Pasos clave del desarrollo humano del cerebro, con el uso de cultivos 2D derivados de células

madre humanas y organoides cerebrales 3D para investigar características y mecanismos de

enfermedades. También discutimos las oportunidades y desafíos de la integración de nuevas
tecnologías para revelar la arquitectura genética del desarrollo y los trastornos del cerebro
humano.

El desarrollo del cerebro humano sigue un desarrollo secuencial, de pasos celulaes y moleculares
que siguen de planos genéticos para poder crear un órgano sofisticado, para tareas sofisticadas de
alto nivel como cognición, memoria, emociones, lenguaje o comportamiento.

Además, los trastornos neurológicos y psiquiátricos con pasos críticos de desarrollo interrumpidos
brindan otra perspectiva para estudiar la genética del desarrollo del cerebro humano al vincular los
rasgos de la enfermedad con su etiología genética.

Gracias a la mayor disponibilidad de muestras de cerebro humano neurotípico y patológico de alta

calidad, los rápidos avances en las tecnologías de detección molecular y los estudios de asociación
de todo el genoma (GWAS) han dado lugar a numerosos conjuntos de datos 'ómicos', que
proporcionan una caracterización molecular de la (pato)fisiología de desarrollo del cerebro
humano.

Junto con los avances en la edición del genoma, los modelos basados en células madre
pluripotentes humanas (células hPS) recientemente establecidos han surgido como una plataforma
sin precedentes para investigar la causalidad del genotipo y el fenotipo durante los procesos de
desarrollo del cerebro humano, identificando la regulación genética específica del tipo de célula a
nivel molecular, celular y niveles anatómicos

Aquí, primero resumimos nuestra comprensión actual de los pasos clave del desarrollo del cerebro
humano, destacando las características enriquecidas por los humanos y centrándonos en la corteza
como ejemplo. A continuación, describimos cómo el estudio de las alteraciones en los paisajes
generales del neurodesarrollo debido a la evolución, los genes de riesgo asociados con los
trastornos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, o el impacto de las exposiciones ambientales
facilita nuestra comprensión del control genético de los procesos de desarrollo del cerebro
humano. Destacamos los descubrimientos recientes de mecanismos genéticos causales que
regulan el desarrollo cortical y las características celulares y moleculares enriquecidas en humanos
a partir de plataformas emergentes basadas en células hPS, y enumeramos ejemplos para ilustrar
cómo estos estudios pueden avanzar en nuestro conocimiento de la genética del desarrollo del
cerebro humano.

Aquí, primero resumimos nuestra comprensión actual de los pasos clave del desarrollo del cerebro
humano, destacando las características enriquecidas por los humanos y centrándonos en la corteza
como ejemplo.

A continuación, describimos cómo el estudio de las alteraciones del neurodesarrollo debido a la

evolución, los genes de riesgo asociados con los trastornos del neurodesarrollo y
neuropsiquiátricos, o el impacto de las exposiciones ambientales facilita nuestra comprensión del
control genético de los procesos de desarrollo del cerebro humano.
Destacamos los descubrimientos recientes de mecanismos genéticos causales que regulan el
desarrollo cortical y las características celulares y moleculares enriquecidas en humanos a partir de
plataformas emergentes basadas en células hPS, y enumeramos ejemplos para ilustrar cómo estos
estudios pueden avanzar en nuestro conocimiento de la genética del desarrollo del cerebro
humano.

Articulamos oportunidades y desafíos de implementar modelos basados en células hPS para

identificar variantes causantes responsables de rasgos humanos específicos en el desarrollo,
función y disfunción del cerebro.

Finalmente, discutimos cómo la integración de modelos basados en células hPS con modelos
animales in vivo y otras tecnologías puede revolucionar nuestro paradigma de investigación para
identificar vínculos genéticos causales entre el desarrollo del cerebro humano y las enfermedades
en una etapa de desarrollo específica del tipo de célula y de la región del cerebro. -forma
específica y específica de cada especie para ayudar en el desarrollo de estrategias terapéuticas
para diversos trastornos del desarrollo cerebral

El desarrollo del cerebro humano sigue patrones espaciotemporales conservados en todos los
mamíferos.

Comienza con la neurulación, un proceso en el que la placa neural, formada a partir del ectodermo
embrionario, se pliega y fusiona para formar un tubo neural cerrado. Este tubo luego se segmenta
en vesículas de linaje restringido que convertirse en el prosencéfalo, el mesencéfalo y el
rombencéfalo (Fig. 1a).

La pared interna del tubo neural contiene células madre neuroepiteliales (NEC) que pueblan la
zona ventricular proliferativa (VZ). Luego, las NEC se transforman en células gliales radiales (RGC)
que producen neuronas excitadoras e inhibidoras posmitóticas y, posteriormente, glia (Fig. 1a, b).

La neurogénesis de los mamíferos se basa en células progenitoras intermedias (IPC), los

descendientes inmediatos de las RGC que se dividen en la zona subventricular (SVZ), para
amplificar la producción neuronal (Fig. 1b). En la corteza en desarrollo, los precursores de las
neuronas excitadoras migran radialmente a lo largo de la estructura glial radial de las CGR para
poblar la placa cortical en una forma estereotipada de una manera 'de adentro hacia afuera', con
neuronas de la capa superior nacidas tardíamente migrando de neuronas de capa profunda
nacidas tempranamente.

Las interneuronas inhibidoras surgen principalmente de progenitores en la eminencia ganglionar y

migran tangencialmente hacia la corteza (Fig. 1a, b). La diferenciación y maduración neuronal
ocurren junto con la migración en ondas temporales superpuestas para lograr la diversificación del
tipo de célula radial y la arealización tangencial para propagar el prosencéfalo dorsal. Mientras se
acercan a sus destinos regionales, las neuronas envían axones y dendritas a través de conos de
crecimiento altamente móviles que integran señales ambientales.

Tras el establecimiento de redes neuronales, se forman espinas dendríticas para permitir las
comunicaciones neuronales a través de sinapsis. El ensamblaje sináptico y la posterior poda
dendrítica y sináptica dependen en gran medida de la actividad neuronal y plástica, y su
refinamiento continuo persiste hasta la edad adulta (Fig. 1a).

Entre las células no neuronales, las CGR generan astrocitos y oligodendrocitos después de la
neurogénesis y maduran durante los primeros períodos posnatales para modular las funciones
neuronales, como la regulación de la transmisión sináptica y la mielinización de los axones
neuronales (Fig. 1a, b).

La microglía derivada del linaje hematopoyético y las células endoteliales que recubren los vasos
sanguíneos migran al sistema nervioso derivado del neuroectodermo para apoyar el desarrollo del
cerebro embrionario. Los cambios genéticos evolutivos dan como resultado neotenia en los
humanos, con procesos de desarrollo temporalmente prolongados en comparación con otras
especies en casi todos los pasos del desarrollo del cerebro, especialmente en la proliferación de
progenitores y el desarrollo neuronal (Fig. 1b).

Por ejemplo, los NEC humanos muestran una diferenciación prolongada, lo que resulta en una
mayor expansión del cerebro anterior que en las abejas. La neurogénesis mediada por RGC en
humanos ocurre a un ritmo sustancialmente más lento (más de 3 meses) e involucra programas
genéticos diferentes que en ratones (~1 semana) y macacos (1 a 2 meses), lo que probablemente
contribuye al agrandamiento desproporcionado del cerebro anterior humano.

