ORGANOIDES EN UN CHIP

Ana Herrera; Angie Lizcano; Paola Medina; Milena Pabón; Erika Sanchez; Frank Suarez; Liliana Vega; Wendy Villalba.
Biotecnología II - Microbiología
ORGANOIDES EN UN CHIP

Estudios recientes han demostrado

una serie de órganos en miniatura
autoorganizados derivados de
células madre, denominados
organoides, que replican las
características estructurales y
funcionales clave de sus
contrapartes in vivo.
En los últimos años se han observado progresos considerables hacia la explotación de las propiedades
autoorganizadas de las células madre pluripotentes o adultas para generar construcciones multicelulares
organotípicas conocidas como organoides.

Los métodos convencionales de Factores de

formación de organoides se basan crecimiento
en:

Los investigadores de la biología de células madre y desarrollo están formando alianzas con
ingenieros y científicos físicos para desarrollar tecnologías in vitro avanzadas para la
investigación de organoides y así abordar limitaciones.
¿QUÉ SON ÓRGANOS EN UN CHIP?

Dispositivos de cultivo celular El primer paso es entender la

microfabricados diseñados para anatomía del órgano objetivo y
modelar las unidades reducirlo a los elementos básicos
funcionales de los órganos esenciales para la función fisiológica.
humanos in vitro. En general, la Unidades funcionales examinadas
para identificar características clave:
construcción de cualquier
• diferentes tipos de células,
órgano en un sistema de chip se • organización estructural y
guía por principios de diseño • microambientes bioquímicos y
basados en un análisis físicos específicos de órganos.
reduccionista de su órgano
objetivo.

Por ejemplo, la
unidad
alveolar-capilar
del pulmón
Fig. 1. Principios de diseño de
Organ-on-a-chip.
(A) El análisis reduccionista de un
órgano diana (pulmón) identifica los
alvéolos como la unidad funcional
compuesta de células epiteliales y
endoteliales separadas por un
delgado intersticio. (B) Se construye
un modelo análogo a partir de tres
capas para acercar estos dos tipos de
células a la proximidad fisiológica. (C)
Para imitar la actividad mecánica
inducida por la respiración, las
células se estiran cíclicamente
aplicando vacío (aspiradora) a las
cámaras laterales.
¿QUÉ PUEDEN HACER LOS ÓRGANOS EN UN CHIP PARA LOS ORGANOIDES?

LOS ÓRGANOS EN UN CHIP Y LOS ORGANOIDES REPRESENTAN DOS ENFOQUES

FUNDAMENTALMENTE DIFERENTES PERO COMPLEMENTARIOS HACIA EL MISMO
OBJETIVO.

LA TECNOLOGÍA SE BASA EN:

1. Conocimiento de los órganos humanos para diseñar

2. El microambiente del órgano que se controlan con precisión.

LOS ORGANOIDES
Siguen programas de desarrollo intrínsecos y se desarrollan a partir de células madre autoorganizadas para
reproducir las propiedades estructurales y funcionales clave de sus contrapartes in vivo.

Los investigadores están explorando ahora la posibilidad de

combinar sinérgicamente las mejores características de cada
enfoque para desarrollar una tecnología in vitro más potente.
DESAFIOS DE LOS ORGANOIDES EN UN CHIP.
DESAFÍO UNO:
Control Microambiental De Organoides

Estrategia para la construcción de modelos organoides es:

CULTIVAR CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES O ADULTAS EN

UN ENTORNO 3D.

Aunque las técnicas convencionales de cultivo 3D

proporcionan un medio simple y eficaz para producir
organoides en un entorno de laboratorio

VENTAJAS:

Su simplicidad y facilidad de uso a menudo vienen a expensas

de un control preciso.

En esta sección, profundizamos en este problema e introducimos soluciones emergentes proporcionadas por la
tecnología órgano en un chip.
Control del suministro de nutrientes

Los organoides en el cultivo 3D dependen únicamente de la difusión pasiva

para recibir nutrientes y oxígeno y eliminar los productos de desecho.

