Multiplicación viral

Introducción
Concepto de susceptibilidad/permisibilidad.
. Infección de células susceptibles
- productiva: ocurre en células permisivas/producción de progenie viable.
- abortiva:
a) infección de células susceptibles pero no permisivas.
b) infección de células permisivas o no permisivas por viriones defectivos.

- restrictiva:
a) persistencia viral en células transitoriamente no permisivas.
b) sólo algunas células de una población o tejido son permisivas.
- latente: persistencia de genomas virales pero no de partículas infecciosas
en células transitoriamente no permisivas. Genoma episomal -
-Transformación –Virus Papilloma.

. Susceptibilidad no asegura multiplicación viral y progenie.

Etapas de la Mul?plicación viral

1) adsorción
.requiere de proteínas de unión (attachment) virales.
.mediada por receptores y co-receptores celulares específicos

2) penetración/desnudamiento
virus envueltos .

vía 1. Fusión con membrana celular mediada por unión proteína de anclaje y fusión
virales/ receptor celular. Paramyxoviridae (RSV, Sarampión)
vía 2. Patrón endocítico. Fusión de envoltura viral con membrana del compartimento
endosomal mediada por proteínas virales y receptores celulares.Orthomyxoviridae
(Influenza): HA/Ac. Siálico
from Schaechter et al, Mechanisms of Microbial Disease, 3rd ed, 1998
virus desnudo

vía 1. Penetración por patrón endocítico mediado por receptores –viropexis- en

compartimentos endosomales (Adenovirus) o lisosomales (Reoviridae).
vía 2. Formación de poro a nivel de membrana plasmática por modificaciones
estructurales de la cápside viral. Picovirnaviridae (Poliovirus)
Vías de
penetración/
desnudamiento

3) replicación del genoma viral

Compleja variedad de estrategias replica?vas de acuerdo a carácterís?cas

estructurales, genómicas y moleculares (ver más adelante)
4) ensamblaje y maduración del virión –multiplicidad de estrategias-

Determinadas por estrategias replicativas y carácterísticas estructurales

. Patrón teórico general
Formación de unidades estructurales individuales de una o varias
proteínas.
1. síntesis coordinada a la unión al ácido nucleico/formación de ribonucleoproteina:
Mononegavirales.
2. Ensamblaje de subunidades a medida que se sintetizan: Herpes simplex Tipo 2.

Ensamblaje de las subunidades estructurales proteicas de acuerdo a las

secuencia e interacciones apropiadas.
1. asociación de proteínas individuales: Hepa%%s B.
2. ensamblaje de subunidades mediado por proteínas accesorias: Adenovirus Tipo 2.
3. a partir de polipéptidos precursores: Poliovirus
Empaquetamiento selectivo del ácido nucleico y otros componentes
esenciales del virión.
1. ensamblaje concertado; productivo si se realiza en asociación al genoma viral.
2. ensamblaje secuencial; el genoma se inserta en una cápside proteica
preformada: Herpex simplex Tipo 2.
 Adquisición de una envoltura lipídica de origen celular.
1. Secuencial y posterior al ensamblaje de los componentes estructurales del
virión/requiere reconocimientos específicos de proteínas virales estructurales y de
membrana (M1 y HA o NA de Influenza): Mononegavirales.
2.Simultaneidad espacio-temporal con el ensamblaje de la cápide del virión:
Retrovirus.
Liberación desde la célula infectada.
. Virus desnudos: lisis celular mecanismo más común, con destrucción de
membrana celular y ECP.
. Virus envueltos: gemación asociada a la adquisición de envoltura lipídica /en
general, proceso no lítico que permite la sobrevida celular/infección con
progenie muy grande puede generar lisis.

Maduración del virión.

. Mayormente por procesos proteolíticos de péptidos o polipéptidos virales que
transforman proviriones no infecciosos en viriones infecciosos.
Poliovirus. Clivaje de VP0 libera VP4y VP2-adsorción y penetración.

HIV. Procesamiento proteolítico de Gag-modificaciones estructurales que

favorecen las interacciones entre proteínas del virión.
 Hsiung, GD et al., Diagnostic Virology 1994 p204 (D. Medina)

HIV. maduración y
egreso por
brotamiento

Principles of Virology. ASM Press.2016.

 Replicación de Virus ARN
1. Aspectos generales

. configuración del genoma/mecanismos de replicación (sh, dh, +, -).

. síntesis de ARN-dependiente de ARN no es un proceso propio de las células
eucariotas – necesidad de enzimas codificadas por el virus.
. todos los virus con genoma ARN (excepto Retroviridae) codifican una ARN
polimerasa-ARN dependiente.
. ARN- y ds ARN deben incluir en el virión la ARN polimerasa-ARN dependiente.
ARN+ se traduce directamente.
. extrema variabilidad de estrategias replicativas entre virus ARN, incluso
mayor que la variabilidad estructural y organizativa.
2. Proteínas accesorias
.Virales

. implicadas en el reconocimiento del templado de ARN.

. en el reconocimiento de los sitios de iniciación específico del templado.

Poliovirus: 3AB/3CD se unen al extremo 3´-OH del genoma y dirigen y favorecen la
unión de la ARN polimerasa-ARN dependiente al molde.
VSV: interacciones P/ L (subunidad catalítica) de ARN polimerasa-ARN dependiente.
N- terminal de P se asocia al ARN viral.

. direccionamiento de la ARN polimerasa en el contexto celular.

