ESTRUCTURA DE AMINOÁCIDOS Y PRECIPITACIÓN DE CASEÍNA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA SEDE PALMIRA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
NOMBRES:
Dirly Nataly Benavides Rojas
Juan Camilo Sanchez Garcia
Daniela Quintero Garcés
2022

ESTRUCTURA DE AMINOÁCIDOS Y PRECIPITACIÓN DE CASEÍNA

Los aminoácidos son unidades estructurales de las proteínas, estos están conformados por
C,H,O,N y algunos contienen S. Lo que denomina a los aminoácidos es la presencia de dos
grupos, el amino y el grupo carboxilo que están unidos a un mismo átomo de carbono y que
se diferencian por sus cadenas laterales o grupos R. Fisiológicamente el grupo amino (-
NH3 +) se encuentra protonado y los grupos ácidos como bases conjugadas (COO-).
(Ospina,2010)

Las proteínas por su parte están constituidas por aminoácidos, los cuales, se unen a través
del enlace peptídico que es el enlace entre grupo carboxílico y el grupo amino. Las
proteínas en cierto modo se encuentran en mezclas complejas, por ende, su separación y
precipitación es posible variando el PH de la solución; cuando una de estas alcanza el punto
isoeléctrico, es decir, cuando el PH del aminoácido no posee carga neta y como resultado
de ello no puede desplazarse en un campo eléctrico. La mayor parte de los aminoácidos
tienen un punto isoeléctrico alrededor de 6.0, cuando el aminoácido es dicarboxílico su
punto isoeléctrico es muy bajo, alrededor de 3.0, si el aminoácido es dibásico, su punto
isoeléctrico estará entre 9 a 11 estado alcalino. (Ospina, 2010)

En el caso de la leche, esta tiene diversas proteínas como la caseína, que es una
fosfoproteína cuyo punto isoeléctrico ronda entre 4,7 que si disminuimos el PH hasta ese
valor esta se precipita y las demás proteínas quedarán en el líquido sobrenadante.

1. objetivo general
Conocer el concepto de la relación entre el punto isoeléctrico de una proteína con el
Ph del medio donde este se encuentra, así como su identificación con diferentes
reactivos.

1.1 objetivos específicos

● realizar la precipitación de caseína y reconocer las características de los
aminoácidos
● Implementar la reacción de biuret en la identificación de proteínas.
2. Materiales y Métodos.

2.1: Extracción de la caseína, en el vaso de precipitados se agregó 30 ml de leche entera

de la marca Colanta, la cual, se procedió a calentarla en unos 40°C y se dejó reposar, para
luego, añadir con un gotero el ácido acético hasta que el PH sea 4,7, y así obtener la
filtración y secado del precipitado.

2.2: Análisis de la presencia de proteínas. para ello, se tomó dos tubos de ensayo donde
se añadió en uno el suero de leche sobrante para la prueba de Biuret y en el otro la caseína
con adición de agua, luego, se procedió a realizar el baño maría, donde se adiciona el
reactivo y se analiza la coloración donde nos indico la presencia de proteínas.

2.3: Comprobación de carbohidratos, para el siguiente paso se procedió a realizar el

reactivo Fehling A y B el cual, se añadió N ml, se calentó con el baño maría por unos
minutos, donde se agrega el suero de leche. Luego, se procede a calentar nuevamente y a
medida que pasa el tiempo se observó el cambio de coloración que nos comprobó la
presencia de carbohidratos.

2.4 Determinación de la presencia de Calcio: para la determinación de la presencia de

calcio se utilizó el suero de leche, un tubo de ensayo y el oxalato de amonio, donde se
dispuso el suero en el tubo de ensayo y se añadió N gotas de oxalato de amonio, donde se
procedió a observar el precipitado blanco.

2.5 Determinación de Riboflavina: El último paso, es la comprobación de riboflavina en el

suero de leche que se añadió en un biker, para ello, con ayuda de luz ultravioleta se pudo
identificar la presencia de riboflavina.

3. Resultados y Análisis

3.1 Extracción de la caseína:

 Figura 3.1.1, proceso de extracción de la caseína, Fuente propia.

Cuando se realiza el proceso de extracción de la caseína, ocurre un fenómeno de

desnaturalización que es una alteración de la estructura y rompimientos de enlaces
de hidrógeno, lo que produce un cambio, en este caso en la leche, tanto físico como
químico, es decir, el rompimiento de enlaces originó un desplegamiento de la
molécula y pérdida de su actividad biológica, esto sucedió, porque las moléculas
proteicas de la leche funcionan en un intervalo limitado de PH y temperatura, así
que, cuando se procedió a cambiar el PH a 4,7 y hubo variación de temperatura a
40°C esta se desnaturalizo y se precipitó. (Ospina, 2010)
Como puede prolongarse en muchas ocasiones cuando se realiza un experimento,
pueden aparecer ciertos errores. En el proceso donde se mide la masa de la
caseína que tuvo un peso total de 3,76 gr. El valor se puede considerar aproximado,
porque existe la posibilidad que en el momento de tomar el peso, la caseína haya
quedado con algo de humedad del suero, lo cual afecta la exactitud de masa total
correspondiente al volumen del suero.

Cabe mencionar, que la caseína es una proteína heterogénea y se caracteriza por

ser proteína de la leche que al llegar a su punto isoeléctrico con un PH de 4,7 se
separe de las demás proteínas y no interactúe con las demás moléculas presentes
en el suero, lo que garantiza que lo que hemos retirado en el experimento es
totalmente caseína.

3.2 Análisis de la presencia de proteínas:

Figura 3,2,1 Análisis de presencia de proteínas

con la prueba de Biuret, Fuente propia.

