Prueba Cuantitativa de Anticuerpos igM, igG (Covid19)
INSTITUTO SUPERIOR TECNOLOGICO PUBLICO
“MANUEL NUÑEZ BUTRON” JULIACA
PROGRAMA DE ESTUDIOS DE LABORATORIO CLINICO
TEMA: Prueba Cuantitativa de Anticuerpos igM, igG (Covid19)
AUTORES: Quispe Ojeda Shirly Liliana
c
RESUMEN:
OVID-19 IgG/IgM en 2019, en la cuidad de
Wuhan, China, se detectaron pacientes
infectados con un nuevo coronavirus
denominado 2019-nCoV, hoy SARS-CoV-2.
El alarmante crecimiento de esta pandemia
hace necesario conocer e implementar
métodos de diagnóstico confiables para detectar y tratar
adecuadamente a los pacientes, lo que contribuirá a
frenar la propagación de la enfermedad. La necesidad
de tener profesionales entrenados en la toma de
muestras, en las buenas prácticas de laboratorio clínico
y en el manejo de técnicas moleculares y
hematológicas es de suma importancia para identificar
adecuadamente la infección con este virus. La
estandarización de los protocolos de obtención,
traslado y almacenamiento de la muestra es igualmente
relevante para detener la expansión de la pandemia de
COVID-19 causada por el SARS-CoV-2, se dispone de
los métodos serológicos que permiten detectar la
presencia de anticuerpos IgM e IgG que se generan
luego de la respuesta inmune contra el SARS-COV-2,
por lo general estas pruebas ayudan a identificar a los
pacientes con infección previa por el virus SARS-COV-
2 y aquellos con infección aguda luego de 10 días o más
iniciada la infección. (1)
Las pruebas cuantitativas en muchos casos, no solo
queremos saber si un paciente tiene anticuerpos contra
ciertos patógenos, sino también su concentración o
tasa. Esto es útil porque para muchas infecciones, la
concentración puede correlacionarse con la condición
clínica.
Para ello, realizamos diluciones seriadas del suero que
irán sucesivamente disminuyendo la concentración de
anticuerpos; el título del suero será la última dilución del
suero que da una reacción positiva. Según esto, un
suero con un título 1/32 tendrá menos anticuerpos que
un suero con un título 1/256. En base a este concepto
creamos una curva de calibración, con la cual vamos a
comparar nuestro suero problema y vamos a dar un
resultado cuantificado.
En la actualidad las metodologías cuantificadas ya
vienen con calibradores para generar una curva de
calibración y las respectivas unidades que le dan el
carácter de cuantificación (mUI/mL, ng/mL, ug/dL,
UI/mL). (2)
Palabras clave: Covid-19 IgM, IgG, SARS-COV-2
SUMMARY
OVID-19 IgG / IgM In 2019, in the city of Wuhan, China,
patients infected with a new coronavirus called 2019-
nCoV, today SARS-CoV-2, were detected. The
alarming growth of this pandemic makes it necessary to
know and implement reliable diagnostic methods to
properly detect and treat patients, which will help slow
the spread of the disease. The need to have
professionals trained in taking samples, in good clinical
laboratory practices, and in the handling of molecular
and hematological techniques is of utmost importance
to properly identify infection with this virus. The
standardization of the protocols for obtaining,
transferring and storing the sample is equally relevant
to stop the spread of the COVID-19 pandemic caused
by SARS-CoV-2, there are serological methods that
allow detecting the presence of antibodies IgM and IgG
that are generated after the immune response against
SARS-COV-2, these tests generally help to identify
patients with previous infection by the SARS-COV-2
virus and those with acute infection after 10 days or
more started the infection.
Quantitative tests in many cases, we not only want to
know if a patient has antibodies against certain
pathogens, but also their concentration or rate. This is
useful because for many infections, the concentration
can be correlated with the clinical condition.
To do this, we carry out serial dilutions of the serum that
will successively decrease the concentration of
antibodies; the serum titer will be the last serum dilution
that gives a positive reaction. According to this, a serum
with a 1/32 titer will have fewer antibodies than a serum
with a 1/256 titer. Based on this concept, we create a
calibration curve, with which we are going to compare
our problem serum and we are going to give a quantified
result.
