la velocidad de una reacción catalizada por enzimas es proporcional a la concentración
del complejo enzima­sustrato predicho por la ecuación de Michaelis­Menten. porque el original
El texto estaba escrito en alemán, pero a menudo es citado por autores de habla inglesa, emprendimos una
traducción completa de la publicación de 1913, que ofrecemos como suplemento en línea
(http://pubs.acs.org). Aquí introducimos la traducción, describimos el contexto histórico de la obra,
y mostrar un nuevo análisis de los datos originales. Al hacerlo, descubrimos varias sorpresas que
revelan una visión interesante de la historia temprana de la enzimología. En particular, nuestro nuevo análisis de
Los datos de Michaelis y Menten utilizando métodos computacionales modernos revelaron un rigor inesperado
y precisión en la publicación original y descubrió un análisis completo y sofisticado
que se ha pasado por alto en el siglo desde que se publicó su trabajo. Michaelis y Menten no
solo analizaron las mediciones de velocidad inicial, pero también ajustaron sus datos de curso de tiempo completo al
forma integrada de las ecuaciones de velocidad, incluida la inhibición del producto, y derivó una sola
michaelis
constante para representar todos sus datos. Esa constante no era la constante, sino más bien,
Vmáx/Km , la constante de especificidad multiplicada por la concentración de la enzima (kcat/Km*E0 ).

En 1913, Leonor Michaelis y Maud Leonora Menten publicaron su ahora clásico artículo (1). Estudiaron Morir
Kinetik der inversión la invertasa, llamada así porque su
la reacción da como resultado la inversión de la rotación óptica de positivo para sacarosa a negativo neto
por la suma de fructosa más glucosa.

Después de recibir su título de médico en 1911 en la Universidad de Toronto, Maud L. Menten

(1879 – 1960) trabajó como asistente de investigación en el laboratorio de Berlín de Leonor Michaelis
(1875­1949). Supervisó la velocidad de la reacción catalizada por invertasa en varios niveles de sacarosa.
concentraciones mediante la medición cuidadosa de la rotación óptica en función del tiempo, siguiendo

Autor para correspondencia: Kenneth A. Johnson, Departamento de Química y Bioquímica, Instituto de Biología Celular y Molecular,
La Universidad de Texas, Austin, Texas 78712, kajohnson@mail.utexas.edu, Teléfono: 512­471­0434, Fax: 512­471­0435.
Información de apoyo disponible.
El texto completo de la traducción del alemán al inglés del artículo original de Michaelis y Menten de 1913 se proporciona como suplemento. Este
el material está disponible de forma gratuita a través de Internet en http://pubs.acs.org.
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la reacción hasta el final. Su objetivo era probar la teoría de que "la invertasa forma un complejo con
sacarosa que es muy lábil y se descompone en enzima libre, glucosa y fructosa", lo que lleva a la
predicción de que "la tasa de inversión debe ser proporcional a la concentración predominante de
sacarosa­enzima". complejo." Michaelis y Menten reconocieron que los productos de la reacción
Página 2

eran inhibidores, como se sabe por trabajos anteriores de Henri (2). Aunque la mayoría de los
estudios cinéticos enzimáticos en ese momento habían buscado una forma integrada de las
ecuaciones de velocidad, Michaelis y Menten eludieron la inhibición del producto al realizar
mediciones de velocidad inicial donde solo "necesitarían seguir la reacción de inversión en un
rango de tiempo donde la influencia de la escisión Los productos no se notan. La influencia de los
productos de escisión se puede observar fácilmente en experimentos separados”. Michaelis
y Menten realizaron mediciones de la velocidad inicial en función de la concentración variable
de sacarosa y ajustaron sus datos basándose en la suposición de que la unión de la sacarosa
estaba en equilibrio con la enzima y el postulado de que la velocidad de la reacción era
proporcional a la concentración de la enzima. ­complejo de sustrato. Al mostrar que la dependencia
de la concentración de sacarosa de la tasa siguió la relación hiperbólica predicha, proporcionaron
evidencia para respaldar la hipótesis de que la catálisis enzimática se debió a la formación de
del
un complejo enzima­sustrato, de acuerdo con la ahora famosa ecuación de Michaelis­Menten, y
obtuvieron, “Por primera vez, una imagen de la magnitud de la afinidad de una enzima por su
sustrato”. También derivaron expresiones para la inhibición competitiva y cuantificaron los efectos
de los productos en las velocidades de reacción para obtener estimaciones de las constantes de
disociación de la fructosa y la glucosa. Como prueba final y exhaustiva de su modelo, analizaron
los datos cinéticos del curso a tiempo completo en función de la forma integrada de las
ecuaciones de velocidad, incluida la inhibición del producto. Por lo tanto, como describimos a continuación, lograron mucho má

