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Printed in Colombia
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Director
Autores
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PRÓLOGO
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temas y decida profundizar de acuerdo a su laboratorios, finalizando con unos
conciencia de aprendizaje y dominio del interrogantes que buscan incentivar a los
contenido. estudiantes a la investigación y a la
retroalimentación de los temas.
Como se ha enunciado anteriormente, el
objetivo es enfocar al estudiante hacia la Este manual de Microbiología está diseñado
apreciación objetiva de la intervención de los no solo como una guía de laboratorio en la
microorganismos en los diferentes procesos, asignatura en particular, sino que facilita al
así mismo el conocimiento de los mismos profesional una orientación en su ejercicio
como agentes causantes de la contaminación laboral. Fue diseñado por estudiantes de
en los alimentos, el manejo de muestras, su Ingeniería Agroindustrial, asesorados por
previa identificación y posterior eliminación. profesionales expertos en el área, con el
animo de unificar el criterio de la
Para la Agroindustria es importante Microbiología dentro de los procesos
conocerlos no solo por la anterior afirmación, agroindustriales.
sino además por su gran utilidad y eficiencia
en el desarrollo de algunas funciones dentro Esperamos que el manual cumpla con su
del organismo y fuera de este, de su papel en objetivo y sea de válida ayuda para quien lo
los alimentos y de su utilización bioquímica utilice.
para el beneficio del hombre. Todo ingeniero
Agroindustrial ha de tener que enfrentarse en
algún momento de su carrera con dichos
microorganismos y para aquel momento ha
de conocer el procedimiento correcto de
control, buscando beneficiar su empresa y el
bienestar del consumidor.
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1. BIOSEGURIDAD
“Cualquier persona que trabaje en un laboratorio, debe cumplir con las mínimas
normas que le aseguren su buen estado de salud. Debe contar con las garantías
suficientes que le permitan un trabajo en optimas condiciones.”
OBJETIVOS
1. Identificar las normas de Bioseguridad para aplicarlas en el desarrollo de los procesos que se
realizan en cualquier laboratorio, como base fundamental de la formación del Ingeniero
Agroindustrial, promotor de una empresa segura e higiénicamente responsable.
2. Identificar los riesgos a los que se expone el personal que labora en un laboratorio.
3. Sensibilizar al estudiante en formación, de la importancia que tiene el aplicar las normas de
Bioseguridad en el laboratorio, por su bienestar y el de sus semejantes, conservando tal actitud
en su profesión como promotor de la seguridad de su empresa.
4. Crear un ambiente de seguridad al interior del laboratorio con la constante aplicación de las
normas de Bioseguridad dentro de este.
MATERIALES
Textos bibliográficos
Videocintas
Documentos sobre el tema
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FUNDAMENTO lavado cuidadoso de las manos, antes y
después de cada procedimiento, así no se
Las normas de Bioseguridad son aplicadas tenga contacto con el material patógeno.
universalmente en todos los laboratorios; Utilizar el protocolo correcto en la
en particular hablaremos de aquellas que realización de cada uno de los
tienen mayor incidencia en el desarrollo de procedimientos.
nuestro proyecto educativo de Microbiologia Ser cuidadosos en caso de ruptura de
Fundamental. material de vidrio contaminado, el cual se
Conozcamos las normas generales que se debe recolectar con escoba y recogedor,
deben aplicar cuando trabajamos en nuestro nunca con las manos.
laboratorio de Microbiologia: Reportar inmediatamente a la persona a
cargo del laboratorio en caso de accidente de
Mantener el lugar de trabajo en optimas trabajo sea por: heridas con material corto
condiciones de higiene y aseo. punzante, inhalación o consumo de material
Se prohíbe fumar, beber y comer toxico o contaminado y salpicaduras en los
cualquier alimento en el sitio de trabajo. ojos o cualquier parte de la piel.
Utilizar mecheros cuando el
procedimiento lo requiera, estableciendo A parte de lo anterior, tengamos en cuenta
una zona de asepsia para que el material a las siguientes recomendaciones:
procesar se mantenga libre de contaminación.
Descontaminar con desinfectante la zona Llevar siempre puesta la bata dentro del
de trabajo al empezar y terminar el proceso laboratorio, pues esta protege su ropa.
de manipulación de las muestras, y así No empezar a trabajar hasta que haya
mismo cuando sucedan salpicaduras o recibido las instrucciones.
derramamiento de estas. Preguntar cuando no entienda el
Emplear la cámara de Bioseguridad método o la finalidad del procedimiento.
cuando se realicen procedimientos de alto Mantener en los mesones lo esencial y
potencial infeccioso como la manipulación de al final de la sesión dejarlos limpios y libres
muestras o el uso de reactivos que requieran de material y equipo.
condiciones asépticas. Poner todo el material sólido usado en
Descontaminar las asas bacteriológicas los recipientes destinados para este fin y el
directamente en la llama del mechero, o material de vidrio en las bandejas.
colocarlas previamente en solución de Aplicar las principales normas de asepsia
hipoclorito de sodio al 5.0% en caso de no para evitar el riesgo cuando se trabaja
tener incinerador. con microorganismos contaminantes;
Utilizar pipetas automáticas. Nunca se preservando su manejo y transferencia sin
debe pipetear con la boca, si es necesario se ningún inconveniente.
debe hacer manualmente. No se debe Evitar el contacto de sus manos con la
expulsar a la fuerza material infeccioso de cara o cualquier otra parte del cuerpo durante
una pipeta, pues puede crear el efecto de la practica, así evitara reacciones alérgicas o
aerosol o salpicaduras que pueden dermatitis por contacto.
contaminar el ambiente.
El beneficio que obtengamos del desarrollo
Hacer buen uso de la bata, cofia, de la practica dependerá de la metodología
guantes y tapabocas. Si es necesario salir del que apliquemos y de nuestro orden y
recinto, tales elementos de protección se limpieza.
deben dejar dentro del laboratorio.
No barrer, ni encerar los pisos del PROCEDIMIENTO
laboratorio, solo se trapearán con una
solución de hipoclorito de sodio al 1.0%. Identificar los riesgos para prevenir
Dar cumplimiento a una de las normas futuros accidentes.
más importantes de la prevención, que es el
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Verificar las técnicas de prevención y de Descontaminación
seguridad operativa. Limpieza
Revisar las técnicas e instrumentos de Microbiostasis
protección. Microbicida.
Comprobar que los elementos básicos de Bactericida
protección para el desarrollo de las Viricida
practicas del laboratorio se encuentren Fungicida
disponibles. 3. ¿Cómo se relaciona la Bioseguridad con
Reconocer y asimilar la importancia de la Salud Ocupacional; y que papel
las normas de Bioseguridad en el desempeña el Ingeniero Agroindustrial en
laboratorio. dicha interrelación?.
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2. ESTERILIZACIÓN
MATERIALES
Autoclave
Estufa
Hornos de Pasteur
Papel craft
Mechero
Material de Vidrio (cajas de petri, tubos de ensayo, pipetas, erlenmeyer, etc.)
Bioindicadores de esterilización
Cinta de Enmascarar
FUNDAMENTO
OBJETIVOS
MATERIALES
Microscopio.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Agua destilada.
Asa bacteriológica.
Muestras para observación.