At present, the quantified methodologies already come
with calibrators to generate a calibration curve and the
respective units that give it the character of
quantification (mIU / mL, ng / mL, ug / dL, IU / mL).
Keywords: Covid-19 IgM, IgG, SARS-COV-2
INTRODUCCION:
L
os Coronavirus son virus de ARN y envoltura
vírica que se distribuyen ampliamente entre
humanos, mamíferos y aves y causan
enfermedades respiratorias, entéricas, hepáticas
y neurológicas. Se sabe que siete cepas de coronavirus
causan enfermedades en humanos. Cuatro cepas -
229E, OC43, NL63 y HKU1 - son prevalentes y
típicamente causan síntomas del resfriado común en
individuos inmunocompetentes. Las otras tres cepas:
coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave
(SRAG), Síndrome respiratorio por coronavirus de
Oriente Medio (MERS) y el nuevo coronavirus del 2019
(COVID-19): son de origen zoonótico y se han
relacionado con enfermedades que pueden a llegar a
ser fatales. Los anticuerpos IgG e IgM para el nuevo
Prueba Cuantitativa de Anticuerpos igM, igG (Covid19)
coronavirus 2019 se pueden detectar 2-3 semanas
después de la exposición. La IgG sigue siendo positiva,
pero el nivel de anticuerpos disminuye con el tiempo.
En la gran mayoría de los casos, la infección por SARS-
CoV-2 presenta síntomas parecidos a la influenza, pero
en los pacientes con edad avanzada la enfermedad
puede progresar hasta una forma grave de neumonía
intersticial, que rápidamente evoluciona y causa la
muerte a entre el 2 % y el 5 % de los casos, aunque
factores como la edad y las enfermedades crónicas
preexistentes pueden incrementar esta cifra.
Debido a su condición de pandemia, es imprescindible
contar con métodos de diagnóstico confiables para la
determinación de esta infección viral, lo que contribuye
a su diagnóstico oportuno, y además reduce la
posibilidad de clasificar a individuos como falsos
negativos, los que podrían propagar la enfermedad.
Diversos institutos de investigación en todo el mundo,
asociados con laboratorios de salud pública, son
capaces de implementar tecnologías de detección
basadas en pruebas serológicas basadas en la
detección de las inmunoglobulinas específicas de
cepas de coronavirus para emitir diagnósticos precisos
y confiables. En todos estos casos, las muestras virales
de pacientes infectados son la única fuente que se tiene
para establecer, controlar ensayos y validar protocolos
que son compartidos con la comunidad internacional.
Si bien los exámenes de laboratorio son determinantes
para el diagnóstico de la enfermedad, no menos
relevante es realizar una buena toma de muestra al
paciente, procedimiento que contribuirá a la
conservación de la muestra y la fiabilidad del resultado
final. En este sentido, los errores de diagnóstico como
consecuencia de incorrectos procedimientos
preanalíticos pueden ocurrir en los laboratorios clínicos,
sobre todo cuando el personal está sometido a entregar
resultados bajo alta presión laboral, tal como ocurre en
los laboratorios en todo el mundo debido al crecimiento
exponencial de casos positivos a SARS-CoV-2). (1)
El presente trabajo muestra una breve introducción
sobre la estructura, y la respuesta inmune del
hospedero contra los coronavirus, información
necesaria para diseñar y validar técnicas de diagnóstico
cuantitativas en IgG e IgM para la COVID-19.
Adicionalmente, hace referencia a temas relacionados
con la toma y manejo de la muestra, aspectos no menos
relevantes de la etapa preanalítica del diagnóstico.
CÓMO DIFERENCIAR ENTRE PRUEBAS
CUALITATIVAS Y CUANTITATIVAS
Hoy en día varios proveedores promocionan sus
pruebas cuantificadas y los médicos tratantes también
ordenan mucho estas pruebas. ¿Pero está bien
utilizado el término “prueba cuantificada”? Teniendo en
cuenta los conceptos de la sección anterior, analicemos
cuándo se debe utiliza el término y cuándo no.