Notas sobre la traducción

El estilo del artículo es sorprendentemente coloquial, lo que nos hace darnos cuenta de lo formales
que somos en nuestra escritura actual. Al traducir el documento, que proporcionamos aquí como
suplemento, hemos intentado conservar la voz del original, mientras usamos términos que
serán familiares para los lectores del siglo XXI . Michaelis y Menten se refirieron a la enzima como
el "fermento", pero adoptamos la palabra "enzima" en base a documentos contemporáneos escritos en inglés.
Su referencia a la velocidad inicial se traduce literalmente como la "velocidad máxima de fisión",
que interpretamos como la velocidad máxima durante la fase inicial de la reacción antes de que
la velocidad comience a disminuir debido al agotamiento del sustrato y la inhibición del producto;
y así, hemos adoptado la terminología convencional de “tasa inicial”. El
término Restdissoziationskurve, que no se usa comúnmente, planteó algunos problemas de traducción.
Elegimos confiar en el contexto en el que se usó en relación con las expresiones matemáticas que
describen la saturación fraccional de un ácido en función del pH, lo que implica el significado de
"curva de asociación" en términos modernos.

Según los estándares modernos, hay una serie de idiosincrasias, incluida la falta de dimensiones en los
parámetros informados y un uso muy impreciso de los conceptos. Por ejemplo, en la página 23 de nuestra
Kd =
traducción, los autores atribuyen el efecto inhibitorio del etanol, con un aparente 0,6 M, como
debido enteramente a un cambio en el carácter del solvente y, en consecuencia, asignan = ∞; k alcohol

sin embargo, ahora creemos que para la mayoría de las enzimas, una solución que contiene 5% de
alcohol no es inhibitoria debido a los efectos del solvente. Una característica general del artículo es el
uso inexacto de los términos cantidad, cantidad y concentración. En la mayoría de los casos los
autores se refieren a concentración cuando dicen cantidad. En las tablas usaron la unidad “n” pero en el
texto generalmente usaron N para representar concentración. A lo largo de la traducción, hemos pasado
al uso de M para designar concentraciones molares. Por supuesto, Michaelis y Menten no tenían forma de
conocer la concentración de enzima en sus experimentos; por lo que todas las referencias se referían a
cantidades relativas de enzima añadidas a las mezclas de reacción. Sorprendentemente, faltaba cualquier
mención de la fuente de la enzima o los métodos utilizados para su preparación.

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Hemos tratado de reproducir la sensación general del papel con aproximadamente el mismo
saltos de página y maquetación de texto y figuras. Hemos conservado las notas a pie de página originales en el
al final de cada página e intercalamos nuestros propios comentarios editoriales. En general, traducimos
el papel literalmente, pero corrigió dos errores matemáticos menores (signo y subíndice), que no fueron
Página 3

propagado en ecuaciones posteriores en el texto original. Todos los datos originales para cada uno de
las cifras se proporcionaron en tablas, una característica útil que falta en las publicaciones actuales.
La disponibilidad de los datos originales nos permitió volver a dibujar las cifras y volver a analizar los resultados utilizando
métodos computacionales modernos. Hemos intentado recrear el estilo del original.
cifras, con una excepción. En las Figs. 1–3, los puntos de datos individuales se trazaron utilizando una pequeña x
con una letra o número adyacente para identificar el conjunto de datos. Al intentar recrear este estilo,
encontramos que el etiquetado es poco fiable y ambiguo, por lo que hemos recurrido al uso de
símbolos modernos.