A. Base
B. Fuente de iluminación
C. Diafragma
D. Brazo
E. Platina
F. Macro y micrométrico
G. Condensador
H. Objetivos
I. Ocular
4. COLORACIONES Y TINCIONES
“Leeuwenhoek en su siglo, y otros microbiologos de la segunda mitad del siglo
XlX tuvieron que observar los microorganismos sin teñir; su estudio
microscopico se facilito notablemente al tratarlos con colorantes.”
OBJETIVOS
Conocer y estudiar la morfología de las bacterias (tamaño, forma, arreglo y estructura) que
constituye una de las características más importantes para su determinación y clasificación.
Definir los métodos de tinción para identificar la morfología de las células bacterianas y
distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen.
Practicar la observación con el microscopio al máximo aumento (objetivo de inmersión) y
aprender el uso correcto del aceite de inmersión.
MATERIALES
1. Mecheros 2. Asa 3. Portaobjetos 4. Cultivos Bacterianos Colorantes para las tinciones
simples, compuestas y/o diferenciales 5. Microscopio 6. Aceite de inmersión 7. Solución salina
y/o agua destilada
PROCEDIMIENTO
Las bacterias teñidas con el método de Las bacterias Gram negativas son más
coloración de Gram se clasifican en dos susceptibles a antibióticos como la
grupos: 1. Bacterias Gram Positivas, estreptomicina. Las bacterias Gram positivas
conservan el colorante cristal violeta y se son generalmente más susceptibles al
tiñen de color violeta oscuro. 2. Bacterias antibiótico penicilina y menos susceptibles
Gram Negativas, pierden el cristal violeta al a la desintegración por tratamiento mecánico
ser lavadas con el alcohol y al teñirse con el (tal como la exposición a muy altas presiones
colorante de contraste (safranina) toman el o a vibraciones ultrasónicas), o por
color rojo. exposición a ciertas enzimas.
El mecanismo de tinción de Gram se basa en
la estructura y composición de la pared REACTIVOS PARA LA TINCION DE GRAM
celular bacteriana. Las bacterias Gram
negativas contiene un porcentaje más elevado Cristal violeta modificado de Hucker
de lípidos que las bacterias Gram positivas. Solución de yodo de Gram
Las bacterias Gram negativas presentan Etanol al 95%.
paredes celulares más delgadas que las Solución de safranina
Gram positivas. Las pruebas experimentales Agua corriente.
sugieren que durante el procedimiento de
- Tiñe nuevamente de color de rosa las
PRINCIPIO DE REACCION DE LA TINCION bacterias que han sido decoloradas por el
etanol.
El cristal violeta tiñe todas las bacterias -- No tiene efecto sobre las demás bacterias,
de color violeta intenso. que quedan de color violeta oscuro.
La solución de yodo fija el color violeta a
las bacterias. CAUSAS DE ERROR
El etanol al 95%:
- Decolora ciertas bacterias cuando la Puede ocurrir una reacción Gram positiva falsa
solución de yodo no ha fijado firmemente porque:
la tinción violeta. - El frotis fue fijado antes de que estuviera
- No decolora otras bacterias si la solución seco.
de yodo ha fijado firmemente la tinción - El frotis ha sido demasiado grueso.
violeta. - Quedaron sedimentos de cristal de violeta
La solución de safranina: en el frasco (filtrar antes de usar).
- La solución de yodo de Gram, no se
escurrió completamente.
- No se dejó que el etanol actuara suficiente Puede ocurrir una reacción Gram negativa
tiempo falsa porque:
- La solución de safranina fue demasiado - No se dejó actuar suficiente tiempo la
fuerte o se dejó demasiado tiempo en el solución de yodo de Gram.
portaobjetos. - El etanol se dejó demasiado tiempo en el
portaobjetos y no se lavó adecuadamente.
PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIIENTO
TRABAJO COMPLEMENTARIO 11.¿Si usted necesitara tener una idea clara y
bien ajustada a la realidad sobre la forma
1.¿Existe alguna relación entre el tipo de de una especie bacteriana cual de las
morfología y la Tinción de Gram?. tinciones realizadas en la presente practica
escogería usted?.
2.¿Qué diferencias estructurales hay entre
las Bacterias Gram Positivas y las Gram 12.¿Para que sirve la tinción en microscopia
Negativas?. óptica? ¿Por qué se utilizan los colorantes
cationicos como agentes generales de
3.¿Qué son las estructuras teñidas con verde tinción?.
de malaquita que aparecen en el medio
circundante?. 13.¿Frente a la tinción de Gram como se
observan las levaduras en cuanto a tamaño,
4.¿Todas las endosporas aparecen igual en las morfología y coloración?.
bacterias de la misma especie? ¿a que se
debe esta diferencia?. 14.Los colorantes como compuestos
orgánicos contienen radicales cromóforos y
5.¿Por qué es necesario que la muestra no grupos de auxocromos, ¿Cuál es la función
hierba durante la tinción con carbofucsina?. de dichos radicales y grupos?.
6.Otras bacterias que poseen en su pared 15.La coloración de células y tejidos es una
celular estructuras que proporcionan alta combinación de fenómenos físicos y
hidrofobilidad, ¿Serian resistentes a la químicos. ¿Explique cuales son esos
decoloración por ácidos y alcoholes con la fenómenos?.
tinción de Ziehl Neelsen?.
MÁS INFORMACIÓN . . .
7.¿Qué fin tiene la fijación de las muestras
al realizar un frotis bacteriano?. Díaz R, Gamazo C, Goñi-López I: Manual
práctico de Microbiología, 2ª.Ed. Masson S.A.,
8.Las bacterias que usted observó España, 1999; 1-3.
sometidas a las diferentes tinciones, Organización Panamericana de la Salud.
¿Estaban vivas?. Manual de Técnicas básicas para un
laboratorio de salud, 2ª Ed. PALTEX, 1983;
9.¿Qué papel cumple el mordiente?. 33-38.
Carpenter Philip L. Microbiologia, sexta
10.¿Cuál es la importancia de las tinciones reimpresión, Ed. Interamericana, México
de Gram , Ziehl Neelsen y Sheafer - Fulton 1978.
en la Taxonomia Bacteriana?.
5. MEDIOS DE CULTIVO
“Los primeros microbiólogos desconocían que los requerimientos nutricionales de
los microorganismos son variables, empleaban como medio de cultivo, jugos,
caldos, infusiones de carne y sopas .”
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En la naturaleza las bacterias están son las sustancias donde los
distribuidas de tal forma que hacen parte de microorganismos encuentran los sustratos
los diferentes ecosistemas. Estas, como los necesarios para realizar sus funciones
demás seres vivos, necesitan para su metabólicas que favorecen su
desarrollo nutrientes apropiados y multiplicación. El crecimiento de los
condiciones ambientales óptimas, como son: microorganismos se manifiesta por la
el pH, la presión osmótica, la concentración aparición de colonias sobre los medios
de oxigeno, la temperatura, la humedad, sólidos y la presencia de turbidez o
entre otras. En la Ingeniería Bioquímica formación de grumos en los medios líquidos.
estas condiciones son un requisito de vital Un medio de cultivo debe contener sustratos
importancia para el crecimiento de con altas fuentes de Carbono y Nitrógeno;
microorganismos en el proceso de la sales inorgánicas como Fósforo, Calcio,
fermentación. Magnesio, Sodio; Agua y en ciertos casos
En el laboratorio de Microbiología en Vitaminas, Aminoácidos y otras sustancias
condiciones in vitro, los medios de cultivo promotoras de crecimiento.
