FOTOSÍNTESIS

¿Qué es la fotosíntesis?

Proceso mediante el cual las plantas fabrican su propio alimento. Para

hacerlo necesitan:

– Agua
– Dióxido de carbono
– Sales minerales
– Luz del sol

Las plantas toman el agua y las sales minerales del suelo a través de las
raíces, los cuales ascienden hasta las hojas por los vasos del xilema
presentes en el tallo. En las hojas, la clorofila presente en los cloroplastos de
las células de las hojas, absorben la luz del sol y transforma las sales
minerales en azúcares con ayuda de agua y de dióxido de carbono. En esta
reacción se libera oxígeno a la atmósfera. Después, todos los nutrientes
serán transportados a todas las partes de la planta a través de los vasos del
floema.

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PRÁCTICA
Introducción

El uso de algas inmovilizadas y el indicador hidrogenocarbonado provee de un

interesante acercamiento al trabajo práctico del aprendizaje de la fotosíntesis en un
laboratorio escolar.

Figura 1 Algas inmovilizadas en un indicador hidrogenocarbonado.

Una nueva técnica

Las algas pueden ser cultivadas fácilmente, concentradas, y luego, usando

técnicas de inmovilización, dividirlas en cantidades estándar en forma de bolas de algas.
Estas bolas algales pueden ser manipuladas fácilmente y, en asociación con el indicador
hidrogenocarbonado, se pueden usar en las investigaciones prácticas de fotosíntesis. El
indicador hidrogenocarbonado cambiará el color según la concentración de dióxido de
carbono disuelto (CO2). La concentración de CO2 disuelto será gobernada por el equilibrio
entre fotosíntesis y respiración. Los cambios de color del indicador puede ser cuantificado
midiendo la absorbancia del indicador a 550 nm con un colorlimetro o comparando los
colores con un juego de soluciones estándar.

El SAPS Photosynthesis Kit

Figura 2 - SAPS Photosynthesis Kit

El SAPS Photosynthesis Kit (Fig. 2) contiene algas (Scenedesmus quadricauda);

medio de enriquecimiento para crecer las algas; alginato sódico para inmovilizar las
algas; jeringuillas para dar de manera apropiada las gotas uniformemente que pueden
formar bolas algales; indicador hidrogenocarbonado en forma concentrada; botellas para

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realizar las reacciones; y los filtros coloreados que pueden ser usados en las
investigaciones de longitud de onda de luz sobre la fotosíntesis.

Haciendo las bolitas de algas

Para hacer las bolas algales, las algas son mezcladas con la solución de alginato
de sodio. Esta mezcla ha de gotear con cuidado en la solución de cloruro de calcio. Esto
forma las bolitas de alginato cálcico con algas atrapadas dentro y así este proceso
inmoviliza las algas.

El cultivo algal que ha crecido necesita ser distribuido (aproximadamente 50 ml por

estudiante o grupo) y concentrado. La concentración de las algas se puede obtener por:

- dejándolos de pie (la Figura 3)

- centrifugación.

Figura 3 – Concentrando las algas

Eliminando el sobrenadante, queda un volumen muy reducido de restos de algas

concentradas. Aproximadamente 5 ml de estas algas concentradas son mezcladas (la
Figura 4) con un 2.5 ml de solución de alginato sódico en un recipiente limpio.

Figura 4 - Mezcla de algas con alginato sódico

¿Cómo preparar la solución de alginato sódico?

- Se debe preparar un día antes.

- Solución alginato sódico al 3 % (3 gramos en 100 ml de agua).
- Se necesita 2.5 ml de solución por persona.
- Añadir el polvo de alginato sódico en agua fría y mantener con un agitador
magnético durante 24 horas para que llegue a disolverse completamente.( la
solución no debe ser calentada en ninguna fase de la preparación).
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 Personas Alginato (g) Agua (ml)
4 0.3 10
6 0.45 15
8 0.6 20
10 0.75 25
12 0.9 30
14 1.05 35
16 1.2 40
18 1.35 45
20 1.5 50
22 1.65 55
24 1.8 60
26 1.95 65
28 2.1 70
30 2.25 75
32 2.4 80
34 2.55 85
36 2.7 90
38 2.85 95
40 3 100

- Se puede mantener la solución durante un par de semanas en el frigorífico.