Perspectiva historica
Quizás el héroe anónimo de la historia temprana de la enzimología es Victor Henri, quien primero
derivó una ecuación que predice la relación entre la tasa y la concentración de sustrato
del
basado en un modelo racional que implica la formación de un complejo enzima­sustrato catalítico
(2). Sin embargo, como señalan Michaelis y Menten, Henri cometió dos errores cruciales, que
le impidió confirmar la relación predicha entre la tasa y el sustrato
concentración. No tuvo en cuenta la mutarotación lenta de los productos de la reacción.
(equilibrio de los anómeros α y β de la glucosa) y se olvidó de controlar el pH. De este modo,
errores en sus datos impidieron una prueba precisa de la teoría. De lo contrario, probablemente estaríamos
escribiendo sobre la ecuación de Henri.

Como generalmente se les atribuye, Michaelis y Menten midieron la velocidad inicial como un
función de la concentración de sacarosa y derivó una ecuación que se aproxima a la moderna
versión de la ecuación de Michaelis­Menten:

dónde C ·Φ= V máximo, Φ = concentración total de enzima, y k = .

Kansas

En esta expresión, C es kcat multiplicado por un factor para convertir el cambio en la rotación óptica en
concentración de sustrato convertida en producto.

Michaelis y Menten pasaron por alto el obvio complot recíproco doble como un medio para obtener una
extrapolación lineal a concentración infinita de sustrato. Más bien, Michaelis se basó en su
experiencia en el análisis de la dependencia del pH (aunque el término pH aún no se había definido).
Volvieron a graficar sus datos como tasa versus el logaritmo de la concentración de sustrato, en una forma
análoga a la ecuación de Henderson­Hasselbalch para la dependencia del pH, que se publicará cuatro
años después (3). Michaelis y Menten siguieron entonces un procedimiento bastante complicado para
estimando Kansas de los datos sin conocer la velocidad máxima de la reacción. Ellos
derivó una expresión que define la pendiente de la gráfica de tasa inicial contra el logaritmo de la
concentración de sustrato en V/2 (en su terminología V = v/(·Φ), expresada C como una fracción de
la velocidad máxima). Ellos razonaron que la curva de V versus log [S] debería ser
aproximadamente lineal en torno a V/2 con una pendiente de 0,576. La escala de la ordenada de una parcela.
Luego se ajustó la relación de tasa versus log[S] para hacer que la pendiente fuera realmente igual a 0.576, y dado que la
la curva ajustada debería saturarse en V=1, luego podrían leer el valor de log[S] en V=0.5
para determinar .Kansas
Este largo procedimiento permitió la normalización de sus datos para permitir
extrapolación a la saturación del sustrato para estimar la Vmax y así determinar la de la sacarosa.Kansas
Habiendo visto la destreza matemática de Michaelis, que es evidente en este artículo y en un

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libro posterior (4), nos sorprendió que no pensara en linealizar la ecuación para
dar:
Página 4

Veinte años después, Lineweaver y Burk (5) descubrirían la utilidad del doble
trama recíproca y su artículo de 1934 pasaría a ser el más citado en la historia de la
Revista de la American Chemical Society con más de 11.000 citas (Lineweaver
murió en 2009 a la edad de 101 años).

Michaelis y Menten asumieron la unión en equilibrio de la sacarosa a la enzima durante la

