VALIDACIN DE

METODOS
ANALITICOS
ROSA MARIA HIGUERA ARDILA
QUIMICA ESPECIALISTA EN INGENIRIA AMBIENTAL

VALIDACIN
NUMERAL 5.4.5.1
LA VALIDACIN ES LA CONFIRMACIN POR
EXAMEN Y SUMINISTRO DE EVIDENCIA OBJETIVA
DEL
CUMPLIMIENTO
DE
LOS
REQUISITOS
PARTICULARES PARA UN USO ESPECFICO.

NORMA NTC-ISO-IEC 17025

VALIDACIN
TCNICA:

aplicacin de un PROCEDIMIENTO:

principio cientfico del cual se

ha demostrado

su utilidad

para

informacin

proveer

analtica. Ej: AA .

conjunto

de

instrucciones detalladas necesarias

para llevar a la prctica un mtodo,
presentadas en forma escrita.

PROTOCOLO:

Conjunto

de

MTODO: Adaptacin de una

instrucciones que se deben seguir

tcnica

sin

para

especfica
determinado.

una
con

medicin
un

fin

excepcin

resultados

uniformes

procedimiento
laboratorio.

para
en

garantizar
de

un

cualquier

Seleccion
Metodos

Metodos Normalizados

Ultima Version Disponible

de

los

Metodos No Normalizados
Validados

Responder a las necesidades del cliente .

Informar al Cliente del metodo elegido
Apropiado para los ensayos que se
realizan

 Mtodos no estandarizados
Mtodos desarrollados
Mtodos estandarizados usados fuera del
alcance propuesto
Mtodos estandarizados
modificados

ampliados

VERIFICACION
Es comprobar que el mtodo
establecido en el laboratorio
funciona
para
las
condiciones disponibles en
el laboratorio

OBJETIVO DE LA
VALIDACIN O
VERIFICACION
Demostrar que el mtodo utilizado por un
laboratorio es adecuado para los ensayos que
realiza.
Tambin demostrar que las modificaciones que
pudieron haberse realizado no afectan su
desempeo, ni la confiabilidad de los
resultados-.

GRADO DE VALIDACION

CARACTERISTICAS DE LA
VALIDACIN

PARAMETROS DE
VALIDACION O
Selectividad
VERIFICACION
Especifico para el analito de inters

Sensibilidad

Aplicabilidad
Incertidumbre
de la medicion

Recuperacion
Repetibilidad

Exactitud
Sesgo y recuperacin

Presicion

Rango de
aplicacion

Limite de
deteccin
del mtodo
Responder a necesidades del cliente

CARACTERSTICAS DEL
MTODO
QUMICOS:
VOLUMTRICO
GRAVIMTRICO

TIPO DE
INSTRUMENTACI
N

PRECISIN
POTENCIOMTRIC
NECESARIA
O
GRADO DE
MICROBIOLGICO
SENSIBILIDAD
ESPECTROFOTOM TIEMPO ANLISIS
ETRICO
COSTO ANLISIS

ETAPAS DE LA
VALIDACION
SELECCIN DEL MTODO:
Rango de aplicacin de acuerdo a las necesidades del
laboratorio
Resultados reproducibles
Que sea econmico
Que los reactivos y materiales se puedan conseguir
fcilmente en el mercado
Que se cuente con los equipos
Que los residuos que se generen se puedan eliminar
fcilmente.

ETAPAS DE LA
VALIDACION
Una vez seleccionado el mtodo se debe
tener una copia del procedimiento
analtico para conocer el mtodo que se
va a aplicar, con el fin de llevar a cabo
el proceso.
Fundamento del mtodo: Se debe
elaborar un resumen de la parte qumica
y fsica del mtodo.