También se observa una diferenciación y maduración prolongadas en las neuronas humanas de la

corteza y otras regiones del cerebro, lo que lleva a un aumento en el volumen de neuronas con
neuritas y sinapsis más elaboradas. Estos períodos prolongados pueden permitir un mayor tamaño,
complejidad y plasticidad del cerebro humano, así como una mayor vulnerabilidad a factores
genéticos o ambientales que pueden alterar el desarrollo normal. Aparte de los tiempos
diferenciales en el desarrollo, existen muchas características celulares especiales en los humanos.
La capa SVZ externa de la corteza, una de las características distintivas en humanos y especies con
una corteza girificada (plegada) más grande que está prácticamente ausente en los roedores, surge
de las células gliales radiales externas (oRGC) (Fig. 1b). Estos oRGC exhiben una capacidad
proliferativa mejorada y generan la mayoría de las neuronas corticales de la capa superior,
coincidiendo con la expansión de la corteza de los primates en tamaño y área de superficie.

Existen otros tipos de células exclusivas de los mamíferos girencefálicos (como los primates),
incluidas las RGC truncadas, los progenitores EGFR+ derivados de oRGC que están preparados para
convertirse en precursores de oligodendrocitos y los astrocitos de sustancia blanca derivados de la
SVZ externa (Fig. 1b).

Las interneuronas humanas muestran orígenes únicos y tipos de células distintos en comparación
con los roedores, como la posible producción local de interneuronas por parte de las RGC
corticales, el cambio de subtipo y un subtipo específico de primates de interneuronas estriatales
TAC3+. Además, la subplaca de los primates, una capa transitoria durante el desarrollo que es
fundamental para establecer conexiones cortical-talámicas, es cinco veces más gruesa que la de
otros mamíferos, lo que sugiere una formación y un refinamiento de circuitos más extensos y
potencialmente divergentes en los primates. En general, la regulación genética evolutivamente
distinta de las características celulares, que van desde una duración prolongada del desarrollo
hasta tipos de células y estructuras anatómicas especializadas, proporciona las bases
arquitectónicas para la expansión del cerebro, la conectividad y las funciones de orden superior en
los humanos.

Gran parte de nuestro conocimiento sobre las contribuciones genéticas a los paisajes moleculares
y celulares del desarrollo del cerebro se obtuvo a partir de estudios de ganancia o pérdida de
función utilizando modelos animales.

Por ejemplo, en estudios clásicos que utilizaron modelos de ratón se identificaron señales
difusibles del mesodermo durante la inducción neuronal y la formación de patrones tempranos. La
"hipótesis de la unidad radial" durante la neurogénesis cortical se estableció mediante exámenes
histológicos, moleculares y fisiológicos en primates. Los modelos de Drosophila melanogaster
revelaron los mecanismos subyacentes a la búsqueda de trayectorias y el crecimiento de axones y
dendritas. Los primates siguen siendo el modelo principal para estudiar funciones de circuitos de
nivel superior para modelar enfermedades. En particular, los modelos emergentes derivados de
células hPS, incluidos cultivos 2D y organoides cerebrales 3D xenoinjertados, integrados y
específicos de la región, permiten realizar pruebas funcionales de variantes genéticas candidatas
para establecer su causalidad en fenotipos celulares en modelos humanos, lo que impulsa la
investigación actual para investigar la genética de los seres humanos. -Procesos específicos de
desarrollo cerebral a través de la lente de la evolución y los trastornos cerebrales (Fig.2).

Perspectiva desde una perspectiva evolutiva

La evolución ofrece una perspectiva natural para estudiar los mecanismos genéticos que subyacen
a diferentes características entre especies. La variación genética que subyace a los rasgos
específicos de los humanos se identifica predominantemente en los procesos de neurogénesis y
desarrollo neuronal y se localiza en genes codificadores de proteínas o en regiones reguladoras no
codificantes, como las regiones aceleradas por humanos (HAR). Las alteraciones fenotípicas
resultantes ocurren a nivel microscópico (celular), pero en última instancia influyen en toda una
región del cerebro a través de cambios macroscópicos en el volumen, la complejidad, la
conectividad y la arquitectura de las células, lo que puede conferir ventajas únicas al cerebro
humano, como un mayor volumen cerebral, plasticidad y conocimiento Una reciente oleada de
descubrimientos basados en estudios filogenómicos y genómicos comparativos entre especies
seguidos de pruebas funcionales utilizando modelos animales humanizados y modelos basados en
células hPS ha revelado genes, vías y mecanismos reguladores críticos para la modulación
específica del tipo celular y de la etapa de desarrollo de desarrollo del cerebro humano (Tabla 1 y
Fig. 3).

Variaciones de la neurogénesis exclusivas de los humanos.

La neurogénesis está mediada por células madre neurales y progenitoras y está regulada por ciclo
celular, la modulación de la transcripción, las vías de señalización, la dinámica mitocondrial y el
metabolismo, que tradicionalmente se revelaban mediante la expresión ectópica de genes
humanos en modelos animales (Fig. 3a). Se ha realizado un número creciente de descubrimientos
utilizando organoides cerebrales derivados de células hPS, ya que modelan de manera sólida las
características microscópicas y macroscópicas del desarrollo temprano del cerebro humano que
están dominadas por células progenitoras neurales (Fig. 3a). Por ejemplo, estudios funcionales
comparativos utilizando organoides del prosencéfalo humano y de simio identificaron ZEB2, que
codifica un correpresor transcripcional, como un impulsor evolutivo que contribuye a una mayor
expansión cortical en humanos al retrasar la transición de NEC a RGC con ciclos celulares más
rápidos (Tabla 1 y Figuras 3a, 4a). De manera similar, la alteración de los ciclos celulares de RGC
mediante dos mecanismos regulados por HAR que involucran a PPP1R17 (que codifica un inhibidor
de la proteína fosfatasa y un regulador del ciclo celular) y FZD8 (que codifica un receptor WNT)
conduce a un desarrollo prolongado y un mayor tamaño de la neocorteza (Tabla 1 y Figura 3a). Las
comparaciones funcionales entre especies revelaron un control genético diferencial de la
proliferación de RGC en humanos a través de la modulación de vías de señalización clave,
incluyendo PDGF62, Robo17, Notch (por ejemplo, mediante la duplicación de genes específicos
humanos de NOTCH2NL)63,64, mTOR (por ejemplo, a través de INSR (que codifica el receptor de
insulina, un activador de mTOR), ITGB8 (que codifica un receptor de fibronectina, un activador de
mTOR) y el gen específico de homínidos CROCCP2 (que codifica una proteína de los cilios y regula
la señalización de mTOR en oRGC) y redes reguladoras, incluso a través de el dominio proteico
DUF1220 (aumento específico de humanos) y ZNF558 (que codifica un regulador de mitofagia
específico de humanos (Tabla 1 y Fig. 3a). También existen variaciones que afectan
específicamente a las oRGC, un subconjunto de RGC enriquecidas en primates. Amplificación de
oRGC y la expansión neocortical es promovida por la sobreexpresión del gen mitocondrial
específico humano ARHGAP11B en ratones, hurones, titíes u organoides de chimpancé, el supresor
de histona metiltransferasa específico de hominoide TBC1D3 en ratones y organoides de células
hPS; el gen TMEM14B relacionado con el ciclo celular específico de primates en ratones; o el gen
TKTL1 relacionado con la síntesis de ácidos grasos específico de homínidos en ratones u organoides
humanos editados con genoma (Tabla 1 y Fig. 3a). En conjunto, estos estudios identificaron no solo
vías de señalización canónicas que regulan características humanas específicas en la neurogénesis,
como Notch y mTOR, sino también nuevos mecanismos genéticos que modulan diversas
propiedades celulares de las células madre neurales y progenitoras humanas (Tabla 1 y Fig. 3a).