curso de la reacción. Dentro de un año, Van Slyke y Cullen (6) publicaron una derivación en
la unión del sustrato a la enzima y la liberación del producto se consideraron
reacciones irreversibles, produciendo un resultado idéntico a la ecuación de Michaelis­Menten. Su
El enfoque, como el de Michaelis y Menten, estaba en la forma integrada de las ecuaciones de tasa
del
y el ajuste de los datos del curso de tiempo completo de la reacción, y notaron algunos
inconsistencias en sus intentos de ajustar los datos a medida que la reacción se acercaba al equilibrio. No era
hasta 12 años después cuando en 1925 Briggs y Haldane (7) introdujeron el estado estable
aproximación y proporcionó argumentos que respaldan la validez de la velocidad inicial
mediciones, eliminando así la necesidad de asumir que la unión del sustrato estaba en
Equilibrio rápido o irreversible. Ellos razonaron que debido a que la concentración de enzima
fue insignificante en relación con la concentración de sustrato, la tasa de cambio en el
concentración del complejo enzima­sustrato, “excepto el primer instante de la reacción”,
también debe ser insignificante en comparación con las tasas de cambio en las concentraciones de sustrato
y producto Esto proporcionó la justificación para la aproximación del estado estacionario. Modelado
la unión de sacarosa como equilibrio en la derivación publicada por Michaelis y Menten fue
probablemente correcto para la unión de sacarosa a invertasa; aunque, en estado estacionario apropiado
No es necesario conocer los datos kcat /Km valores, los detalles sobre la tasa intrínseca
cinéticos para extraer kcat y las constantes que gobiernan la unión del sustrato y no afectan el resultado, a
hecho reconocido por Briggs y Haldane. La derivación de Briggs y Haldane basada en la
La aproximación de estado estacionario se utiliza en los libros de texto de bioquímica para introducir la
ecuación de Michaelis Menten. Tal vez nuestro uso actual de los términos se puso de moda después de la referencia de
Briggs y Haldane a la “ecuación de Michaelis y Menten” y “su constante KS”.

Inhibición del producto y la ecuación de velocidad integrada

El análisis de Michaelis y Menten fue mucho más allá de las mediciones iniciales de velocidad para
que su trabajo es citado con más frecuencia. Más bien, en lo que constituye un verdadero tour de force de la
papel, ajustan sus datos de curso de tiempo completo a la forma integrada de la ecuación de tasa mientras
teniendo en cuenta la inhibición por los productos de la reacción. Demostraron que todos sus datos,
recogidos en varios momentos después de la adición de varias concentraciones de sacarosa, podría ser
analizada para derivar una única constante. En su opinión, este análisis confirmó que su
enfoque fue correcto, basado en estimaciones de las constantes de disociación de la sacarosa,
glucosa y fructosa derivados de las mediciones de velocidad inicial. En retrospectiva, su
¡El análisis ahora puede ser reconocido como el primer análisis global de datos cinéticos de curso de tiempo completo!
La constante derivada por Michaelis y Menten proporcionó una prueba crítica de su nuevo modelo.
para la catálisis enzimática, pero no fue el ). Más Constante de Michaelis
bien derivaron ( km
un término que ahora describimos como Vmáx/
, la constante de especificidad, multiplicada por la enzima
kilómetros kcat /Km
concentración, que, por supuesto, les era desconocida.

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Aquí mostramos una breve derivación de las ecuaciones de velocidad publicadas por Michaelis y Menten,
Página 5

pero con términos traducidos para que sean más familiares para los lectores de hoy, con la excepción de que nosotros
conservar el
“
constante
”
para describir su nueva constante, y mostramos cómo analizaron su
término datos globalmente para extraer un único parámetro cinético de todo su conjunto de datos. Además, nosotros
muestran que ajustan globalmente sus datos usando métodos computacionales modernos basados en
integración numérica de las ecuaciones de velocidad da esencialmente el mismo resultado producido por
Michaelis y Menten hace casi un siglo.

Michaelis y Menten probaron el postulado de que la velocidad de una reacción catalizada por enzimas
C
podría describirse mediante un término constante () multiplicado por la concentración del complejo
enzima sustrato usando el siguiente modelo.
del
Michaelis y Menten demostraron que la velocidad era proporcional a la cantidad de enzima
("fermento") agregado a la mezcla de reacción, pero no tenían medios para determinar el molar
=
C cada y C = Vmáx
concentración de enzimas. Hoy reconocemos que, aunque kcattérmino
contenía un factor para convertir unidades de concentración a grados de rotación óptica en su
mediciones. Posteriormente, utilizaron un factor de conversión para calcular la fracción de
sustrato convertido en producto al ajustar sus datos a la forma integrada de la ecuación de velocidad,
como se describe abajo.Kansas
es igual a ), aunque
kilómetros (el
Constante
se definió comode Michaelis
la constante de disociación de equilibrio de la sacarosa. Michaelis y Menten fueron más allá
simple análisis y se dio cuenta de que la unión de los productos de la reacción, fructosa (F) y
la glucosa (G) compite con la unión de la sacarosa y que un análisis completo del tiempo de reacción
Por supuesto, tendría que tener en cuenta la inhibición del producto en base a un análisis más completo.
modelo que se muestra a continuación.

