V IBEROLAB

VALIDACIN ANALTICA CORRESPONDIENTE AL ENSAYO DE BIFENILOS POLICLORADOS (PCBs) EN MUESTRAS DE ACEITES AISLANTES SEGN NORMA ASTM D 4059-00 P. Roqu1, M. Manetti1, G. Mendizbal1 y P. Manzo1
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CEQUIMAP (Centro de Qumica Aplicada), Facultad de Ciencias Qumicas, Universidad Nacional de Crdoba, Medina Allende esq. Haya de la Torre, Ciudad Universitaria, 5000, Crdoba, Argentina; e-mails: porque@fcq.unc.edu.ar, mmanetti@fcq.unc.edu.ar, gmendizabal@fcq.unc.edu.ar y pmanzo@fcq.unc.edu.ar

RESUMEN. El presente trabajo involucra la determinacin de una serie de parmetros de validacin como aspecto central para el aseguramiento de la calidad analtica de los resultados en la determinacin de PCBs en muestras de aceite aislante de acuerdo a los lineamientos de la norma ASTM D 4059-004. Se determinaron los siguientes parmetros: repetibilidad, precisin intermedia, exactitud, adems se realiz una experiencia de comparacin de analistas y se calcul la incertidumbre metodolgica.

3.1 Materiales y equipo utilizado -Cromatgrafo de Gases Agilent 6890 equipado con inyector automtico, bandeja para 100 viales y detector uECD, todo el sistema controlado por ChemStation. -Materiales de referencia certificados (MRC): Aroclors 1242, 1254 y 1260 en aceite aislante marca Accustandard. -Solvente: Para el preparado de todas las soluciones de material de referencia y para las muestras problema se utiliz Hexano Grado Plaguicida (GP). -Aceite Blanco: Se utiliz para realizar las diluciones de los MRC. Aceite aislante YPF 64 (aceite comnmente utilizado por los fabricantes y reparadores de transformadores). Matriz previamente analizada para determinar la ausencia de PCBs. -Muestras reales: Muestras de Aceite aislante contaminado con PCBs obtenidas en muestreos a campo. -cido Sulfrico: Para el clean up (eliminacin de interferentes) de las muestras se utiliza cido Sulfrico grado proanlisis (PA). -Solvente de Lavado: Para el proceso de reacondicionamiento del material de vidrio que entr en contacto con muestras es necesario el empleo de Hexano PA, Hexano GP y Acetona grado proanlisis (PA). -Material de Vidrio: Para la preparacin de muestras se utilizan tubos de 10 ml con tapa a rosca y cierre hermtico (tipo Hach).

1.- Introduccin El objetivo de toda estrategia de validacin es probar la aptitud del mtodo en relacin a su utilizacin posterior con una finalidad predeterminada. Esto se logra mediante la determinacin de ciertos parmetros y la comparacin de los mismos con requisitos de calidad preestablecidos. La normativa regulatoria oficial, imperante en Argentina, involucra la utilizacin de la norma tcnica ASTM D 4059004 para la determinacin de PCBs en muestras de aceites aislantes. En virtud de este requisito oficial, de la necesidad de garantizar la calidad analtica de los resultados y el cumplimiento de los requisitos tcnicos de la norma IRAM 301 ISO/IEC 170253, se estableci la necesidad de validar la metodologa.

3.2 Metodologa 2.- Objetivos Determinar y Evaluar los siguientes parmetros de validacin: Repetibilidad, Precisin Intermedia, Exactitud e Incertidumbre Expandida asociada al mtodo. -La metodologa empleada para el clculo de la incertidumbre fue extrada de Michael Gluschke, et al. A case Study in the practical estimation of mesurement uncertainty, Accred Qual Assur 10:107-111 (2005)2. -Estadsticos utilizados: Repetibilidad, Desviacin Estndar Diaria, Precisin Intermedia, Varianza Interdiaria, Varianza Intercorrida, Desviacin Estndar Relativa, Coeficiente de Variacin, Desviacin Relativa de la Concentracin medida, Incertidumbre relativa de Recuperacin, Incertidumbre Combinada Relativa e Incertidumbre Expandida Relativa.

3.- Materiales y Mtodos Las determinaciones de PCBs fueron realizadas por Cromatografa Gaseosa de acuerdo a la norma ASTM D4059-00. Los ensayos fueron realizados utilizando la Gua Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) versin EP5-A21.