Peten, TSC2, NFN1, MFR1 X FRAGIL.

Variaciones en el desarrollo de neuronas y circuitos específicas de los humanos

Las tasas y niveles de neuritogénesis y sinaptogénesis relacionados con la formación de circuitos y

la conectividad también están regulados de manera diferencial en los humanos, cuyos mecanismos
subyacentes se revelaron principalmente utilizando modelos de ratón humanizados (Fig. 3b). Por
ejemplo, FOXP2, el gen más antiguo reportado con evidencia de adaptación evolutiva específica
del ser humano en su secuencia codificante, tiene roles críticos en el desarrollo del habla y la
vocalización. Codifica un factor de transcripción que modula la longitud dendrítica y la plasticidad
sináptica (Tabla 1 y Fig. 3b). La expresión ectópica del gen SRGAP2C específico de humanos en
ratones embrionarios interfiere con la actividad de su copia ancestral de SRGAP2 (que codifica un
activador de GTPasa Slit-Robo RHO), lo que lleva a una maduración prolongada y una mayor
densidad de sinapsis y conectividad de neuronas piramidales (Tabla 1). y figura 3b). Las
modificaciones específicas de los primates en las regiones reguladoras también resultan en una
remodelación dendrítica o sináptica. Por ejemplo, la osteocrina (codificada por OSTN)
normalmente se secreta en huesos y músculos, pero evolutivamente se reutiliza para expresarse
en el cerebro de los primates, donde interactúa con el factor de transcripción MEF2 y regula el
crecimiento dendrítico dependiente de la actividad específicamente en las neuronas de los
primates. Cambios en los niveles de expresión de CBLN2 (que codifica la cerebelina 2, un regulador
de la sinaptogénesis) o PLXNA1 (que codifica la plexina A1 del receptor de semaforina y participa
en la guía del axón) debido a la pérdida de los sitios de unión de la región reguladora para sus
respectivos factores de transcripción, SOX5 y FEZF2, altera el crecimiento dendrítico y la densidad
de la columna en las neuronas de primates. EPHA7 regulada por bucle de cromatina específica
humana, que codifica una proteína guía de axones, exhibe una expresión elevada en neuronas de
subplaca humanas e impacta el crecimiento de las dendritas y el desarrollo de circuitos (Tabla 1 y
Fig. 3b). Una deleción específica humana en un supuesto elemento regulador de LOXL2 (un gen
relacionado con la diferenciación neuronal), que es una región altamente conservada en otros
vertebrados, conduce a cambios transcriptómicos relacionados con la señalización del calcio y la
mielinización de las neuronas, como se muestra al reintroducir el conservado. Secuencia
reguladora de chimpancé para LOXL2 en células humanas. Además, un estudio reciente reveló un
mapeo específico de los HAR en humanos en neuronas excitadoras en etapa tardía en el
telencéfalo en desarrollo que faltan en las regiones aceleradas de los chimpancés, lo que sugiere
un nuevo cableado evolutivo de las interacciones entre los genes del desarrollo neurológico y los
HAR. Además, se han identificado genes que median la diferenciación y maduración neuronal
prolongada en humanos utilizando modelos de ratón (por ejemplo, MEF2A y NPAS3, que codifican
factores de transcripción implicados en el desarrollo del cerebro, y GADD45G, que codifica un
represor del ciclo celular, un activador de la apoptosis y un regulador epigenético). y modelos de
células hPS (por ejemplo, GATA3, que codifica un factor de transcripción que regula las velocidades
del potencial de acción y está regulado positivamente de manera única en las neuronas humanas
en maduración en comparación con los primates no humanos para contribuir a la neotenia
humana). Estos hallazgos sugieren que muchos procesos de desarrollo neuronal y de circuitos se
conservan en los mamíferos, con mayores niveles de conexiones sinápticas y una duración
prolongada en los humanos que proporcionan un sustrato para redes neuronales mejoradas (Tabla
1 y Fig. 3b). A pesar de los rápidos avances, el número limitado de genes estudiados hasta ahora
sugiere que sólo hemos arañado la superficie de los mecanismos reguladores humanos específicos
que, en última instancia, nos hacen humanos. Sin embargo, es importante tener cautela al
interpretar los resultados de estudios basados en la evolución como los descritos anteriormente.
En particular, las recientes controversias sobre TKTL1 y FOXP2 resaltan que variantes que parecen
estar ausentes en los genomas de los humanos modernos pueden, de hecho, detectarse cuando se
examina un mayor número de genomas que representan una mayor diversidad ancestral. Una
preimpresión reciente mostró que el riesgo de enfermedad y la expresión genética durante el
desarrollo humano se ven afectados por diferentes ancestros genéticos y antecedentes
ambientales y, sin embargo, los estudios en humanos más recientes se han centrado en
poblaciones con ascendencia europea. Es fundamental que los estudios genéticos futuros
representen la amplia heterogeneidad genética y la diversidad ancestral de las poblaciones
humanas, especialmente aquellas que actualmente están genéticamente subrepresentadas,
mediante el desarrollo de recursos como el borrador recientemente publicado de la referencia más
inclusiva del pangenoma humano. También es importante señalar que los modelos animales
tienen limitaciones para los estudios evolutivos, ya que la expresión ectópica de proteínas
humanas en células de otras especies puede dar lugar a artefactos no específicos. Por lo tanto, los
modelos de células hPS con variantes genéticas determinadas proporcionan una plataforma
humana útil para estudiar los vínculos causales entre genotipos y rasgos funcionales (Figs. 2 y 4).
Sin embargo, debe recordarse que las variantes genéticas únicas que alteran los rasgos físicos del
cerebro pueden no traducirse en efectos sobre rasgos más complejos, como los comportamientos
humanos específicos, que no pueden medirse en estos sistemas y que probablemente sean
poligénicos. Por lo tanto, los rasgos identificados y modelados en modelos animales y de células
hPS deberían validarse aún más en poblaciones humanas que porten las mutaciones
correspondientes. Por lo tanto, en el futuro, se pueden descubrir más mecanismos genéticos
causales clave a través del mapeo genético a mayor escala (por ejemplo, usando ensayos de
reporteros paralelos masivos o exámenes genéticos de todo el genoma), seguido de pruebas
funcionales en modelos celulares humanos avanzados y validación de rasgos en especies
específicas. poblaciones humanas.

Defectos del tubo neural.

Las fallas en el cierre del tubo neural exponen el neuroepitelio al ambiente exterior, lo que resulta
en degeneración neuroepitelial y déficits posteriores del sistema nervioso.

al modelo de ratón en un sistema invaluable para recapitular los mecanismos de control genético
centrales identificados en estudios clínicos.

Desregulación en vías de señalización clave (por ejemplo, proteína morfogenética ósea, Notch,
polaridad celular plana, WNT no canónico, Sonic hedgehog), ciclo celular y maquinaria de
supervivencia (por ejemplo, CASP3, que codifica la caspasa 3 para la apoptosis celular), sistemas de
citoesqueleto (por ejemplo, MARCKS, que codifica una proteína reticulante de filamentos de
actina) y las funciones de interacción y adhesión celular (por ejemplo, Eph-efrina) interrumpen los
pasos de flexión del neuroepitelio o cierre del tubo neural, muchos de los cuales dependen de
comportamientos NEC, como el movimiento, proliferación, supervivencia e interacciones entre
células, y conduce a trastornos graves, como craneoraquisisquisis y exencefalia (Tabla 1 y Fig. 5). A
pesar de la identificación de muchas mutaciones clave, las causas genéticas de los defectos del
tubo neural siguen siendo difíciles de alcanzar, en gran medida debido a una etiología poligénica
atribuida a interacciones complejas gen-gen o gen-ambiente. Nuevas plataformas de organoides
cerebrales para modelar la formación del tubo neural pueden probar sistemáticamente genes de
riesgo en modelos humanos para investigar los mecanismos subyacentes.
Malformación por neurogénesis alterada.