Las constantes de disociación de sacarosa, fructosa y glucosa se estimaron a partir de

mediciones de velocidad que tratan la fructosa y la glucosa como inhibidores competitivos para dar:

Resolviendo estas ecuaciones simultáneamente se obtuvo:

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ES , S, F , ylas concentraciones dependientes del tiempo de la enzima­sacarosa

donde representan GRAMO

complejo, sacarosa, fructosa y glucosa, respectivamente. Según su postulado, la tasa

de reacción fue proporcional a la concentración de ES:

dónde C = C · mi
0

Esta es la forma ahora familiar de la ecuación para la inhibición enzimática competitiva, donde el
F/KF y G/KG en la cuenta del denominador para la inhibición del producto. Aunque el
del
términos concepto de inhibición competitiva aún no se había definido formalmente, está claramente representado
aquí matemáticamente.

Michaelis y Menten razonaron que si su postulado era correcto, entonces deberían poder
para adaptarse a la dependencia del tiempo completo de la reacción a varias concentraciones de sacarosa para derivar un
C,
única constante, basada Kansas, KF y de KG
en los valores conocidos de . Integración la tarifa
ecuación requiere incluir términos de balance de masa para reducir la ecuación a una forma con un
única variable para la concentración de S, F o G.

Esta ecuación diferencial luego se integró para producir:

=
constante C/KS
Esta ecuación permitió calcular el término constante , de mediciones
a partir
de la concentración de producto (F) en función del tiempo (t) a varias concentraciones iniciales
de sacarosa, S0. Michaelis y Menten convirtieron sus datos de rotación óptica para obtener la fracción
de producto formado en relación con la concentración inicial de sustrato, [P]/[S0], como se ilustra en la Tabla
C/KS
1. Demostraron que, en efecto, el término constante era, “consistente y, aparte de leves
fluctuaciones, no muestra ninguna inclinación con el tiempo o con la concentración de azúcar, que podemos
considéralo como una constante satisfactoria.”

Este análisis extraordinario permitió el análisis del curso de tiempo completo de la formación del producto para
la forma integrada de la ecuación de tasa para extraer una sola constante desconocida que representa
para todos los datos. Al hacerlo, Michaelis y Menten demostraron que la variación en la tasa
de la rotación en función del tiempo y la concentración de sustrato podría entenderse como una
constante que define la velocidad de formación del producto en función de la concentración calculada de
el complejo ES. Esta es una contribución notable. Sin embargo, cabe señalar que la

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constante derivada por Michaelis y Menten en el ajuste de sus datos no fue el . Más bien, en los Michaelis
constante términos que se utilizan hoy en día, ajustan sus datos a la constante de C/KS = (kcat
especificidad multiplicada por la concentración de enzima. Esto fue lo más lejos que pudieron tomar
su análisis, ya que no tenían forma de saber la concentración de enzima; la naturaleza exacta
Página 7

/Km)*E0 ,

y el peso molecular de la enzima donde se desconocía en ese momento. Su ajuste de datos proporcionado
un valor medio de C/KS = 0,0454 ± 0,0032 m−1, a partir del cual podemos calcular
basándose en su valor informado de KS = 16,7 mM.

