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FORMATO DE TCNICA ANALTICA

1. Nombre qumico: Determinacin de Nitrgeno


2. Mtodo o tcnica: Micro-Kjeldahl
3. Origen o referencia de quien sugiere la tcnica: AOAC, Mtodo 960.52
4. Funcionalidad de la tcnica: Aplicable a todos los alimentos.
5. Principio o fundamento: Se basa en la destruccin de la materia orgnica con cido sulfrico
concentrado, formndose sulfato de amonio que en exceso de NaOH libera amoniaco, el que se
destila recibindolo en: a) cido sulfrico donde se forma sulfato de amonio y el exceso de cido
es valorado con NaOH o b) cido brico, fomndose borato de amonio el que se valora con HCl.
6. Equipo: Digestin Rack: con cualquier gas o calentadores elctricos que suministre suficiente
calor. Aparato de destilacin o Parnas Wagner aparatos de destilacin. Digestin Flask: uso de
30ml Kjeldahl Soltys o frascos pequeos para muestras de 10ml Kjeldahl.
Reactivos: H
2
SO
4
, H
3
BO
3
, HCl 0.02N, NaOH+Na
2
S
2
O
3
, K
2
SO
4
, HgO, Rojo de metilo 0.2%, azul
de metileno 0.2%
7. Preparacin o patrones: Llevar la muestra de leche a aproximadamente 20C y mezclar por
trasvase a otro recipiente limpio, repitiendo la operacin hasta asegurar una muestra homognea
evitando la formacin de espuma.
8. Preparacin de la muestra:
9. Procedimiento:
- Medir con pipeta 0,5 ml de la muestra bien homogeneizada, transferir a un baln de Kjeldahl para
microanlisis (30 ml). Agregar 1,9 g de K
2
SO
4
, 40 mg de HgO y 2,5 ml de H
2
SO
4
. La tcnica de la
A.O.A.C. recomienda no pesar ms de 100 mg de materia orgnica seca y el empleo de 2 ml de
H
2
SO
4
para 15 mg de muestra, si la misma pesa ms de 15 mg, se debe agregar 0,1 ml de H
2
SO
4

por cada exceso de 10 mg de muestra. Adicionar adems, algunas perlas de vidrio.
- Calentar la mezcla en el agitador hasta que el digerido adquiera un aspecto claro y limpio. Enfriar
a temperatura ambiente.
- Disolver el contenido del baln en una pequea cantidad de agua destilada. Colocar una fina
pelcula de vaselina alrededor del borde del baln.
- Para efectuar la destilacin, colocar un vaso de precipitado o erlenmeyer de 100 ml de capacidad,
conteniendo 5 ml de solucin de cido brico al 4% y 2-4 gotas del indicador en el aparato, debajo
del refrigerante de modo que la punta de este quede sumergida en el lquido. Seguidamente,
transferir el digerido, ya diluido, con agua destilada, a la cmara interna de destilacin, haciendo 5
o 6 lavados sucesivos con porciones de 1-2 ml de agua destilada. A continuacin adicionar 8-10 ml
de la solucin de NaOH-Na
2
S
2
O
3
, lavar ligeramente el embudo con agua destilada y cerrar las
llaves de vidrio del aparato. Finalmente, encender el generador de vapor y destilar hasta recoger
unos 15 ml.
- Retirar el destilado y diluirlo con agua destilada hasta 50 ml. Titular directamente con HCl 0.02N,
colocado en una microbureta automtica.
- Calcular el porcentaje de nitrgeno y de protenas totales en la muestra de leche aplicando la
frmula correspondiente y empleando el factor 6,38.
10. Clculos:
) 100 (
) 14 )( )( (
%
1 2
|
.
|

\
|
=
W
N V V
OTAL NITRGENOT
Donde:
V1= volumen (ml) de solucin de HCl requerido para la prueba en blanco
V2= volumen (ml) de solucin de HCl requerido para la muestra problema
N= normalidad el HCl
W= peso (g)de la muestra

11. Bibliografas: AOAC Official Methods of Analysis; International Association of Official
Analytical Chemists; 1984.