Los defectos en la amplificación o apoptosis de los progenitores dan como resultado alteraciones
en el tamaño del cerebro y a menudo se asocian con microcefalia primaria, retraso en el desarrollo
y epilepsia. A pesar de las diversas etiologías, las causas genéticas de los déficits estructurales del
cerebro, como la "cabeza pequeña" (microcefalia) o el "cerebro liso" (lisencefalia), a menudo son
atribuibles a genes que controlan la arquitectura del citoesqueleto o la maquinaria de crecimiento
celular en varios tipos de células. En ratones y organoides corticales derivados de células hPS que
modelan la microcefalia, se detectaron mutaciones causantes en los genes que codifican proteínas
involucradas en la función del centrosoma y la mitosis (por ejemplo, ASPM106, CDK5RAP2 (ref. 9),
CENPJ107 y WDR62 (refs. 108,109), respuesta al daño del ADN (por ejemplo, MCPH1) y secreción
del retículo endoplásmico (por ejemplo, IER3IP1) se dirigen a RGC neurogénesis mediada por
microcefalia, lo que resulta en una diferenciación prematura de RGC, agotamiento y, en
consecuencia, una reducción significativa en el tamaño cortical (Tabla 1 y Fig. 5). Entre los genes
que causan microcefalia, ASPM y CDK5RAP2 contribuyen a un mayor tamaño del cerebro en
primates, y a identificar más tales Los genes podrían revelar mecanismos genéticos convergentes
que subyacen tanto a la evolución como a las enfermedades. Además, la alteración de las vías de
señalización críticas relacionadas con el crecimiento celular en los progenitores neuronales puede
conducir a una proliferación anormal y malformaciones anatómicas. Modelos de células hPS en los
que la señalización de mTOR se alteró mediante la eliminación de PTEN (que codifica un supresor
de mTOR) macrocefalia fenocopiada al afectar la amplificación de RGC cortical, y aquellos en los
que la señalización de mTOR fue alterada por deficiencia de TSC2 (que codifica un regulador del
crecimiento celular) complejo de esclerosis tuberosa fenocopiado debido a la sobreproliferación de
progenitores interneuronales (Tabla 1 y Fig. 5). . Los modelos organoides derivados de individuos
con neurofibromatosis tipo 1 (mutación en NF1, que codifica la neurofibromina, un activador de la
GTPasa RAS) y síndrome de Pitt-Hopkins (mutación en TCF4, que codifica un factor de transcripción
que inicia la diferenciación neuronal) mostraron alteraciones tanto en la proliferación de
progenitores como en la proliferación de neuronas. diferenciación, aunque la mutación NF1 actúa
sobre la señalización RAS y la mutación TCF4 altera la señalización WNT. Los organoides derivados
de individuos con síndrome de epilepsia focal de displasia cortical debido a una mutación
homocigota en CNTNAP2, un gen que codifica la neurexina, recapitulan los fenotipos de
sobrecrecimiento del prosencéfalo debido a un ciclo y una producción más rápidos de las células
progenitoras neurales. El silenciamiento homocigoto del gen que codifica el factor de transcripción
EOMES afecta la propagación y migración de IPC, provocando microcefalia con polimicrogiria y
agenesia del cuerpo calloso (ACC). Muchas variantes patogénicas de la microcefalia causan
fenotipos superpuestos de lisencefalia (por ejemplo, NDE1 (ref. 2) y LIS1 (ref. 120)), polimicrogiria
(por ejemplo, EOMES119 y WDR62 (ref. 12)) y displasia cortical focal (por ejemplo, genes
relacionados con mTOR)121,122, lo que destaca la asombrosa complejidad de las manifestaciones
genotipo-fenotipo incluso en enfermedades monogénicas12 (Tabla 1 y Fig. 5). En particular, varios
modelos de ratón de mutaciones que causan microcefalia en humanos exhiben una leve reducción
en el tamaño del cerebro (por ejemplo, ASPM4, CDK5RAP2 (refs. 3,6) e IER3IP1 (ref. 111)) en
contraste con fenotipos robustos en sus correspondientes hPS. modelos celulares, destacando el
papel único de los modelos basados en células hPS no solo para identificar variantes de novo que
causan enfermedades, sino también para revisar genes de riesgo previamente estudiados solo en
modelos animales. Además, los modelos basados en células hPS pueden servir como plataforma
para la detección a gran escala para revelar nuevos modificadores genéticos de la neurogénesis
humana y el tamaño del cerebro111 (Fig. 2).

Migración, diferenciación y maduración neuronal anormal.

La migración mediada por precursores neuronales permite la expansión del cerebro y la

autoorganización de la arquitectura, que puede verse alterada por mutaciones patógenas en genes
citoesqueléticos clave que regulan los centrosomas en el borde de ataque de los neuroblastos o
microtúbulos migratorios que son necesarios para la translocación somal. La migración anormal de
los precursores y el posicionamiento neuronal resultante conducen en gran medida a la
lisencefalia(Fig. 5). ). Los pacientes con lisencefalia clásica (tipo I) muestran una estructura cortical
de cuatro capas más gruesa con una banda heterotópica, mientras que los organoides del cerebro
anterior derivados de células hPS portan mutaciones causales clave, incluida LIS1 (que codifica un
regulador de la proteína motora dineína), YWHAE (que codifica una proteína mediadora de la
transducción de señales que tiene diversas funciones, como la división celular y la regulación de la
sensibilidad a la insulina) y TUBA1A, modelaron defectos en la arquitectura anatómica y la
submigración de neuronas recién nacidas (Tabla 1 y Fig. 5). Las mutaciones en el DCX ligado al
cromosoma X, que codifica una proteína asociada a los microtúbulos, causan lisencefalia en los
hombres y están asociadas con diferencias de sexo y dependencia de la dosis en la gravedad de la
enfermedad, ya que las pacientes femeninas se ven afectadas por una heterotopía de bandas
subcorticales más leve.