Análisis informático
Hoy, podemos ajustar los datos originales de Michaelis­Menten globalmente basados en valores numéricos.
integración de las ecuaciones de tasa y sin supuestos simplificadores. La figura 1 muestra el ajuste global
de los datos del artículo de Michaelis­Menten (Tabla 1) obtenidos mediante el programa de Explorador de KinTek
simulación (8, 9). Los datos se ajustaron a un modelo en el que S, F y G se unen cada uno al
enzima en una reacción de equilibrio rápido usando constantes de disociación reportadas por Michaelis
y Menten. Los datos se ajustaron a una única constante cinética, =0,80 ± 0,02kcatE0
mM/m. El
El valor global (promedio) logrado por Michaelis y Menten (0,76 ± 0,05 mM/m) es igual a lo que
del
se puede derivar hoy con el software de simulación por computadora más avanzado y se erige como un
testimonio de la precisión de las medidas de Maud Menten y Leonor Michaelis y su
cuidado al realizar los cálculos a mano.

La simulación por computadora también se puede usar para mostrar cuánto contribuyó la inhibición del producto a
la dependencia del tiempo de la reacción. Las líneas discontinuas en la Fig. 1 muestran el tiempo previsto
supuesto suponiendo que no hay inhibición del producto. Claramente, la unión del producto a la enzima
hace una contribución significativa al curso del tiempo. Quizás Michaelis y Menten
reconocieron este hecho cuando intentaron por primera vez ajustar sus datos a la ecuación de tasa integrada
basado en un modelo más simple y luego se dio cuenta de que deben incluir productos competitivos
inhibición. Un análisis adicional por integración numérica también apoya la conclusión de
Michaelis y Menten que no hay una acumulación significativa de un complejo ternario EFG
basado en el postulado de sitios que no interactúan, liberación rápida del producto y los valores medidos. Kd

En el siglo pasado, el análisis cinético enzimático ha seguido el uso del estado estacionario
aproximación, lo que permite ajustar los datos de velocidad inicial utilizando expresiones algebraicas simples.
Michaelis y Menten establecieron un alto estándar para el ajuste completo de datos y su
El trabajo pionero ahora debe considerarse como el precursor del ajuste moderno de datos globales.
Trabajo en enzimología durante las dos primeras décadas del siglo XX por Henri,
Michaelis y Menten, y Van Slyke y Cullen se centró en encontrar el integrado
forma de las ecuaciones de velocidad para tener en cuenta las curvas de progreso completas de catalizadas por enzimas
reacciones Ese enfoque se complica por los supuestos necesarios para derivar un
ecuación matemática que describe el curso de tiempo completo; es decir, la suposición de que el
concentración de sustrato fue siempre mucho mayor que la concentración de enzima, y la
KI para la inhibición del producto. Michaelis y
necesidad de conocimiento previo de la naturaleza y valores
Menten, Briggs y Haldane proporcionaron la solución simple al problema al mostrar
cómo las mediciones de velocidad inicial durante un estado estable que existe antes de significativo
el agotamiento del sustrato se puede utilizar para derivar y valoreskilómetros para la renovación del sustrato y
kcat KI
para la inhibición del producto. Lineweaver y Burk proporcionaron un análisis gráfico simple para analizar
los datos cinéticos basados en un gráfico de doble recíproco. Este tipo de análisis domina
enzimología durante la mayor parte del siglo XX. Análisis por integración numérica de tasa
ecuaciones (también conocido como simulación por computadora) ha eliminado la necesidad de simplificar suposiciones
para permitir el análisis cuantitativo de las curvas de progreso completas, como fue iniciado por Carl Frieden (10).
Ahora se pueden derivar parámetros cinéticos de estado estacionario y constantes de inhibición del producto mediante
ajustando los datos del curso a tiempo completo directamente usando la simulación por computadora (11), sin pasar por el laborioso

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análisis de tasa inicial. Es quizás un testimonio de los primeros trabajos en enzimología que solo en
la primera década del siglo XXI con la llegada de las computadoras personales rápidas y optimizadas
algoritmos que el análisis de datos globales de las curvas de progreso completo finalmente ha llegado a la mayoría de edad.