Muchos laboratorios indican que sus pruebas son
cuantificadas, porque les dan un número en el cual el
médico puede basarse para su tratamiento y
seguimiento. Sin embargo, eso no es del todo correcto.
La mayoría de las pruebas tienen índices elaborados
por los propios fabricantes para poder darles un valor a
sus pruebas. Se basan por lo general en un punto de
corte y encontramos entre estos índices las siguientes
nomenclaturas (COI, INDEX, NTU, Abs, Cov, AU). Por
lo tanto, pruebas que vienen con esas nomenclaturas
se deberían considerar cualitativas o semicuantitativas,
pero no cuantitativas.
Es fácil evidenciar si una prueba es cuantificada o no y
lo podemos revisar directamente con el inserto del
producto. Por lo general, en el título o en la introducción
del documento este nos indica, por ejemplo:
ntended for qualitative detection and differentiation of
IgG/IgM antibodies to the novel coronavirus SARS-
CoV-2 in human venous whole blood, serum or plasma
samples.
Destinado a la detección cualitativa y la diferenciación
de anticuerpos IgG / IgM contra el nuevo coronavirus
SARS-CoV-2 en muestras de sangre completa venosa
humana, suero o plasma.
Ahora la pregunta es, ¿cómo encuentro unas pruebas
cuantitativas y qué debería buscar en el inserto? Como
indicamos antes, las pruebas cuantitativas se reportan
en unidades cuantificadas como mUI/mL, ng/mL, ug/dL
o UI/mL.
Por ejemplo, las pruebas COVID-19 de anticuerpos de
la casa Lansionbio se reportan en mUI/mL y utilizan una
curva de calibración para hacer la interpolación de los
resultados. La interpretación se realiza mediante un
dispositivo de lectura que nos indica la cantidad de
miliunidades internacionales de anticuerpos IgM e IgG
que tiene el paciente por cada mililitro. En el inserto, en
la sección de interpretación de resultados, se puede
observar los rangos para resultados positivos y
negativos y sus respectivas unidades. (2)
PRUEBAS SEMICUANTITATIVAS
Las pruebas semicuantitativas (cualitativas, pero con un
índice) pueden hacerse por las metodologías de ELISA
y CLIA. Algunas pruebas de ELISA disponibles
actualmente permiten medir las IgM e IgG como las de
Monobind. A través de la metodología de CLIA
(quimioluminiscencia), algunos fabricantes permiten
detectar las IgA e IgM en conjunto y las IgG pueden
medirse solas.
Todos estos resultados semicuantitativos arrojan un
valor que, a partir de un punto de corte, orientará si hay
presencia o no de anticuerpos, dando como resultados
la interpretación de REACTIVO o NO REACTIVO,
POSITIVO o NEGATIVO y un rango intermedio o
INDETERMINADO.
Inmunoensayos tipo ELISA
Prueba Cuantitativa de Anticuerpos igM, igG (Covid19)
Un ELISA es una técnica común que se puede utilizar
para detectar antígenos o anticuerpos. Los ensayos
ELISA utilizan enzimas unidas a anticuerpos que
causan un cambio de color que puede ser cuantificado.
La fuerza del cambio de color es proporcional al número
de anticuerpos presentes en la muestra. Los ELISA
permiten realizar hasta 96 ensayos completados al
mismo tiempo, lo que permite disponer de un método
económico y efectivo para analizar lotes de con muchas
muestras al mismo tiempo. Esta tecnología podría
ayudar a acelerar el número de pacientes que se
pueden analizar para el SARS-CoV-2.
Un ELISA detecta anticuerpos producidos en la sangre
del paciente debido a la infección con SARS-CoV-2.
Todo el experimento se puede realizar en un pocillo e
implica mezclar muestras de pacientes, anticuerpos,
antígenos y enzimas junto con un sustrato que al ser
metabolizado se convierte en un producto que cambia
de color.