Esta mezcla es añadida a la jeringuilla y luego se permite que gotee con cuidado
en la solución de cloruro de calcio al 2% (la Figura 5).

Figura 5 – Formando las bolsas de algas

Las jeringuillas tienen inyectores estrechos que permiten formar bolas algales
pequeñas y uniformes. La solución de cloruro de calcio debe ser removido con una varilla
con cuidado cuando las algas pasan por ella. El resultado es la formación de las bolas de
alginato de calcio de tamaño uniforme y conteniendo cantidades aproximadamente
iguales de algas.
Las bolas algales deberan dejarse aproximadamente cinco minutos para endurecer y
después lavarlas con agua utilizando un colador para sostenerlas (Figura 6) y luego un
aclarado final con agua destilada.

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 Figura 6 – Lavando las bolas algales en un colador.

Se requiere que todos estos pasos que aclaran aseguren que todo el cloruro de
calcio es eliminado completamente. Ahora, las bolas pueden ser guardadas en agua
destilada y en la nevera hasta seis meses. Cuando se vaya a realizar el trabajo
experimental, las bolas pueden ser sacadas del recipiente (Figura 7) y añadidas al
indicador hidrogenocarbonado.

Indicador hidrogenocarbonado

El indicador hidrogenocarbonado es muy sensible a cambios del pH y, por tanto, al

nivel de dióxido de carbono disuelto. El indicador es de color naranja/rojo cuando la
concentración de dióxido de carbono disuelto está en equilibrio con el aire. Este se
cambia de naranja a amarillo cuando disminuye el pH (aumenta la concentración de
dióxido de carbono, por ejemplo, cuando la tasa de respiración excede la tasa de
fotosíntesis). El indicador hidrogencarbonado cambia de rojo a un púrpura cuando
aumenta el pH (disminuye la concentración de dióxido de carbono, por ejemplo, cuando la
tasa de fotosíntesis excede la tasa de respiración). Así, el color del indicador
hidrogenocarbonado puede ser usado para supervisar tanto la respiración como la
fotosíntesis. El cambio de color puede ser medido usando un colorímetro para medir
absorbancia en 550 nm o comparándose con un juego de soluciones estándar ( Figura 8).

<------------- aumento CO2

disminución CO2 -------------->

Figure 8 – Cambio de color del indicador hidrogenocarburado en las soluciones estándar

de pH 7.6 - pH 9.2 en aumentos de 0.2.

250 ml de indicador hidrogenocarburado es proveído por el kit. Tiene que ser

diluido 10 veces para su uso. A causa de su sensibilidad frente a cambios del pH, es

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esencial que todos los materiales sean aclarados con un pequeño indicador antes de su
uso.

Fuentes luminosas

La fuente luminosa tiene que ser más fuerte que una lámpara estándar de 40 W.
Se recomiendan dos tipos de fuente luminosa:

1. Las lámparas de halógeno como la mostrada en la figura 9 de 150 W. Estas dan

mucho calor por lo que debería emplearse un filtro de calor. Un filtro de calor bueno
podría ser simplemente una botella llena de agua colocada entre la lámpara y las bolas
algales.

Figure 9 – Lámpara 150 W

2. Tubos fluorescentes no dan tanto calor y, por tanto, no requieren un filtro de calor.
Como es más fácil medir la distancia entre las muestras y la lámpara (Figura 10), se
pueden usar más muestras con un solo tubo fluorescente, así reducimos los efectos de
variabilidad en la fuente luminosa.

Figure 10 – Bolas algales a varias distancia de la fuente luminosa (en este caso, un tubo
fluorescente)

Experimentos usando las bolas algales

El uso de las bolas algales permite una amplia gama de investigaciones y provee a
los estudiantes de una oportunidad de planificar y realizar sus propias investigaciones.
Como las algas absorben CO2 o liberan CO2 en el indicador hidrogenocarbonado, este
cambia el color. Esto puede ser usado para investigar un número de factores variables
que afectan a la tasa de fotosíntesis. En el siguiente apartado miramos como los efectos
de la intensidad de luz y de la longitud de onda así como la cantidad y el tipo de algas
pueden afectar la tasa de fotosíntesis.