OBJETIVOS
MATERIALES
FUNDAMENTO
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Poseen pocos requerimientos nutricionales, se emplean para - Agár nutritivo
Simples
el crecimiento de las bacterias poco exigentes. - Caldo Nutritivo
De Contienen proteínas, carbohidratos y otros requerimientos - Agár Sangre
enriquecimiento nutritivos que permiten el alto crecimiento de las bacterias. - Agár Suero
- Agár S.S.
Contienen sustancias que inhiben el crecimiento de unos
Según Selectivos Salmonella
microorganismos y permite el de otros.
composición Shiguella
química Permiten el crecimiento diferencial de las bacterias a partir de - Agar de Mac
Diferenciales
una mezcla de ellas. Conkey
- Agar Citrato de
Para clasificación Permiten la identificación de las bacterias, basándose en Simmons
Bioquímica sus propiedades y comportamiento bioquímico. - Agar T.S.I.
- Agar L.I.A
Para Permiten el reconocimiento de la susceptibilidad de las - Agar de
Antibiogramas bacterias a los antibióticos. Mueller Hinton
Se utilizan para mantener viables los microorganismos
- Agar ó Medio
De transporte presentes en las muestras mientras son procesadas o
Según su Stuart
trasladadas a Laboratorios de Referencia.
utilidad
Son empleados para mantener cepas en el Laboratorio, para
práctica De conservación - Agar Nutritivo
estudios posteriores.
Para esterilidad Usados para chequear la pureza de ciertos productos. - Agar Sangre
Para recuentos Medios específicos para determinar el conteo bacteriano (U.F.C) - Agar Plate
bacterianos de muestras como agua, leche y otros alimentos en general. Count
6. SISTEMAS DE SIEMBRA
“Koch encontró que, si los cultivos mixtos eran extendidos en forma de rayas
sobre la superficie de nutrientes sólidos, los diferentes microorganismos se
diseminaban y quedaban separados para producir colonias que no se mezclaban.”
OBJETIVOS
MATERIALES
FUNDAMENTO
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El éxito de un sistema apropiado de siembra desliza el asa por la superficie en bisel
depende de la calidad de la muestra como marcando estrías.
parte representativa de un todo susceptible 4.Siembra en Medio liquido.
de ser analizada con un fin determinado. La Para transferir un producto contenido en un
muestra debe cumplir estrictamente con tres medio liquido o sólido a otros medios
condiciones para que sea válida: líquidos se puede usar pipetas estériles o asa;
representatividad, homogeneidad y asepsia. si se hace con pipeta, unas pocas gotas (2 a 3
Es muy importante ser cuidadosos en la gotas, equivalente a 100 a 150 microlitos) son
colección de las muestras para análisis suficientes para el desarrollo bacteriano, si se
microbiológicos en el campo de la Ingeniería practica con asa redonda una o dos asadas.
Agroindustrial como son : muestras de aguas,
suelos, medio ambiente, plantaciones, PRÁCTICA 6A
animales y alimentos, entre otros. En la
colección de la muestra debemos tener en
cuenta:
PROCEDIMIENTO
Las condiciones físicas: cantidad, color,
olor, pH, etc. Marcamos adecuadamente los tubos y las
Rapidez en su análisis, teniendo en cajas de petri con los Medios de Cultivo
cuenta que mientras menos tiempo corra estériles, con su nombre o identificación del
desde el momento de la toma de la grupo, fecha, medio de cultivo y nombre
muestra hasta su análisis, los resultados de la muestra.
serán más reales.
La identificación de cada muestra para SIEMBRA EN MEDIO LIQUIDO
evitar confusiones.
Realización de la siembra en los La siembra en medios contenidos en tubos
medios pertinentes según el propósito. requiere mayor cuidado, ya que un solo
microorganismo contaminante del aire puede
El sistema de siembras nos permite superar en crecimiento el microorganismo
determinar el tipo de microorganismos presente en la muestra en estudio. Por tanto,
presentes en una muestra, reconocer las debemos tener las siguientes precauciones:
características de un determinado Mantener inclinado el tubo que contiene
microorganismo o mantenerlo en cultivo el medio de cultivo de modo que los
puro el cual es la base de todos los análisis contaminantes del aire caigan en las
para identificar a los microorganismos. paredes externas del tubo y no en la
boca.
CLASES DE SIEMBRA EN TUBO Los tapones de los tubos deben
mantenerse en la mano derecha
1.Siembra en estrías. sostenidos entre el meñique y el anular.
Se realiza en un tubo con medio sólido Nunca deben colocarse sobre la mesa de
inclinado con bisel, deslizando el asa sobre la trabajo o algún otro lugar.
superficie y marcando surcos o estrías.
2.Siembra en picadura. A continuación seguimos el siguiente
Se designa con este nombre a la siembra que procedimiento:
se realiza con asa recta en tubos de medios 1. Calentamos el asa al rojo vivo y la
sólidos o semisólidos generalmente sin dejamos enfriar en las paredes del tubo.
inclinar; se introduce el asa cargada con la 2. Tomamos el medio de cultivo líquido
bacteria al medio de cultivo por el centro de previamente inoculado con la mano
la superficie al fondo. izquierda y quitamos el tapón de algodón con
3.Siembra Mixta. la mano derecha.
Igualmente se realizan siembras mixtas en 3. Con el asa redonda sacamos una gota y
picadura en el fondo del tubo y luego se tapamos el tubo con su tapón después de
haber flameado su boca en el mechero.
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4. Tomamos el tubo que vamos a sembrar PRÁCTICA 6B
con la mano izquierda, quitamos el tapón,
flameamos la boca y depositamos el asa en el MÉTODO DE SIEMBRAS POR DILUCIÓN
medio líquido, agitándola cuidadosamente
dentro del líquido. El método que más usamos para determinar
5. Retiramos el asa, flameamos la boca del el número de células microbianas en un
tubo y colocamos el tapón. análisis, es el recuento en placa o recuento de
6. Calentamos el asa al rojo vivo. colonias. Este método se basa en la relación
7. Incubamos los tubos a 37°C por 24 horas. teórica donde una célula bacteriana da lugar
8. Realizamos el mismo procedimiento para a una colonia y en la presunción que el
los demás cultivos de la práctica. número de colonias que se desarrollan sobre
una placa de agar, corresponde al número
SIEMBRA EN MEDIO SÓLIDO original de bacterias.
En la caja de petri podemos sembrar en placa
Si realizamos la siembra en un medio sólido profunda para el recuento de
contenido en un tubo de ensayo, seguimos microorganismos, o realizar siembras en
los pasos de la siembra en medio líquido pero superficie tomando de la muestra analizada
teniendo cuidado de utilizar el asa recta y con pipeta estéril 0.1 ml y distribuyéndolos
sembramos haciendo punción y/o estrías en homogéneamente sobre la superficie del
superficie del medio. medio.
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6. Con otra pipeta estéril mezclamos la
suspensión del número 4, tomamos 1.0 ml y PRÁCTICA 6C
lo pasamos a una caja de petri estéril.
7. Con otra pipeta estéril mezclamos la MULTIPLICACIÓN BACTERIANA Y
suspensión del número 3, tomamos 1.0 ml y FORMACION DE COLONIAS
lo pasamos a una caja de petri estéril.