También es interesante notar que la constante

original
de Michaelis, la derivada por
Página 8

Michaelis y Menten al analizar los datos de sus cursos de tiempo completo a nivel mundial, fue en realidad el
kcat ,/Km
constante de especificidad, multiplicada por la concentración de enzima, que fue
desconocido en ese momento. Ahora reconocemos la constante de especificidad como la más importante
parámetro cinético de estado estacionario en el sentido de que define la especificidad de la enzima, la eficiencia y
competencia (12). En cambio, la constante atribuida a Michaelis, la es de menor ,
kilómetros

importancia en enzimología y muy a menudo se malinterpreta. Tal vez sea el caso de que el
uso de ganado
kilómetros protagonismo porque se podía medir sin conocer la enzima
concentración y podría derivarse de cualquier medida de tasa arbitraria sin la necesidad
para convertir a unidades de concentración. Hoy en día, los enzimólogos generalmente kcat y es kcat /Km
consideran que los dos parámetros cinéticos primarios de estado kilómetros simplemente una relación dekcat y
kcat /Km estacionario y que . Este punto de vista ciertamente genera menos confusión que los kilómetros sin
intentos de interpretar información mecanicista adicional (13). En términos de reducción de errores en la estimación de la
del
constante de especificidad y una representación más realista de la cinética de enzimas catalizadas
reacciones, una mejor forma de la ecuación de Michaelis­Menten sería:

kilómetros
k
donde es la constante de especificidad, utilizando minúsculas para designar una cinética en lugar de una
constante de pseudo­equilibrio. Quizá podríamos referirnos como km
el menten constante.

Resumen
Casi un siglo después de la publicación original, el trabajo de Michaelis y Menten se levanta
al escrutinio más crítico de la retrospectiva informada. Es lamentable que el término
Constante de Michaelisno se atribuyó al análisiskcat /Km , que se derivó como la constante en su
de datos "globales", en lugar del término. Para el siglo pasado y ciertamente para el
kilómetros

a continuación, los enzimólogos continúan trabajando hacia la meta, declarada por Michaelis y Menten en
su párrafo inicial, de “lograr el objetivo final de la investigación cinética; es decir, para obtener
conocimiento de la naturaleza de la reacción a partir de un estudio de su progreso”.

Material suplementario
Consulte la versión web en PubMed Central para obtener material complementario.

Expresiones de gratitud
Con el apoyo de una subvención de The Welch Foundation (F­1604) y los Institutos Nacionales de Salud (GM084741) para
KAJ y por una subvención de Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB642, proyecto A4) a RSG. Corporación KinTek
proporcionó el software KinTek Explorer.

Literatura citada
1. Michaelis L, Menten ML. Die Kinetik der Invertinwirkung. Biochemische Zeitschrift. 1913;
49:333–369.

2. Henri, V. Lois générales de l'action des diastase. Hermann; París: 1903.

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3. Hasselbalch KA. Die Berechnung der Wasserstoffzahl des Blutes aus der freien und gebundenen Kohlensäure
desselben, und die Sauerstoffbindung des Blutes als Funktion der Wasserstoffzahl.
Biochemische Zeitschrift. 1917; 78:112–144.
4. Michaelis, L. Einführung en die Mathematik. Saltador; Berlín: 1922.
Página 9

5. Lineweaver H, Burk D. La determinación de las constantes de disociación de enzimas. J Am Chem Soc. 1934;
56:658–666.

6. Van Slyke DD, Cullen GE. El modo de acción de la ureasa y de las enzimas en general. J Biol Chem.
1914; 19:141–180.
7. Briggs GE, Haldane JBS. Una nota sobre la cinética de la acción enzimática. Biochem J. 1925; 19:338–339.
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8. Johnson KA, Simpson ZB, Blom T. FitSpace Explorer: un algoritmo para evaluar el espacio de parámetros
multidimensionales en el ajuste de datos cinéticos. Bioquímica anal. 2009; 387:30–41. [PubMed: 19168024]
9. Johnson KA, Simpson ZB, Blom T. Global Kinetic Explorer: un nuevo programa informático para simulación
dinámica y ajuste de datos cinéticos. Bioquímica anal. 2009; 387:20–29. [PubMed: 19154726]
10. Barshop BA, Wrenn RF, Frieden C. Análisis de métodos numéricos para la simulación por computadora de
procesos cinéticos: desarrollo de KINSIM, un sistema portátil y flexible. Bioquímica anal. 1983; 130:134–
145. [PubMed: 6688159]
del
11. Johnson KA. Ajuste de datos cinéticos de enzimas con KinTek Global Kinetic Explorer. Métodos Enzymol.
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12. Miller BG, Wolfenden R. Competencia catalítica: el caso inusual de la descarboxilasa OMP. año
Rev. Bioquímica. 2002; 71:847–885. [PubMed: 12045113]
13. Tsai YC, Johnson KA. Un nuevo paradigma para la especificidad de la ADN polimerasa. Bioquímica. 2006;
45:9675–9687. [PubMed: 16893169]