Los kits de ELISA para detectar anticuerpos están
detectando la respuesta de los anticuerpos a la
infección por COVID-19. La detección de anticuerpos
contra el SARS-CoV-2 podría decirle a un especialista
clínico si un paciente ha sido infectado con COVID-19,
ya sea actualmente o en el pasado. Sin embargo, los
pacientes infectados no serán detectados
inmediatamente después de la infección, sino solo
cuando el sistema inmune al virus pueda detectarse en
la sangre, aproximadamente 5 días después de la
infección. El conocimiento actual sugiere que una vez
que una persona ha sido infectada con el virus, su
sistema inmunológico evitará una futura infección con
el mismo virus. (3)
En este sentido, la capacidad de detectar anticuerpos
dirigidos contra la proteína SARS-CoV-Spike en sueros
de pacientes representa un poderoso biomarcador para
la confirmación de la infección. Aquí, Presentamos el
diseño de un ensayo de serología fluorescente basada
en células de prueba de concepto (denominado C19-SI-
IFA) para detectar la infección por SARS-CoV-2. El
ensayo se basa en la captura de anticuerpos IgG en el
suero de pacientes COVID-19 positivos utilizando
células que expresan exógenamente SARS-CoV-2-
Spike y su posterior detección fluorescente.
Figura 1 Esquema del ensayo C19-SI-IFA. Se
añadieron muestras de suero a células que expresan
A549-SARS-CoV-2-spike. Se detectaron anti-COVID-
19-IgG unidas con anti-IgG-humana-FITC. Las células
positivas fueron indicativas de sueros infectados con
virus.
Prueba cuantitativa de anticuerpos IgG IgM Covid-19
Pueden usarse diferentes tipos de ensayos para
determinar diferentes aspectos de la respuesta inmune
adaptativa y la funcionalidad de los anticuerpos. Las
pruebas pueden clasificarse ampliamente para detectar
anticuerpos de unión o neutralizantes.
Detección de anticuerpos de unión:Estas pruebas
utilizan proteínas purificadas de SARS-CoV-2, virus no
viables, y se pueden realizar en laboratorios con niveles
de bioseguridad más bajos (p. Ej., BSL-2). Con
reactivos específicos, se pueden diferenciar tipos de
anticuerpos individuales, como IgG, IgM e IgA. Tanto
los anticuerpos IgM como IgG del SARS-CoV-2 pueden
detectarse aproximadamente al mismo tiempo después
de la infección. Sin embargo, aunque la IgM es más útil
para determinar una infección reciente, por lo general
se vuelve indetectable semanas o meses después de la
infección; por el contrario, la IgG suele detectarse
durante períodos más prolongados. La IgA es
importante para la inmunidad de las mucosas y puede
detectarse en secreciones mucosas como la saliva
además de la sangre; aunque aún no se ha
determinado su importancia en esta enfermedad.
Dependiendo de su complejidad.
Las pruebas de laboratorio utilizan métodos de flujo
lateral, ELISA o inmunoensayo quimioluminiscente
(CIA) para la detección de anticuerpos en suero,
plasma, sangre completa y gotas de sangre seca, que,
para algunos ensayos, pueden requerir científicos de
laboratorio capacitados e instrumentos especializados.
Según la prueba, se pueden detectar anticuerpos
totales (Ig) o se pueden detectar IgG e IgM por
separado. Si bien la mayoría de las pruebas detectan
anticuerpos contra las proteínas S o N, algunas pruebas
pueden detectar anticuerpos contra ambas proteínas
inmunodominantes (ensayos múltiples).
Indicaciones para la prueba de anticuerpos y la
interpretación de los resultados.
La prueba de anticuerpos no reemplaza las pruebas
virológicas y no debe usarse para establecer la
presencia o ausencia de una infección aguda por
SARS-CoV-2. Las personas sospechosas de tener
COVID-19 que dan positivo por métodos de detección
viral directa para SARS-CoV-2 (p. Ej., NAAT o pruebas
de detección de antígenos) generalmente comienzan a
desarrollar anticuerpos medibles 7 a 14 días después
del inicio de la enfermedad, y a las 3 semanas la
mayoría de las personas dará positivo para anticuerpos.