Muchas mutaciones que causan lisencefalia conducen a rasgos de enfermedad en varias regiones
del cerebro además de la corteza. Por ejemplo, las 'tubulinopatías' y las 'actinopatías' causadas por
mutaciones en genes que codifican proteínas involucradas en la regulación de los microtúbulos
(por ejemplo, TUBA1A) y la actina (por ejemplo, ACTB, ACTG1 según los datos discutidos en un
artículo preimpreso), respectivamente, conducen a lisencefalia cortical y una amplia gama de
trastornos del desarrollo en el cerebelo, el hipocampo y el cuerpo calloso, aunque la
neuropatología solo se ha modelado en organoides corticales humanos (Tabla 1 y Fig. 5). Las
mutaciones que se dirigen preferentemente a la migración y diferenciación de interneuronas,
como ARX (que codifica un factor de transcripción homeobox altamente conservado implicado en
el desarrollo cerebral de los vertebrados), conducen a fenotipos de agiria y lisencefalia combinados
con trastornos neuropsiquiátricos graves, como la epilepsia o el ACC. Las mutaciones en RELN (que
codifica reelina, una glicoproteína secretada de la matriz extracelular involucrada en la migración
neuronal y las interacciones celulares) alteran la regulación de la migración de precursores
neuronales por parte de las células de Cajal-Retzius, lo que causa paquigiria o lisencefalia con
hipoplasia cerebelosa. La importancia del posicionamiento espacial preciso de las neuronas para el
desarrollo normal del cerebro se enfatiza en estos fenotipos celulares de enfermedades y en
muchos otros, incluida la migración excesiva de neuronas corticales recién nacidas en la
lisencefalia en adoquines (tipo II) (por ejemplo, debido a mutaciones en POMT, que codifica una
glicosiltransferasa), migración aberrante y revestimiento a lo largo de los ventrículos de las
neuronas corticales recién nacidas en una heterotopía periventricular que a menudo se combina
con convulsiones recurrentes (por ejemplo, debido a mutaciones en los genes que codifican la
cadherina (DCHS1, FAT4) o una proteína de unión a actina filamina A (FLNA )12), y la migración
interneuronal y los déficits de sinapsis en el síndrome de Timothy (por ejemplo, debido a
mutaciones en CACNA1C, que codifica una subunidad del canal de calcio Cav1.2) (Tabla 1 y Fig. 5).
En particular, muchas mutaciones que causan enfermedades y que tienen un impacto claro en los
pacientes, como DCX y FLNA, no muestran fenotipos correspondientes en ratones. El desarrollo
reciente de modelos organoides cerebrales que exhiben una clara segregación de distintas capas
corticales y algunas circunvoluciones estructurales proporciona modelos humanos prometedores
para examinar el impacto de estos genes de riesgo en la diversificación y distribución de las
neuronas e investigar los mecanismos subyacentes. Quedan por desarrollar plataformas
organoides más avanzadas para revelar la base molecular y celular que conduce a características
citoarquitectónicas clave, incluida la girificación.

Además de la migración anormal (que determina el posicionamiento espacial), la desregulación en

los procesos de diferenciación y maduración neuronal también puede provocar enfermedades,
algunas de las cuales se han modelado eficazmente con organoides derivados de células hPS. Por
ejemplo, los organoides corticales derivados de PSC (células iPS) inducidas por pacientes con
displasia cortical focal recapitularon fenotipos de neuronas dismórficas e hiperexcitabilidad de la
red neuronal a través de la regulación negativa de RHOA, un pequeño gen de señalización de
GTPasa RHOA134, que reveló un mecanismo causante de displasia cortical focal independiente de
Regulación mTOR de la proliferación de progenitores. La alteración de la señalización de RHOA
causada por la expresión reducida de CRLF3 también se atribuyó a defectos en la diferenciación,
supervivencia y maduración neuronal en organoides del prosencéfalo derivados de pacientes con
NF1 (Tabla 1 y Fig. 5). Además, se han utilizado organoides de células iPS de pacientes que
modelan trastornos con anomalías estructurales menos graves pero síntomas psiquiátricos más
pronunciados para revelar defectos celulares subyacentes causados por mutaciones, que a
menudo se asocian con la diferenciación neuronal. Por ejemplo, se demostró que OLIG2 en
organoides derivados de células iPS de pacientes con síndrome de Down con trisomía 21 es un
factor transcripcional que impulsa la elección del destino de las interneuronas, lo que resulta en un
exceso de progenitores e interneuronas OLIG2+ (Tabla 1 y Fig. 5). Un modelo organoide cortical de
distrofia miotónica tipo 1 que porta una mutación de DMPK (que codifica la proteína quinasa
miotonina que interactúa con las GTPasas pequeñas de la familia RHO) muestra pérdida de
neuronas glutamatérgicas, desregulación de la señalización sináptica del glutamato y una marcada
elevación en el número de células gliales. . La excitotoxicidad inducida por glutamato se manifiesta
a través de vías relacionadas con MECP2, y el modelo organoide del paciente mutado por DMPK
fenocopia el de la deficiencia de MECP2 (Tabla 1 y Fig. 5). El análisis de tres modelos de organoides
corticales con mutaciones isogénicas de SUV420H1, ARID1B y CHD8, tres genes de riesgo de
trastorno del espectro autista (TEA) que codifican reguladores epigenéticos, reveló fenotipos
comunes de diferenciación interneuronal excesiva y diferenciación prematura de neuronas
corticales de capa profunda (Tabla 1 y Figura 4b). En general, estos hallazgos enfatizan la
importancia de controlar con precisión el posicionamiento de las neuronas tanto en el espacio
como en el tiempo para lograr la compleja organización estructural del cerebro humano.
Formación de circuitos y cableado aberrantes.

La alteración del ensamblaje del circuito neuronal y la conectividad que involucra genes clave que
regulan la guía de los axones y la función sináptica, además de la organización del citoesqueleto,
puede provocar trastornos cerebrales en humanos (Fig. 5). La mayoría de los estudios funcionales
de mutaciones que causan enfermedades en familias de genes guías de axones encontradas en
pacientes humanos, que a menudo se asocian con epilepsia y TEA, se han realizado en modelos
animales. Por ejemplo, las mutaciones en varias familias de genes del receptor del ligando Slit-
Robo en ratones interrumpen el cruce de la línea media del axón entre dos hemisferios y se
asocian con trastornos como el ACC agenesia del cuerpo calloso o la dislexia en humanos. Las
neuronas que expresan la hormona liberadora de gonadotropina migran desde la nariz a través del
prosencéfalo hasta el hipotálamo a lo largo de tractos axónicos neuronales, y los modelos de ratón
muestran que las mutaciones en los genes de la semaforina que causan el síndrome de Kallmann
en humanos (como SEMA3A, un gen que codifica la semaforina regulado por CHD7 ) alteran los
sustratos de migración de estas neuronas138. Una preimpresión reciente que utilizó organoides
derivados de individuos con ACC reveló que la haploinsuficiencia ARID1B causa anomalías en la
maduración de las neuronas de proyección callosa, la formación de proyecciones de largo alcance y
la transcripción del desarrollo del cuerpo calloso (Fig. 5). Este hallazgo demuestra que el rápido
avance de los organoides de las células hPS que modelan diferentes regiones del cerebro y etapas
posteriores del desarrollo permite el estudio del desarrollo de la proyección neuronal en humanos.
Las disfunciones genéticas en la formación y la plasticidad de las sinapsis son factores importantes
que contribuyen a la patogénesis de los trastornos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos,
incluido el TEA. , epilepsia, discapacidad intelectual (DI) y esquizofrenia. Además de la
modelización sólida de trastornos con defectos estructurales causados por déficits en la
proliferación de progenitores, migración o diferenciación de neuronas, los sistemas organoides,
como los asmbloides, están avanzando rápidamente para proporcionar plataformas para examinar
la patogénesis y los mecanismos subyacentes a trastornos psiquiátricos menos diferenciados
anatómicamente pero más complejos que involucran anomalías en los circuitos (Fig. 2). En los
últimos años, se ha demostrado que muchas de las mutaciones de un solo gen más comunes para
el TEA o la DI son suficientes para causar déficits celulares y recapitular 'sinaptopatías' relevantes
en organoides derivados de pacientes: los ejemplos incluyen CACNA1C en el síndrome de Timothy,
DGCR8 (que codifica un regulador de microARN para la señalización del calcio) en el síndrome de
DiGeorge, FMR1 (que codifica la proteína de retraso mental X frágil, una proteína de unión a ARN
enriquecida en el cerebro esencial para el desarrollo del cerebro) en el síndrome de X frágil,
MECP2 (que codifica un regulador epigenético multifuncional) en Rett síndrome, SHANK3 (que
codifica una proteína de andamiaje de sinapsis) en el síndrome de Phelan-McDermid149, UBE3A
(que codifica una ubiquitina ligasa E3 para el gran canal de potasio dependiente de voltaje) en el
síndrome de Angelman, DISC1 (que codifica una proteína multifuncional, alterada en la
esquizofrenia 1, implicado en la proliferación celular, diferenciación, crecimiento de neuritas,
adhesión celular y formación de sinapsis, entre otros) y FGFR1 (que codifica un receptor tirosina
quinasa para que el factor de crecimiento FGF regule la señalización celular) en la esquizofrenia, y
WWOX (que codifica una enzima oxidorreductasa) en encefalopatía epiléptica (Tabla 1 y Fig. 5).
Además, las mutaciones que causan patología asociada a la glía pueden provocar retrasos en el
desarrollo y otros rasgos de la enfermedad debido a las funciones críticas de la glía en la
modulación de la sinapsis. Por ejemplo, los organoides derivados de pacientes con enfermedad de
Pelizaeus-Merzbacher, una rara enfermedad ligada al cromosoma X causada por una mutación del
gen PLP1 (que codifica la proteína mielina) y asociada con un retraso en el desarrollo de las
habilidades motoras y la hipotonía durante la primera infancia, recapitulan los fenotipos celulares
de los pacientes. de defectos de mielinización (Tabla 1 y Fig. 5). Además de los fenotipos
moleculares, celulares y anatómicos, las alteraciones en la actividad neuronal son otra lectura que
identifica la fisiopatología del ensamblaje y la función del circuito. Los estudios emergentes revelan
las funciones y mecanismos de los genes de riesgo en la regulación de la formación, función y
plasticidad de las sinapsis utilizando neuronas humanas, como FMR1 en el síndrome del X frágil, y
esperamos que se aprenda más en el futuro, especialmente a través de comparaciones entre
modelos humanos y de ratón.
Desregulación a través de interacciones ambientales.