A medida que los organoides crecen, el transporte difuso se vuelve insuficiente

para satisfacer sus crecientes necesidades metabólicas, y finalmente no puede
apoyar su crecimiento y maduración. Este problema a su vez plantea la cuestión de
cómo los embriones en el cuerpo hacen frente con las altas demandas metabólicas
del desarrollo de órganos.

La vascularización de los organoides está emergiendo como una estrategia prometedora

para abordar el problema del suministro limitado de nutrientes y la vida útil en los
modelos de organoides tradicionales.
Control del Microambiente Biofísico

Embrión en desarrollo
 Plataformas de microingeniería
mecánicamente accionables
pueden Generar y Aplicar fuerzas
mecánicas in vivo a los
Las fuerzas de
F tracción generadas organoides.
u
por una sola célula .
e La falta de este control
r
biomecánico se reconoce
z
a como una limitación para  Generar señales biomecánicas
s
El estrés por
desarrollar organoides fisiológicas que promueven la
cizallamiento de completamente maduros maduración estructural y
M
fluidos en cultivo y construir
e
c modelos organoides
funcional de los organoides en
á fisiológicamente desarrollo.
n
Las fuerzas relevantes.
i
c mecánicas sólidas
a que surgen de la Demostrada por el informe
actividad mecánica
s
coordinada de reciente de organoides en un
grandes grupos de
células
chip de riñón humano.
 Fig. 2. Control del microambiente de organoides en un chip.

(A) Los gradientes fisiológicos se generan por difusión entre (B) Un intestineon-a-chip puede generar gradientes opuestos) a
los microcanales: EJEMPLO: Los gradientes de lo largo del eje cripta-vellosidad, que induce la
purmorfamina compartimentación de:
Proliferativa (Olfm4)
(C) En un tumor y no proliferativa
organoides en un chip,(KRT20)
los vasos
Cámara de cultivo en neuronas motoras (MN; verde) Los sanguíneos se forman en la cámara central
gradientes opuestos inducen la localización espacial de cocultivando células endoteliales (CE) con
neuronas motoras y pluripotentes (Oct4; rojo) fibroblastos en un hidrogel, Los vasos en la cámara
central crecen en las cámaras tumorales para
vascularizar los tumoroides.
 Fig. 2. Control del microambiente de organoides en un chip.

(D) El flujo luminal en el estómago.
Se simula en un organoide en un chip estomacal mediante
la canulación de organoides gástricos humanos (hGO) en
Matrigel para suministrar fluido.
(E) Los organoides renales se cultivan bajo flujo en
un dispositivo impreso en 3D.
El estrés por cizallamiento fluido mejora la
vascularización y la maduración de los organoides
renales.
DESAFÍO DOS:
Modelado de tejido-tejido e interacciones multiorganicas

La complejidad se origina por las

interacciones dinámicas entre sus
componentes dentro y a través de
diferentes niveles de organización
• Emular interraciones
• Imitar comportamiento integrado se
sistemas disiologicos complejos in-vitro
• Organoides

La tecnología organoide en un chip puede proporcionar

soluciones a a este problema?
Modelo de interaccion tejido-tejido

Prácticamente en todos los órganos, las interacciones entre

diferentes tipos de tejido desempeñan un papel fundamental
en el desarrollo de órganos, homeostasis y enfermedades.

Los órganos en un chip proporcionan una plataforma para

diseñar ambientes más controlables y más conductivos para el
cocultivo de diferentes tipos de células y tejidos en sistemas
organoides.

Fig 2. (A) Se establece un modelo de organoide hepático

vascularizado en un dispositivo accionado por balancín que contiene
medios conectados en serie y cámaras de cultivo. Los organoides
hepáticos cultivados con células endoteliales de la vena umbilical
humana (HUVEC) muestran una mayor expresión de albúmina (ALB;
rojo). Barras de escala, 500 mm (blanco), 50 mm (amarillo).
 Modelado de interacciones
multiorgánicas

Modelo multiorgánico utilizando un matriz de microfluidos

para co-cultivar organoides hepáticos, intestinales y
estomacales derivados de células madre.

