EFECTO GASTROPROTECTOR DEL YOGURT ENRIQUECIDO CON CEPAS DE

LACTOBACILLUS ACIDOPHILLUS EN RATAS INDUCIDAS A LESIONES

GÁSTRICAS CON INDOMETACINA EN LOS LABORATORIOS DE FISIOLOGÍA
DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL, 2012

Autores:

 Flores Bardales Diego

 Martinez Rivera Alvaro
 Moreau Almaraz Jacqueline
 Niño de Guzmán Cahuana Marjorie
 Padilla Urbano Jesús
 Paucar Chuquilin Ludwig
 Poma Balbin Juan
 Tamariz Cuenca Cinthia
 Tenorio Escriba Nestor
 Timoteo Camargo Miguel

Filiación

 Estudiantes de medicina humana del tercer año de la facultad

“Hipólito Unanue” de la Universidad Nacional Federico Villarreal

Asesor: Dr. Felix A. Bernuy

Lima – Perú

2012
RESUMEN:

OBJETIVO: Demostrar el efecto gastroprotector del yogurt enriquecido con cepas de

lactobacillus acidophilus en ratas inducidas a lesiones gástricas con indometacina.
DISEÑO: Estudio experimental aleatorizado incompleto, prospectivo y transversal.
LUGAR: Laboratorios de investigación del departamento de fisiología de la universidad
nacional Federico Villarreal. MATERIALES: 21 ratas adultas jóvenes de 2 meses de edad de
la raza Holtzman de peso promedio 243 g cada rata, yogurt enriquecido con cepa de
lactobacillus acidophillus. INTERVENCIONES: Las ratas se dividieron en 3 grupos
aleatoriamente un grupo control y dos grupos experimentales. Grupo "Yogurt" grupo
expuesto a dosis de yogurt con concentración de lactobacillus acidophillus de 0.04 mg/ml
e indometacina 50mg/kg, n=7; grupo "control positivo", suero fisiológico, 2.5ml e
indometacina, 50mg/kg, n=7 y grupo "control negativo" al cual no se le administró yogurt
ni medicamento alguno, n=7, para los 2 primero grupos Las dosis fueron administradas
durante30 días, luego de este tiempo se les administraró una dosis de 50mg/kg de
indometacina. Para evaluar el grado de lesión ulcerativa, Se tendrá en cuenta la magnitud
de la lesión observada en la mucosa gástrica, siendo calificada según la escala de Alada y
col, 2008 modificada y posteriormente para la evaluación histopatológica será según Devi
y col, 1998.RESULTADOS: Si bien se mostró un efecto gastroprotector del yogurt
enriquecido con la cepa de lactobacillus acidophilus, este fue leve y poco significativo.
CONCLUSIONES: En condiciones experimentales se muestra que el yogurt enriquecido con
cepa de lactobacillus acidophillus en concentraciones de 0.04 mg/ml tiene un efecto
gastroprotector leve en ratas normales

PALABRAS CLAVE: Lactobacillus acidophilus, úlceras, efecto gastroprotector.

ABSTRACT:

OBJECTIVE: To demonstrate the gastroprotective effect of yogurt enriched with

Lactobacillus acidophilus strains induced in rats with gastric lesions by indomethacin.
DESIGN: Experimental study incomplete randomized, prospective and transversal. PLACE:
Research laboratories of the department of physiology at the Universidad Nacional
Federico Villarreal. MATERIALS: 21 young adult rats 2 months of age race Holtzman
average weight 243 g each rat, yogurt enriched with Lactobacillus acidophilus strain.
INTERVENTIONS: Rats were divided into 3 groups randomly to a control group and two
experimental groups. Group "Yogurt" group exposed to doses of yogurt with lactobacillus
acidophilus concentration of 0.04 mg / ml and indomethacin 50mg/kg, n = 7; group
"positive control" saline, 2.5ml and indomethacin, 50mg/kg, n = group 7 and "negative
control" which was not given any medicine or yogurt, n = 7 for the 2 first groups were
administered doses durante30 days, after this time they administraró a 50mg/kg dose of
indomethacin. To assess the degree of injury ulcerative Take into account the size of the
lesion observed in the gastric mucosa, being qualified according to the scale of Winged et
al, 2008 and subsequently modified for histopathologic evaluation will be according Devi
et al, 1998. RESULTS : Even though it showed a gastroprotective effect of yogurt enriched
with lactobacillus acidophilus strain, this was minor and insignificant. CONCLUSIONS:
Experimental conditions shows that the yogurt enriched with Lactobacillus acidophilus
strain in concentrations of 0.04 mg / ml has a slight gastroprotective effect in normal rats

KEY WORDS: Lactobacillus acidophilus, ulcers, gastroprotective effect.

INTRODUCCIÓN:

ANTECEDENTES

En nuestra población, las enfermedades producidas en el tracto gastrointestinal como

gastritis y úlceras pépticas son muy comunes y constituyen una diversa gamma de
enfermedades, que son controladas con el uso de distintos esquemas terapéuticos. Sin
embargo, es importante destacar, que la mayoría de veces, estas enfermedades son
producto del uso de tratamientos que sirven para tratar otras áreas del organismo, como
es el caso de la terapia basada en antiinflamatorios no esteroideos (AINES).