Los procesos de desarrollo del cerebro humano pueden verse afectados negativa o positivamente
por alteraciones genéticas inducidas por factores ambientales. Las agresiones biológicas o
químicas, como infecciones virales, agentes químicos o radiación, pueden inducir directamente
lesiones genéticas o alterar cascadas moleculares durante uno o más pasos del desarrollo del
cerebro, incluida la generación de precursores, la migración, el posicionamiento o el
establecimiento de conexiones neuronales. Los genes afectados se han identificado utilizando
modelos animales o basados en células hPS. Un ejemplo notable es la microcefalia congénita
inducida por el virus Zika. Los estudios iniciales mostraron una proliferación reducida de
progenitores neuronales y una diferenciación prematura tras la infección viral de organoides
cerebrales humanos o de ratones. Luego, las investigaciones mecanicistas vincularon las
interacciones de las proteínas virales con moléculas clave en la neurogénesis (como TLR3 y
ANKLE2) y procesos del citoesqueleto (como las uniones adherentes y los genes del centrosoma)
(Tabla 1 y Figuras). Además, la exposición a factores fisiológicos (como la nutrición o el
microbioma) ) o los mecanismos dependientes de la actividad (como un entorno o una experiencia
enriquecidos) afectan a los elementos genéticos que regulan no sólo los patrones y la
citoarquitectura del cerebro, sino también los factores neurotróficos y los sistemas de
neurotransmisores que están alterados en muchos trastornos del neurodesarrollo y
neuropsiquiátricos, incluidos la DI, el TEA y la esquizofrenia. Por ejemplo, la vitamina A es un
complemento esencial durante la formación del tubo neural. Su derivado ácido retinoico, una
molécula de señalización evolutivamente regulada diferencialmente que presenta un gradiente
enriquecido de la corteza prefrontal de anterior a posterior en el cerebro en desarrollo, tiene un
papel crítico en el patrón de la corteza prefrontal y la conectividad talámica cortical, como pérdida
de función de sus genes receptores ( RXRG, RARB) o el catabolismo dependiente de CYP26B1 en
modelos de ratón mostraron déficits. Muchas alteraciones inducidas ambientalmente influyen en
el desarrollo neuronal y de circuitos a través de mecanismos reguladores epigenéticos. En
particular, la gravedad tanto de los cambios estructurales (por ejemplo, a través de la infección por
el virus Zika) como de los trastornos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo complejos (como el
TEA y la esquizofrenia) depende en gran medida de los antecedentes genéticos del paciente, que
pueden modelarse con células hPS.

Puntos de vista emergentes sobre la multiplicidad genética, las interacciones y regulación.

Los avances recientes en el estudio de los trastornos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo han
revelado principios emergentes de multiplicidad genética, regulación diferencial, interacciones
gen-gen e interacciones de regiones genómicas no codificantes con genes asociados a
enfermedades. La integración de dicha información ofrece una nueva perspectiva, al tiempo que
plantea desafíos en la investigación de la arquitectura genética diversa del desarrollo del cerebro
humano entre relaciones complejas genotipo-fenotipo y etiologías superpuestas. La multiplicidad
genética, tanto la pleiotropía genética de riesgo como la poligenicidad de la enfermedad, se ha
revelado a través de la escala ampliada de secuenciación multiómica unicelular de próxima
generación y análisis GWAS de TEA, esquizofrenia y otros trastornos neuropsiquiátricos y del
neurodesarrollo complejos. Estos esfuerzos no sólo han identificado una lista cada vez mayor de
genes y variantes de riesgo con alta confianza estadística, que van desde variantes comunes de
pequeños efectos hasta variantes raras pero nocivas, sino que también han revelado su naturaleza
altamente poligénica mediante la puntuación del riesgo poligénico y el análisis de las interacciones
y variaciones de las variantes. convergencia. Además, estudios recientes con mayor rendimiento y
sensibilidad han comenzado a analizar cómo las variantes genéticas ubicuas causantes de
enfermedades o asociadas a enfermedades afectan al cerebro de una manera específica de la
región, de la etapa de desarrollo y del tipo de célula. Por ejemplo, las mutaciones periventriculares
que causan heterotopía (como FLNA12 y PRPF6) interrumpen la proliferación de RGC y la
diferenciación neuronal a través de mecanismos específicos del tipo celular. En neuronas
inmaduras se identificaron nuevas funciones para varios genes sinápticos, incluidos SCN2A y
CACNA1C en los canales iónicos y SHANK3 y SYNGAP1 en la modulación sináptica; Estas funciones
son distintas de su función conocida en las neuronas maduras y se deben a una regulación
espaciotemporal diferencial. La alteración en FMR1 en un modelo organoide derivado de un
paciente con síndrome de X frágil mostró anomalías en múltiples pasos del desarrollo, incluida la
neurogénesis, la maduración neuronal y la formación de sinapsis (Tabla 1 y Fig. 5). Estos hallazgos
resaltan el nivel de complejidad entre los rasgos de las enfermedades, sus variantes causales y los
procesos de desarrollo afectados. Las enfermedades con fenotipos anatómicos pueden implicar
interacciones genéticas. Por ejemplo, se demostró que las interacciones genéticas durante el cierre
del tubo neural son necesarias en ratones heterocigotos para mutaciones tanto en DVL1 como en
DVL2, y en ratones y humanos heterocigotos para mutaciones tanto en DVL como en VANGL2;
estos individuos heterocigotos compuestos muestran redundancia funcional y efectos aditivos que
se asemejan a los de cada homocigoto. El impacto sinérgico de las variantes heterocigotas
comunes de efectos individualmente pequeños está mejor representado en los trastornos
poligénicos con manifestaciones del desarrollo neurológico, como el TEA. También son
fundamentales las interacciones con regiones genómicas no codificantes que afectan la expresión
genética a través de potenciadores u otras interacciones en los rasgos de enfermedades humanas.
El avance de las herramientas de detección molecular unicelular puede revelar consecuencias
específicas del tipo de célula y de la etapa de desarrollo. Por ejemplo, los ARN largos no
codificantes, como DLX6-AS1, LINC006 y LINC01166, que están desregulados en múltiples
trastornos neuropsiquiátricos y del desarrollo neurológico, modulan la especificación de
interneuronas. Los avances en las tecnologías de edición del genoma permiten la investigación
sistemática de la epistasis de las interacciones genéticas durante pasos específicos del desarrollo
del cerebro utilizando modelos de células hPS. Por ejemplo, la edición basada en CRISPR de una
supuesta (FURIN rs4702) y cuatro variantes comunes de riesgo de esquizofrenia mejor clasificadas
(FURIN, SNAP91, TSNARE1 y CLCN3) en líneas celulares iPS isogénicas demostró sus efectos
causales y sinérgicos en la modulación de la sinapsis. En general, las variaciones genéticas
específicas del proceso de desarrollo, su pleiotropía y regulación, y las interacciones genéticas
entre sí y con el medio ambiente exigen avances tecnológicos para comprender la compleja
arquitectura genética del desarrollo del cerebro humano.
Oportunidades y desafíos

