Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Los tres procesos básicos que sufren cualquier pre-ARNm eucariota en su maduración son:
modificación 5´, modificación 3´ y la eliminación de intrones. De forma resumida:
*En todo ARNm de eucariotas y también de procariotas hay unas regiones en los extremos
que no se traducen a proteínas pero que no se eliminan (como los intrones) llamadas región
5´no traducida (5´UTR) y región 3´no traducida (3´UTR), estas regiones no se traducen, pero
como se verá si intervienen el proceso de la traducción.
El complejo dimerico tiene dos actividades, fosfatasa y ARNm guanililtransferasa. Uno de los
monómeros de ese dímero lo primero que hace es quitar el último fosfato del primer
nucleótido del extremo 5' del pre-ARNm, es decir tiene actividad fosfatasa. Lo que hace esta
primera enzima es quitar el fosfato gamma (γ), que es el primer fosfato. Después participa la
otra parte del complejo dimerico, que lo que hace es que a expensas de una molécula de GTP
transfiere una unidad de GMP a ese extremo 5' de manera que se libera pirofosfato y el GMP
queda unido al extremo 5' mediante un enlace guanosina-5'-5'-trifosfato, esta actividad
enzimática se llama ARNm guanililtransferasa. Por eso todos los ARNm maduros van a empezar
siempre por un nucleótido de guanina (GMP). El enlace guanosina-5'-5'-trifosfato protege al
extremo 5´del mensajero de ser degradado. A esta terminación se la denomina caperuza, o
cap. Posteriormente, ese extremo va a sufrir una serie de metilaciones (añadir grupos metilo,
CH3) en los primeros nucleótidos, por una proteína con actividad metiltransferasa, por lo que
podemos tener distintas terminaciones cap en función del número de grupos metilos
introducidos. Las metilaciones pueden ocurrir o bien en las bases o bien en los azúcares de los
nucleótidos. El grupo metilo es donado por la SAM (S-AdenosilMetionina) que va a regenerarse
gracias a la participación de la vitamina B12 y ácido fólico. Una vez que se ha formado esa
caperuza o cap y es metilada, se libera el complejo sintetizador de la caperuza y se une un
complejo proteico de unión a la caperuza que también protegen al extremo 5´del ARN
mensajero de ser degradado.
Como ya hemos visto, una de las dos cadenas de ADN de cualquier gen es complementaria a
la de su ARNm (la cadena molde), al ser complementarias, si en un tubo de ensayo en un
laboratorio se pusieran juntos el ADN de un gen y su ARNm deberían de unirse completamente
por la complementariedad de sus nucleótidos. Cuando se realizaron estos experimentos con
ADN de genes eucarióticos (ver figura) se comprobó que había regiones de su secuencia que
no existían el su ARNm. Ya que se observaron una serie de bucles formados solo por ADN (en
gris y numerados con letras en la figura). Es decir, los genes tenían regiones internas que no se
traducían a proteínas. A estas regiones se denominaron intrones y a las que si hibridaban
exones (en azul y numerados con números en la figura). Desde entonces los ARN se
clasificaron en dos tipos, pre-ARNm (con intrones) y ARNm maduro (ya sin intrones). Hay
algunas excepciones, los genes del interferon α y de las histonas no tienen intrones.
A continuación vamos a ver el mecanismo mediante el cual los intrones son eliminados de los
pre-ARNm.
Intrones de tipo I
No solo hay intrones en los ARNm también los hay en los ARNr (ribosómicos). Los intrones de
tipo I se encuentran en los genes de algunos ARNr. Es necesaria la presencia de un nucleótido
de guanina externo para eliminarlos. El nucleótido de guanina va a actuar como un nucleófilo
de manera que su OH actúa atacando la unión intrón-exón del centro 5´de ayuste rompiendo
el enlace fosfodiéster entre el último nucleotido del primer exón y el primero del intrón.
Quedando libre el OH del exón y el nucleótido de guanina unido al extremo del intrón. En la
segunda reacción el OH del extremo del exón que ha quedado libre ataca al centro 3’ de
ayuste rompiendo el enlace fosfodiéster entre el ultimo nucleotido del intrón y el primero del
siguiente exón, formándose uno nuevo enlace que une ambos exones y dejando el intrón libre
(con la guanina unido a su extremo).
Tres de los 4 ARNr de eucariotas se sintetizan juntos en forma de un único pre-rRNA llamado
45S, el cual se corta por endonucleasas específicas en tres fragmentos, los cuales también se
maduran los extremos, originando los ARNr (28S, 18S, 5’8S). El otro ARNr 5S se sintetiza de
forma independiente y solo se madura por los extremos.