8. Con otra pipeta estéril mezclamos la Despues de practicada una siembra y dada
suspensión del número 2, tomamos 1.0 ml y las condiciones requeridas de nutrientes,
lo pasamos a una caja de petri estéril. temperatura, tiempo de incubación,
9. Con otra pipeta estéril mezclamos la presencia o ausencia de oxigeno, segun el
suspensión del número 1, tomamos 1.0 ml y tipo de bacteria investigada, observamos la
lo pasamos a una caja de petri estéril. aparición macroscopica de las bacterias en
10. Después de haber agregado el inoculo a poblaciones, originadas a partir de una
la caja de petri, añadimos el Agar Plate Count célula y que denominamos Colonias.
estéril, fundido y enfriado a 45 °C, a cada una
de las cajas, mezclamos con movimientos En los Medios de cultivo sólidos las colonias
circulares suaves en la dirección de las agujas se desarrollan sobre la superficie del medio
del reloj y luego en sentido contrario (tres presentando una morfologia con
movimientos en cada dirección). caracteristicas comunes y particularres según
11. Dejamos enfriar el agar hasta que se los grupos bacterianos y que constituyen uno
solidifique e incubamos a 37 °C por 24 de los primeros pasos en la identificación de
horas. bacterias.
12. Contamos las colonias y damos
resultados de la siguiente manera: Estas caracteristicas pueden presentar
a. Seleccionamos las cajas que contengan variaciones dependiendo de la composicón
entre 30 y 300 colonias. quimica del medio empleado co tambien de
b. Empezamos a contar las colonias desde la las condiciones ambientales. En los Medios
parte superior de la caja, evitando contar la Liquidos el crecimiento se hace aparente por
misma colonia dos veces. turbidez en el medio.
c. Calculamos el número de microorganismo
por ml., de muestra, multiplicando el número Las caracteristicas macroscopicas de las
de colonias por el factor de dilución: colonias bacterianas que debemos tener en
RTG = No. de colonias x factor de dilución cuenta para su descripción son:
d. Los resultados se dan en número de Tamaño: grande, mediana, pequeña y
microorganismos por ml. Si tomamos 0.1 ml puntiforme.
de la muestra debemos multiplicar por 10 el Forma de borde: regular (continuo) ó
número final de microorganismos obtenidos. irregular (festonado, dentado, lobulado,
Por ejemplo: Si contamos 250 colonias en la ondulado, filamentoso, arborescente).
dilución 1:10.000, reportamos así: Forma de elevación: elevada ( convexa,
RTG = 250 x 10000 = 2.500.000 microorg./ml. umbilicada, mamelonada, papilar).
Superficie: lisa ó rugosa.
NOTA Consistencia: blanda, dura, mucoide,
Para llevar a cabo los pasos del 6 al 9 del seca, grasosa, granulosa, viscosa.
procedimiento anterior podemos utilizar una Aspecto: billante u opaco, mate ó
sola pipeta, realizando la siembra en orden translucida.
descendente, es decir, con la pipeta que se Color ó pigmento: amarillo, rojo, verde,
realizo la dilución del tubo número 4 blanco, ocre, etc.
realizamos las otras siembras; con esta pipeta Olor: sui-generis, nauseabundos,
tomamos 1.0 ml del tubo número 3 y lo fecaloides, a frutas, etc.
dispensamos a su correspondiente caja de Hemolisis: Total (beta), parcial (alfa), no
petri, y así sucesivamente hasta llegar a la hemolisis (gama).
dilución del tubo número 1.
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Ver gráficos anexos para complementar la 0.2ml de cada una sobre un medio adecuado.
información del presente laboratorio. Tras la incubación en la placa de la dilución
1/1.000.000 crecen 200 colonias, calcule el
TRABAJO COMPLEMENTARIO número probable de UFC por gramo de tierra
y el RTG de la resuspensión.
1.¿Qué diferencia existe entre los 13.¿Desde su punto de vista cual es la
procedimientos de siembra y repique? importancia de aplicar correctamente las
2.¿Que ventajas tiene la siembra en Medios técnicas de siembra para el futuro desempeño
sólidos sobre la siembra en Medios líquidos? de su profesión?
3.¿Escriba tres posibles causas de
contaminación de un cultivo? MAS INFORMACION...
4. ¿Qué es un cultivo microbiano?
5. ¿Qué es un cultivo mixto? Profesores de Microbiología. Manual de
6. ¿Qué es un cultivo puro? Laboratorio de Microbiología General.
7. ¿Qué es un cultivo contaminado? Universidad de Antioquia, Facultad de
8. ¿Qué es un inóculo microbiano? Ciencias Exactas y Naturales. Medellín, 1986.
9. Describa las características morfológicas de González V. Gloria, Martínez H. Gloria.
las colonias de los siguientes géneros Manual Sobre Técnicas Microbiológicas.
microbianos: Escherichia, Lactobacillus, Universidad de Antioquia. Facultad de
Estafilococos, Clostridium, Salmonella. Química Farmacéutica. Medellín, 1990.
10. ¿Se obtendría el mismo resultado si Díaz R, Gamazo C, Goñi-López I.
cuantificáramos las bacterias de una muestra Manual práctico de Microbiología. 2ª Ed.
por turbidimetría o por diluciones seriadas? Masson S.A. España, 1999.
¿ Por qué? Martínez M. María. Microbiologia.
11. Se sembraron dos placas de medios de Universidad Sur Colombiana. Facultad de
cultivo a partir de las diluciones 1/10.000 y Ciencias Básicas e Ingeniería. Santafé de
1/100.000. Tras la incubación de las placas a Bogotá. 1995.
37° C, no apareció ninguna colonia. ¿Significa Pulido P. Rosalba, Ramirez C. Carlos.
esto que no había ninguna bacteria en la Elementos del método en Microbiología.
muestra problema? Explique este resultado. Departamento de Biología. Catedra de
12. Se toman 2.5 gramos de tierra y se Microbiología. Universidad Pedagógica
resuspenden en solución salina estéril hasta Nacional.
un volumen final de 50ml. A continuación se
hacen diluciones decimales y se siembran
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7. REACCIONES BIOQUIMICAS
“El conjunto de todas las reacciones bioquímicas de un organismo vivo se conoce
como Metabolismo. En condiciones in- vitro se pueden realizar pruebas
bioquímicas estandarizadas que permiten ver el comportamiento metabólico de
los microorganismo y a la vez contribuyen en su identificación ”
MATERIALES
Medios de cultivo:
Agar citrato de Simmons
Agar Triple Azucar Hierro (TSI)
Agar de SIM (Sulfuros Indol Motilidad)
Agar Urea
Agar Lisina Hierro (LIA)
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Producción de gas: Burbujas dentro del aminoácidos azufrados, que por acción enzimática
medio o desplazamiento de las bacterias producen un gas incoloro (H 2S),
Producción de H2S: Ennegrecimiento del que al reaccionar con una sal pesada de citrato
medio férrico de amonio produce un precipitado negro
insoluble (sulfuro ferroso).