Intensidad de luz

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El efecto de intensidad de la luz sobre la tasa de fotosíntesis en bolas algales se puede
observar de dos modos:

1. Las botellas que contienen una cantidad estándar de bolas algales y el indicador
hidrogenocarbonado pueden ser colocadas a distancias diferentes de la lámpara
con lo que se puede observar el cambio de color. El cambio de color del indicador
de naranja a rojo y a púrpura más rápido se da en la botella más cercana a la
fuente luminosa. Las bolas algales contenidas allí realizan la fotosíntesis en una
tasa más rápida que aquellas que están en las botellas más lejanas a la fuente
luminosa, la concentración de CO2 se reduce más rápidamente y se observa un
cambio de color rápido. Se tiene que tener cuidado de que las botellas más
cercanas a la fuente luminosa no oscurezcan las botellas más lejanas.

2. Las botellas pueden ser cubiertas por diferentes filtros de densidad neutra. Filtros
de densidad neutra son filtros 'grises'. Un filtro de densidad ideal neutro reduciría la
intensidad de luz de todas las longitudes de onda igualmente. En la práctica, los
filtros de densidad neutros no permiten esto. Cada uno de los filtros proporcionados
en el kit, realmente reducen la intensidad de luz uniformemente a través de la
gama 400-660 nm. Los nombres y la cantidad teórica de luz transmitida en la gama
espectral 400-660 nm por cada uno de los filtros de densidad neutros son
resumidos en la tabla 1 .

298 209 210 211 299

Nombre del filtro
(0.15 ND) (0.30 ND) (0.6 ND) (0.9 ND) (1.2 ND)

Luz transmitida (%) 71 50 25 12.5 6.3

Tabla 1 – Nombres y la cantidad teórica de luz transmitida en la gama espectral 400-660

nm por cada uno de los filtros de densidad neutros.

Longitud de onda de la luz

El efecto de longitud de onda de la luz sobre la tasa de fotosíntesis en bolas algales

puede ser investigado usando los filtros de colores diferentes (Figura 11).

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Figura 11 – Bolas algales e indicador hidrogenocarbonado en botellas cubiertas con filtros
de colores.

Además de los cinco filtros de densidad neutros, el equipo proporciona nueve filtros
coloreados. Estos pueden cubrir las botellas y proporcionar un modo de cambiar la
longitud de onda de la luz que alcanza las bolas algales. La tasa de fotosíntesis en cada
una de las botellas puede ser comparada observando cambios del color del indicador
hidrogenocarbonado.

Cantidad de algas

El efecto de los números de algas sobre la tasa de fotosíntesis puede ser observado de
dos modos:

1. El número de bolas algales usadas en un volumen estándar de indicador

hidrogencarbonado puede ser variado.

2. Las algas concentradas producidas por sedimentación o centrifugación pueden ser

diluidas y las diluciones diferentes suelen hacer bolas algales que contienen números
diferentes de algas.

En este caso, las bolas con la misma cantidad de algas deben ser añadidas al volumen
estándar del indicador hidrogenocarbonado.

Tipo de algas

Las tasas de fotosíntesis realizada por diferentes algas pueden ser investigadas si las
algas son cultivadas y inmovilizadas de forma diferente. La concentración de algas se
puede cuantificar mediante un hemocitometro y así se pueden comparar las tasas de
fotosíntesis de similares concentraciones de algas en determinadas condiciones.
Equivalentes concentraciones de algas, sin embargo, no necesariamente han de tener
igualdad en las concentraciones de clorofila. No obstante, sería posible investigar,
cualitativamente, la fotosíntesis óptima en color azul-verde y en otra longitud de onda de
la luz estándar de algas. Se puede cultivar con éxito Scenedesmus quadricauda, Chlorella
sp. (algas) y Cynechoccus sp. (Cianobacterias azul-verdes).
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