Para la identificación de proteínas se procede a realizar la prueba de Biuret, la cual,

es utilizada para la identificación de enlaces peptídicos, cuando hay presencia de
estos un ion de cobre (II) forma unos complejos de coordinación de un color Malva
en soluciones alcalinas.

Por consiguiente, se procede a tomar dos tubos de ensayo donde en uno

agregamos un poco de suero de leche más la prueba de Biuret, y en el otro,
añadimos lo mismo pero esta vez con un poco de agua. se pudo observar ciertos
cambios físicos como lo describe la siguiente tabla.

Tubo 1: suero de leche + R. Biuret Tubo 2: suero de leche + R. Biuret +

agua

se forma el precipitado formación del precipitado a menor

cantidad

la mezcla procede a un cambio de color la mezcla procede a un cambio de color

malva leve con intensidad suave. malva, pero esta vez con intensidad
más suave.

Tabla 3,2,1: Observación de cambios fisiológicos en la mezcla del suero con la prueba de Biuret.

El color que se obtuvo como resultado hace referencia a la existencia de proteínas

en el suero de leche, esto se debe a que los iones del cobre (II) y el par de
electrones no compartidos del nitrógeno dan la formación al color malva. lo que nos
comprobó la existencia de proteínas.

3.3 Comprobación de carbohidratos de lactosa

Figura 3.3.1 Proceso de comprobación de carbohidratos de la lactosa, con el reactivo de Fehling, fuente propia

Para este experimento de la comprobación de carbohidratos se utilizó la prueba del

reactivo de Fehling A y B, este reactivo es utilizado principalmente para la
determinación de azúcares reductores, teniendo en cuenta que el reactivo Fehling A
es una solución de color celeste y está formada por sulfato cúprico pentahidratado y
el reactivo Fehling B es incolora y contiene NaOH como medio básico tartrato de
sodio y potasio (como estabilizador del Cu2+)(Unicen).

Se observó que mientras la solución calentaba en el baño maría alrededor de 2

minutos, se visualizaba unos cambios en el aspecto de la solución referente al color,
obtiniendo primero un color verde, amarillo, naranja y luego un naranja intenso, lo
cual es positivo para la existencia de carbohidratos.
Por lo tanto, la principal fuente de azúcar
(carbohidratos) presentes en la leche es la
lactosa, que está compuesta por dos
moléculas: la glucosa y la galactosa que son
azúcares simples. El hecho de que la prueba
haya sido positiva se debe que la molécula
galactosa no es un componente reductor a
diferencia de la glucosa que si es reductor, lo
que hace que la lactosa se caracterice como
reductora, a esto se debe que el catión cúprico
reaccione con el azúcar dando como
resultado un óxido cuproso.
Figura, 3.3.2 Lactosa, fuente: Wikipedia.com

3.4 Determinación de la presencia de Calcio:

3.4.1 proceso de determinación de calcio en suero- fuente propia

En la muestra de suero de leche en el tubo de ensayo, se procedió agregar oxalato

de amonio, provocando inmediatamente la aparición de un precipitado color blanco
que indica la presencia de oxalato de calcio.
la prueba de oxalato de amonio dará positiva cuando entre en contacto con un
compuesto que contenga calcio, dando lugar asi al oxalato de calcio, de ahi que se
obtuviera un precipotado de color blanco positivo para calcio.
3.5 Determinación de Riboflavina:

para la determinación de riboflavina, contamos con dos (2) muestras de suero una de ellas
diluida en agua , los electrones de la riboflavina tienen la característica de ser excitados por
luz ultravioleta saltando del estado basal al estado excitado, cuando los electrones regresan
al estado basal remiten esa energía en forma de luz o fotones.
los beaker al ser expuestos a la luz ultravioleta claramente se observa (imagen 3.5.1), como
el beaker con la muestra de suero diluida tiene menos intensidad en su color es decir a más
concentración mayor intensidad de la luz indicando la concentración de riboflavina.

3.5.1 determinación riboflavina con luz ultravioleta.

4 discusión:

¿Cómo pueden clasificarse los aminoácidos? Examine las características

comunes de cada grupo, compare los diferentes radicales de cada
aminoácido y familiaricese con su estructura.

R// los aminoácidos se pueden clasificar de 3 maneras distintas, la primera es por su

ubicación en un grupo amino, la segunda es de acuerdo a su obtención y la tercera
por sus propiedades en cadena.
¿Qué se entiende por pH o punto isoeléctrico de un aminoácido o una
proteína? ¿Por qué, en dicho punto, las especies se precipitan? ¿Qué es lo
que permite que los aminoácidos actúan como reguladores de pH de los
fluidos biológicos?

R// se entiende que es cuando una sustancia tiene la carga neta en cero además de
que la solubilidad en dicha sustancia podría llegar a ser nula.

Experimentalmente, ¿Cómo diferenciaría usted entre un aminoácido aromático

y otro que no lo es? Indague al respecto y diseñe un breve protocolo de
laboratorio para la respectiva experimentación.
5. Conclusiones

● a lo largo de la práctica pudimos concluir y observar detenidamente cada

cambio en la precipitación de la caseína, logrando aislar la proteína caseína
a partir de su punto isoeléctrico
● podemos concluir que la caseína es insoluble, gracias a ello pudimos filtrar la
proteína para obtener el suero.

6. Bibliografía

Blanca Lucia Ospina Giraldo, P. (2010). Introducción a la Bioquímica. Palmira: 4°

Impresión.

UNICEN. (2017). Química Orgánica y Biología . Obtenido de UNICEN :

https://www.exa.unicen.edu.ar › catedras › quimica.

Wikipedia . (01 de abril de 2022).Lactosa. Obtenido de La enciclopedia libre:

https://es.wikipedia.org/wiki/Lactosa.