Bioquímica . Manuscrito del autor; disponible en PMC 2012 04 de octubre.

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PA
aut
del
PAMa
Manu
autor
NI
NIH­
del Johnson y Goody Página 10

Fig. 1. Ajuste global a los datos de Michaelis y Menten

Los datos de Michaelis y Menten (reproducidos en la Tabla 1) se ajustaron mediante simulación utilizando
software KinTek Explorer (9) con la única variable kcat*E0 para obtener líneas suaves;
se eligió una concentración de enzima baja arbitraria para realizar la simulación. Los datos son para
concentraciones iniciales de sacarosa de 20,8 ( ), 41,6 ( ), 83 (•), 167 (■) y 333 (•) mM
de la Tabla 1. Los datos en tiempos de más de 250 m se incluyeron en el ajuste pero no se muestran
en la figura. Las líneas discontinuas muestran la cinética predicha si se ignora la inhibición del producto.

Bioquímica . Manuscrito del autor; disponible en PMC 2012 04 de octubre.

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del
PAMa
Manu
autor
NI
NIH­ Johnson y Goody

Ajuste de datos globales de Michaelis­Menten a

tabla 1
Página 11

sacarosa = 333 mM

Tiempo (m) [P]/[S0 ] constante

7 0.0164 0.0496

14 0.0316 0.0479

26 0.0528 0.0432

49 0.0923 0.0412

75 0.1404 0.0408

117 0.2137 0.0407

1052 0,9834 [0,0498]

sacarosa = 41,6 mM
del
Tiempo (m) [P]/[S0 ] Const.

10,25 0,1147 0.0406

30,75 0,3722 0.0489

61,75 0,615 0.0467

90,75 0,747 0.0438

112,70 0,850 0.0465

132,70 0,925 0.0443

154,70 0,940 0.0405

sacarosa = 166,7 mM

Tiempo (m) [P]/[S0 ] Const.

8 0.0350 0.0444

dieciséis 0.0636 0.0446

28 0,1080 0,0437

52 0.1980 0.0444

82 0.3000 0.0445

103 0.3780 0.0454

sacarosa = 20,8 mM

Tiempo (m) [P]/[S0 ] constante

17 0.331 0.0510

27 0.452 0.0464

38 0.611 0.0500

62 0.736 0.0419

95 0.860 [0.0388]

1372 0.990 [0.058]

Bioquímica . Manuscrito del autor; disponible en PMC 2012 04 de octubre.

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del
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Manu
autor
NI
NIH­ Johnson y Goody

sacarosa = 83 mM

Tiempo (m) [P]/[S0 ] Const.

49.5 0.352 0.0482

Pagina 12

90,0 0.575 0.0447

125.0 0.690 0.0460

151.0 0.766 0.0456

208.0 0.900 0.0486

Valor medio constante = 0,0454/m

a
Esto reproduce los datos de la última tabla (sin numerar) en Michaelis y Menten (1). Michaelis y Menten analizaron estos datos usando el
forma integrada de las ecuaciones de velocidad para calcular una sola constante, constante = C/KS, como se describe en el texto. Ajustamos estos datos globalmente basados en

integración numérica de las ecuaciones de velocidad para dar los resultados que se muestran en la Fig. 1.
del

Bioquímica . Manuscrito del autor; disponible en PMC 2012 04 de octubre.