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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAÑETE

ESCUELA PROFESIONAL DE AGRONOMIA

"Año de la lucha contra la


corrupción e impunidad"

TEMA: PRÁCTICA N° 02 (INTRODUCCIÓN AL CULTIVO IN VITRO)


DOCENTE: ING. MIRTHA PIZARRO
ASIGNATURA: RAICES Y TUBEROSAS
CARRERA: AGRONOMÍA
ESTUDIANTES:
 CHUMPITAZ MATOS JESUS OMAR
 CATUNTA QUISPE EDGAR
 MANRIQUE CHUQUISPUMA JHON ROBIN
 VILLALBA HUAYA BRYAN
 SORIANO FERRER FRANKLIN KENNEDY
 ESPINOSA AGUILAR ALDAIR
 JULCA CADILLO ALFREDO
 CHIPANA JANAMPA EMILIO
 HUARI CAMA SERGIO

CAÑETE-2019

GUÌA DE PRÀCTICA, VISITA DE ESTUDIO.

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I. TITULO:

Introducción al Cultivo In vitro

II. INTRODUCCION

El cultivo in vitro permite el crecimiento y desarrollo de material vegetal en recipientes que lo


separan del ambiente exterior y lo mantienen en condiciones controladas y asépticas. Entre las
diversas técnicas de cultivo in vitro, la micropropagación consiste en la producción clonal de
vegetales a partir, generalmente, de ápices o explantos nodales de una planta madre. La gran
producción de nuevas plantas se ve favorecida gracias al rápido crecimiento del material vegetal
in vitro y a la proliferación de tallos durante los subcultivos.

III. FUNDAMENTO

IV. OBJETIVOS

 Conocer las diferentes técnicas de propagación in vitro para la conservación, el


mejoramiento y la producción de metabolitos secundarios
 Comprender la fundamentación teórica del uso del cultivo in vitro en la propagación
y producción vegetal.
 Adquirir habilidad para realizar la esterilización, la desinfección y la siembra de
diferentes tejidos vegetales.
 Valorar el uso de las técnicas de cultivo in vitro para la conservación de especies
amenazadas y la restauración ecológica.

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V. MATERIALES Y METODO

A Materiales

 Cámara de flujo laminar


 Tubos de ensayo
 Autoclave
 Pipeta

B Insumos

 Sacarosa
 Agar
 Murashige – skoos
 Agua destilada esteril
 Alcohol 70%

C Materiales que traerá el estudiante

 Tubérculo de papa con brotes


 Lejía
 Bisturí
 Guantes
 Cubre cabello
 Cubre boca
 5 Velas pequeñas

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VI. PROCEDIMIENTO 1. Preparación Del Medio De Cultivo


La elaboración de los medios de cultivo se realiza diluyendo las soluciones
madre previamente realizadas. Además, se añade la fuente de carbono y el agente gelificante,
que normalmente es agar. Se pueden hacer distintos medios de cultivo manteniendo la misma
concentración de algunas sustancias, por ejemplo sales minerales y vitaminas, y modificando
o eliminando otras como los reguladores de crecimiento.
2. Establecimiento In Vitro
El paso previo a la instalación in vitro de un material vegetal es la asepsia superficial. El
protocolo de este proceso dependerá de las características del tejido empleado. Para trabajar
en condiciones asépticas, es recomendable realizar este proceso en una cámara de flujo
laminar y emplear material estéril. El ambiente debe mantenerse limpio con la superficie de
trabajo desinfectada con etanol al 70% antes y después de usarla. Se debe usar bata de
laboratorio y lavarse bien las manos.
3. Asepsia Superficial De Material Vegetal
Se pueden considerar dos situaciones dependiendo que el explanto que se va a emplear esté
protegido en el interior de un órgano, como el embrión, o esté en contacto con el exterior,
como brotes y yemas.
Para los explantos en el interior de órganos hay que realizar los siguientes pasos:
Realizar una asepsia superficial del órgano con etanol al 70 %.
Eliminar el tejido del órgano hasta alcanzar el explanto.
Colocar el explanto en el medio de cultivo MS-O
Dentro de este grupo de explantos podemos considerar a numerosas semillas y a los
embriones.
Los explantos en contacto con el ambiente exterior han de estar en óptimas condiciones
sanitarias gracias a la aplicación regular de productos fitosanitarios. Por ejemplo, para
introducir in vitro plantas de patata se colocan tubérculos en una bandeja con papel de filtro
humedecido con acaricida, fungicida y bactericida, hasta que se desarrollen pequeños brotes.
Con un material vegetal saneado se puede seguir el siguiente protocolo:
Cortar segmentos nodales o apicales de crecimiento activo y de un tamaño ligeramente
superior al deseado.

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VII.PRACTICA EN LABORATORIO UNDC

PASO 1: materiales en la mesa de trabajo del laboratorio por grupo:

Paso 2: mezcla de los diferentes compuestos químicos en el laboratorio con previa


asepsia de la mesa y utensilios etc

Figura 5 lejía y toalla

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1figura 8 agua destilada


100 ml

Ilustración 3 mescla

Ilustración 2mescla 2

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Ilustración 5 colocacion de las velas

Ilustración 4 agregando gotas de lejia

Ilustración 6 segunda esterilización de


Ilustración de 2 repeticiones8 primera esterilizacion Ilustración 7

esterelizacion 1

visturi

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Ilustración 9 esterilizacion de pinsas

Ilustración 10 se procede al corte


de la yemas del brote

Ilustración 11 sumergir la yema en la solucion por 5 y 10 minutos segun indica la docente de practica

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Ilustración 12 sumergiendo en solucion por 10


minutos

 Luego de realizar la práctica, ir observando el crecimiento, se estima que el tiempo


determinado es de 15 a 2º días calendario como lo estipula la docente guía de la
práctica realizada en el laboratorio undc.

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VI. CONCLUSIONES

1-El cultivo in vitro de plantas presenta numerosas e interesantes ventajas con respecto a los
métodos de cultivo convencionales
2-el aumento de la productividad, ya que posibilita su explotación industrial consiguiendo
aumentar el ratio beneficio/coste; de forma que resulta mucho más rentable desde un punto
de vista económico.
3-la producción in vitro aumenta el número y la calidad de los metabolitos secundarios
obtenidos. Puesto que las células empleadas son susceptibles de mejora genética y se tiene
control sobre las rutas metabólicas y por tanto su manipulación, este tipo de cultivo facilita el
descubrimiento de nuevos compuestos bioquim ́ icos que pueden ser de interés.
4-la seguridad de los productos que se obtienen in vitro es mucho mayor, puesto que en este
tipo de condiciones la propagación debe realizarse en un ambiente estéril, libre de cualquier
agente patógeno que pueda afectar tanto a los vegetales productores, como a los compuestos
destinados al consumidor.

VII. RECOMENDACIONES

- Se recomienda utilizar todos los implementos de seguridad ya sea guardapolvo , tapa


boca ,cubre cabello y guantes estériles , etc. para evitar alguna contaminación a nuestro
medio de cultivo .
- Se sugiere tener en cuenta que en cada corte se debe esterilizar los instrumentos como el
bisturí o navajas que se hayan empleado para cortar las yemas .
- Se aconseja llevar buenas muestras para que nuestro cultivo in vitro sea exitoso .
- Es necesario tener un previo conocimiento o haber leído algo sobre cultivos in vitro.

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Bibliografía

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