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• https://www.youtube.com/watch?v=gG7uCskUOrA
• “El dogma central define el paradigma de la biol. molecular.
Los genes se perpetúan como secuencias de ácido nucleico,
si bien actúan al ser expresados en forma de proteínas. La
duplicación es responsable de la herencia de la información
genética. La transcripción y la traducción son responsables
de la conversión de una forma a otra.”
La traducción del
RNA a proteína es
unidireccional.
GENOMA: información biológica necesaria para construir
y mantener un organismo
Streptococcus neumoniae
Smooth (S) virulent
Rough (R) avirulent
February, 1944 // JEM vol. 79 no. 2 137-158
El experimento de
Avery et al. (1944)
El principio transformante es el DNA
El experimento de Hershey-
Chase (1952)
Se marca
el ADN
Se marcan
las proteínas
DNA material
80% 35
S genético de
bacteriófagos
70% 32P
20% 35S
5’
La polimerización es un
proceso catalizado por
RNA o DNA polimerasas
en dirección 5’-3’
Direccionalidad
Por convención cuando se
escribe una secuencia siempre
5’-3’ de izquierda a derecha: Alpha phosphate forms a 5'-3'
phosphodiester linkage
5’-ACTG-3’ between sugars while the beta
and gamma phosphates
(pyrophosphate) are hydrolysed
to provide the energy source
3’ driving the polymerization
reaction
- Datos de Difracción de rayos X à naturaleza helicoidal del ADN
(Rosalind Franklin & Wilkins)
•Hélice regular, diámetro constante à Py enfrentada a Pu
•Distancia entre nucleótidos adyacentes
- Densidad del ADN à 2 polinucleótidos
- Proporción de G=C y A=T (Ley de Chargaff, A+G=C+T)
Franklin
https://www.youtube.com/watch?v=o_-6JXLYS-k
Antiparalelas
A=T
G≡C
right-
handed
B-form
Familia de estructuras de doble-helices de DNA tienen variaciones locales en:
• A, B son “right-handed”
• DNA usualmente en forma B
• RNA-DNA en forma A
•Perfil de absorción:
üPureza: relación
absorbancia 260/280 y
260/230
fenol, Solución de ADN pura : A260/280= 1.8-2
algunas
Solución de ADN contaminado con
prots, sales proteínas: A260/280 < 1.8
•Concentración:
üAbsorbancia= 1 => 50ug/ml (ADNdc)
ØDoble cadena altamente estable en condiciones fisiológicas
•Puentes de Hidrógeno (H-bonds) entre bases complementarias
Estabiliza
•Interacciones hidrofóbicas (stacking) entre bases apiladas
•Repulsión electrostática de cargas del esqueleto de fosfato-azucar Desestabiliza
Efecto
hipercrómico
Aumento de A260 à
NOTA: La Tm es una
medida de estabilidad de
la doble hebra
Depende de :
§ 1- conc. del DNA
§ 2- tiempo
§ 3- conc. de sales (buffer factor)
C 1 Cinética de
= reasociación es
C0 1 + kC0t bimolecular
Valores de Cot1/2 chicos indican que las secuencias complementarias están en alta conc.
(renaturalizan rápidamente)
Valores de Cot1/2 grandes indican que las secuencias complementarias están en baja conc.
(renaturalizan lentamente)
Qué ocurre si mezclamos cantidades iguales de ambos
genomas?
AAAAAAAAAAAAAAAA C= 1; N=16
ATATATATATATATATA C= 2; N=16
ATCATCATCATCATCA C= 3; N=16
=> N es determinado
directamente a partir del Cot1/2
Valor C: cantidad total de ADN por
genoma haploide
≈ 30% Moderadamente
Repetitivo (350 copias)
≈ 45%
(1 copia)
LAS PROPORCIONES DE
CADA TIPO DE
SECUENCIAS SON
ÚNICAS DE CADA
GENOMA
Una diferencia > 2 log indica diferentes poblaciones
§Análisis de la cinética de reasociación de los genomas (1970) à Curvas Cot
§Avances en secuenciación de genomas à Secuencia completa de genomas
§Intrones
§Secuencias intergénicas
§Elementos reguladores de genes
§Genes que codifican para RNA funcional
(miRNA, siRNA, snoRNA)
NOTA: Intrones se encuentran en todos los tipos de genes, incluyendo rRNA y tRNA. La
estructura del gen interrumpido es la misma en todos los tejidos, exones se unen en RNA en el
mismo orden que estaban en el DNA (proceso de splicing).