ETAPAS DE LA
VALIDACION
INVENTARIO DE EQUIPOS MATARIALES Y REACTIVOS.
Se debe tener un listado:
Reactivos : que sean grado analtico, que los patrones
para la estandarizacin sean trazables a la NIst
Equipos: Se debe asegurar que los equipos se
encuentran funcionando perfectamente y que estn
calibrados
Materiales : Se debe contar con los materiales necesarios
para la validacin. El material de vidrio para mediciones
ser clase A

ETAPAS DE LA
VALIDACION

Plan de validacin

Realizar
un plan para la preparacin de
reactivos, estndares, muestras y muestras
adicionadas de acuerdo con el tiempo de vida
til de cada uno y la estabilidad del analito.
Se debe contar con un formato de captura de
datos

ETAPAS DE LA
VALIDACION
PARTE EXPERIMENTAL O MEDICIONES (PREVALIDACIN)
Antes de iniciar el proceso de validacin se debe establecer por
mediciones programadas:
Lmite de deteccin instrumental
Lmite de deteccin del mtodo
Intervalo lineal del mtodo
Linealidad
Sensibilidad
Variables instrumentales o metodolgicas particulares del
laboratorio que puedan afectar el proceso de medicin en aquellos
aspectos en que no se pueda seguir estrictamente el mtodo.

PREVALIDACIN
LIMITE DE DETECCI INSTRUMENTAL
Lmite de deteccin instrumental (LDI): concentracin de
analito que produce una seal superior a cinco veces la
relacin seal/ruido del instrumento; se ha establecido en
1,645 veces el valor s ( desviacion estndar) de los
anlisis de blancos. Resulta muy til para valorar la
concentracin de analito necesaria para producir una
seal que permita calcular un LDM estimado.

1,645 s

Bk

PREVALIDACIN
LIMITE DE DETECCION DEL METODO
LDM
Concentracin de analito que, cuando se
procesa a travs del mtodo completo,
produce una seal con una probabilidad del
99% de ser diferente del blanco

LDM C t s
Eb

n 1

Se aade el analito al agua grado reactivo o

a la matriz de inters para obtener una
concentracin (CEb) prxima al LDM
estimado y se analizan diez partes de esta
solucin

PREVALIDACIN
Valores de la distribucin t (99%) para
calcular LDM
gl

99%

gl

99%

gl

99%

gl

99%

31,82

11

2,72

21

2,52

40

2,42

6,96

12

2,68

22

2,51

50

2,40

4,54

13

2,65

23

2,50

60

2,39

3,75

14

2,62

24

2,49

70

2,38

3,36

15

2,60

25

2,48

80

2,37

3,14

16

2,58

26

2,48

90

2,37

3,00

17

2,57

27

2,47

100

2,36

2,90

18

2,55

28

2,47

2,33

2,82

19

2,54

29

2,46

10

2,76

20

2,53

30

2,46

PREVALIDACIN

INTERVALO LINEAL

Intervalo en el cual la respuesta del

instrumento
o
seal
es
directamente
proporcional a la concentracin y se
relacionan mediante una ecuacin lineal
Aplica para mtodos espectrofotomtricos y
electromtricos, principalmente
No aplica para volumetra ni gravimetra
Para gravimetra depende de condiciones
particulares y del instrumento de medida

PREVALIDACIN
LINEARIDAD
Se refiere a la proporcionalidad entre la
concentracin y la seal producida por
el instrumento y se debe verificar si en
el laboratorio se cumple el rango y tipo
de linealidad que reporta la literatura
del mtodo.

PREVALIDACIN
SENSIBILIDAD:
Es una medida del factor de respuesta del
instrumento
como
una
funcin
de
la
concentracin.
Normalmente se mide como la pendiente de la
curva de calibracin.

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
Bk

Blanco de reactivos y procedimiento

Eb

Estndar de concentracin baja, ~LDM

Em

Estndar de conc. ~ 50% del rango

Ea

Estndar de conc. ~ 90% del rango

M1

Muestra natural conc. ~ <50% del rango

M2

Muestra natural conc. >>M1

M1Ab M1 adicionada con ~30% del valor de M1

M1Aa M1 adicionada ~50% del valor de M1
MC

Muestra o estndar certificado

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
Antes de iniciar las mediciones, el analista
debe garantizar que el mtodo est montado
y que el equipo funciona en condiciones
ptimas para la lectura de muestras. La parte
experimental consiste en la corrida de las
muestras y el registro de los resultados
para cada grupo diario de ENSAYOS (ensayo
No 1, ensayo No 2, ...ensayo No 7).
En total se deben correr un mnimo de 7
ensayos en das diferentes que pueden ser
continuos o alternos, con una diferencia
mxima de 3 das entre un ensayo y otro