Intrones de tipo II
Están presentes en genes que producen los ARNm nucleares. Químicamente el mecanismo es
idéntico a los intrones de tipo II, la gran diferencia es que está catalizado por un complejo de
enzimas, es decir no son de auto-ayuste. El ayuste requiere la participación de unas enzimas
del grupo de las ribonucleoproteínas (formadas por ARN y proteínas) que se unen al pre-ARNm
formando un complejo llamado ayustosoma. Los centros de ayuste 5´, 3´ y de ramificación se
caracterizan por poseer una determinada secuencia específica de nucleótidos. Estas secuencias
características de nucleótidos es la que es reconocida por las ribonucleoproteínas que
catalizan el proceso. Estas ribonucleoproteínas contienen pequeñas moléculas de ARN que
reconocen y se unen a los nucleótidos de los centros de ayuste 5´, 3´ y al centro de
ramificación mediante secuencias complementarias. Estos intrones normalmente empiezan
siempre por GU y terminan por AG. El centro de ramificación se caracteriza por tener la
adenina que inicia el proceso en el interior de una secuencia característica y conservada
llamada CURAY. Van a participar principalmente 5 ribonucleoproteínas en la formación del
ayustosoma (U1, U2, U4, U5, U6). U1 reconoce el centro de ayuste 5’ y se une a él; U2
reconoce el sitio de ramificación y se une a él, a continuación se unen también al resto de
ribonucleoproteínas formando el ayustosoma inactivo. Después entra el ATP que se hidroliza, y
el ayustosoma pasa a un estado activo y se encarga del proceso de ayuste. Aparte de los 5
ribonucleoproteínas mostradas van a participar otras proteínas más, formando un gran
complejo proteico que se puede apreciar por su gran tamaño incluso al microscopio
electrónico.
Como hemos visto, el procesamiento de este tipo de intrones depende mucho de las
secuencias de nucleótidos específicas que conectan los intrones y los exones, y también de la
del centro de ramificación. Las mutaciones en el ADN que provocan cambios en las secuencias
de nucleótidos de los centros de ayuste o ramificación, provocan que los intrones se procesen
de forma inadecuada porque no van a poder ser reconocidos por las ribonucleoproteínas que
lo procesan. Lo que va a alterar la secuencia de la proteína, en algunos casos provocando esta
alteración la pérdida de su función, lo que provoca enfermedades. Como es un tipo de anemia
o algunas de las enfermedades que están recogidas en la tabla siguiente.
Intrones de tipo IV
Se encuentran en algunos ARNt y es la única clase de intrones que experimenta corte y unión
por enzimas proteicas (no ribonucleoprotinas). Los intrones del tipo IV se eliminan de manera
diferente de los anteriores, no eliminan por reacciones de transesterificación sino por
proteínas específicas. Es decir, se eliminan mediante un corte endonucleotidico mediado por
una endonucleasa. Seguido del la unión de los exones catalizado por tres enzimas, una
nucleotido fosfodiesterasa en el centro 5´de ayuste; y una quinasa y una ligasa en el centro
3´de ayuste.
Los tres procesos de maduración del ARN que acabamos de ver (modificación 5´, modificación
3´ y la eliminación de intrones), se coordinan a través de la unión de las proteínas o enzimas
que catalizan dichos procesos al extremo CTD fosforilado de la ARN polimerasa. Es decir, a
medida que el pre-ARN mensajero se va sintetizando por la ARN polimerasa, este a su vez va
siendo procesado por este conjunto de proteínas que lleva unido a su extremo CTD fosforilado.
El ayuste alternativo
Un mismo pre-ARNm se procesa de forma distinta en función del tejido celular, mediante la
selección diferencial de las señales de ayuste. En el ejemplo de la figura el pre-ARNm del gen
de la proteína muscular troponina T tiene 5 exones y 4 intrones (A, B, C y D). En las células del
musculo liso no se reconocen los centros de ayuste que conectan el exón 4 a los intrones C y
D, y le elimina el exón 4 como si fuera parte de un intrón, lo que da lugar a una variedad de la
troponina T llamada troponina T isoforma α. En cambio en los otros tipos de células
musculares no se reconocen los centros de ayuste que conectan el exón 3 a los intrones B y C,
y le elimina el exón 3 como si fuera parte de un intrón, lo que origina una nueva versión, la
troponina T isoforma β.
La poliadenilación alternativa
Las diferencias que pueden producir estos cambios en la secuencia de la proteína que codifica
ese ARNm editado pueden ser varias:
- Cambio de aminoácidos.
Un ejemplo concreto de edición de ARNm es el que ocurre con el ARNm de una lipoproteína, el
cual en el hígado no se edita y en el intestino si. El ARNm en ambos órganos es de igual
longitud, pero el ARNm del intestino cambia (debido a una enzima citidina desaminasa) una C
por una U, lo que provoca que el triplete CAA (triplete que codifica la glutamina) ahora sea
UAA (triplete de stop), por lo que la traducción termina prematuramente en el intestino. Y
como consecuencia la proteína que se produce en el intestino es más corta y carece del
receptor de colesterol, que si está presente en la proteína que se produce en el hígado.