Todos los genomas
eucariotas contienen
genes interrumpidos. La
proporción baja en
levaduras, aumenta en
eucariotas inferiores
(mosca de la fruta) y es
alta en eucariotas
superiores (mamíferos).
Gen humano promedio: 27kb
con 9 exones
§ Se originan por:
§ i) errores en la replicación
§ ii) entrecruzamiento desigual
• iii) Microsatélites
• Unidades repetidas de 2-4 pb
• Segmentos de ADN <150 pb
• Simple Sequence Repeats (SSR): polimórficos,
marcadores moleculares
• Trinucleótidos (CAG, CCG): tipo de microsatélites
relacionados con enfermedades genéticas (X Frágil,
Huntington, Distrofia miotónica)
§ 1. Elementos móviles
Secuencia de DNA que puede moverse de manera autosuficiente a
diferentes partes del genoma de una célula (fenómeno conocido como
transposición)
CLASE I • 1.2) DNA transposones Se mueven directamente de una posición a otra en el genoma.
Usan una transposasa para " y pegarse en otro locus
ADN moderadamente repetitivo
§ 2. Genes, familias de genes
• 2.1) Genes rRNA
• E.coli: Hay idénticos genes de rRNA que se repiten
en tándem formando clusters con la unidad
• 7 copias dispersas de transcripción (precursor 18S-5.8S-28S)
separada por espaciadores no transcriptos.
• Eucariotas:
• >100 copias
• Grupos de copias
repetidas en tandem
• Genoma humano:
280 copias agrupadas en
5 clusters de 50 a 70 repet.
en 5 cromos. (polimórfico)
rRNA constituye
del 80 al 90% de la
masa de RNA total
de una célula
40s 60s
DNA moderadamente repetitivo
• 2.2) 5s rRNA
• aproximadamente 2000 genes en genoma humano en un único
cluster (chrom. 1)
• 2.3) tRNA
• 2.4) signal recognition particle RNA
• Ejemplo: 7SL RNA con 3copias y +100 pseudogenes
• 2.5) snRNA
• 2.6) Familias multigénicas
• Globina (cluster)
• Histona (dispersas)
• Tubulina
• Actina
• Inmunoglobulinas
• 2.7) Pseudogenes
El mayor componente del genoma humano consiste en
DNA repetitivo
4% 80% 15%
Los genes se expresan en niveles que varían ampliamente:
# copias nivel de expresión
En una célula
105 mRNA abundante (si su proteína es el mayor producto de una célula) dada, la mayoría
103 <10 mRNA moderadamente abundantes de los genes se
<10 >10.000 mRNA de baja expresión
expresa en
niveles bajos
ARN de transferencia (tRNA)
Fue la 1era
secuencia de
polinucleótido
s
determinada,
gracias a
estudios de
Robert Holley
en 1965
-RNA más pequeño (50-85 nt)
-Representan aprox. 15% del RNA
total de la célula
-Estructura secundaria y terciaria
conservada (hoja de trébol)
- CCA-3’. AA binding site
- D-loop . AA recog. site
- T-loop. Ribos. recog. site Es una cadena plegada de nucleótidos que
aparentan un cruce de carreteras
- Anticodon: -> mRNA
-Alto contenido de bases
modificadas (ver abajo)
*Interacciones
de stacking
entre bases
apiladas
contribuyen a
la
estabilización
de la forma L
• Estructura muy estable
• Evolutivamente muy conservado