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
CONDICIONES
Cada grupo de muestras se analiza en el
mismo da
Es recomendable que el proceso se inicie
siempre a la misma hora y temprano para
que se pueda cumplir con el anlisis de
todas las muestras (posibles imprevistos)
Todo el material deber ser lavado de
acuerdo con el procedimiento establecido
para cada uso y deber ser sometido a la
revisin o control de calidad respectiva

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
Es recomendable que el procedimiento sea
efectuado por un profesional Qumico o con
la supervisin del mismo
El formato de captura de datos se deber
diligenciar en el mismo momento en que se
obtienen los datos (no transcribir, copiar,
etc.)
Las cifras erradas se deben corregir
inmediatamente dejando constancia por
parte del analista en forma clara en que
consisti el error

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
ANLISIS ESTADSTICO DE LOS
RESULTADOS
Se obtienen 14 datos por cada estndar
muestra

RECHAZO DE DATOS
Ordenar los datos menor y mayor (xbajo, xalto)

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
ANLISIS ESTADSTICO DE LOS
RESULTADOS
Calcular T como: T = (xalto - xprom)/s para un
valor alto; T = (xprom - xbajo)/s para un valor
bajo
Si T calculado > T de tablas, el dato se
rechaza
Se pueden rechazar como mximo dos
datos; si la aplicacin del criterio de
rechazo da positiva para ms de dos datos,

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
Valores crticos T para rechazo de datos
n

95%

95%

95%

95%

1,15

11

2,24

19

2,53

27

2,69

1,46

12

2,29

20

2,56

28

2,71

1,67

13

2,33

21

2,58

29

2,72

1,82

14

2,37

22

2,6

30

2,74

1,94

15

2,41

23

2,62

40

2,87

2,03

16

2,44

24

2,64

50

2,96

2,11

17

2,47

25

2,66

60

3,03

10

2,18

18

2,50

26

2,67

100

3,21

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
CLCULO DE VARIABLES QUIMIOMTRICAS
PROMEDIO
n

x
i 1

Calcular el promedio de los 14 datos o

de los que quedaron despus del
rechazo de datos

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION

EXACTITUD: Es el grado de aproximacin entre

el valor obtenido experimentalmente y el valor
real o aceptado; normalmente se expresa en
trminos de error. Se tendrn como referencia
los Patrones preparados en el laboratorio, y por
lo menos un patrn externo CERTIFICADO. La
concentracin de estos patrones deber estar
localizada dentro del rango de aplicacin del
La
delexactitud
mtodo expresada como el porcentaje de error,
se calcula por:
X exp X real
% Error
100
X real

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
PRESICIN:
Indica el grado de concordancia entre los
resultados obtenidos para rplicas de una
misma muestra, aplicando el mismo
procedimiento
experimental
bajo
condiciones prefijadas. Usualmente se
expresa en trminos de la DESVIACIN
ESTNDAR (S). Otra forma de expresar la
precisin es la Desviacin Estndar Relativa
o COEFICIENTE DE VARIACIN (CV), que se
calcula :
n

(x
i1

x
)
i

n -1

CV s100
x

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION
RECUPERACIN: Es la capacidad que
tiene un procedimiento analtico para
determinar
cuantitativamente
una
especie qumica que ha sido adicionada
a una muestra. Se expresa como
Porcentaje (%R) y se calcula como:
%R M

C MA C M
100
CA

donde:
CM = concentracin promedio de la muestra no adicionad
CMA = medida de la concentracin en la muestra adicionad
CA = concentracin conocida adicionada a la muestra.

PROCEDIMIENTO DE
VALIDACION

MUESTRA ADICIONADA:
Es una muestra natural o real a la cual se le ha
adicionado una cantidad conocida del analito que se
estudia . Esta adicin debe hacerse en la forma
prevista en el diseo de las condiciones de
estandarizacin para que sea reproducible.