Durante este intervalo, la sensibilidad de la detección
de infecciones mediante la detección de ácidos
nucleicos o las pruebas de detección de antígenos está
disminuyendo y la sensibilidad de las pruebas
serológicas está aumentando. Las pruebas de
anticuerpos pueden ser útiles para respaldar el
diagnóstico de la enfermedad por COVID-19 o las
complicaciones de COVID-19 en las siguientes
situaciones:
Una prueba de anticuerpos positiva al menos 7 días
después del inicio de la enfermedad aguda en personas
Prueba Cuantitativa de Anticuerpos igM, igG (Covid19)
que tuvieron una prueba de anticuerpos negativa previa
(p. Ej., Seroconversión) pero no recibieron una prueba
viral positiva podría indicar una infección por SARS-
CoV-2 entre las fechas del negativo y pruebas de
anticuerpos positivas.
Una prueba de anticuerpos positiva puede ayudar a
respaldar un diagnóstico cuando los pacientes
presentan complicaciones de COVID-19, como
síndrome inflamatorio multisistémico u otras secuelas
posaguda de COVID-19.
Los anticuerpos contra el SARS-CoV-2, en particular
los anticuerpos IgG, pueden persistir durante meses y
posiblemente años. Por lo tanto, cuando las pruebas de
anticuerpos se utilizan para respaldar el diagnóstico de
COVID-19 reciente, un solo resultado positivo de la
prueba de anticuerpos podría reflejar una infección o
vacunación anterior por el SARS-CoV-2 en lugar de la
enfermedad más reciente. (4)
I. FASE PREANALITICA
1.1. SOLICITUD DE ANALISIS
- Orden Médica:
Al sospechar un caso de COVID-19 la prueba
recomendada para el diagnóstico de infección
por SARS-CoV2, prueba cuantitativa de IgM e
IgG.
- Toma de muestras:
En el caso de toma de muestras con pacientes
sospechosos de COVID-19, se recomienda
crear identificación especial de estos
pacientes, y que estos permanezcan poco
tiempo en los centros de salud, esperando el
resultado de sus exámenes en su domicilio, si
sus síntomas no son graves, o bien esperar en
una zona aislada reservada para estos
pacientes.
Así mismo, se recomienda, tanto para el
paciente como para su acompañante, uso de
mascarilla mientras permanece en la unidad.
- Transporte de muestras:
 Los formularios o la orden médica
deben venir separados de la
muestra.
 El funcionario que transportará las
muestras debe estar informado que
se trata de muestras de caso
sospechoso de Coronavirus.
 El transporte de muestras que
pueden contener 2019-nCoV debe
usar un empaque triple y cumplir con
normas internacionales relacionadas
con el transporte de sustancias
infecciosas: "Sustancia biológica,
categoría B".
 No se recomienda usar sistemas de
transporte pneumático por el riesgo
de liberación de aerosoles.
 Las muestras sanguineas deben
transportarse en un medio de
transporte viral, en condición
refrigerada a 4ºC pues es un virus
RNA y con ello se evita el riesgo de
deterioro de la muestra. (5)
Los errores preanalíticos en los estudios
pueden ocurrir por falta de identificación o
identificación errónea de la muestra, la
colección inadecuada o la cantidad
insuficiente de la muestra por analizar, las
condiciones imprecisas de transporte y
almacenamiento de la muestra (exposición a
lesiones, cadena de frío poco confiable,
tiempo de transporte prolongado) y la
presencia de sustancias interferentes (por
ejemplo, liberación de componentes celulares
que pueden interferir en el ensayo debido a la
congelación de sangre entera, uso de aditivos
inapropiados), La viabilidad de la muestra es
responsabilidad del personal que la recoge y
que debe asegurar la cadena de custodia
hasta que dicha muestra llega al laboratorio.
1.2. INFORMACION Y ORIENTACION AL PCTE
PREPARACIONES Y RECOMENDACIONES
AL PCTE DE LA PRUEBA
Los pacientes que se realicen pruebas de
detección deben recibir información clara
sobre:
El fabricante y nombre de la prueba, el tipo de
prueba, la finalidad de la prueba, las
especificaciones de desempeño de la prueba,
las limitaciones asociadas a la prueba, cómo
se realizará la prueba, cómo y cuándo
recibirán los resultados de la prueba; y cómo
entender lo que significan los resultados,
medidas asociadas a resultados negativos o
positivos, diferencia entre la realización de una
prueba como evaluación en el lugar de trabajo
y la realización de una prueba con fines de
diagnóstico médico, quién recibirá los
resultados, cómo se usarán los resultados y
las consecuencias de negarse a someterse a
la prueba de detección.