Aproximadamente el 25% de los consumidores crónicos de AINES presentan reacciones

adversas al medicamento y del 10 a 30% desarrollan úlcera péptica en 6 meses de
tratamiento continuo ; además el riesgo de sangrado digestivo se cuadruplica en relación
a la población general.(1)

Ante esta situación, el interés por los cultivos probióticos y su uso en de los productos
lácteos fermentados ha crecido en los últimos años (2). Se han realizado nuevas
investigaciones acerca de los probióticos «microorganismos vivos que ingeridos en
cantidades adecuadas, producen efectos beneficiosos para la salud, que se añaden a su
valor puramente nutricional« (3.4), como un nuevo concepto en nutrición saludable y
estabilización de salud, deteriorada a causa de los esquemas de tratamiento
(administración de AINES) que siguen la mayoría de pacientes con enfermedades de tipo
crónico. (5,6)

Tradicionalmente la producción de yogurt está basada en la adición de fermentos de

Streptococcus salivarius thermophilus y Lactobacillus delbrueckii bulgaricus. Hoy día, la
introducción de microorganismos probióticos ha permitido no sólo mejorar la producción
de éste (por ejemplo para disminuir la postacidificación), sino también el que actúe como
agente terapéutico, causando efectos beneficiosos en las personas que los ingieren. (7)

El Lactobacillus acidophilus es uno de los probíoticos más populares y además de sus

beneficios al tracto intestinal. Los mecanismos de defensa de los probíoticos residen
simultáneamente en un efecto sobre la flora, un efecto sobre la pared y la mucosa y un
efecto sobre el sistema inmunitario, e incluyen la modificación de la flora para evitar la
colonización patógena, la prevención del desequilibrio de la flora intestinal, la reducción
de la incidencia y duración de diarreas, el mantenimiento de la integridad de las mucosas,
la producción de vitaminas como la B2, B6 y biotina, la asimilación de oligoelementos (del
calcio, produce enzimas como la lactasa, que ayuda a la digestión de la proteína de la
leche (lactosa) y a mejorar los síntomas del Síndrome de Intestino Irritable) y la actividad
antitumoral (produce antibióticos naturales que ayudan en el control de bacterias
patógenas intestinales) , disminuyen el contenido de ácido fítico presentes en la mayoría
de legumbres, cereales integrales y semillas que dificultan la absorción de hierro, zinc y
otros minerales.

Los lactobacillos constituyen una especie predominante del estómago. Son bacterias
ácido-lácticas, bacilos o cocos gram positivos. Son microorganismos anaerobios y/o
tolerantes a condiciones aerobias. Pueden ser homo o heterofermentativos, según las
características de su metabolismo fermentativo y mesofílicos o termofílicos, según las
temperaturas óptimas de desarrollo. Otra característica es su capacidad de adherirse a las
mucosas, lo cual facilita su residencia en el estómago y le permite ejercer efectos
funcionales, por ejemplo, relacionados con la protección de la mucosa gástrica y su
cicatrización en caso de lesiones (8,9). Algunas cepas de Lactobacillus (La1, LB) ejercen
actividades bacteriostáticas o bactericidas frente a Hp o reducen su adhesión a células en
cultivo (10).

El Lactobacillus acidophilus se puede consumir en forma de productos como el yogur, kéfir

y también se encuentra a la venta en las tiendas de dietética en forma de liquido o
cápsulas, que proveen una mayor concentración de la bacteria que la leche, el yogur u
otros productos lácteos cultivados. Muchas personas toman Acidofilus cuando viajan a
otros países, como prevención para las infecciones intestinales y como ayuda para la
recuperación del tracto digestivo, después de un tratamiento con antibióticos,
especialmente los de amplio espectro. (11)

En diciembre de 2006 entró en vigencia una modificación del Artículo 576 del CAA, donde
se expresan los recuentos mínimos de bacterias lácticas para cada producto. Establece
que para el yogur y la leche acidófila dicho recuento debe ser como mínimo de 10 7 ufc/g
de Bacterias Ácido Lácticas totales mientras que para la leche cultivada el mínimo es 10 6
ufc/g. (12). Existen pocos trabajos experimentales que corroboren la efectividad que
pueden tener estos tratamientos sobre las lesiones gástricas y si sus efectos son
comparables o no con los tratamientos convencionales. (13,14). La aparición de las
lesiones ulcerosas en las mucosas proviene del desequilibrio entre los agentes irritativos
locales y los mecanismos protectores. Entre los primeros destaca la propia secreción
ácida gástrica, ácidos biliares, Helicobacter pylori y enzimas proteolíticas como la pepsina;
entre los mecanismos protectores destaca la secreción de moco, de carácter
glucoproteico, ión bicarbonato (segregado por células mucosas del antro y del duodeno),
barrera epitelial y prostaglandina E de la mucosa gastroduodenal. Las concentraciones
elevadas de ácido pueden producir por sí mismas, una lesión aguda en la mucosa del tubo
digestivo alto. Niveles de ácido más fisiológicos no causan lesión directa, pero tienen un
papel permisivo en el desarrollo de las erosiones (ulceraciones) provocadas por otras
causas. (15)
Para la inducción de lesiones gástricas se usa la indometacina. La presencia de
indometacina en la mucosa gástrica estimula la expresión de TNF α, entre otras
sustancias. En estas circunstancias se produce, a nivel celular, una reacción proteolítica
con la participación de proteosomas que liberan el NFK β, un modulador de la
transcripción a nivel nuclear que, así liberado, induce la síntesis y expresión de moléculas
de adhesión. Una vez producida la expresión de moléculas de adhesión, los neutrófilos se
adhieren fuertemente al endotelio vascular y luego se produce la extravasación de
neutrófilos y la activación de los mismos, con la consiguiente combustión respiratoria,
producción de oxidantes y sustancias citotóxicas (16).

