[Título del documento]

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA.
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGÍA VETERINARIA
Técnica de esporulación e identificación de coccidias
ELABORADO POR CÓDIGO:
Sara López O MV y Jenny Jovana VERSIÓN: 01
Chaparro. MV. MSc. DrSc FECHA: Diciembre 2015

Responsables

Medico Veterinarios, microbiólogos, bacteriólogos o estudiantes de Medicina Veterinaria con previo

entrenamiento.

Recolección de materia fecal: La materia fecal se debe tomar directamente del recto para
encontrarse libre de elementos extraños que puedan impedir el análisis y la interpretación.

Obtención: Las muestras se pueden obtener mediante el uso de guantes quirúrgicos o bolsas de
polipropileno de pared delgada que permita la penetración completa de la mano en el recto.

Recipientes para envío de muestras. La materia fecal por lo general se envía en bolsas de
polipropileno con que se toman las muestras y que se invierten sobre sí mismas. Las bolsas se cierran
con dos nudos y se incluye la identificación del animal en el espacio de los nudos, impidiendo que
la humedad borre la identificación del animal. Cuando se utilizan frascos como recipientes de envío,
se deben utilizar de boca ancha y llenarlos en su totalidad con el fin de eliminar el aire y evitar la
velocidad de desarrollo y eclosión de huevos de parásitos.

Cantidad de muestra: en rumiantes es recomendable el envío aproximado de 50 a 100 gramos de

materia fecal.

Conservación de materia fecal: Las muestras obtenidas deben enviarse al laboratorio y procesarse
de inmediato especialmente en climas cálidos donde el desarrollo de huevos y procesos de eclosión
se produce más rápidamente.

Cuando exista dificultad para realizar el examen pocas horas después de la toma, se deben conservar
en refrigeración (climas fríos

Materiales:

 Solución saturada
 Cajas de Petri
 Dicromato de potasio
 Vasos de precipitado
 Vasos plásticos desechables
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LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGÍA VETERINARIA
Técnica de esporulación e identificación de coccidias
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Sara López O MV y Jenny Jovana VERSIÓN: 01
Chaparro. MV. MSc. DrSc FECHA: Diciembre 2015

 Baja lenguas
 Gasa
 Pipeta Pasteur
 Cámara de McMaster de tres cámaras
 Toallas de papel
 Microscopio de luz compuesto con objetivos de 10X

DETECCIÓN DE COCCIDIAS

Procesamiento:

Para determinar si la muestra es positiva para coccidias se realiza un análisis coprológico por medio
de flotación directa o la técnica de Mc master.

Coprológico directo por flotación:

Diluir 2 gr de materia fecal en solución de sacarosa saturada (25 ml), mezclar en un recipiente con
cuchara y filtrarla 2 veces por tamiz. La solución se introduce en un tubo de ensayo hasta que llega
al tope y se coloca un cubre objetos de modo que entre en contacto con la solución y se deja reposar
20 minutos. Se pone el cubre objetos sobre la lámina portaobjetos y se buscan estructuras
compatibles con huevos de coccidias en microscopio a 10 X.

Técnica de McMaster :

Pesar 2 gramos de heces y colocar dentro del recipiente y añadir 25 ml de solución de sacarosa
saturada. Revolver cuidadosamente los contenidos de los recipientes con un baja lenguas o
espátula. Luego Filtrar la suspensión fecal con un colador y revolver el filtrado en el recipiente dos
con una pipeta Pasteur. Utilizando esta pipeta, retirar una sub-muestra mientras el filtrado es
mezclado. Se revuelve el fluido y se llena el primer compartimiento de la cámara de conteo
McMaster con la sub-muestra. Mezclar de nuevo el fluido y llenar el segundo compartimiento con
otra sub-muestra. Se Deja reposar la cámara de conteo por 5 minutos. (Protocolo de la Universidad
de Georgia, USA. Dr Ray Kaplan)

Examinar la sub-muestra del filtrado bajo un microscopio compuesto con aumento de 10 x. El

número de huevos por gramo puede ser calculado de la siguiente manera:
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- Número de huevos dentro de la rejilla de cada cámara, ignorando aquellos fuera de los
cuadros

- Multiplicar el total por 50, esto da la cantidad de huevos por gramo de heces (h.p.g.)

Aislamiento de ooquistes:

Las muestras positivas son filtradas por un tamiz con gasa doblada y centrifugadas a 250 x g por 10
minutos.

Para la esporulación se pone la muestra filtrada en un plato de Petri con solución al 2,5% de
dicromato de potasio (K2Cr2O7) y son dejados a temperatura ambiente. Después de 4 – 5 días se
recuperan los ooquistes por centrifugación a 250 x g por 5 minutos en solución de sacarosa saturada
y estos se lavan con agua destilada. La concentración de ooquistes esporulados se lleva a cabo
mediante la cerifugación durante 10 minutos a 250 x g de la solución y después se guarda en
dicromato de potasio. (Rocha Cavalcantea et al, 2012)

Morfología.

Se identifican por medio de microscopio óptico y micrómetro ocular basados en las medidas de la
pared del ooquiste y esporoquiste, (ancho, longitud y forma) y observación de características
internas específicas. (Christophe Chartie. 2012, Cordero del Campillo, 1999)

Imagen 1: Morfología de las diferentes especies de ooquistes de Eimeria en cabras.

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Sporulated oocysts of the principal species of Eimeria in goats ( Eckert et al., 1995).

Imagen 2: Fotografía de Huevos de Coccidia.

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Fig. 1. Nomarski interference contrast (NIC) photomicrographs of sporulated oocyst of Eimeria species frequently
found in goat feces. Fig. 1. Eimeria arloingi; Fig. 2. Eimeria ninakohlyakimovae. Fig. 3. Eimeria alijevi; Fig. 4. Eimeria
christenseni, Bars=10μ. (Břetislav Koudela, Alice Boková, 1998)

Imagen 3: Partes del OOquiste.

(Quiroz Romero. 1984)