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CURSO:
Bioquímica
TÍTULO:
Dosaje de la Hemoglobina y hematocritos en la cuantificación de proteínas y lípidos de la
especie Cavia Porcellus en relación a su estado nutricional
INTEGRANTES:
CABRERA VEGA, Luis Daniel.
CANO MARGARITO, Jesús Fernando.
CUBEÑOS FLORES, Angie Hallison.
DIAZ CRUZ, Bruno Geanpiero.
FALCON MORILLO, Keyla Harumi.
FLORES HIDALGO, Dayana Milagros.
ZAFRA MEDINA, Guillermo José
DOCENTE:
Sorayda Mendoza Espinoza
I. Introducción (Daniel)
La especie Cavia Porcellus en nuestro país, tiene propiedades esenciales en su carne como las
proteínas, lípidos y el hierro para combatir la anemia, es también una especie de gran valor a
nivel de la economía peruana pues, se sabe que las exportaciones de su carne muestran un
valor acumulado de U.S $ 306.864,00 dólares americanos en los años 2001 y 2007 descrito
por Santos V (2007).
Es una especie herbívora por excelencia, su alimentación es a base de forraje verde, malezas,
residuos de cosechas y domésticos, ante el suministro de diferentes tipos de alimentos,
muestra siempre su preferencia por el forraje, las leguminosas por su calidad nutritiva se
comportan como un excelente alimento, aunque en muchos casos la capacidad de ingesta que
tiene no le permite satisfacer sus requerimiento nutritivos, en cambio las gramíneas tienen
menor valor nutritivo y son más fáciles de digerir por lo que es conveniente combinar
especies tanto de gramíneas como leguminosas (Solorzano & Sarria, 2014, p.18 citado en
Tapia, 2019).
Por ello, los resultados del trabajo permitirán mediante los métodos de cuantificación
determinar la cantidad de proteínas, lípidos y glóbulos rojos, presentes en el plasma
sanguíneo del cuy, y de esta forma conocer la calidad y la salud de esta especie, así como su
importancia en el consumo humano. Este trabajo nos motiva a que, como estudiantes de
biotecnología estemos interesados en la calidad de vida de un animal tan simbólico de nuestro
País y mediante nuestro trabajo experimental lograr hallar una manera de mejorar la crianza,
alimentación y beneficio en los consumidores y criaderos de dicha especie.
Según Chauca (1994), la carne de cuy se considera una fuente importante de proteína animal
ya que contiene 20,3% de proteína, 0,8% de minerales, 7,8% de grasa y 70,6%. la humedad
en comparación con la carne de otros animales es una muy buena alternativa. En nuestro país,
esta carne es preferida entre diferentes celebraciones andinas; pero en los últimos años se ha
incrementado el consumo de carne de cuy en la costa, esto se debe a la migración a ciudades
más grandes, originada en décadas anteriores, así como la reciente valorización de este
nutritivo y tradicional producto.
Cajamarca, D. (2006), evaluó la adición de dos niveles de harina de lombriz (2,5 y 5,0 %) en
el balanceado para cuyes en la etapa de crecimiento-engorde, para ser comparado con un
tratamiento testigo (balanceado tradicional), suministrado a 36 de ambos sexos (18 machos y
18 hembras), determinando que los niveles de harina de lombriz, no afectaron el
comportamiento de los animales, registrando un peso final de 1.095 kg, incremento de peso
de 0,61 kg, consumo total de 3,195 kg de materia seca, conversión alimenticia de 5,55, peso a
la canal de 0,79 kg y rendimientos a la canal de 71,73 %.
Gonzalo, y Aldaz (2012), en el trabajo de investigación titulado “Evaluación de diferentes
niveles, 0 %, 10 %, 20 % y 30 % de polvillo fino de arroz en la alimentación de cuyes de la
línea peruano mejorado en la etapa de crecimiento engorde en la parroquia Tumbaco,
provincia de Pichincha”. Se obtuvo que el peso inicial de los cuyes fue 340,83 gramos;
además esta variable a lo largo de la investigación no presentó diferencias significativas
desde el punto de vista estadístico. La ganancia de peso total fue de 907,60 g en 90 días de
crianza, no existió diferencias significativas entre sus tratamientos. La conversión alimenticia
total fue de 5,37. No se apreciaron diferencias significativas en los tratamientos. Una vez
culminada la investigación se recomendó lo siguiente: No utilizar un programa de restricción
del alimento, es decir entregar a voluntad para apreciar la verdadera acción del polvillo fino
de arroz en la alimentación de cuyes ya que el producto en balanceados resulta menos
costoso.
Herrera, (2012), evaluó el comportamiento productivo de cuyes alimentados con forraje más
balanceado con diferentes niveles de saccharina más aditivos (5, 10 y 15 %). En la etapa de
crecimiento-engorde se utilizaron 80 animales (40machos y 40 hembras) de 15 días de edad.