Sin embargo, todos estos estudios han sido dirigidos en referencia a los conceptos de
interferencia bacteriana, hecho en el cual la presencia de estos microorganismos
benéficos limita el potencial patogénico de otros microorganismos patógenos como es el
caso del Helicobacter pylori(17,18), mas no se han realizado estudios que evalúen el
efecto protector prebiótico en la mucosa gástrica para evitar las gastritis erosivas por
administración prolongada de AINES, para dilucidar con pruebas la acción y actuación del
probiótico en la presentación de gastritis por terapia con AINES. El presente trabajo
plantea determinar el efecto protector del Lactobacillus acidophilus en Yogurt para
prevenir la gastritis erosiva producida por el consumo de la indometacina (AINE).

JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA:

El uso de los AINES se ha incrementado en los últimos años. El vínculo entre AINES e
injuria digestiva se demuestra por la alta prevalencia (15 – 20%) de úlcera gástrica o
duodenal en usuarios crónicos de AINEs, más del 50% cursan asintomáticas y 1 – 3 % se
complican con hemorragia o perforación.
En el Perú la adquisición de medicamentos sin receta médica supera el 60%, de éste grupo
el 30 – 40 % se automedica y el 24% es persuadido (por la recomendación del
farmacéutico) (19).
Todo esto ha incrementado el número de casos de personas con afecciones
gastrointestinales, y ante la falta de medicamentos que puedan neutralizar esto, sin
impedir la función de los primeros (pues recordemos q los AINES son importantes por sus
propiedades antiinflamatorias, antipiréticas y analgésicas) se ha visto con buenos ojos la
actividad protectora de los probióticos, que es lo que se pretende demostrar en el
presente estudio.
Recientemente se ha estado hablando de los probióticos como potentes inhibidores de
lesiones gastrointestinales, esto debido a sus propiedades: favorecen el equilibrio de la
microflora intestinal, estimulan el sistema inmune, compiten contra patógenos,… (20) en
un estudio realizado en Costa Rica se evaluó el efecto del cultivo probiótico Lactobacillus
rhamnosus adicionado a yogurt natural sobre poblaciones de S. aureus, E. coli, Listeria
monocytogenes y Salmonella enteridis; encontrándose un gran poder de inhibición del
Lactobacillus sobre los últimos (21).
En otro estudio realizado en España, se demostró que dos cepas de Lactobacillus, tenían
efectos beneficiosos sobre niños sanos, y además no se presentó ningún efecto adverso
(22). En otro estudio se empleó el Lactobacillus johnsonii para interferir la colonización
gástrica por helicobacter pylori (23).
El lactobacillusacidophilus es considerado un probiótico, y como tal protege al hombre del
efecto nocivo de otros microorganismos. Este Lactobacillus degrada nutrientes,
produciendo lactato, peróxido de hidrógeno y otros subproductos que crean medios
hostiles para el crecimiento de organismos indeseables. Además puede competir con
microorganismos patógenos por nutrientes y de esta manera controlarlos.
El motivo por el cual se abordará el presente estudio, es para experimentar, el efecto
gastroprotector del yogurt enriquecido con cepas de lactobacillus acidophillus en ratas
inducidas a lesiones gástricas con indometacina, en los laboratorios de fisiología de la
Universidad Nacional Federico Villarreal. 2012.
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA:

¿Tendrá el yogurt enriquecido con cepas de Lactobacillus acidophilus un efecto

gastroprotector frente a la lesiones gástricas en ratas inducidas por indometacina?
HIPÓTESIS ALTERNA:

 El Yogurt enriquecido con cepa de Lactobacillus acidophilus tendrá efecto

gastroprotector en ratas inducidas a lesiones gástricas con indometacina

HIPÓTESIS NULA:

 El yogurt enriquecido con cepa de Lactobacillus acidophillus no tendrá ningún

efecto gastroprotector.

HIPÓTESIS COMPLEMENTARIAS:

 El lactobacillusacidophilus limitará el potencial patógeno de otros

microorganismos como el helicobacterpilory
 El lactobacillus acidophilus estimulará la producción de prostaglandinas que son
producidas por las células de la mucosa gástrica y protectoras de las mismas.

OBJETIVOS:

OBJETIVO GENERAL:

 Demostrar el efecto gastroprotector del yogurt enriquecido con cepas de

lactobacillus acidophilus en ratas inducidas a lesiones gástricas con indometacina.

 OBJETIVO ESPECÍFICOS:

 Determinar el nivel de grado de lesión de hiperemia en las ratas que recibieron

dosis de yogurt enriquecido con cepas de lactobacillus acidophilus.
 Determinar el nivel de grado de lesión de ulcerativa en las ratas que recibieron
dosis de yogurt enriquecido con cepas de lactobacillus acidophilus
 Determinar si existe o no efecto gastroprotector del yogurt enriquecido con cepas
de lactobacillus acidophilus en la mucosa gástrica ante las lesiones gástricas
producidas por la dosis de indometacina.

MÉTODOS

DISEÑO DE ESTUDIO
  Será un estudio experimental aleatorizado incompleto (por el control de variables),
prospectivo (por la ocurrencia de los hechos) y transversal (por la recolección de
datos). El presente estudio tuvo como fecha de inicio el 21 de mayo y se llevó a
cabo en los laboratorios de Farmacología y Fisiología de la Facultad de Medicina
Hipólito Unanue de la Universidad Nacional Federico Villarreal (UNFV).

POBLACIÓN DE ESTUDIO

 UNIVERSO

 Se emplearán 21 ratas de raza Holtzman obtenidas de la Universidad Nacional

Agraria La Molina, Lima, Perú.

Criterios de inclusión

 Ratas macho
 Ratas de 2 mes de edad
 Ratass de aproximadamente 243 gramos de peso

Criterios de exclusión

 Ratas hembras
 Ratas que no tengan dos meses de edad
 Ratas que no presenten aproximadamente 243 gramos de peso

VARIABLES

 VARIABLES DEPENDIENTES:
NIVEL DE GRADO DE LESIONES DE HIPEREMIA.
NIVEL DE GRADO DE LESIONES ULCERATIVAS.