P. Roqu et al. Validacin analtica correspondiente al ensayo de (PCBs) en muestras de aceites aislantes segn Norma ASTM D 4059-00.

4.- Desarrollo 4.1 Precisin 4.1.1 Experiencia de Repetibilidad -Objetivo de la experiencia: Determinar los valores absolutos de las desviaciones estndar y los respectivos CV a tres niveles de concentracin, a los fines de compararlos con los especificados por la norma ASTM D 4059-00. -Diseo de la experiencia: Ensayos repetidos n veces, en un corto lapso de tiempo, en el mismo equipo, con el mismo operador (n=20). Experiencia efectuada con tres muestras reales de concentraciones cercanas a 5, 50 y 100 mg/Kg (muestra A, B y C respectivamente). -Especificacin de Calidad: Intervalo de Repetibilidad para concentraciones de PCBs en el orden de las 5, 50 y 100 mg/Kg deben ser iguales o menores a 1, 7 y 12 mg/Kg respectivamente, lo que corresponde a Desviaciones Estndar de 0,5; 3,5 y 6 mg/Kg, segn norma ASTM D 4059-00. -Estadsticos empleados: Desviacin Estndar y CV -Resultados obtenidos:
Tabla 1. Datos de Repetibilidad Muestra A Media (mg/Kg) Desviacin estndar (mg/Kg) CV (%) 5.38 0.15 (0.5)1 2.9 Muestra B 50.54 0.50 (3.5)1 1.0 Muestra C 102.55 1.25 (6)1 1.2 Media (mg/Kg) Desviacin estndar (mg/Kg) CV (%)

(X
Sr =
i =1 j =1

ij 1

X ij 2 ) 2 = 0, 85
2 S dd

(1)
A2 = B2 = 11, 24 2

4I

Estimacin de la Repetibilidad

( X i1. X i 2. ) 2
A=
i =1

Estimacin de la Varianza Interdiaria

2I

= 1, 21

(2)

Desviacin Estndar Intradiaria Intercorrida

S2 S = A r = 1,10 2
2 rr 2

(X
B=
i =1

i.

X ... )

Estimacin de la Varianza Intercorrida

I 1

= 3, 46

(3)

Desviacin Estndar Diaria

donde: I = n total de das, j = n de corridas en el da, Xij1 = resultado para el duplicado 1, corrida j en el da i, Xij2 = resultado para el duplicado 2, corrida j en el da i, Xi1 = resultados promedio de la corrida1, da i (promedios de los duplicados); Xi2 = resultados promedio de la corrida 2, da i (promedios de los duplicados)
S
T

2 dd

+ S

2 rr

+ S

2 r

= 3 .6 1 m g / K g

Tabla 2. Datos de Precisin Intermedia Muestra M-50 55.2 3.6 6.4

1. Requisito de calidad ASTM 4059-00.

Como se observa en la tabla 1, las desviaciones estndar observadas en ambos ensayos cumplen con los requisitos de calidad especificados en la norma ASTM D 4059-00. 4.1.2 Ensayos de Precisin Intermedia -Objetivo de la experiencia: determinar los valores de las desviaciones estndar en condiciones de variabilidad mxima dentro del mismo laboratorio y efectuar comparacin de desempeo entre dos analistas (PR y GM). -Diseo de la experiencia: Ensayo realizado, utilizando Gua CLSI versin EP5-A2 que define, dos corridas analticas diarias (maana-tarde) medidas por duplicado, realizadas por dos analistas alternadamente (20 corridas por analista). Experiencia efectuada con muestra de MRC concentracin (49.4 2.8) mg/Kg (M-50). -Especificacin de Calidad: No hay valor prefijado en la Norma ASTM D 4059-00 para este parmetro sin embargo es determinante para el clculo posterior de la incertidumbre. -Estadsticos empleados: Desviacin Estndar, CV, F y t Resultados obtenidos: -Datos de precisin intermedia:

-Comparacin entre Analistas:

Tabla 3. Datos comparacin analistas M-50 Analista GM Media (mg/Kg) Desviacin estndar (mg/Kg) CV (%) 55.1 3.8 7.0 M-50 Analista PR 55.4 3.3 6.0

-Test F para varianzas de dos muestras:

Tabla 4. Datos Test F M-50 Fexperimental Fcrtico(1 cola, P 0.05) Resultado 0.41 1.69 Fexp<Fcrit (cumple)

-Test t para comparacin de medias:

Tabla 5. Datos Test t M-50 texperimental tcrtico (2 colas, P 0.05) Resultado 0.73 2.02 texp<tcrit (cumple)

P. Roqu et al. Validacin analtica correspondiente al ensayo de (PCBs) en muestras de aceites aislantes segn Norma ASTM D 4059-00.