Se han logrado enormes avances utilizando herramientas de diversos dominios tecnológicos para
estudiar el control genético preciso del desarrollo del cerebro humano, con el objetivo de avanzar
en el desarrollo terapéutico (Fig. 6a).

Los estudios de fenotipado de pacientes, como estudios genéticos e imágenes funcionales,

examinan rasgos neuropatológicos durante el desarrollo e identifican variantes genéticas que
causan enfermedades. Las investigaciones a escala del genoma completo pueden revelar genes de
riesgo asociados a enfermedades, que son fundamentales para estudiar genes de gran efecto
asociados de forma fiable con procesos de desarrollo específicos o trastornos complejos como el
TEA. En particular, la ómica unicelular y el análisis a nivel genómico, transcriptómico y epigenómico
se han aplicado ampliamente para mapear una imagen holística y de alta resolución de la
arquitectura genética de una manera específica para el tipo de célula (Fig. 6a). Por otro lado, varios
modelos animales y el surgimiento de sistemas de modelos 2D y 3D derivados de células hPS, junto
con iteraciones rápidas de Herramientas de manipulación genética. Aunque los modelos derivados
de células hPS tienen la ventaja única de modelar características moleculares y celulares
específicas de los humanos, los modelos animales (particularmente roedores y primates) con
mutaciones humanas siguen siendo el enfoque principal para explorar muchas funciones de nivel
superior, como la cognición y el comportamiento (Fig. .6a). La integración de tecnologías en cada
dominio permite la convergencia de la genética humana y la neurociencia del desarrollo,
estableciendo sistemáticamente vínculos genotipo-fenotipo para ofrecer información sobre cómo
se desarrolla el cerebro humano, lo que a su vez allana el camino para estrategias de diagnóstico y
tratamiento de enfermedades (Fig. 6a).

Oportunidades con enfoques combinatorios.

El poder de los enfoques combinatorios brindará enormes oportunidades para una mejor
comprensión de la genética del desarrollo del cerebro humano y para desarrollar estrategias
terapéuticas para los trastornos cerebrales (Fig. 6a). Un ejemplo notable es nuestra investigación
multidisciplinaria de DISC1, que inicialmente se identificó como un gen de riesgo ultra raro para
trastornos psiquiátricos importantes en una familia escocesa numerosa196 y luego en una familia
estadounidense más pequeña (Pedigree H) (Fig. 6b). Comenzando con modelos de roedores, se
demostró que la pérdida de función de DISC1 en neuronas granulares dentadas nacidas en adultos
conduce a déficits en la morfología neuronal, la migración, el crecimiento dendrítico y la formación
de sinapsis, así como a anomalías del comportamiento. La derivación de líneas celulares iPS de
múltiples miembros de Pedigree H202 y la generación de líneas celulares iPS mutantes y de rescate
isogénico con edición del genoma, junto con la diferenciación dirigida en neuronas corticales 2D,
establecieron un papel casual de la mutación DISC1 en la formación desregulada de sinapsis y la
expresión génica 3D. El análisis de organoides cerebrales reveló además déficits en la maduración
neuronal cortical y la segregación de capas, así como su mecanismo molecular subyacente.
Además, los análisis estructurales moleculares y atómicos de DISC1 han identificado sus socios de
unión molecular y vías de señalización, y se demostró que algunas de estas interacciones afectan el
desarrollo neuronal en ratones y modelos 2D y 3D derivados de células hPS, para exhibir epistasis
en un mayor riesgo genético. para la esquizofrenia de múltiples cohortes y para afectar la función y
la conectividad del hipocampo según el análisis de imágenes de resonancia magnética funcional en
humanos. El análisis molecular mecanicista de neuronas 2D derivadas de células iPS identificó aún
más objetivos farmacológicos, lo que condujo al rescate farmacológico de déficits sinápticos en
neuronas humanas mutantes. Finalmente, un modelo de ratón humanizado con la misma
mutación encontrada en Pedigree H reveló que los déficits sinápticos y de comportamiento
podrían rescatarse en ratones adultos mediante el mismo enfoque farmacológico que en las
neuronas humanas 2D. En conjunto, estos estudios ilustran un proceso viable que comienza con
modelos humanos basados en mutaciones de pacientes con líneas celulares iPS isogénicas para
establecer roles causales en fenotipos específicos del desarrollo neuronal, seguido de estudios
mecanicistas para identificar objetivos farmacológicos y pruebas de fármacos, y finalmente
pruebas de eficacia en Niveles funcionales y de comportamiento en un modelo de ratón
humanizado con la misma mutación del paciente (Fig. 6b).

Limitaciones de los modelos de células hPS actuales y futuros.

mejoras.