 VARIABLE INDEPENDIENTE:
EFECTO GASTROPROTECTOR DEL YOGURT ENRIQUECIDO CON CEPAS DE
LACTOBACILLUSACIDOPHILUS

OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES:

CRITERIOS DE TIPOS DE ESCAL

MEDICIÓN DE LAS VARIABLES A DE
CATEGORÍAS MEDICI
 VARIABLE DEFINICIÓN CATEGORÍ ÓN
AS

NIVEL DE GRADO Nivel de grado Ausente Ausente=0 CATEGÓRIC NOMINA

DE LESION DE de lesión No presencia de A L
HIPEREMIA hiperemia en la hiperemia
mucosa gástrica POLITÓMIC
de la rata Leve Leve =1 A
Holtzzman Leve presencia de
hemorragia

Moderado Moderado=2
Moderada
presencia de
hemorrágicas.
Severo
Severo=3
Severa presencia
de hemorragia.

NIVEL DE GRADO Nivel de grado Ausente Ausente=0 CATEGÓRIC NOMINA

DE LESION de lesión No presencia de A L
ULCERATIVA ulcerativa en la úlceras
mucosa gástrica POLITÓMIC
de la rata Leve Leve=1 A
Holtzzman Úlceras puntiformes
<1 mm o
microhemorragias
Moderado
Moderado:=2
Dos o más ulceras
hemorrágicas
pequeñas

Severo

Severo=3
Úlceras grandes >2
mm de dìámetro

EFECTO EFECTO Bueno Bueno: CATEGÓRIC NOMINA

GASTROPROTECT GASTROPROTE Si se evidenció A L
OR DEL YOGURT CTOR DEL efecto
ENRIQUECIDO CON YOGURT gastroprotector DICOTÓMIC
CEPAS DE ENRIQUECIDO Malo A
LACTOBACILLUS CON CEPAS DE Malo:
ACIDOPHILLUS LACTOBACILLU Si no se evidenció
S efecto
ACIDOPHILLUS gastroprotector

DEFINICIÓN OPERACIONAL:

R: Distribución al azar (randomización)

O: Grado de protección después de la inducción de la gastritis por indometacina
 X:Lactobacilus (grupo experimental) y Placebo (estímulo del grupo control)

PROCEDIMIENTOS

El estudio se realizó en 21 ratas machos, raza Holtzmann, con un peso aproximado de

243g, obtenidas de la Universidad Nacional Agraria La Molina, Lima, Perú.

Estos animales fueron aclimatados previamente en el ambiente de experimentación de

Laboratorios de Fisiología de UNFV, durante 7 días. Se les mantuvo en un ambiente a una
temperatura de 21ºC, con alimentación balanceada y agua a libertad.

La preparación del yogurt fue realizada en la planta piloto de leche de la Universidad

Nacional Agraria La Molina con asesoría especializada del Ing. José Miguel Mayta Casallo
(ingeniero de industrias alimentarias)

INGREDIENTES

• 10 litros de leche

• 650 gramos de azúcar

• 350 gramos de leche en polvo

• 35 gramos de grenetina o almidón modificado

• 1 sobre de cultivo láctico para yogur con probióticos (dosis: 10 litros de leche)

• 1 kilogramo de mermelada de la fruta de su preferencia

Para el preparado del yogurt se calentó la leche a 40 grados centígrados (°C), separamos 3
litros en los cuales se disolvieron la leche en polvo, azúcar y grenetina. Para que no
queden grumos se utilizó una licuadora. La mezcla se incorpora Nuevamente al resto de la
leche.

Pasteurizamos a 82 °C durante 20 minutos. Durante este tiempo se muevió con una

cuchara o agitador, para que no se peguen los sólidos en la olla y para favorecer el
aumento de temperatura. Luego enfriamos a 50 °C, a baño María (forma de preparación
que consiste en dejar un recipiente con el alimento en agua hirviendo un determinado
tiempo). Inoculamos el cultivo para yogur con probióticos, para esto utilizamos 1 Litro de
yogurt al cual le agregamos 40mg de Lactobacillusacidophillus obteniendo una
concentración de 0.04mg/ml de cepas inactiva de Lactobacillus acidophillus que fueron
compradas en los Laboratorios Montana. Se mezcló por tres minutos procurando que el
cultivo quede disperso en toda la leche. El periodo de incubación de las bacterias es de
dos horas y media a tres horas. Se tomó cuidado de que la temperatura permanezca de 47
a 50 °C; temperatura que necesitan las bacterias para su buen desarrollo. Una vez que
transcurrieron las tres horas se formó un gel que había alcanzado una acidez de 70 °Dornic
(parámetro para medir la acidez de la leche). Se bajó la temperatura y se puso al
refrigerador. Al día siguiente el yogurt fue mezclarlo por cinco minutos. Se incorporó
trozos de fruta y se mezcló perfectamente (100 gramos de mermelada de fruta por cada
litro de yogur natural). Se envasó en recipientes de 1 litro y para la conservación se
mantuvo a 5 °C.

Una vez terminada la fase de aclimatación de las ratas, es decir, transcurridos los 7 días se
realizó la aleatorización y se dividió a las 21 ratas en tres grupos de 7 ratas. Luego
procederemos a marcar cada rata del número 1 al número 7, y procedimos a la medición
de los pesos de cada rata de los tres grupos, para de esta manera obtener el peso
promedio por cada grupo y el peso promedio de los tres grupos.

