INFORME DE LABORATORIO 1.

DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES -DETERMINACIÓN DE ETANOL

INGENIERÍA DE BIOPROCESOS
CUANTIFICACIÓN DE
AZÚCARES
Método de Fehling.
Esta prueba consiste en detectar sustancias reductoras como en este caso, azúcares reductores.
Basándose en la reducción de cobre por oxidación con estos azúcares y estando en medio alcalino
con tartrato de sodio y potasio para estabilizar el cobre.

En dos tubos de ensayo se agregan fracciones del reactivo

(1-2 ml). En el tubo 1 se adiciona 7% sulfato de cobre
disuelto en agua y en el tubo 2, 35% tartrato de potasio,
10% NaOH diluidos en agua. Luego se mezclan muy bien y
se le agrega 1-5ml de muestra a los tubos y posteriormente
se lleva al baño termostatado durante 5 min. (Cristancho &
Monroy., 2014)

R. Positiva: Precipitado color rojo ladrillo por oxidación del cobre.

R. Negativa: Coloración azul, sin cambios.
Método Miller (DNS).

De acuerdo al método Miller, la reacción redox de ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS) por medio de
azúcares reductores (como la glucosa) en un ambiente cálido presenta un cambio de calor notable (de
tonalidades amarilla y café), dicha tonalidad es evaluada con ayuda de un espectrofotómetro a 540nm.
La reducción será frenada con hielo con el fin de que vuelva a su configuración de estado original.
(Núñez, et al., 2012).
DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES POR EL MÉTODO DNS
MÉTODO DE CUANTIFICACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES DNS

Inicialmente realizamos la preparación de la solución primaria de la siguiente

manera:

En una balanza analitica Se pesaron 0.3003 g de Glucosa se disolvieron en un

vaso de precipitado, luego se pasaron a un balón aforado de 100ml y se
completó a volumen
En 10 tubos de ensayo adicionamos los siguientes volúmenes de la
solución primaria 0, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9 y 1ml

Las muestras anteriores se completaron a 1 ml con agua destilada

Añadimos 1 ml de DNS y calentamos a ebullición por 10

minutos en el baño termostatado
Cumplido este tiempo las soluciones se
enfriaron por 10 minutos en un baño de agua
con hielo

A cada solución adicionamos 10 ml de agua

destilada y homogenizar

Procedimos a leer las absorbancias en el

espectrofotómetro a 540 nm y realizar la gráfica
 RESULTADO:
Curva de calibración de absorbancia vs concentración
Concentración Absorbancia

0 0

0,2 0,495

0,3 0,773

0,4 1,032

0,5 1,251

0,6 1,478

0,7 1,678

0,8 1,876

0,9 2,053

1 2,217
CUANTIFICACIÓN DE
ETANOL
Cuantificación de etanol por el método HPLC

La cuantificación por HPLC es un

método de cuantificación de
etanol, mediante una bomba en
la que pasan los compuestos
dentro de una fase móvil.

Luego se pasa esta fase por una columna de

cromatografía la cual tiene una fase estacionaria y
dependiendo de la interacción de la fase móvil y
estacionaria, se da la cuantificación de etanol
RESULTADO:
Curva de calibración HPLC

y = 5.18*10-5*x - 9.71*10-3
R2 = 1
MÉTODO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE ETANOL - VALORACIÓN REDOX

Solución del dicromato de potasio (K2Cr2O7) a 1 mol/L

Solución del yoduro de potasio (KI) al

10 %

Solución de almidón como indicador (2g de almidón,

500ml de agua, aforar a 1000 ml)

solución de tiosulfato de sodio a 1 mol/L

(Na2S2O3ꟷ 5H2O) (Estandarizada)
Estandarización de (Na2S2O3ꟷ 5H2O)
5. Realizar Blanco sin presencia de muestra a analizar
Conclusiones
● Se verificó la presencia de un metabolismo oxidativo por mejoramiento de actividad enzimática en
las cajas de Petri, que permitió calibrar una función lineal de etanol por HPLC (absorbancia en
relación a la concentración) a partir de la cuantificación de biomasa, contando con un coeficiente
de determinación (R2) igual a 1.

● Se evidenció un comportamiento lineal para la absorbancia en función de la concentración a fin de

cuantificar glucosa por método de DNS, que, en conjunto al tono café de las muestras con
concentraciones más altas (1ml > 0.5ml) de solución de glucosa, da cuenta de la dependencia de
los azúcares reductores en la obtención de etanol por fermentación, al influenciar ampliamente la
actividad metabólica del proceso.

● Se comprobó la importancia de la metodología para la determinación de azúcares por medio de la

reducción de DNS como patrón indicador del rendimiento alcanzado durante un procedimiento de
fermentación.
 Bibliografía

● Cristancho, L., & Monroy, R., (2014). Manual de métodos generales para determinación de carbohidratos.
https://es.slideshare.net/LeidyCristancho/manual-de-mtodos-generales-para-determinacin-de-carbohidratos
● Mengana , A., Tejera, H., & Mas, S. (2022). Tecnología Química . Obtenido de Seleccion de una técnica
analitica para la determinacion de la concentración de etanol:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2224-
61852022000300503#:~:text=Los%20m%C3%A9todos%20para%20determinar%20la,de%20flujo%20y%20va
loraci%C3%B3n%20redox.
● Núñez, R., Pérez, B., Motzezak, R., & Chirinos, M. (2012). Contenido de azúcares totales, reductores y no
reductores en Agave cocui Trelease. Multiciencias, 12(2), 129-135. Recuperado de:
https://www.redalyc.org/pdf/904/90424216002.pdf