Del anlisis estadstico de comparacin entre analistas, observados en las tablas 3, 4 y 5, surge que ambos analistas miden con precisin y exactitud no diferenciables estadsticamente para el nivel de confianza establecido del 95% 4.2 Exactitud

donde:

C obs =Promedio de los replicados del CRM;

CCRM =Concentracin certificada del analito;
n =Nmero de replicados; u(Ccrm)= Incertidumbre estndar del CRM -Incertidumbre Combinada Relativa:

Para la evaluacin de este parmetro se realiz el anlisis de un material de referencia certificado, en una matriz semejante a la de la muestra. Se compar el promedio de los valores obtenidos con el valor de referencia certificado, siendo la diferencia el sesgo del mtodo. -Especificacin de Calidad: No hay valores prefijados en la Norma ASTM D 4059-00 para este parmetro. -Diseo de la experiencia: Se analizaron n veces muestras de MRC (M-50) de concentracin (49,4 2.8) mg/Kg en condiciones de precisin intermedia (n=80). -Resultados obtenidos:
Tabla 6. Datos obtenidos para Exactitud con muestra de M-50 Valor Incertidum Desviacin Valor Sesgo medio bre del Muestras estnda MRC (mg/Kg) obtenido MRC (mg/Kg) (mg/Kg) (mg/Kg) (mg/Kg) M-50 55.2 3.6 49.4 2.8 5.8

uc ( Pcbs ) = RSD 2 + urel ( R m ) 2 + 2 = 0,134

-Incertidumbre Expandida:

U ( PCBs ) = 2uc ( PCBs ) = 0, 264

El anlisis de la incertidumbre combinada se hizo en forma relativa incorporando tres componentes: uno de precisin, uno de exactitud y otro de recuperacin. Con el valor de la incertidumbre combinada relativa se calcul el valor de la incertidumbre expandida relativa utilizando para ello un factor de cobertura K igual a 2. Valor porcentual obtenido 26,4%.

5.- Conclusiones Los valores de precisin obtenidos en la validacin son comparativamente menores a los establecidos por la Norma ASTM 4059-00 por lo tanto cumplen con los requisitos de calidad preestablecidos. Se determin la presencia de un sesgo positivo en la metodologa, el cual es considerado en el clculo posterior de la incertidumbre a pesar que la norma no establece requisitos para este componente. Metodolgicamente, consideramos que la complejidad de las muestras, en funcin de la cantidad de analitos presentes que se cuantifican en conjunto, es el factor de mayor incidencia en el valor de sesgo observado. Comparativamente consideramos que la exactitud es el componente de mayor aporte a la incertidumbre del mtodo, dado que el factor relativo correspondiente al sesgo duplica el valor de precisin (desviacin estndar relativa), mientras que el factor relativo a la recuperacin, es prcticamente despreciable.

Del ensayo de exactitud realizado se evidencia un sesgo positivo con respecto al MRC. 4.3 Calculo de Incertidumbre -Objetivo: Establecer la incertidumbre para los ensayos de muestras problema. -Especificacin de Calidad: No hay valores prefijados en la Norma ASTM D 4059-00 para este parmetro. -Estadsticos empleados: Incertidumbre expandida. -Componentes para el clculo de la Incertidumbre:

RSD =

ST = 0, 065 Cobs

(1)

Desviacin Estndar Relativa

ST2 u (CCRM ) 4 urel ( R m ) = _ = + = 8,32 10 2 CCRM n C obs ( Rm ) (2)

_

u ( Rm )

Bibliografa
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). User Verification of Performance for Precision and Trueness; Approved Guideline-Second Edition. CLSI document EP5-A2. Michael Gluschke, et al. A case Study in the practical estimation of mesurement uncertainty, Accred Qual Assur 10:107-111 (2005). IRAM 301/ISO/IEC 17025 Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y de calibracin. ASTM D 4059-00. Standard Test Method for Anlisis of Polichlorinated Biophenyls in Insulating Liquids by Gas Chormatography.

Incertidumbre relativa de Recuperacin

Cobs CCRM = 0,117 CCRM

(3)

Desviacin Relativa de la Concentracin medida