Al terminar de dividir y pesar cada grupo las ratas se las sometió a 24 horas de ayuno,
luego procedimos con la fase de experimentación.

A cada grupo se le administraró durante 30 días consecutivos, por vía orogástrica a través
de una sonda de pequeño calibre (Nelatón No. 8) lo siguiente:

Paso 1: Al grupo “control positivo” se le administró NaCl, al grupo experimental “Yogurt”,

se le administró el yogurt enriquecido con 0.04 mg/mL de lactobacillus por un periodo de
30 días, al grupo “control negativo” no se le administró sustancia alguna, los dos primeros
grupos recibieron dichas dosis por un periodo de 30 días.

Paso 2: llegado al trigésimo día al grupo control positivo y grupo experimental se le

administró indometacina (50mg/kg), en el caso del grupo experimental este
procedimiento se realizaró media hora después de administrarle el yogurt con
lactobacillus.

Paso 3: Cinco horas después de la administración de indometacina, las ratas fueron

anestesiadas con 1ml de pentobarbital sódico (Halatal), luego se procedió a cirugía
abdominal para la localización y extracción de los estómagos, los cuales fueron abiertos
por la curvatura mayor, lavados con suero fisiológico y extendidos para lograr una
completa exposición de la mucosa para el análisis macroscópico y la toma de fotografías
en fresco.

Paso 4: Procederemos a la evaluación macroscópica:

Para la evaluación macroscópica tuvimos en cuenta la evaluación del grado y presencia de

lesiones de hiperemia y lesiones ulcerativas.
*Para evaluar el grado y presencia de hiperemia, esta fue calificada según los siguientes
parámetros: según la magnitud del enrojecimiento presente y la hemorragia, según la
magnitud del sangrado, dependiendo de la cantidad de vasos comprometidos.

Los parámetros antes mencionados fueron medidos empleando la escala de puntaje

observacional mencionada en la siguiente tabla.

GRADO DE ESCALA DE PUNTAJE

AUSENTE 0
LEVE 1
MODERADO 2
SEVERO 3

*Para evaluar el grado de lesión ulcerativa, se tuvo en cuenta la magnitud de la lesión

observada en la mucosa gástrica (pérdida de continuidad o rotura de la misma), siendo
calificada según la escala de Alada y col, 2008 modificada, en:

GRADO DE LESIÓN CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS PUNTUACIÓN

ÚLCERATIVA
AUSENTE No presencia de úlceras 0
LEVE Úlceras puntiformes <1 mm o microhemorragias 1
MODERADO Dos o más ulceras hemorrágicas pequeñas 2
SEVERO Úlceras grandes >2 mm de diámetro 3

Paso 5: Luego procedimos a la evaluación histopatológica:

Para la evaluación histopatológica según Devi y col., 1998, los estómagos fueron
extirpados y lavados suavemente con solución salina, para remover la sangre y los detritos
adheridos al tejido.

Posteriormente se les fijó en solución de formol al 10% tamponado, por 3 días, y luego se
seleccionó las zonas donde de acuerdo al examen macroscópico se evidenciaba lesión
aparente. Transcurrido este tiempo, se les procesó en un procesador de tejidos por 18
horas, en soluciones de alcoholes para deshidratación, hidratación con xilol, y embebido
en parafina.

El procesamiento de los tacos de parafina se realizará empleando un dispensador de

parafina. Los tacos obtenidos fueron llevados a congelamiento a <0°C, por un lapso de 3
horas, para luego proceder al corte de 3µ de espesor con ayuda de un micrótomo. Luego,
se retiró la parafina en una estufa, para proceder a la coloración con hematoxilina y
eosina.

Después de la deshidratación y limpieza de las láminas, fueron llevadas para observación

microscópica y luego procedimos al diagnóstico histopatológico de cada muestra tomada
de la mucosa gástrica.

ASPECTOS ÉTICOS

Los procedimientos se realizaron siguiendo los principios éticos de la experimentación

animal del International Council forLaboratory Animal Science.

1) Se contó con la ayuda de personal técnico que nos instruyeron en las diversas
maniobras que se realizaron en la investigación

2) Las condiciones de alojamiento fueron las adecuadas, ya que los animales no estuvieron
hacinados, las constantes ambientales fueron controladas, además se estimuló las
actividades de las ratas mediante ruedas.

3) Se realizó buenas prácticas de sujeción, analgesia, anestesia y eutanasia, para evitar

someter a los animales a sufrimientos innecesarios.

PLAN DE ANÁLISIS DE DATOS

Se elaboró el trabajo a partir de los datos que se recolectaron, y estos fueron

analizados con ayuda del programa estadístico SPSS 15.0 y Epidat.
a. Estadística descriptiva
Para variables cuantitativas usamos Medidas de tendencia central (media o
mediana, según corresponda) y de dispersión (desviación estándar o rango
intercuartílico, según corresponda). En las variables cualitativas usamos
distribución de frecuencias.

b. Estadística inferencial
Se trabajó con un nivel de significancia del 5% y una potencia estadística del
80%, concordante con la estimación del tamaño de muestra. Una confianza del
95% en la construcción de intervalos.

c. Análisis crudo (Bivariado)

Se evaluó la asociación y su magnitud de las variables cualitativas con el
empleo de la razón de odss (odss ratio, OR) y sus respectivos intervalos de
 confianza al 95%. Asimismo, su significancia con el test Chi cuadrado o con el
test exacto de Fisher según corresponda

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

La variable respuesta es el resultado del diagnóstico del efecto del yogurt enriquecido con
cepas de lactobacillusacidophilus en ratas inducidas a lesiones gástricas con
indometacina.

La variable explicativa son los grupos sometidos en la investigación ( control,

indometacina y yogurt con indometacina). Es un factor con 3 niveles.

