Nuevos algoritmos modificados de diagnóstico infección por Clostridium difficile: mejora de

especificidad empleando leucocidinas y Staphylococcus aureus resistente a meticilina

Entre Octubre y Diciembre de 2022 se emplearon nuevos algoritmos modificados de 2 y 3 pasos

(figuras 1 y 2) en el diagnostico de infección por Clostridium difficile (ICD) para comprobar su
rendimiento.

Método: para su comparación se empleó como Gold Standar el algoritmo clásico en 2 pasos. Estos
nuevos algoritmos se diferencian de los clásicos en la repetición de la inmunocromatografía (ic) de
GDH con resultado positivo, tras procesar la muestra con una solución de leucocidinas y
Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM) según la patente P202330734 (Diagnosis of
Clostridium difficile: a wrong algorithm and an improvement in immunoassays, peer review): en el
nuevo algoritmo modificado en 2 pasos inmediatamente tras GDH positiva, se realiza ic
GDH/leucocidinas+SARM donde el resultado positivo se confirma con PCR, el resultado negativo, se
da como negativo. En el nuevo algoritmo modificado en 3 pasos igualmente se realiza la ic
GDH/leucocidina+SARM en muestras ic GDH+: si el resultado es negativo, se da como negativo, si es
positivo se realiza ic Toxina y en función de esta la PCR.

Resultados: tras procesar 660 muestras de heces, 77 muestras resultaron positivas a GDH, y de estas
solo 40 positivas en la PCR (Genexpert C.difficile/Epi), usando el algoritmo clásico en 2 pasos. Tanto
el nuevo algoritmo modificado en 2 pasos como en 3 pasos, fueron coincidentes en resultados al 100%.
La diferencia principal fue la reducción de PCR necesarias respecto al algoritmo clásico en 2 pasos: el
nuevo algoritmo modificado en 2 pasos permitió una reducción del 44% en las PCRs necesarias, con
los mismos resultados, y el nuevo algoritmo modificado en 3 pasos permitió una reducción aún mayor,
del 64% en las PCRs necesarias, con iguales resultados. Esta mejora se debe al aumento de la
especificidad de la GDH tras el tratamiento con leucocidinas+SARM, al disminuir los FP de la ic.

2 pasos modificado: 77 GDH positivas, de estas 43 GDH/leucocidinas+SARM positivas, y de estas 40

PCR positivas. Reducción de PCR del 44% (40 en lugar de 77).

3 pasos modificado: 77 GDH positivas, de estas 43 GDH/leucocidinas+SARM positivas, 16 ic Toxina

positiva, y de las 27 Toxina negativa 24 PCR positiva. Reducción PCR del 64% (24 en lugar de 77).

Discusión: el tratamiento de muestra con leucocidinas+SARM es simple, barato y rápido (una hora
aproximadamente, la mayor parte de incubación) y permite emplearla en otras ic (como la de Toxina),
pero es un proceso casero no disponible aún comercialmente en ningún kit, por lo tanto su
implementación en un laboratorio de microbiología para el diagnóstico es una incógnita. Hay muestras
que no son susceptibles de beneficiarse de este proceso: muestras muy purulentas o muy
sanguinolentas, en este estudio un 3,8% de las muestras, que requirieron una incubación prolongada en
la solución de leucocidinas+SARM: 3 horas en lugar de 1 hora. Para este tipo de muestras,
dependiendo de la urgencia, pueden ser más o menos utiles estos nuevos algoritmos modificados.