Organoides de Musculo esquelético
Roberto Murillo Arredondo
Biotecnología
Introducción
Los organoides de músculo esquelético
son un reto para la medicina actual, ya que
la complejidad organizacional y
fisiológica que tiene el musculo
esquelético dentro del cuerpo humano
constituyen un gran reto para la creación
de organoides. Los organoides musculares
son buscados por los científicos con la
finalidad de poder modelar enfermedades
degenerativas del musculo, además
interacciones de fármacos y de
conocimiento de mecanismos de
regeneración celular muscular, ya que,
hasta la fecha, aún no se conoce todo el
proceso de regeneración muscular ni los
factores a que se active o desactive este
proceso. Es por ello por lo que se hace un
análisis de todos los mecanismos e
ingredientes necesarios para poder crear
un organoide medianamente funcional.
Tipos de células empleadas para la
creación de los organoides
Las células que se emplean en la
actualidad para la creación de organoides
musculares son las células madre
pluripotentes humanas (hPSC por sus
siglas en inglés), que después de una serie
de manipulaciones moleculares son
diferenciadas en las células generadoras de
las fibras musculares, estas células son las
células madre progenitoras miogénicas o
también conocidas como las células
satélites (SC por sus siglas en inglés).
Figura [1]
Figura 1. Activación de las células madre
musculares para llevar a la regeneración
muscular.
Marcadores celulares empleados para la
identificación de las células musculares
Para la generación de los organoides se
dividen en dos etapas: 1) La activación de
la vía de señalización para diferenciación
a células progenitoras de musculo
(Inducción mesodérmica paraxial) Y
2)Crecimiento y producción de la células
fibrosas musculares para crear el
organoide. Durante la primera etapa los
marcadores que se analizan son para
expresión de marcadores de
pluripotencialidad: factor de transcripción
de unión a octámero 4 (OCT4), NANOG,
la expresión Brachyury (marcador de
mesodermo), factor de transcripción T-
Box 6 ( TBX6), y mesogenina 1 (MSGN1;
marcadores presomíticos). Para
caracterizar aún más la diferenciación
mesodérmica paraxial, el marcador TBX6,
demuestra compromiso mesodérmico
paraxial inicial exitoso.
En la segunda etapa, que es la etapa de
cultivo celular, los marcadores
progenitores miogénicos, PAX3 y PAX7,
se expresarían durante la especificación
miogénica. Además, los factores de
transcripción reguladores musculares
(MRF), como la proteína de determinación
de mioblastos 1 (MYOD) y la miogénica
(MYOG), son fundamentales para la
determinación de células progenitoras
miogénicas y la diferenciación terminal.
En la figura 2 se puede ver la relevancia de
estos marcadores en las diferentes etapas
de la diferenciación muscular.
Figura 2. Algunos marcadores en sus
respectivas etapas de diferenciación de las
células musculares.
Factores que se agregan al cultivo y vías
de señalización que se regulan para la
generación de organoides musculares.
Se hace una inducción directa,
promoviendo la diferenciación
mesodérmica paraxial con activación de la
vía de WNT, inhibición de la proteína
morfogenética ósea (BMP) para evitar
creación de células óseas y señalización
del factor de crecimiento de fibroblastos 2
(FGF2) para generar células presomíticas
en condiciones de cultivo 3D. Los
organoides se someten a la aplicación de
factores de crecimiento para promover la
diferenciación miogénica. El factor de
crecimiento de hepatocitos (HGF) y el
factor de crecimiento similar a la insulina
1 (IGF1) se agregan a los medios de
especificación miogénica para estimular la
generación de células musculares. En la
figura 3 se puede ver el proceso en periodo
de tiempo para la creación de un organoide
muscular.
Figura 3. Proceso de activación de la vía
de WNT y agregación de los factores de
crecimiento.
Matriz celular usada como base para el
cultivo
En el pasado, todos los organoides
musculares se hacían en vitro y con un
alcance de crear organoides en 2D, ya que
no se sabía cómo se podía hacer para crear
organoides en 3D, además de que no se
tenía la tecnología necesaria para hacerlo.
En la actualidad ya se busca hacerlos 3D,
y para esto se emplea Matrigel reducido en
factor de crecimiento para proporcionar un
entorno para mejorar la organización 3D y
luego se transfiere a una placa de seis
pocillos en un agitador orbital. El Matrigel
es el nombre comercial de la matriz de la
membrana basal solubilizada secretada por
las células de sarcoma de ratón
Engelbreth-Holm-Swarm (EHS)
producidas por Corning Life Sciences.
Matrigel se parece al entorno extracelular
de la membrana basal rico en
laminina/colágeno IV que se encuentra en
muchos tejidos y los biólogos celulares lo
utilizan como sustrato ( matriz de la
membrana basal ) para el cultivo de
células. Los principales componentes de
Matrigel son proteínas estructurales
como laminina , nidógeno , colágeno y
proteoglicanos de sulfato de heparán que
presentan a las células cultivadas las
secuencias peptídicas adhesivas que
encontrarían en su entorno
natural. También están presentes factores
de crecimiento como TGF-beta y EGF que
previenen la diferenciación y promover la
proliferación de muchos tipos de
células. También está disponible un
Matrigel con factor de crecimiento
reducido, este es el que se utiliza para la
generación de los organoides musculares.
Reactor biológico o tipo de cultivo en
que se realiza
En este caso, la mayoría se los organoides
musculares se hacen en vitro, a través de
que matrices como Matriagel. En algunos
casos se puede hacer en reactores
biológicos, pero esto casi no se hace
debido al costo que ello representa y la
complejidad alta. Matriagel es el
mecanismo de cultivo conocido como
andamios y es el mas utilizado en la
producción de órganoides musculares.
Alcances y limitaciones de los modelos
actuales
En la actualidad, ya es posible la creación
de organoides 3D funcionales, que puedan
imitar el proceso de regeneración muscular
y como este reacciona ante diferentes
fármacos y toxinas. Sin embargo, el
musculo es mucho más complejo ya que se
encuentra vascularizado e inervado, por lo
que este proceso de regeneración muscular
e reacción a los fármacos y demás no es del
todo completa y sincera, ya que le hace
falta parte del flujo sanguíneo y la
interacción nerviosa. Para que sea un
modelo confiable, se debe de inervar y
vascularizar el organiode, en lo que estos
dos procesos son sumamente complejos,
ya que, al ser un órgano altamente
organizado, es muy complicado que se
lleven a cabo y se hagan de manera
correcta, pero ya hoy en día se esta
trabajando en dichos procesos.
Bibliografía.
[1] Shin, M.-K., Bang, J. S., Lee, J. E.,
Tran, H.-D., Park, G., Lee, D. R., & Jo, J.
(2022). Generation of skeletal muscle
organoids from human pluripotent stem
cells to model myogenesis and muscle
regeneration. International Journal of
Molecular Sciences, 23(9), 5108.
https://doi.org/10.3390/ijms23095108
[2] Jalal, S., Dastidar, S., & Tedesco, F.
(2021). Advanced models of human
skeletal muscle differentiation,
development and disease: Three-
dimensional cultures, organoids and
beyond. Current Opinion in Cell Biology,
73, 92-104.
https://doi.org/10.1016/j.ceb.2021.06.004
[3] Jiang, Y., Torun, T., Maffioletti, S.,
Serio, A., & Tedesco, F. (2022).
Bioengineering human skeletal muscle
models: Recent advances, current
challenges and future perspectives.
Experimental Cell Research, 416(2),
113133.
https://doi.org/10.1016/j.yexcr.2022.1131
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