RESULTADOS

En el presente trabajo se desea saber la efectividad del efecto protector del yogurt
enriquecido con cepas de lactobacillus acidophilus en ratas inducidas a lesiones gástricas
con indometacina. En el que se ha trabajado con tres grupos. A continuación se presenta
las estadísticas descriptivas de cada uno de ellos.

TABLA 1

Descriptivos

Porcentaje de Hiperemía
Intervalo de confianza
para la media al 95%
Desviación Límite Límite
N Media típica Error típico inferior superior Mínimo Máximo
Yogurt con indometacina 7 12,25 ,83 ,31 11,48 13,01 11,16 13,35
Sólo indometacina 7 15,74 1,13 ,43 14,70 16,78 14,23 17,30
Control 7 2,22 ,49 ,19 1,77 2,68 1,54 2,87
Total 21 10,07 5,93 1,29 7,37 12,77 1,54 17,30

Como se observa el grupo control a quien no se le ha administrado ningún producto, ni el

yogurt, ni la indometacina el porcentaje de lesiones de hiperemia es bajo (2,22%), aquello
que se ha administrado solamente indometacina el porcentaje de lesiones de hiperemia
son mayores (15,74%).

En esta tabla se haya porcentaje máximo de lesiones en cada grupo y observamos que le
grupo al que sólo se le administro indometacina tiene el mayor porcentaje con el 17,3% y
el mínimo 1,54% correspondiente al grupo control.

En la presente investigación se desea comparar cada uno de los grupos para esto
podemos aplicar la Anova, sin embargo la aplicación de esta técnica es factible si cumple
los siguientes requisitos:

NORMALIDAD
No se observa datos discordantes (outliers) los datos tienen un comportamiento normal
en cada uno de los grupos

HOMOSCEDASTICIDAD

Prueba de homogeneidad de varianzas

Porcentaje de Hiperemía
Estadístico
de Levene gl1 gl2 Sig.
3,070 2 18 ,071

La prueba de homogeneidad de varianzas tiene una significación de p = 0,071 de lo que

podemos considerar que los 3 grupos son homoscedásticos

Como se ha comprobado que se cumplen los supuestos entonces podemos comparar las
medias de los tres grupos, es decir:

H 0 : μ1=μ2=μ3
H 1: μ1 ≠ μ 2 ≠ μ3

ANOVA

Porcentaje de Hiperemía
Suma de Media
cuadrados gl cuadrática F Sig.
Inter-grupos 689,178 2 344,589 469,275 ,000
Intra-grupos 13,217 18 ,734
Total 702,396 20

De la tabla de ANOVA sacamos el test F=469,3 que corresponde un valor-p de 0,00, este
valor-p es menor que el nivel de significación de 0,05, por lo tanto rechazamos la hipótesis
nula y concluimos que existen diferencias significativas entre las medias de los tres grupos
al 5%.
En la aplicación de la Anova se ha logrado determinar que existe diferencia entre los
grupos, sin embargo, vamos a determinar mediante una Prueba Post Hoc usando el
método de Bonferrini para realizar comparaciones múltiples.

Comparaciones múltiples

Variable dependiente: Porcentaje de Hiperemía

Bonferroni
Intervalo de confianza
al 95%
Diferencia de Error Límite Límite
(I) Grupo (J) Grupo medias (I-J) típico Sig. inferior superior
Yogurt con indometacina Sólo indometacina -3,50 * ,46 ,00 -4,70 -2,29
Control 10,02* ,46 ,00 8,81 11,23
Sólo indometacina Yogurt con indometacina 3,50 * ,46 ,00 2,29 4,70
Control 13,52* ,46 ,00 12,31 14,73
Control Yogurt con indometacina -10,02* ,46 ,00 -11,23 -8,81
Sólo indometacina -13,52* ,46 ,00 -14,73 -12,31
*. La diferencia de medias es significativa al nivel .05.

Se observa que al comparar los grupos entre sí, es decir control con el yogurt con
indometacina, control con solo indometacina y así todas las posibles combinaciones en
todos los casos son significativos, es decir todos los grupos son diferentes.
GRAFICO DE MEDIAS

15,74

15,00

12,25
12,50

10,00

7,50

5,00

2,50 2,22

Yogurt con indometacina Sólo indometacina Control

Grupo

En este grafico muestra la media de porcentaje de Hiperemia en cada grupo. Como se

observa en la tabla 1 la media del grupo control es la más baja, al grupo que se le
administro el yogurt tiene un menor porcentaje que aquellos que se le administro sólo la
indometacina sin embargo en estos dos últimos grupos presentan una lesión moderada
concluyendo que el yogurt enriquecido con cepas de lactobacillus acidophillus muestra
una leve gastroprotección.
 ESTUDIO HISTOPATOLÓGICO
GRUPO CONTROL NEGATIVO

(grupo que no recibió sustancia alguna)

Fig 1.Corte histológico de estómago de rata. Se observa todas las capas del estómago
conservadas (mucosa, submucosa, múscular y cerosa)
 GRUPO EXPERIMENTAL “YOGURT”

Fig. 1 Corte histológico de Estomago de Rata. Puntero: Gran cantidad de hematíes en la Luz del
vaso. Estructura conservada.

Fig. 2 hematíes en la Luz del vaso, se observa extravasación de hematíes en submucosa

 Fig. 2 Abundantes regiones de sangrado en todas las capas, hematíes extravasados.