4. AGAR CITRATO DE SIMMONS Cistina Cisteina Desulfurasa
Cisteina Acido Pirúvico + H2S + NH3
Fundamento H2S + citrato férrico de amonio Sulfuro
Algunas Bacterias pueden obtener energía ferroso (precipitado negro)
utilizando el citrato como única fuente de
carbono; son aquellas que poseen la enzima Prueba del Indol: Señala la capacidad de las
citrasa, que pueden degradar el citrato hasta bacterias para oxidar el triptófano y utilizarlo
oxalacetato que finalmente se incorpora al como fuente de nitrógeno, esta reacción es
ciclo de krebs. El medio utilizado para este detectada mediante la adición del Reactivo de
fin no debe contener proteínas y Kovac's al medio dando una coloración roja cereza
carbohidratos que sirvan como otra fuente de en forma de anillo en la superficie del medio. La
carbono, por esta razón, es empleado el acción enzimática de la triptofanasa produce
Citrato de Simmons que contiene citrato de varios metabolitos entre los cuales esta el Indol.
sodio, sales de amonio y azul de bromotimol
como indicador del cambio de pH que ocurre Prueba de Motilidad: En este medio se puede
cuando se degradan las sales de amonio detectar la movilidad de las bacterias que la
produciendo hidróxido de amonio y poseen, siempre y cuando no haya producción de
basidifican o alcaliniza el medio. El indicador H2S que dificulta la lectura. Cuando esto ocurre
azul de bromotimol es amarillo a pH menor la motilidad se observa en el medio Agar blando.
de 6.0 y azul a pH mayor de 7.6 El desplazamiento se observa hacia las paredes del
tubo provocando turbidez.
Procedimiento
Con el asa recta tomar una colonia del Procedimiento
microorganismo a estudiar, del agar de Tomar una superficie aislada del
MacConkey. Sembrar en la superficie del microorganismo con el asa de punta recta y
tendido haciendo una estría, e incubar a 35° puncionar el medio hasta el fondo del tubo
por 24 horas. una vez suavemente. Después de incubar
agregar unas gotas del reactivo de Kovacs y
Lectura esperar unos minutos para la reacción.
POSITIVA: Crecimiento y cambio del medio Lectura
(verde) a color azul a las 24 horas de Producción de H2S: Aparición de pigmento
incubación. negro.
NEGATIVA: El medio no cambia de color. Producción de Indol: Produce anillo rojo (+)
No produce anillo (--)
MOTILIDAD:
Positivo: el microorganismo se difunde en el
5. AGAR DE SIM medio provocando opacidad
Negativo: crecimiento bacteriano siguiendo
Fundamento la linea de siembra
Se emplea el medio SIM (Sulfuros Indol
Motilidad) que contiene triptófano 6. AGAR DE UREA
(aminoácido), azufre, sales de hierro y agar.
En esta prueba se pueden observar tres Fundamento
reacciones: Este medio señala la capacidad de un
Producción de ácido sulfídrico (H2S) : ayuda microorganismo para desdoblar la urea, por
a diferenciar entre las especies de bacterias capaces acción de la enzima ureasa. Especialmente
de producir ácido sulfídrico. El medio contiene sirve para identificar las especies del genero
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Proteus también puede ser usado para otras son ácidos orgánicos que acidifican el medio
enterobacterias, que hidrolizan la urea mas de cultivo. Los géneros Proteus, Providencia y
lentamente, incubando el medio por un Morganella deaminan la lisina con una
periodo mas largo de tiempo (48 horas). La característica especial y es la formación de un
urea al ser hidrolizada produce amonio que complejo pardo-rojizo en la superficie del
reacciona en solución formándose carbonato medio, el cual se produce por la presencia de
de amonio, compuesto que alcaliniza el oxigeno y de sales férricas. Este medio
medio, es decir, cambian el color amarillo además es útil en la identificación de algunas
inicial del medio a un color rojo rosado o especies de Salmonella, las cuales son lisina
fucsia. El indicador de pH es Rojo de Fenol. decarboxilasa positivas en un 94.6%.
Salmonella paratyphi es lisina decarboxilasa
negativa. Ninguna de las especies del genero
Urea ureasa Amoniaco + CO2 Citrobacter que son lactosa negativa,
decarboxilan la lisina. La decarboxilacion de
Procedimiento la lisina se observa por la presencia de un
Tomar una colonia del microorganismo con el color púrpura, en todo el medio (K/K). Esto
asa de punta recta. Inocular el medio una vez, se debe a la alcalinizacion del medio por la
hasta el fondo del tubo, suavemente. amina liberada: cadaverina.
Lectura Procedimiento
Positivo: color rojo fucsia (urea hidrolizada) Con el asa recta, tomar una colonia del
Negativo: color amarillo (urea no microorganismo y puncionar el medio por el
hidrolizada) centro hasta el fondo dos veces. Terminar la
inoculación con una estría en el tendido,
7. AGAR LISINA HIERRO (LIA) luego cerrar el tubo e incubar a 37°C por 24
horas.
Fundamento
Los procesos de decarboxilación y Lectura
deaminación en el medio de cultivo, tienen Color del tendido:
lugar con la previa fermentación del - Púrpura (decarboxilación) K
carbohidrato que contiene el medio (glucosa) - Rojo (deaminacion) R
y la acidez producida por esta reacción; si el Color del fondo:
microorganismo posee las decarboxilasas - Amarillo (ácido de glucosa) A
necesarias, se produce la decarboxilación - Púrpura (decarboxilación) K
liberándose como producto final las aminas Producción de gas: Burbujas dentro del
que alcalinizan el medio de cultivo; si el medio
microorganismo posee las deaminasas se Producción de H2S: Ennegrecimiento del
efectúa la deaminacion y el producto final medio
________________________
TSI CITRATO
TSI CITRATO LIA
LIA SIM
SIM UREA
UREA
UREAURAAUREA
UREAURAAUREA
UADRO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN LOS MEDIOS DE CULTIVO
RESULTAD
MEDIOS DE CULTIVO REACCIONES
O
Su Fuente Citrato
Agar citrato de Simmons
Su Fuente No Es Citrato
Agar LIA Tendido K (Decarboxilacion)
R (Deaminacion)
A (Acidez)
Fondo
K (decarboxilacion)
Fermenta Lactosa
Fermenta Glucosa
Agar TSI
H2S
E. coli
Produccion de Gas
E. aerogenes H S
2
Agar SIM H. alvei Indol
S. marcescens Motilidad
S. liquefaciens
Hidroliza la urea
Agar Urea E. gergoviae
No Hidroliza la urea
S. odorifera
IDENTIFICACION DEL MICROORGANISMO POR EL DIAGRAMA TENIENDO EN
CUENTA LAS REACCIONES OBTENIDAS
LISINA + ORNITINA +
E. coli E. aerogenes
S. odorifera H. alvei
S. marcescens
S. liquefaciens
E. gergoviae
+ INDOL -
E. aerogenes S.
H. alvei marcescens
S. liquefaciens
E. gergoviae
+ ARABINOSA -
________________________
E. S. liquefaciens
aerogenes H. alvei
H. alvei
+ GAS -
AGAR LIA
COLOR DEL MEDIO DE CULTIVO
PRODUCCION
MICROORGANISMO Columna Superficie
DE H2S
vertical Inclinada
Arizona Violeta Violeta +
Salmonella* Violeta Violeta +
Proteus mirabilis
Amarillo Pardo-rojizo +
Proteus vulgaris
Proteus morganii
Amarillo Pardo-rojizo -
Proteus rettgeri
Providencia Amarillo Pardo-rojizo -
Citrobacter Amarillo Violeta +
Escherichia Amarillo Violeta -
Shigella Amarillo Violeta -
Klebsiella Violeta Violeta -
AGAR DE UREA
________________________
________________________
PRACTICA 2: REACCIONES agua destilada en los alvéolos para
BIOQUIMICAS PARA proporcionar una atmósfera húmeda.