Es obligatorio entregar a las personas hojas
informativas para el paciente sobre la
autorización de uso de emergencia ícono de
sitio externo (EUA, por sus siglas en inglés) de
las pruebas. (4)
Prueba Cuantitativa de Anticuerpos igM, igG (Covid19)
1.2.1. PREPARACION PSICOLOGICA DEL PCTE
Se debe tranquilizar al paciente indicándole
que se realizara una prueba invasiva que no
es muy dolorosa, y al enterarse de un
resultado positivo no se altere y que lo tome
con tranquilidad indicándole que recibirá su
tratamiento correspondiente de ser así.
1.2.1.1. OBTENCION Y/O RECOLECCION DE LA
MUESTRA:
1 COVID-19 IgG/IgM (Serum/Plasma) puede
realizarse usando suero o plasma.
2 Separe el suero o el plasma de la sangre lo
antes posible para evitar la hemólisis. Utilice
solo muestras transparentes no hemolizadas.
3 La prueba debe realizarse inmediatamente
después de la recolección de la muestra. No
deje las muestras a temperatura ambiente por
períodos prolongados. Las muestras de suero
y plasma se pueden almacenar a 2-8°C hasta
3 días. Para almacenar a largo plazo, las
muestras deben mantenerse por debajo de los
-20°C. La sangre recolectada por punción
intravenosa debe almacenarse a 2-8°C si la
prueba se realizará dentro de los 2 días
posteriores a la recolección. No congele
muestras de sangre. La sangre recolectada
por punción digital debe analizarse de
inmediato.
4.Las muestras congeladas deben
descongelarse completamente (a temperatura
ambiente) y mezclarse bien antes de la
prueba. Las muestras no deben congelarse y
descongelarse repetidamente.
5. Si se van a enviar muestras, se deben
empaquetar de acuerdo con las regulaciones
locales sobre el transporte de agentes
etiológicos.
1.2.2. CONSERVACION Y TRANSPORTE DE LA
MUESTRA:
Las muestras deben mantenerse refrigeradas
(4-8 °C) y enviarse al laboratorio donde se
procesarán en un plazo de 24 a72 horas
después de la toma. Si no se pueden enviar
las muestras dentro de este período, se
recomienda congelarlas a -70 °C (o menos)
hasta que se envíen (asegurando que se
mantenga la cadena de frío). Si los hisopos se
colocaron en solución salina estéril en lugar de
medio de transporte viral, el envío debe ser
inmediato.
El envío de muestras sospechosas debe
cumplir con las reglamentaciones nacionales y
utilizar, como mínimo, un sistema de triple
empaque básico (12). Además, los envíos a
laboratorios de referencia o centros
colaboradores fuera del país deben cumplir
todas las normas internacionales para
sustancias biológicas de categoría B (13).
PREPARACION DE MATERIALES,
INSUMOS Y EQUIPOS:
1. Suero
recolectar la sangre en un tubo sin aditivos, y
mantener a temperatura ambiente durante 30
minutos antes de procesar.
Centrifugar durante 10 minutos (3000rpm,
4°C).
Utilizar inmediatamente después de la
centrifugación o congelar el sobrenadante a -
80 °C previamente alicuado para evitar ciclos
de congelación/descongelación.
Plasma
recolectar la sangre en un tubo con
anticoagulante, y mantener a temperatura
ambiente durante 30 minutos antes de
procesar.
Centrifugar durante 10 minutos (3000rpm,
4°C).
Utilizar inmediatamente después de la
centrifugación o congelar el sobrenadante a -
80 °C previamente alicuado para evitar ciclos
de congelación/descongelación.
Las pipetas son parte del equipo estándar de
un laboratorio. En las pruebas de ELISA, se
utilizan para transferir un volumen preciso de
una solución a los pocillos de la placa de
microtitulación. Las pipetas están disponibles
en varias versiones.