Influenza: Nucleoprotína viral contiene regiones que median la localización nuclear
de la ARN polimerasa -ARN dependiente.
Poliovirus: 2C y 3AB implicadas en el direccionamiento de la ARN polimerasa hacia
las vesículas en las cuales ocurre la síntesis de ARN.
. ARN helicasas
. estructuras secundarias del ARN formadas por regiones de apareamiento de
bases deben eliminarse para permi]r la unión de ARN polimerasa-ARN
dependiente.
. previenen el apareamiento de la cadena parental de ARN y la naciente.
. Poliovirus, Sindbis, Hepa]]s C codifican ARN helicasas.

. Celulares
. componentes estructurales del citoesqueleto celular.
. Measles y Sendai virus: síntesis de ARNm estimulada por tubulina (componente
mayoritario del microtúbulo).
. RSV y Parainfluenza 3: síntesis de ARNm estimulada por actina.

.Microfilamentos que conforman el citoesqueleto actuarían como moléculas de

anclaje de la ARN Polimerasa viral.
 3. Sitios celulares de síntesis de ARN viral

-No todos los virus con genoma ARN se replican en el citoplasma-

.Núcleo
. Influenza y Borna disease virus: síntesis de ARNm y replicación del genoma ocurre
en el núcleo/ Probablemente debido a la necesidad de ciertas enzimas nucleares
involucradas en la maduración post-transcripcional de ARNm.

. Citoplasma
. Enorme mayoría de los virus ARN.

. ARN Pol-ARN depdte. puede estar asociada a una membrana (plasmática, lisosomal,
endosomal, vesicular)/especificidad de templado/concentración de componentes de la
maquinaria replicativa.

.Infección por Poliovirus induce la formación de vesículas/anclaje de la ARNpol.

. Reovirus replican en cuerpos de inclusión (compuestos de proteínas virales y sin

membrana)/rol análogo a las membranas vesiculares.
4. Replicación de Virus ARN-estrategias-
Virus ARN polaridad +
Picornavirus-Flavivirus-Coronavirus
5´ 3´
+ ARN - ARN
3´ 5´

+ ARN

Configuración genómica.
. Moléculas únicas de ARN de polaridad +.
. Picornavirus: proteína Vpg unida al extremo 5´funciona como primer para la síntesis de ARN.

Dependencia de la célula/ replicación.

.Codifican (pero no incluída en el virión) una ARN polimerasa viral-ARN dependiente.
.Codifican enzimas capping (todos excepto Picornavirus).

Estrategias expresión génica.

. Genoma es una ARNm que se traduce inmediatamente post-infección.
. Genoma es copiado a ARN-, los cuales son opiados a más ARNm y genomas.
. Síntesis de una sola poliproteína que luego es clivada en proteínas individuales por proteasas.
 Virus ARN polaridad -
Orthomyxovirus-Paramyxovirus-Rhabdovirus

+ ARN
3´ 5´ 5´ 3´
- ARN

3´ 5´
3´ 5´
3´ 5´
- ARN

Configuración genómica.
.Genomas ARN- segmentados o no segmentados/ Arenavirus y Bunyavirus son ambisentido.

Dependencia de la célula/ replicación.

 Virus ARN doble cadena
Reoviridae (Rotavirus)

+ ARN ARNm
5´ 3´ 3´ 5´
3´ 5´
- ARN

ARNm

Configuración genómica.
. Genoma ARN segmentado.

Dependencia de la célula/ replicación.

. Requiere activación proteolítica en endosomas y lisosomas tardíos.
. ARN pol viral y otras enzimas necesarias para la síntesis de ARNm están empaquetadas en el virión.

Estrategias expresión génica.

. ARNm monocistrónico/ de cada segmento.
. ARNm es incorporado simultáneamente a la síntesis de la cápside.
 Virus ARN+ con intermediario ADN
Retroviridae (HIV)
retrotranscriptasa viral
5´ 3´ ADN dh + ARN
+ ARN

Configuración genómica.
. 2 copias de ARN+ unidas a un ARNt/primer.
. Virión contiene una retrotranscriptasa.
Dependencia de la célula/ replicación.
. ARN no funciona como ARNm.
. Genoma es molde para retrotranscripción en un ADN dc./ integración al genoma hospedero.
. ARNpol II celular transcribe el ADN en ARN.

Estrategias expresión génica.

. Regulación traduccional y postraduccional.
. Capacidad transformación oncogénica.
 Modelo viral: Influenza

Familia: Orthomyxoviridae

Estructura del virión:

• Glicoproteínas de superficie HA (hemaglutinina) y NA (neuraminidasa)

• Canal iónico M2
• Proteína de cápside M1
• Complejo ribonucleoproteico (vRNP): 8 segmentos de ARN simple hebra de polaridad
negativa (ARNss-).
Ecología y nomenclatura de Influenza A
Ciclo de replicación de Influenza
 Etapas del ciclo

1. Unión del virión via HA a residuos de ácido siálico (SA)

2. Ingreso por endocitosis mediada por receptor
3. Fusión de la membrana viral con la de la vesícula por la acidificación del endosoma y
liberación de las vRNP al citoplasma.
4 y 5. Transporte del genoma al núcleo para transcripción y replicación
6. Los ARNm virales viajan al núcleo para su traducción
7. Se forman los complejos de vRNP en el núcleo
8. Las vRNP junto con HA y NA se ensamblan en la superficie celular
9. El virión egresa por gemación
10. NA cliva el ácido siálico de la superficie celular y de la progenie viral, permitiendo su
liberación.
 Reconocimiento de receptor

SA en posición α2,6 predomina en el tracto respiratorio superior al que se une Influenza A

Influenza aviar se une a SA α2,3

Cambio genéticos de Influenza

Deriva antigénica:
Acumulación de mutaciones en
proteína de superficie de unión
a receptor

Salto antigénico:
causado por reordenamiento
de segmentos del genoma
Reordenamiento de segmentos da origen a cepas pandémicas