GRUPO CONTROL POSITIVO

(Grupo Indometacina)

Fig 1.Corte histológico de estómago de rata. Se observa abudante sangre sobre la mucosa
Fig.3 Pequeñas regiones con pérdida de la mucosa gástrica que se prolonga hasta submucosa
ANALISIS ANATOMOPATOLOGICO

Vista macroscópica del estómago de

una rata proveniente del grupo control
negativo, el cual presenta normalidad y
conservación de la estructura.
Vista macroscópica del estómago de una rata
proveniente del grupo experimental, el cual presenta
normalidad y conservación de la estructura con un leve
grado de Hiperemia.

Vista macroscópica del estómago de una rata proveniente del grupo control positivo, el cual presenta
normalidad y conservación de la estructura con un alto grado de Hiperemia sobre todo el órgano (en
el estudio microscópico se evidenció perdida del epitelio en algunas regiones).
DISCUSIÓN

Actualmente se observa un gran aumento en el número de casos que optan por los
probióticos para poder prevenir la gastritis, los resultados del presente trabajo nos
demuestran que el Lactobacillus acidophillus tuvo un efecto protector leve sobre la las
lesiones gástricas.
Nuestros resultados coinciden con los presentados por Nageli Lazo, Miguel Maco, Zulia
Matos y Yolanda Maguiña, quienes encontraron que el Lactobacillus acidophillus tenía un
efecto protector leve sobre la gastritis erosiva: sin embargo, ellos encontraron un nivel
mayor de hiperemia en ratas con presencia de gastritis erosiva (27,5%).
El mecanismo de protección del Lactobacillus acidophilus parece estar principalmente en
el restablecimiento de las prostaglandinas. Como se sabe, los AINEs actúan a nivel de la vía
de las ciclooxigenasas, inhibiéndola, lo que impediría la formación de las prostaglandinas.
Aquí el Lactobacillus acidophilus actúa restableciendo las prostaglandinas, especialmente
la E y la I; esto aumentaría el flujo de sangre en el estómago, lo cual evitaría la hiperemia.
Resultados semejantes también se encontraron en un estudio relaizado en Costa Rica por
Oscar Calderón, Carolina Padilla, Carolina Chaves, Laura Villalobos y María Laura Arias,
pero en este caso se empleó el Lactobacillus rhamnosus, y se demostró que esta bactería
actuaba inhibiendo el crecimiento otras colonias de bacterias patógenas, como E. coli,
Listeria monocytogenes, Staphylococcusaureus y salmonella enteritidis.

RECOMENDACIONES
En el presente trabajo se empleó una concentración de bacterias de 0.04 mg/mL de
Lactobacillus, lo que se considera como una dosis apropiada de la bacteria, sin embargo,
en el estudio realizado por Nageli Lazo, Miguel Maco, Zulia Matos y Yolanda Maguiña
(quienes trabajaron con dos dosis: una baja que fue de 0.03 mg/mL y una alta que fue de
0.06 mg/mL), se encontró que las ratas sometidas a dosis altas del Lactobacillus hubo un
gran número de casos de gastritis leve y moderada. Entonces se recomienda tener
cuidado al experimentar con este tipo de bacterias, respecto a la cantidad de dosis a
utilizar.
Además se recomienda realizar un estudio para determinar la cantidad exacta de
Lactobacillus que es beneficiosa para el organismo. Como se explicó anteriormente, la
dosis alta de Lactobacillus acidophilus (0,06 mg/mL) resultó ser dañina, ocasionando una
gran incidencia de gastritis erosiva (62,5%) en el estudio mencionado.

CONCLUSIONES

 Se demostró que el yogurt enriquecido con Lactobacillus acidophilus presentó un

grado de gastroprotección leve frente a las lesiones gástricas inducidas por la
indometacina.
 Se encontró un bajo grado de hiperemia (12,25%) en las ratas que recibieron el
yogurt enriquecido con Lactobacillus acidophilus, a comparación del grupo de ratas
que solo recibió indometacina.
 Se encontró de leve a escaso grado de lesión ulcerativa en las ratas que estuvieron
bajo los efectos del yogurt enriquecido con el Lactobacillus acidophilus.
 Se concluye que si existe un grado de protección, aunque leve, del yogurt
enriquecido frente a las lesiones ulcerativas inducidas por la indometacina.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. SOLOMON DH, GURWITZ JH. Toxicity of non-steroidal anti-inflammatory drugs in

the elderly: is advanced age a risk factor?. Am J Medicine 1997;102:208-215

2. Naidu A, W Bidlack & A Clemens. Probiotic spectra of Lactic Acid Bacteria (LAB).
Crit Rev Food Sci Nut.1999; 38(1): 13-126

3. Palou A, Serra F. Pico C. General aspects on the assessemnet of funcional foods in

the Europan Unión, Eur J Clin Nutr 2003; 57 Suppl 1: S12-7

4. Dras. María Pía Taranto, Marta Médeci y Graciela Font de Valdez, Laboratorios de
Tecnología y genética, Centro de Referencia para lactobacilos,mayo 2005