La investigación que utiliza modelos de células hPS aún se encuentra en sus primeras etapas y aún
quedan muchos desafíos por abordar. A diferencia de los ratones endogámicos que tienen
antecedentes genéticos prácticamente idénticos, los humanos tenemos un alto grado de
diversidad genética. Por lo tanto, es crucial estudiar los efectos de variantes genéticas específicas
en el contexto de diferentes orígenes genéticos para comprender completamente su impacto en
diversas poblaciones humanas, especialmente en grupos minoritarios. Además, existe una
variabilidad sustancial entre los modelos de células hPS, lo que destaca la necesidad de mejorar la
reproducibilidad. Las líneas celulares iPS son muy variables porque se generan utilizando diferentes
métodos y a partir de diferentes pacientes y, por lo tanto, puede ser necesario personalizar
protocolos de diferenciación para cada línea individual. Los modelos organoides también necesitan
una mayor optimización para incorporar una variedad más amplia de tipos de células que imiten
mejor la heterogeneidad del tipo de célula encontrada in vivo. Por ejemplo, la microglía y las
células endoteliales, que se derivan de linajes diferentes a los de las células neurales, se pueden
incorporar a los organoides mediante el uso de técnicas de cocultivo. Aunque los modelos
organoides actuales están mejorando en su capacidad para modelar las primeras etapas del
desarrollo del cerebro, como la neurogénesis, se necesita un esfuerzo sustancialmente mayor para
optimizar estos modelos para replicar mejor la citoarquitectura y los circuitos del cerebro humano,
incluidas distintas capas corticales y columnas funcionales. Estos esfuerzos sentarán una base
celular sólida para modelar etapas posteriores del desarrollo del cerebro humano. Mientras tanto,
el xenotrasplante de células humanas y organoides en huéspedes animales brinda otra
oportunidad para estudiar tipos de células o interacciones celulares específicas de humanos (como
examinar los circuitos y el comportamiento de los huéspedes animales) en un contexto in vivo.
También es necesario invertir más esfuerzos en el desarrollo de protocolos reproducibles para
generar una variedad más amplia de tipos de células cerebrales y organoides específicos de
regiones cerebrales para ampliar la gama de regiones cerebrales que se pueden modelar. Aunque
la mayoría de los estudios actuales se centran en modelar una única región del cerebro, el enfoque
ensamblado permite estudiar las interacciones entre diferentes regiones del cerebro, aunque con
límites artificiales. El desarrollo de métodos para modelar organoides cerebrales que abarcan
múltiples regiones del cerebro es prometedor para estudiar la migración neuronal dirigida a larga
distancia, las proyecciones axonales y la propagación de la actividad de los circuitos. Finalmente, se
necesitan enfoques de alto rendimiento que produzcan grandes cantidades de organoides con
propiedades consistentes para permitir pantallas de edición primaria o basadas en CRISPR dirigidas
o de todo el genoma para la investigación funcional de genes específicos o variantes de un solo
nucleótido en pasos de desarrollo específicos, así como como pruebas de fármacos y estrategias
de tratamiento en organoides con lecturas de alto rendimiento. Es importante destacar que a
medida que los modelos organoides se vuelven más avanzados y se xenoinjertan en modelos
animales (animales potencialmente grandes), es crucial considerar las implicaciones éticas de
todos estos desarrollos. En general, a pesar de estar en las primeras etapas, pronto se adoptarán y
avanzarán ampliamente enfoques prometedores con células hPS para una detección y pruebas
más sistemáticas y ambiciosas de variantes específicas para humanos, por ejemplo, utilizando
ensayos informadores paralelos masivos, o incluso probando cada variante de riesgo de GWAS
para establecer vínculos causales entre genotipos y sus consecuencias celulares y moleculares. En
consonancia con el objetivo de reducir el uso de animales en la investigación, esto nos ayudará a
avanzar hacia una comprensión holística de la genética del desarrollo del cerebro humano y
allanará el camino para las aplicaciones clínicas.

Otras innovaciones futuras.

Además de estos avances en modelos celulares, se necesitarán otros avances técnicos para
permitir una comprensión más completa de la genética que subyace al desarrollo del cerebro (Fig.
6a). Será esencial una mejor fenotipificación de los rasgos humanos. Una mejor adquisición de
tejido cerebral humano a través de colaboraciones globales permitirá cubrir un mayor número y
una mayor diversidad de poblaciones humanas, lo que reducirá el sesgo en los estudios genéticos y
generará puntuaciones poligénicas para diferentes enfermedades, muchas de las cuales
actualmente se basan en poblaciones con ascendencia europea. , más aplicable a una gama más
amplia de etnias. Aumentar la escala, la profundidad y la asequibilidad de los análisis ómicos
descubrirá variantes que antes no se habían apreciado y sus funciones, y revelará niveles de
complejidad de los rasgos humanos a través de análisis integradores de diferentes modalidades de
datos. Se necesitan métodos de imágenes histológicas, patológicas, funcionales y radiológicas más
avanzados y herramientas analíticas aceleradas de inteligencia artificial que logren mayor
precisión, resolución, profundidad y rendimiento y ofrezcan más modalidades (Fig. 6a).

También serán necesarios mejores estudios de causalidad genética de los rasgos humanos. Con la
disponibilidad de sistemas de modelado y un número cada vez mayor de genes candidatos a genes
de riesgo de enfermedad o específicos para humanos identificados con confianza, el campo está
preparado para pruebas funcionales a mayor escala. Las herramientas para la investigación básica
seguirán ampliándose, como las herramientas de edición de genes que logran una cobertura de
todo el genoma, una mayor eficiencia y menos efectos fuera del objetivo, y aquellas que permiten
el rastreo y la reconstrucción de linajes de células cerebrales (como el rastreo de linajes basado en
virus). herramientas y el uso de mutaciones del ADN somático como un sistema de códigos de
barras retrospectivo natural) (Fig. 6a). Finalmente, se necesitan mejores estrategias para
desarrollar tratamientos para los trastornos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo. Un
conocimiento profundo de la genética guía la identificación de nuevos biomarcadores para el
diagnóstico y nuevos objetivos terapéuticos. Aunque los enfoques computacionales impulsados
por inteligencia artificial acelerarán en gran medida el descubrimiento de fármacos, el uso de
modelos de células hPS debe ampliarse a un nivel industrial para permitir evaluar la seguridad y
eficacia de los fármacos tanto a nivel poblacional como individual. Además, los descubrimientos
genéticos acelerarán la mejora de métodos de tratamiento novedosos y precisos, como la terapia
génica, con una administración más segura y eficiente. En conjunto, estos desarrollos futuros
prometen agilizar los descubrimientos, desde la caracterización y el modelado de rasgos humanos
hasta el descubrimiento de genes y fármacos (Fig. 6a).

Conclusiones.

Nuestra comprensión de la base genética del desarrollo del cerebro humano proviene en gran
medida de estudios comparativos entre especies que identifican características celulares y
moleculares que contribuyen a fenotipos humanos específicos y descubrimientos de variantes e
interacciones genéticas en pacientes con trastornos del desarrollo cerebral. Los paradigmas
clásicos suelen comenzar definiendo rasgos fenotípicos de características evolutivas humanas
únicas o enfermedades cerebrales. A esto le siguen enfoques de genética molecular avanzada,
como la secuenciación de próxima generación, para identificar variantes genéticas asociadas que
se supone que son la causa genética. Luego, la genética inversa mediante la manipulación genética
en modelos animales permite establecer la causalidad entre genotipos y fenotipos y estudios
posteriores de filogenética o patogénesis. La creciente accesibilidad del tejido humano y el rápido
desarrollo de sistemas modelo basados en células hPS, junto con los avances en la edición de
genes, el análisis de secuenciación y los ensayos funcionales, han mejorado nuestra capacidad para
abordar estos problemas. Ahora podemos aplicar el mismo proceso a múltiples sistemas de
modelos humanos y animales para identificar y estudiar genes directamente a una resolución y
escala sin precedentes para establecer la causalidad genotipo-fenotipo. A medida que se
identifican más genes y variantes en los estudios de secuenciación, sigue siendo tanto un objetivo
como un desafío realizar pruebas funcionales de estructuras anatómicas y circuitos neuronales en
etapas posteriores del desarrollo humano, para las cuales todavía faltan modelos confiables
basados en células hPS. Es importante destacar que la combinación de estas tecnologías
habilitadoras puede conducir pronto a un cambio de paradigma en la forma en que estudiamos la
genética del desarrollo del cerebro humano, especialmente en lo que respecta a las características
exclusivas de los humanos, las mutaciones en regiones reguladoras no codificantes, las
interacciones entre genes y los mecanismos subyacentes a complejos poligénicos. enfermedades.
Mejorar nuestro conocimiento de la genética del desarrollo del cerebro humano utilizando
modelos integrados y herramientas de detección molecular pronto podría transformar
sustancialmente nuestra arquitectura de diagnóstico y acelerar el desarrollo terapéutico para los
trastornos cerebrales.
R62 Falta del desarrollo fisiológico normal esperado

F90.0 Trastorno por déficit de atención e hiperactividad

F80.9 Trastorno del desarrollo del habla y del lenguaje no especificado

Z62.0 Problemas relacionados con la supervisión o el control inadecuados de los padres