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Universidad de los Andes

Facultad de Ciencias
Escuela de Química
Laboratorio de Química Orgánica

Informe No. 9

Cromatografía en columna

Díaz S, Dennys G.

V-26.492.264

Febrero, 2024.

Práctica No. 9 Cromatografía en columna

Febrero, 2024.
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Tablas de resultados y discusiones

Datos de la columna

 Vidrio
 0,7 cm de diámetro
 30,0 ml de reservorio

Datos de los solventes

 Diclorometano
 éter de petróleo (36-60 ºC)

Analitos

 Mezcla de b-caroteno y licopeno

 Pasta de tomate 15,0 g
 Zanahoria 9,77 g

Datos del absorbente

 Silica gel 60 (70-230 mesh) scharlan 2,00 g

Desarrollo de la practica

Esta practica tuvo como objetivo la separación entre el licopeno y el b-caroteno, se ira desglosando paso a paso
los datos obtenidos de mencionada separación.

Separación de los pigmentos,

Para la separación fue necesario realizar un proceso por cromatografía de columna, se ensamblo la bureta
adecuadamente, posteriormente se agregó una mezcla de b-caroteno y licopeno en el cabezal siendo absorbido
por el gel silica utilizada, se comenzó empleando una mezcla de 0,5:9,5 de diclorometano y éter de petróleo
siendo esta combinación más a fin con el b-caroteno que fue la primera sustancia en salir de la columna. Ver la
imagen 1.

Imagen 1. Comienzo de la separación por cromatografía en columna.

Práctica No. 9 Cromatografía en columna

Febrero, 2024.
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Esto ocurre debido a que el b-caroteno tiene una estructura más pequeña que el licopeno, en cuanto al área
superficial. Esto la hace más débil y así mejor absorbida por la silica. El producto obtenido fue recolectado en
fracciones en tubos de ensayo y se observó la presencia de un color amarillo característico del b-caroteno. Ver
imagen 2.

Imagen 2. Muestras de la separación

En la imagen número 2, es necesario destacar que de izquierda a derecha se fuero tomando las muestras, esto
explica el hecho de que el color va de un amarillo oscuro a uno claro, esto debido a que el primer tubo de ensayo
contiene la muestra más concentrada y pura, a medida que se fue llevando la separación quedaba menos b-
caroteno en la columna, así mismo como se empezaba a desplazar el licopeno. Si bien, el licopeno de empieza
a desplazar, normalmente es necesario añadir una mezcla 1,5.8,5 de los mismos solventes para desplazarse, sin
embargo, en esta experiencia la columna presento un atasco la cual impidió el paso del solvente hasta un punto
donde dejo de gotear, por lo cual, se preparó un montaje al vacío que hizo que no fuera necesario este último
solvente. Así finalmente se extrajo el licopeno ver imagen 3. Donde esta vez la intensidad del color fue en aumento
de izquierda a derecha, hasta llegar a la muestra final donde se asumen que se encontraba el licopeno con mayor
pureza.

Imagen 3. Muestras de la separación.

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Tabla 1. Tabla de observaciones

Tubo de ensayo Compuesto Observaciones

1 b-caroteno Tonalidad amarillo oscuro (usado

para el UV)

2 b-caroteno Tonalidad amarillo

3 b-caroteno Tonalidad amarillo claro

4 b-caroteno Tonalidad amarillo claro

5 Licopeno Tonalidad naranja claro

6 Licopeno Tonalidad naranja claro

7 Licopeno Tonalidad naranja oscuro

Es menciona el hecho de que durante la practica la columna presento una inconsistencia la cual impidió la
totalidad de la extracción, donde para terminar la experiencia se hizo un montaje en vacío, por lo cual no se
obtuvieron tubos de ensayo de color transparente indicando la separación de la mezcla.

Cromatografía en capa fina,

Obtenidas las muestras de la separación de capa fina de los componentes originales de la mezcla y de los
productos separados para verificar la eficiencia de la separación se obtuvo,

Tabla 2. Resultados de la cromatografía en capa fina

Cantidad Distancia
Frente del solvente
Solvente Compuesto de recorrida RF calculado
(cm)
manchas (cm)
B- caroteno
recuperado 1 2,0 4,0 0,50
muestra 1
B- caroteno
recuperado 1 1,7 4,0 0,42
muestra 3
B- caroteno
Diclorometano recuperado 1 1,0 4,0 0,25
y éter de muestra 4
petróleo 1,0 0,25
Mezcla 2 4,0
1,9 0,47
Licopeno
recuperado 1 1,3 4,0 0,32
muestra 5
Licopeno
recuperado 1 1,0 4,0 0,25
muestra 6

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Licopeno
recuperado 1 1,0 4,0 0,25
muestra 7

Con los resultados obtenidos en la tabla 1, se puede observar como el b-caroteno tiene más afinidad con el éter
de petróleo, por lo cual hace de mejor solvente, para el licopeno si bien tiene afinidad es mucho menor, y en la
placa donde se realizó la muestra se puede ver bajo la forma de separación como se distorsiona el licopeno. Ver
imagen 4.

Imagen 4. Muestra de cromatografía en capa fina

Comparación de los espectros UV-visible,

B- caroteno, se realizó un espectro uv-visible para caracterizas los productos, y se evidencia que en el espectro
del b-caroteno dos picos con los siguientes valores 469,0 nm y 444,0 nm (ver espectro en la imagen 6), es decir
que el rango de absorción del compuesto está en el rango de los colores azules y verdad, de forma que
ópticamente el color observado es un amarillo.

Imagen 6. Espectro UV-visible del b-caroteno

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Por otra parte, el licopeno presenta tres picos, 510nm, 470nm y 440 (ver espectro en la imagen 7), es esta
pequeña variacion en la intensidad de los colores es el que distingue su color rojizo . estos dos compuestos
absorben radiacion en la region visible de espectro electromagnetico debido a los enlaces conjugados que
presenta en su estructura.

Imagen 7. Espectro UV-visible del licopeno

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Conclusiones

 Se logró separar el licopeno y el b-caroteno por cromatografía de columna, debido a la diferencia de

velocidad de cada uno de los compuestos, en este caso se logró separar primero el b-caroteno debido a
que es menos polar que el licopeno
 En el espectro UV-visible se pudieron caracterizar los dos compuestos, debido a la absorción en la
región visible del espectro electromagnético que ambos compuestos presentan debido a los enlaces
conjugados
 En la cromatografía de capa fina se pudo observar el b-caroteno, mientras que el b-caroteno no se logró
observar debido a que estaba muy diluido para la muestra patrón

Bibliografías

1. 2. Perry, R., y Green, D., (1992). Manual del ingeniero químico. Sexta edición. México, D. F. –México:
McGraw-Hill/Interamericana Editores, S.A, de C.V. (Pag. 17-4)
2. Martínez P. H. Guía de laboratorio de química orgánica 1
3. Uzcategui J. Guía de laboratorio de química orgánica 1a. Mérida – Venezuela: Universidad de Los Andes.

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Anexos

1. Imagen del espectro de absorción

Imagen 8. Espectro de absorción.

Disponible en: https://edea.juntadeandalucia.es/bancorecursos/file/e400f315-4809-4cfb-b9d1-

1aba291dd86a/1/es-
an_2018061312_9100900.zip/3_espectro_de_absorcin_y_emisin.html?temp.hn=true&temp.hb=true

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