5. Hawkey CJ. Non steroidal antiinflammatory drugs and peptic ulcers. BMJ. 1990;
300:278.

6. Coconnier MH, Bernet MF, Kernéis S, Chauvière G, Fourniat J, Servin AL.

Inhibitionof adhesion of enteroinvasive pathogens to human intestinal Caco-2
cells by Lactobacillusacidophylus strain LB decreases bacterial invasion. FEMS
Microbiol Lett1993; 110:299-306.
7. CHR Hansen. Simposium de quesos y productos lácteos fermentados. San José,
Costa Rica, pp 2-4, 1998.
8. Gotteland M, Cruchet S, Verbeke S. Effect of Lactobacillus ingestion on the
gastrointestinal mucosal barrier alterations induced by indomethacin in humans.
Alim Pharmacol Ther 2001; 15: 11-17.
9. Elliott SN, Buret A, McKnight W, Miller MJS, Wallace JL. Bacteria rapidly colonize
and modulate healing of gastric ulcers in rats. Am J Physiol 1998; 38: G425-32.
10. Coconnier MH, Lievin V, Hemery E, Servin A. Antagonistic activity against
Helicobacter pylori in vitro and in vivo by the human Lactobacillus acidophilus
strain LB. Appl Environ Microbiol 1998; 4573-80.
11. Fierro, Martin. Revista Ama tu Salud. Prebióticos y probióticos: Alimentos
funcionales. Lun, 13/10/2008
12. Código Alimentario Argentino, Capítulo VIII “Alimentos Lácteos”, Artículo 576
(Res. Conj. SPyRS y SAGPA Nº 33/2006 y Nº 563/2006).
13. Ronald Arce, Janet Molina-Ordóñez, Fiorella Morán, José Moreno-Lozano. Efecto
protector del Aloe vera (sábila) en lesiones gástricas inducidas con etanol en ratas.
Revista CIMEL 2007. Vol 12 (2).
14. Ayala S, Diaz D, Palomino M, Armas S, Paz J. Efecto protector de Croton
palanostigma y Aloe vera frente a la injuria aguda de la mucosa gástrica inducida
por etanol en ratas. An Fac Med.1999; 60 (1):22-9
15. Esplugues J, Flórez J. Farmacología de Flores. 10th ed. New York: McGraw-Hill;
1990. p. 757-776.
16. Yoshikawa T, Naito X. The role of neutrophils and inflammation in gastric mucosal
injury. Radic Res. 2000;33:785-94.
17. Obregón MC, Cruchet S, Diaz E, et al. El consumo regular de Lactobacillus
johnsonii La1 interfiere con la colonización gástrica por helicobacter pylori. Rev
chil nutr. 2003; 30(3):243-9.
18. Alarcón T, López–Brea M. Probióticos e infección por Helicobacter pylori.
[Ponencia] Servicio de Microbiología. Hospital Universitario de la Princesa.
Madrid. [Acceso en setiembre de 2007]. Disponible en:
http://www.seq.es/seq/0214-3429/18/supp1/79.pdf
19. Dr. Óscar E. Frisancho Velarde. Gastroenteropatía por antiinflamatorios no
esteroideos
20. Saavedra JM. Clinical applications of probiotic agents, Am J Clin Nut. 2001;
73:1147-1151.
21. Óscar Calderón, Carolina Padilla, Carolina Chaves, Laura Villalobos y María Laura
Arias. Evaluación del efecto del cultivo probiótico Lactobacillus rhamnosus
adicionado a yogurt natural y con probióticos comerciales sobre poblaciones de
Staphylococcusaureus, Escherichiacoli O157:H7, Listeria monocytogenes y
Salmonella enteridis.Caracas – 2007
22. F. Laura-Villoslada, S. Sierra, J. Boza, J. Xaus y M. Olivares. Efectos beneficiosos en
niños sanos del consumo de un producto lácteo que contiene dos cepas
 probióticas. Lactobacillus coryniformis CECT5711 y Lactobacillus gasseri
CECT5714. 2007
23. María Clara Obregón L., Sylvia Cruchet M., Eric Díaz B., Martín Gotterland R. Efecto
regular de Lactobacillus jhonsonii LA 1 interfiere con la colonización gástrica por
helicobacter pylori.

ANEXO
1. Grupo control.

2. Grupo experimental, “Yogurt”

3. Grupo experimental, Indometacina
 MAYO JU
ETAPAS SEMANA 1 SEMANA 2 SEMANA 3 SEMANA 4 SEMANA 5 SEMANA 1 SEMANA 2 SEMANA 3
3 4 5 7 8 9 10 11 12 14 15 16 17 18 19 21 22 24 25 26 28 29 30 31 1 2 4 5 6 7 8 9 11 12 13 14 1
FASE 1
Revisión bibliográfica
Redacción de informe
Redacción y revisión
FASE II
Elaboración del instrumento
Aplicación del instrumento
Redaccion de datos
Tabulación de datos
Análisis y revisión
FASE III
Elaboración del informe
Presentación del informe
Exposición del informe
 PRESUPUESTO

ITEM O CONCEPTOS PRECIO UNITARIO MONTO TOTAL

RATAS HOLLTZMAN 8 SOLES (21 U) S/. 168
COMIDA PARA RATAS (RATONINA) 3 SOLES / Kg (23 Kg) S/. 69
CINTAS DE EMBALAJE 2 SOLES (3 U) S/. 6
INSUMOS PARA YOGURT Precios variados S/. 100
CEPAS DE LACTOBACILLUS 7 SOLES  (2 U) S/. 14
SUEROS 10 SOLES  ( 5 U) S/. 50
JAULAS 30 SOLES  ( 3 U) S/. 90
COMIDEROS 5 SOLES  (3 U) S/. 15
BEBEDEROS 4 SOLES  (3 U) S/. 12
GUANTES 15 SOLES  (2 U) S/. 30
PREPARADO DE LÁMINAS 15 SOLES  (3 U) S/. 45
INDOMETACINA 10 SOLES  (1 U) S/. 10
PENTOBARBITAL 20 SOLES  (1 U) S/. 20
FOTOCOPIAS E IMPRESIONES 0.10 (100 U) S/. 10
MOVILIDAD 20 SOLES(4) S/. 80
IMPLEMENTOS investigadores)
Precios variados S/. 30
COSTO TOTAL S/. 749

Recursos humanos
 Asesor de diseño y metodología: Dr. Felix A. Bernuy

COSTO TOTAL DE LA INVESTIGACIÓN: S/. 749