ENTEROBACTERIAS CON EL SISTEMA 2. Anotamos el numero de la muestra
API 20 E seleccionada en la lengüeta lateral.
3. Sacar la galería de su embalaje.
API 20 E es un sistema para la identificación 4. Colocar la galería, de forma inclinada, en
de las Enterobacterias y otros bacilos Gram- la cámara de incubación.
negativos no exigentes que utiliza 23 tests Incoculacion de la galeria:
bioquímicos estandarizados y 1. Con la ayuda de una micropipeta, llenar
miniaturizados, y una base de datos. todos los tubos con 200 m l de la
suspensión bacteriana.
Cada galería del API 20 E consta de 20 2. Llenar tubos y cúpulas (parte
microtubos conteniendo substratos sobresaliente) de los tests I CIT I I VP I
deshidratados. Estos tests se inoculan con Y I GEL I con la suspensión
una suspensión bacteriana la cual hidrata el bacteriana.
medio. Durante la incubación, se producen 3. Llenar la cúpula de los tests ADH, LDC,
cambios de color espontáneos o revelados por ODC, H2S, Y URE con aceite Mineral
adición de reactivos. La lectura de las (para obtener anaerobiosis).
reacciones se hace de acuerdo con la tabla de 4. Cerrar la cámara de incubacion
lectura y la identificación mediante el API 20 5. Incubar a 37ºC durante 18-24 horas
E Index o el programa informático para
identificación. LECTURA DE LA GALERIA
1. Después de 18-24 horas A 35-37°C, leer la
PROCEDIMIENTO galería con la ayuda de la Tabla de
Las muestras y cultivos bacterianos deben ser Lectura.
considerados como potencialmente 2. Anotar en la hoja de resultados las
infecciosos y deben ser manipulados de reacciones espontaneas
manera adecuada (empleando lo aprendido 3. Efectuar el revelado de los tests, que
en bioseguridad). Las técnicas asépticas y las requieran reactivos, de la siguiente
precauciones habituales de manipulación manera:
para el grupo bacteriano estudiado deben ser Tests TDA: Añadir 2 gotas de Cloruro
respetadas durante toda la manipulación. Férrico. Un color marrón oscuro indica una
reacción positiva. Anotar los resultados en la
Preparación del Inoculo: Realizar una hoja.
suspensión del microorganismo en 5 ml Tests IND: Añadir 2 gotas de reactivo de
de agua destilada; con la ayuda del asa KOVACS y esperar 2 minutos. La aparicion
de punta redonda, arrastrar colonias del de un anillo rojo indica que la reaccion es
medio de cultivo y suspender en el tubo positiva. Anotar los resultados.
de ensayo que contiene el agua destilada, Tests VP: Añadir una gota de solución A
homogenizar cuidadosamente las (Hidróxido de Potasio) y una gota de
bacterias en el medio; dejar reposar de 10 solución B (a-Naftol). Esperar como minimo
a 15 minutos hasta apreciar cierto grado 10 minutos. Un color rojo o rosa indica una
de turbidez. reacción positiva. La aparición de una
Preparación de la galeria: coloración rosa pálido en 10-12 minutos, debe
1. Preparamos la cámara de incubación, con ser considerada como negativa.
su tapa correspondiente, y repartimos
________________________
TABLA DE LECTURA
RESULTADOS
TEST SUBSTRATOS REACCIONES /ENZIMAS
NEGATIVO POSITIVO
Orto-nito-fenol-b-D
ONPG b-galactosidasa incoloro Amarillo(1)
Galactopiranosido
ADH Arginina Arginina dehidrolasa Amarillo Rojo / naranja(2)
LDC Lisina Lisina descarboxilasa Amarillo naranja
ODC Ornitina Ornitina descarboxilasa Amarillo Rojo / naranja(2)
Verde
I CITI Citrato sódico Utilización del Citrato Azul-verde / azul(3)
pálido/amarillo
H2S Tiosulfato sódico Producción de H2S Incoloro/grisáceo Deposito negro
URE Urea Ureasa amarillo Rojo / naranja
TDA / inmediato
TDA Triptofano Triptofano desaminasa
amarillo Marrón oscuro
JAMES / inmediato o IND / 2 min
JAMES
JAMES
Incoloro
Rosa
Verde
IND Triptofano Producción de indol claro/amarillo
IND
IND
Anillo rojo
amarillo
VP 1 más VP 2 / 10 minutos
I VP I Piruvato sódico Producción de acetoina
incoloro Rosado / rojo
No hay difusión Difusión de
IGELI Gelatina de Kohn Gelatinasa
de pigmento negro pigmento negro
Fermentación /
GLU Glucosa Azul / azul verdoso Amarillo
oxidación(4)
Fermentación /
MAN Manitol Azul / azul verdoso Amarillo
oxidación(4)
Fermentación /
INO Inositol Azul / azul verdoso Amarillo
oxidación(4)
Fermentación /
SOR Sorbitol Azul / azul verdoso Amarillo
oxidación(4)
Fermentación /
RHA Ramnosa Azul / azul verdoso Amarillo
oxidación(4)
Fermentación /
SAC Sacarosa Azul / azul verdoso Amarillo
oxidación(4)
Fermentación /
MEL Melibiosa Azul / azul verdoso Amarillo
oxidación(4)
Fermentación /
AMY Amigdalina Azul / azul verdoso Amarillo
oxidación(4)
Fermentación /
ARA Arabinosa Azul / azul verdoso Amarillo
oxidación(4)
OX / 1-2 minutos
OX Sobre papel filtro Citocromo oxidasa
Incoloro Violeta
1) Un amarillo muy pálido debe considerarse como positivo
2) Un color naranja después de 24 horas de incubación debe considerarse negativo
3) La lectura debe hacerse en la cúpula (aerobiosis)
4) La fermentación empieza en la parte inferior de los tubos, la oxidación empieza en la cúpula.
INTERPRETACION DE RESULTADOS
OBTENIDOS CON EL API 20 E
________________________
En la hoja de resultados los tests estan en Sumando los valores de los tests positivos
grupos de tres y cada uno tiene asignado un para cada grupo se obtiene un codigo de 7
valor: 1, 2 o 4. La galeria API 20 E consta de cifras. Con este codigo empleamos un
20 test, los numeros en el interior de cada sistema de identificacion que consiste en unas
grupo corresponden a las reacciones tablas donde se busca el codigo exacto o un
positivas. Los tests que obtengan reaccion numero aproximado. El formato utilizado
positiva se le asigna el valor correspondiente. para la prueba se encuentra a continuacion:
ONPG ADH LDC ODC I CIT I H2S URE TDA IND I VP I IGEL I GLU
1+ + + + + + + + - + + +
7 7 3 7
+ + -- + + + + + -
1 1
3 7 3
En el esquema de resultados del ejemplo anterior, el codigo obtenido es: 7737373 que corresponde a
una salmonella spp.
TRABAJO COMPLEMENTARIO
1. ¿Por qué es importante trabajar con MAS INFORMACIÓN
cultivos puros para la identificación Frazier W.C. Microbiologia de los
de microorganismos? alimentos. Ed Acribio. Zaragoza, España.