El lavador de ELISA se usa para lavar las
placas de microtitulación. La placa de ELISA
debe lavarse con búfer de lavado después de
cada paso de incubación (excepto la
incubación con el sustrato). Este es un paso
crucial para obtener resultados de alta
precisión cuando se realizan pruebas de
ELISA.
El lector de ELISA también tiene una función
esencial. Se trata de un espectrofotómetro que
permite medir la densidad óptica (DO) y
calcular la concentración de una muestra. El
elevado costo, así como los requisitos de
espacio y mantenimiento, suelen ser un
obstáculo para iniciar el análisis por ELISA, en
especial para los laboratorios pequeños. (6)
1.2.3.1. BIOSEGURIDAD:
La bioseguridad es un aspecto muy importante
que se debe considerar durante la toma y el
manejo de la muestra requerida para el
diagnóstico de la enfermedad COVID-19. La
OMS recomienda el nivel 2 para realizar las
pruebas de diagnóstico. El personal de
laboratorio debe tener entrenamiento
específico en el manejo de agentes
patógenos, bajo la supervisión directa de un
investigador competente, según las normas de
bioseguridad de cada laboratorio.
Prueba Cuantitativa de Anticuerpos igM, igG (Covid19)
II. FASE ANALITICA
.1.1. PASO 1
Manejo de muestras dentro del laboratorio:
Según las recomendaciones del CDC, cualquier
procedimiento que genere potencialmente
aerosoles (por ejemplo, alicuotar, vortear o
centrifugar tubos abiertos) debe manejarse en
gabinete de Bioseguridad.
Los procedimientos que generen aerosoles y se
realicen fuera del gabinete de bioseguridad, así
como la limpieza de material altamente clínico
sospechoso, debe hacerse con el uso de la
máscara N95 o equivalente, guantes, pechera y
antiparras. Después de que las muestras hayan
sido procesadas, las superficies y el equipo deben
ser descontaminados con desinfectantes
apropiados.
Deje que la muestra, se equilibren a temperatura
ambiente (15-30°C) antes de realizar la prueba.
.2. (PASOS DE FASE ANALITICA):
1. Una muestra de plasma del paciente se
añade al pocillo que contiene el antígeno
específico de SARS-CoV-2.
2. Los anticuerpos presentes (o no) contra el
SARS-CoV-2 en el plasma del paciente se
unen a los antígenos dispuestos en la base
del pocillo, el resto de los elementos
presenten en la muestra del plasma son
eliminados mediante lavados.
3. Se añaden anticuerpos secundarios
unidos con enzimas se unen a los
anticuerpos del paciente. El exceso de
anticuerpo no unido al anticuerpo del
paciente es eliminado mediante lavados.
4. Se añade el sustrato que es reconocido
por las enzimas que están unidas al
anticuerpo secundario.
5. En los pocillos que se encuentran los
anticuerpos contra SARS-CoV-2 empiezan
a cambiar de color.
6. El producto formado es capaz de ser
determinado objetivamente con un lector
de placas.
7. Si el paciente no fue infectado con COVID-
19, todo el proceso no puede ser llevado a
cabo, de tal forma que no se forma un
cambio de color en el pocillo. (3)
.2.1. RECOMENDACIONES PARA EVITAR
ERRORES, U OTRO REFERIDO AL
PROCEDIMIENTO.
Los errores preanalíticos en los estudios
pueden ocurrir por falta de identificación o
identificación errónea de la muestra, la
colección inadecuada o la cantidad
insuficiente de la muestra por analizar, las
condiciones imprecisas de transporte y
almacenamiento de la muestra (exposición a
lesiones, cadena de frío poco confiable,
tiempo de transporte prolongado) y la
presencia de sustancias interferentes (por
ejemplo, liberación de componentes celulares
que pueden interferir en el ensayo debido a la
congelación de sangre entera, uso de aditivos
inapropiados)
La viabilidad de la muestra es responsabilidad
del personal que la recoge y que debe
asegurar la cadena de custodia hasta que
dicha muestra llega al laboratorio. Cuando el
laboratorio que realiza el diagnóstico no es el
responsable del proceso de toma de la
muestra, deberá solicitar toda la información
importante para el manejo, embalaje y
condiciones de transporte de la muestra.