Determinándose que el comportamiento en la etapa de crecimiento-engorde no registró efecto
significativo entre los niveles de saccharina más aditivos empleados, aunque numéricamente
las mejores respuestas dentro del estudio se establecieron al emplearse forraje más
balanceado con 5 % de saccharina y aditivos, ya que los cuyes presentaron un peso final de
0,800 Kg, menor consumo de alimento (67,90g de ms/día), conversión alimenticia de 9,20,
rendimiento a la canal de 81,30 %.
6.2. Proteínas
La palabra Proteína, del griego “proteios” que significa “primordial” o “primer lugar”, fue
sugerida por Berzelius para llamar así, las proteínas son moléculas grandes y complejas
formadas por aminoácidos. Son componentes esenciales de la vida y están involucrados en
una amplia gama de funciones biológicas en los organismos vivos, incluido el soporte
estructural, la regulación de las reacciones químicas y el transporte de moléculas a través de
las membranas celulares. ( Torres, 2007)
Las proteínas plasmáticas tienen una función nutritiva, realizan presión coloide osmótica para
el mantenimiento del equilibrio acido-base. Cada proteína en forma individual es utilizada
como enzimas, factores de coagulación, hormonas y sustancias de transporte. El hígado es el
lugar principal para su síntesis y el otro lugar para la síntesis es el sistema inmunitario
(Duncan y Prasse, 2005).
La autora Cortazar (s.f), menciona que las proteínas tienen diversas de las funciones más
comunes de las proteínas son:
Tiene como funcionalidad reserva energética ya que los triglicéridos son una principal
reserva de energía en los animales, por ejemplo; un gramo de grasa produce 9,4 kcal en
reacción metabólicas de oxidación, mientras que en las proteínas y glúcidos producen 4,1
kcal por gramo.
Por otro lado, también tiene una función reguladora, hormonal o de comunicación celular.
Las vitaminas liposolubles son de naturaleza lipídica (terpenos, esteroides); las hormonas
esteroides regulan el metabolismo y las funciones de reproducción; los glucolípidos actúan
como receptores de membrana; los eicosanoides poseen un papel destacado en la
comunicación celular, inflamación, respuesta inmune, etc. (S.a,2014). Además, también
tienen una función térmica, aquí los lípidos son desempañadores en regulación térmica del
organismo.
En resumen, los lípidos son moléculas esenciales para la vida y la salud de los organismos
vivos. Además de proporcionar energía y actuar como aislantes térmicos, también son
componentes importantes de las membranas celulares y actúan como hormonas y
facilitadores de la digestión.
Método de Soxhlet
6.4.1. Espectrofotómetro
Hay que tener en cuenta que la cuantificación de proteínas es un paso de gran importancia en
el control de calidad. La Espectrofotometría con micro volúmenes permite a los trabajadores
del laboratorio estudiar materiales proteómicos de las muestras en volúmenes muy pequeños,
que, a su vez, permite preservar aquellas muestras que son más valiosas. (Cromtek,2019)
Usando el Espectrofotómetro UV-VIS, puede obtenerse una cuantificación precisa del ADN,
ARN y proteínas utilizando solo 1 a 2 µL de muestra. Es un equipo que permite analizar
muestras de proteínas como parte del control de calidad de un lote e incluso como precursor
previo a reacciones adicionales, además de cuantificar el contenido proteico en muestras y en
la identificación de contaminantes que puedan impactar de manera adversa los experimentos
subsiguientes. (Cromtek,2019)
Tanto para cuantificar, como para calificar proteínas, se pueden usar técnicas de medida
directas e indirectas, siendo destacada la aplicación Protein A280, la que calcula la
concentración de proteínas basándose en la absorción de la muestra en 280 nm y el
coeficiente de extinción específico de la proteína y su longitud de onda. Para las medidas
indirectas, se puede utilizar un colorímetro. (Cromtek,2019)
6.4.2. Método de la Ciano metahemoglobina
Este método puede ser utilizado también para determinar la concentración de Hb en la sangre
de animales, debido a que la molécula de Fe hemínico presenta una elevada conservación en
todos los metazoos. Además, en esta molécula, específicamente el átomo Fe, es el que
reacciona con el cianuro de potasio que contiene la disolución de Hemotest para formar el
compuesto de la CHM, cuya absorbancia máxima se mide a 540 nm (λ). (Gonzáles et al.
2015)
Para Murray (1996) la importancia de este método radica en que su utilidad se basa en el
desarrollo de la hematología pisciaria, por lo que las muestras que han sido elaboradas en el
laboratorio pueden ser factiblemente conservadas por un periodo de tiempo relativamente
largo (varias semanas) sin que ésta pueda abandonar su color inicial; complementariamente,
este método es muy sencillo de utilizar y sobre todo asegura un resultado preciso, es decir
cuando se trata de evaluar el contenido de hierro en la sangre (mediante el método
ferrimétrico de Wong).