2. ¿cuáles son las diferencias más Philip L. Carpenter. Microbiologia. Ed
significativas entre respiración y Interamericana
fermentación? Burrows William. Microbiologia. Ed
3. ¿Qué otros medios de cultivo son Interamericana. México 1969
empleados para la identificación de Manual para el Diagnostico in vitro
microorganismos? Medios de cultivo MERCK
________________________
HONGOS Y LEVADURAS
Los hongos son organismos eucarióticos, hongos causan deterioro en textiles, ropas,
poseen un verdadero núcleo delimitado y madera, etc. Y, además enfermedades en
definido. Se encuentran ampliamente plantas, animales y el hombre.
distribuidos en el suelo, en el aire, en el agua,
como parásitos de plantas, animales y el Los hongos se clasifican en cuatro
hombre y como contaminantes de alimentos subdivisiones teniendo en cuenta la forma
y otras sustancias. como se reproducen, así:
Zygomicotina, los que poseen
Estos microorganismos son muy ubicuos y esporangiosporas para la reproducción
tienen una profunda influencia en su medio asexual y zigosporas para la sexual.
ambiente, actúan sobre madera, hojas, tallos, Ascomicotina, los que poseen ascosporas
etc. Para formar el humus que enriquece el para la reproducción sexual y
suelo: expelen CO2 a la atmósfera, el cual es conidiosporas para la asexual.
usado por las plantas; son empleados en la Basidiomicotina, los que poseen
industria de fermentación para producir basidiospora para la reproducción sexual;
ácidos orgánicos,, alcoholes y otros y oidiosporas o artrosporas para la
compuestos; sirven como fuentes de algunos reproducción asexual.
antibióticos, son utilizados en la elaboración Deuteromicotina, que solamente se les
de queso; si no se controlan, esos mismos conoce reproducción asexual por medio
de micro o macroconidias.
OBJETIVOS
Adquirir destreza en al identificación de las estructuras de los hongos.
Desarrollar destreza en el cultivo e identificación de los hongos contaminantes de áreas de
industria, productos agroindustriales etc.
Familiarizarse con las técnicas tales como examen directo, siembra y repiques microbiológicos
necesarios para el correcto diagnóstico macro y microscópico.
MATERIALES
Estériles
Cubre y porta objetos
H2O destilada estéril
Lugol
Azul de lactofenol
Levaduras (Saccharomyces cerevisiae)
Ficomicetes Rhizopus sp. Ascomicetes: penicillium sp. Aspergillus sp.
Basidiomycetes (agaricales, poliporaceos, telephoraceos e hydnaceos).
Deutoromycetes (Mycrosporum canis – Trycophyton metagrophytes) etc.
Medios (Sabouraund – Mycosel).
FUNDAMENTO
Los hongos pueden definirse como
HONGOS Y LEVADURAS organismos nucleados, formadores de
esporas y carentes de clorofila, se reproducen
Los hongos y levaduras constituyen un sexual y asexualmente. Los hongos y
amplio y diverso grupo. levaduras son en su mayoría saprofitos, por
________________________
esto tienen gran importancia en la La mayoría de los hongos deben ser
descomposición de la materia orgánica considerados mesófilos la temperatura
natural y los alimentos. Otras especies son óptima para la mayoría es de 25 a 30ºC,
parásitas facultativas, dependiendo del algunos crecen bien entre 35 y 37ºC.
medio ambiente. Pueden causar Algunos pueden ser psicrófilos, crecen
enfermedades en las plantas, animales y en el bien a temperaturas de refrigeración y
hombre y son de gran importancia en los otros a temperaturas bajas de congelación
procesos de fermentación industrial, ejemplo: pero de forma lenta. Unos pocos son
panes, cerveza, vinos. Algunos son usados en termófilos.
la producción de queso, vitaminas, ácidos 3. Requerimientos de O2 y pH
orgánicos y antibióticos. En los últimos años Los mohos son aeróbicos. La mayoría
se han convertido en herramienta de trabajo puede crecer en amplio rango de pH 2.0–
para la Ingeniería Agroindustrial debido a 8.5, pero la mayoría son favorecidos por
sus ciclos de reproductividad únicos y su un pH ácido.
metabolismo relativamente simple. 4. Requerimientos nutritivos
Los mohos en general pueden utilizar
MOHOS muchos tipos de alimentos desde simples
hasta complejos.
Se da el nombre de mohos a ciertos hongos Los requerimientos básicos incluyen una
multicelulares, filamentosos, cuyo fuente orgánica de carbono, en forma de
crecimiento se conoce fácilmente por su azúcar o almidón, y una fuente orgánica
aspecto aterciopelado o algodonoso. o inorgánica de nitrógeno. Iones
inorgánicos, tales como potasio y
Caracteres Morfológicos: magnesio, ambos son sulfato y fosfato; y
La forma y estructura macro y microscópica trazas de zinc, cobre y magnesio. Factores
de los mohos es la base para su identificación de crecimiento específicos pueden ser
y clasificación. necesitados por aquellas especies que no
1. Hifas y micelio. Los mohos están pueden sintetizar sus propias vitaminas.
constituidos por unos filamentos 5. Inhibidores
Compuestos inhibidores de otros
microorganismos son producidos por
algunos mohos, tales como la penicilina
ramificados y entrecortados llamados hifas, de Penicillium chrysogenin.
cuyo conjunto forma el micelio.
Clasificación e identificación de los
2. Estructuras reproductoras. Generalmente mohos:
le reproducción se realiza por esporas
asexuadas, algunas formas esporas Criterios:
sexuales. Las esporas asexuales se 1. Hifas septadas o no.
diseminan fácilmente con la ayuda del 2. Que en micelio sea claro u obscuro.
aire originando nuevos mohos en donde 3. Que el micelio sea claro o incoloro.
se encuentres condiciones favorables. 4. Que se produzcan esporas o no y en caso
de que se produzcan, de que tipo:
Característica fisiológicas de los mohos: cosporas, zigosporas, ascosporas.
1. Requerimientos de humedad. 5. Clases de esporas asexuales:
La mayoría de los hongos requieren esporangiosporas, conidios o
menos humedad que las levaduras y las artrosporas.
bacterias crecen en un a w de 1.88. 6. Características de las cabezuelas de las
2. Requerimientos de temperatura esporas.
a. Esporangio: tamaño, forma color
colocación.
________________________
b. Conidios: simples o en cadenas, por
gemeción o en masa,forma y
disposición de los estigmas.
PRODUCTOS ALIMENTICIOS
Quesos
(P.roqueforti)
FERMENTACIÓN ANTIBIÓTICOS
Cerveza – vino Penicilium sp.