Además, se debe contar con todos los datos
relevantes que permitan la correcta
identificación de la muestra (nombre y
apellidos del usuario o código, fecha de
nacimiento, tipo de muestra que se envía y
fecha de recolección). Estos y otros detalles
respecto al manejo de las muestras de
pacientes se han protocolizado debido a su
importancia en la condición pandémica actual.
III. FASE POST ANALITICA
Validación y confirmación de SARS CoV2 IgM e
IgG cuantitativa.
Los laboratorios que se encuentren certificados por el
ISP para realizar el informe directo de resultados del
SARS CoV2 IgM e IgG cuantitativa, pueden emitir sus
resultados directamente, sin enviar la muestra a
confirmación. Los laboratorios que no se encuentren
certificados por el ISP para realizar informe directo de
SARS CoV2, deben enviar la muestra a confirmación a
un laboratorio que se encuentre certificado, usando un
empaque triple y cumpliendo con normas
internacionales relacionadas con el transporte de
sustancias infecciosas: "Sustancia biológica, categoría
B", con los formularios separados de las muestras.
Sobre la centrifugación de muestras en general es
recomendable que se utilice una tapa de seguridad en
las centrífugas y esperar a que la generación de
aerosoles sea más segura antes de abrir. Se debe usar
máscarilla N95 si existe riesgo de aerosoles o hacer el
proceso en un gabinete de bioseguridad clase II.
Prueba Cuantitativa de Anticuerpos igM, igG (Covid19)

.3. FICHA DE RESULTADOS

Bibliografía
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IgG son positivos o negativos. Los resultados content/uploads/2020/04/RECOMENDACIONES_E
obtenidos pueden ser: N_EL_DIAGNOSTICO_DE_LABORATORIO_DE_S
ARS_08042020.pdf.
 IgM Negativo/IgG Negativo: la prueba de
Elisa no ha detectado anticuerpos, por lo que 6 r-biopharm. r-biopharm. [Online]; 2021. Acceso
es probable que no estés infectado. Sin . Martes de Noviembrede 2021. Disponible en:
embargo, también es posible que la https://www-cdc-
infección aún no tenga suficiente tiempo gov.translate.goog/coronavirus/2019-
para que los anticuerpos sean detectables
ncov/lab/resources/antibody-tests-
por la prueba. Así también es posible que la
guidelines.html?_x_tr_sl=en&_x_tr_tl=es&_x_tr_hl=
infección haya sido hace muchos meses
atrás y los anticuerpos ya no sean es&_x_tr_pto=sc.
detectables por la prueba. Si hay sospecha
de infección actual o reciente, se 7 Almuzara AC. UVaMOOC. [Online]; 2021. Acceso
recomienda pruebas adicionales con otros . Martes de Noviembrede 2021. Disponible en:
métodos clínicos, indicadas siempre por tu https://www.youtube.com/watch?v=isEQqcbQSJ0.
médico tratante. (7)
 IgM positivo/IgG negativo: es probable que 8 S.A.C. LCM. multilab. [Online]; 2021. Acceso
hayas desarrollado el anticuerpo IgM, lo que . Martes de Noviembrede 2021. Disponible en:
sugiere una infección muy reciente. Se https://www.multilab.com.pe/examen/1165/sars-cov-
recomienda la realización de una prueba cuantitativo.
confirmatoria por la metodología PCR,
siempre indicada por tu médico tratante. 9 Almuzara AC. UVaMOOC. [Online]; 2021. Acceso
 IgM positivo/IgG positivo: es probable que . Martes de Noviembrede 2021. Disponible en:
hayas desarrollado los anticuerpos IgM e
https://www.youtube.com/watch?v=isEQqcbQSJ0.
IgG, lo que sugiere una infección reciente,
podría haber sido aproximadamente 12 días
hasta 5 semanas atrás. También es posible
obtener este resultado luego de la
vacunación.
 IgM Negativo/IgG positivo: es probable
que hayas desarrollado los anticuerpos IgG,
lo que sugiere que estuviste infectado en el
pasado o que se trate de anticuerpos
generados tras la vacunación. (7) (9)