Es denominada también una técnica, la cual utiliza la luz para medir la concentración de los
compuestos químicos; específicamente se basa en el parámetro de capacidad que tienen las
moléculas obtenidas para absorber las radiaciones electromagnéticas en un entorno
determinado, cuando el haz de luz pasa a través de ellas se determina la longitud de onda. La
ley de Lambert Beer explica este fenómeno a partir de las unidades de medida que son la
transmitancia y la absorbancia. (Villa, 2021)
Desde ya muchos años atrás, el CO que está unida a la hemoglobina ha sido evaluada y
medida utilizando métodos espectrofotométricos, el cual se trata de un método que determina
la concentración de carboxihemoglobina; sin embargo, esta técnica ha sido limitada, por ello
muchos investigadores curiosos han visto la necesidad de desarrollar métodos analíticos que
tratan de los principios de la cromatografía de gases la cual se encuentra unida a distintos
detectores, del cual resalta el selector de masas, el cual tiene la capacidad de medir el
porcentaje de saturación de carboxihemoglobina, en donde la concentración de CO está
acoplada a la hemoglobina. (Villa, 2021)
Este método se utiliza para determinar las proteínas en una muestra, este además permite
detectar la presencia de compuestos que se identifican con dos o más enlaces peptídicos.
Generalmente, este método es muy eficiente para la identificación de todas las proteínas y
péptidos cortos, a excepción de los dipéptidos. Este reactivo contiene sulfato de cobre
(CuSO4) e hidróxido de sodio (NaOH); por lo tanto, este método se trata fundamentalmente
del ión Cu2+ en medio alcalino, el cual interactúa con los iones N-3 de los grupos amino de
las proteínas, este proceso forma un quelato de color violeta. Este color intenso corresponde a
que es directamente proporcional a la concentración de las proteínas que están presentes en la
muestra, lo cual significa que es más factible medirlo en un espectrofotómetro. (Vargas,
2006)
Este método ha sido utilizado para una variedad de aplicaciones en la investigación biológica,
incluyendo la identificación de mutaciones genéticas, el diagnóstico de enfermedades
infecciosas, la identificación de especies, y la identificación de genes expresados en tejidos
específicos. (Nieto, s.f)
7.1. Equipos
Centrífuga.
Espectrofotómetro.
7.2. Materiales
1 cuy.
Heparina.
1 frasco de alcohol medicinal.
1 bolsa de algodón.
1 aguja descartable N° 21.
Solución de hidróxido de amonio 4%.
Tubos de ensayo3.2.6 Embudos.
Pipetas de 1 y 10 ml.
Micropipeta de Sali.
Cloroformo.
Desecador de vidrio.
Reactivo para lípidos
Agua destilada
7.3. Métodos
El mecanismo que ha llevado a cabo esta investigación ha sido realizado a partir de los
siguientes pasos:
Paso 1: Paso 2:
Se prepara un algodón y se le coloca una
Principalmente se toma al cuy cuidadosamente determinada cantidad de cloroformo, ya listo, se
para que no se altere. procede a ponerlo en la campana de vidrio, en
donde además se le ubicará al cuy, con la
finalidad de que cuando esté en ese espacio,
huela esta sustancia, se debilite y quede
inmovilizado.
Paso 3: Paso 4:
Paso 7: Paso 8:
Para realizar el método se necesitan 3 tubos, Luego de tener las muestras listas, se
el tubo 1 es el estándar tendrá 0.25 ml de
procede a colocar en la centrifuga por 4 min
agua destilada y 4.5 ml de reactivo para
lípidos, mientras que el tubo 2 tendrá 0.5 a 10 mil regulaciones, después se deja en
ml de suero sanguíneo y 4.5 ml de reactivo
reposo por 30 min. Para luego hacer la
para lípidos y el tubo 3 tendrá 0.25 ml de
suero sanguíneo y 4.5 ml de reactivo para lectura en el espectrofotómetro a 660 nm.
lípidos.
Blanco=0.001
g CHON % =( I X −Blanco ) × Factor de Calibración
Muestra I
g CHON %=0.012416
Muestra II
g CHON %=0.014973
Muestra III
g CHON % =0.022169
Absorbancia=2.082
Concentración=102.85
Factor de Calibración=Concentració nE / Ab s E
Factor de Calibración=49.4
Fórmula Aplicada:
Muestra II
Absorbancia=3.251
Concentración=12.307
Factor de Calibración=Concentració nE / Ab s E
Factor de Calibración=3.786
Fórmula Aplicada:
Muestra I
Hemoglobina ( g / dL )=16.492
Muestra II
Hemoglobina ( g / dL )=14.417
Muestra III
Hemoglobina ( g / dL )=12.532
CONCLUSIONES (Angie)
En síntesis, de los objetivos y de lo desarrollado durante el presente informe de producto se
llegó a concluir lo siguiente:
REFERENCIAS
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