Objetivo: simular la homeostasis de ácido biliar regulada por la

interacción entre el hígado y el intestino in vivo.

El modelo mostró una expresión reducida de una síntesis de ácido biliar

(CYP7A1) en los organoides hepáticos debido a los factores paracrinos
producidos por el organoide intestinal, demostrando la conversación
cruzada fisiológica interorgano.

Jin y col.
Skardal y col. exploraron esta oportunidad emergente
en su modelo microingenético de corazón-pulmón-
hígado.

Hígado impreso en 3D y organoides cardíacos con

tejidos pulmonares de microingeniería de forma
modular y perfundiéndolos con un medio común en un
circuito cerrado.

Este estudio ilustra el potencial como una plataforma

avanzada in vitro para la detección de drogas preclínicas.
DESAFÍO TRES:
Reducir la variabilidad

A diferencia del proceso altamente reproducible de organogénesis in vivo,

los organoides se desarrollan con variabilidad sustancial en :

Estructura Capacidad Expresión

Tamaño
organizacional funcional génica

Esta variabilidad es un problema importante que Recapitular el nicho nativo de las células madre
limita el potencial de la tecnología de los organoides, que desarrollan embriones, proporcionando un
especialmente para aplicaciones en modelado de medio para generar señales instructivas
enfermedades, detección de drogas y trasplante. similares a las in vivo.
Control Automatizado del Cultivo Organoide

La automatización mecánica puede disminuir la variabilidad causada por la manipulación manual

inconsistente durante procedimientos de laboratorio tediosos.
Los sistemas de microingeniería permiten un manejo preciso y dinámico de fluidos y tejidos a las escalas
biológicas, proporcionando una plataforma susceptible de automatización.

Ejemplo

Esta basado en electrohumectación de

organoides hepáticos en un microdispositivo
con un patrón de electrodos; permitiendo
que las gotas de fluido se movieran,
fusionaran y dividieran de manera
programada.
Manipulación y análisis alto rendimiento de organoides

El aumentar la densidad a la que se pueden cultivar y

analizar organoides, es una ventaja potencial para
reducir la variabilidad; permitiendo la selección,
manipulación y cribado de organoides de alto
rendimiento.
Un ejemplo es la plataforma microfluídica creada por Jin
et al.

Una matriz de pilares microfluídicos de alta

densidad permite el filtrado basado en el
tamaño (aguas arriba) y la captura de
organoides (aguas abajo) para el análisis de la
inflamación debido a la toxina del cólera.
Integración de la biodetección

Incorpora elementos de biodetección en plataformas de

cultivo para permitir el cribado continuo de organoides.
Un ejemplo es :

Una plataforma multiorgánica integrada con

sensor permite el monitoreo in situ de
organoides; detecta antígenos específicos que
usan cambios en la cinética de transferencia de
electrones, debido a su unión a los anticuerpos
unidos a la superficie (Ab).

El sistema fue aprovechado para medir las toxicidades

inducidas por fármacos, por su capacidad para realizar el
bioensing continuo.
PERSPECTIVAS

Entre las aplicaciones
más prometedoras de
organoides en un chip
está el descubrimiento
de fármacos.
La medicina
regenerativa es otra
área importante de
oportunidad. Sobre la
base del potencial de
los organoides como
fuente ilimitada de
tejido con capacidad
regenerativa.

Otra posibilidad
Los organoides en un
emocionante es diseñar
chip también pueden
características anatómicas
desempeñar un papel
y fisiológicas avanzadas
fundamental la creación
(por ejemplo, vasculatura,
de modelos de
nervios) en organoides
enfermedades
durante la expansión in
específicas para el
vitro, con el objetivo de
paciente y la población
mejorar su injerto y función
para la medicina
sostenida in vivo.
personalizada.