(Especies levaduras)
Obligatorios facultativa
s Médica Biológica
Usualmente Tizón
especies fúnico
dependientes
ej. Roya Descomposición
natural de la
materia orgánica
Patógenos para (hongos saprofitos)
animales y humanos
Producción de
toxinas
Importancia Importancia
medica industrial
HONGOS Y LEVADURAS
________________________
Los hongos son organismos eucarióticos,
poseen un verdadero núcleo delimitado y hongos causan deterioro en textiles, ropas,
definido. Se encuentran ampliamente madera, etc. Y, además enfermedades en
distribuidos en el suelo, en el aire, en el agua, plantas, animales y el hombre.
como parásitos de plantas, animales y el
hombre y como contaminantes de alimentos Los hongos se clasifican en cuatro
y otras sustancias. subdivisiones teniendo en cuenta la forma
como se reproducen, así:
Estos microorganismos son muy ubicuos y Zygomicotina, los que poseen
tienen una profunda influencia en su medio esporangiosporas para la reproducción
ambiente, actúan sobre madera, hojas, tallos, asexual y zigosporas para la sexual.
etc. Para formar el humus que enriquece el Ascomicotina, los que poseen ascosporas
suelo: expelen CO2 a la atmósfera, el cual es para la reproducción sexual y
usado por las plantas; son empleados en la conidiosporas para la asexual.
industria de fermentación para producir Basidiomicotina, los que poseen
ácidos orgánicos,, alcoholes y otros basidiospora para la reproducción sexual;
compuestos; sirven como fuentes de algunos y oidiosporas o artrosporas para la
antibióticos, son utilizados en la elaboración reproducción asexual.
de queso; si no se controlan, esos mismos Deuteromicotina, que solamente se les
conoce reproducción asexual por medio
de micro o macroconidias.
OBJETIVOS
MATERIALES
Estériles
Cubre y porta objetos
H2O destilada estéril
Lugol
Azul de lactofenol
Levaduras (Saccharomyces cerevisiae)
Ficomicetes Rhizopus sp. Ascomicetes: penicillium sp. Aspergillus sp.
Basidiomycetes (agaricales, poliporaceos, telephoraceos e hydnaceos).
Deutoromycetes (Mycrosporum canis – Trycophyton metagrophytes) etc.
Medios (Sabouraund – Mycosel).
Los hongos pueden definirse como
organismos nucleados, formadores de
FUNDAMENTO esporas y carentes de clorofila, se reproducen
sexual y asexualmente. Los hongos y
HONGOS Y LEVADURAS levaduras son en su mayoría saprofitos, por
esto tienen gran importancia en la
Los hongos y levaduras constituyen un descomposición de la materia orgánica
amplio y diverso grupo. natural y los alimentos. Otras especies son
parásitas facultativas, dependiendo del
medio ambiente. Pueden causar
________________________
enfermedades en las plantas, animales y en el La mayoría de los hongos deben ser
hombre y son de gran importancia en los considerados mesófilos la temperatura
procesos de fermentación industrial, ejemplo: óptima para la mayoría es de 25 a 30ºC,
panes, cerveza, vinos. Algunos son usados en algunos crecen bien entre 35 y 37ºC.
la producción de queso, vitaminas, ácidos Algunos pueden ser psicrófilos, crecen
orgánicos y antibióticos. En los últimos años bien a temperaturas de refrigeración y
se han convertido en herramienta de trabajo otros a temperaturas bajas de congelación
para la Ingeniería Agroindustrial debido a pero de forma lenta. Unos pocos son
sus ciclos de reproductividad únicos y su termófilos.
metabolismo relativamente simple. 8. Requerimientos de O2 y pH
Los mohos son aeróbicos. La mayoría
MOHOS puede crecer en amplio rango de pH 2.0–
8.5, pero la mayoría son favorecidos por
Se da el nombre de mohos a ciertos hongos un pH ácido.
multicelulares, filamentosos, cuyo 9. Requerimientos nutritivos
crecimiento se conoce fácilmente por su Los mohos en general pueden utilizar
aspecto aterciopelado o algodonoso. muchos tipos de alimentos desde simples
hasta complejos.
Caracteres Morfológicos: Los requerimientos básicos incluyen una
La forma y estructura macro y microscópica fuente orgánica de carbono, en forma de
de los mohos es la base para su identificación azúcar o almidón, y una fuente orgánica
y clasificación. o inorgánica de nitrógeno. Iones
3. Hifas y micelio. Los mohos están inorgánicos, tales como potasio y
constituidos por unos filamentos magnesio, ambos son sulfato y fosfato; y
trazas de zinc, cobre y magnesio. Factores
de crecimiento específicos pueden ser
necesitados por aquellas especies que no
ramificados y entrecortados llamados hifas, pueden sintetizar sus propias vitaminas.
cuyo conjunto forma el micelio. 10. Inhibidores
Compuestos inhibidores de otros
4. Estructuras reproductoras. Generalmente microorganismos son producidos por
le reproducción se realiza por esporas algunos mohos, tales como la penicilina
asexuadas, algunas formas esporas de Penicillium chrysogenin.
sexuales. Las esporas asexuales se
diseminan fácilmente con la ayuda del Clasificación e identificación de los
aire originando nuevos mohos en donde mohos:
se encuentres condiciones favorables.
Criterios:
Característica fisiológicas de los mohos: 7. Hifas septadas o no.
6. Requerimientos de humedad. 8. Que en micelio sea claro u obscuro.
La mayoría de los hongos requieren 9. Que el micelio sea claro o incoloro.
menos humedad que las levaduras y las 10. Que se produzcan esporas o no y en caso
bacterias crecen en un a w de 1.88. de que se produzcan, de que tipo:
7. Requerimientos de temperatura cosporas, zigosporas, ascosporas.
11. Clases de esporas asexuales:
esporangiosporas, conidios o
artrosporas.
12. Características de las cabezuelas de las
esporas.
c. Esporangio: tamaño, forma color
colocación.
________________________
d. Conidios: simples o en cadenas, por
gemeción o en masa,forma y
disposición de los estigmas.
PRODUCTOS ALIMENTICIOS
Quesos
(P.roqueforti)
FERMENTACIÓN ANTIBIÓTICOS
Cerveza – vino Penicilium sp.
(Especies levaduras)
Obligatorios facultativa
s Médica Biológica
Usualmente Tizón
especies fúnico
dependientes
ej. Roya Descomposición
natural de la
materia orgánica
Patógenos para (hongos saprofitos)
animales y humanos
Producción de
toxinas
Importancia Importancia
medica industrial
________________________
Al hablar de sustancias antimicrobianas es preciso recordar el origen y la estructura de los seres
vivos mas primitivos: los virus, las bacterias y los hongos. Por ello cuando se busca una
sustancia que actue en contra de ellos es menester tener presente como es su pared, su
membrana y demás estructuras. El objetivo primordial de una droga es destruir los
microorganismos, y no las células huésped.
Los agentes quimioterapicos provienen de: minerales, animales, vegetales y aun de los mismos
protistas o seres más primitivos, como es el caso de la penicilina que destruye las bacterias,
aunque su origen es micotico. Dichos fármacos se clasifican según su mecanismo de acción o su
actividad especifica. Por ello se habla de drogas bactericidas o bacteriostáticas; el primer caso,
es cuando la destruye totalmente, y el segundo, cuando inactiva la multiplicación de la bacteria.
Cuando se emplea una droga antimicrobiana es preferible que esta actue específicamente
contra el germen causal de la infección o enfermedad, evitando así la destrucción de la flora
normal bacteriana. Por ello hoy en día en los tratamientos se prefiere al fármaco de espectro
reducido.
Desde 1929, en que Fleming aisló la penicilina a partir de un hongo. Penicilliun notatum, hasta
nuestros días han sido puestos a nuestra disposición para la lucha contra las enfermedades
bacterianas, gran cantidad de agentes antibacterianos, antibióticos o quimioterapicos. A
diferencia de los de los antibióticos, que son sustancias químicas producidas por
microorganismos o derivados semisinteticos de estas, los quimioterapicos son productos de
síntesis química, pero con la propiedad común de estar dotados de actividad antibacteriana.
OBJETIVOS
________________________
Determinar la sensibilidad bacteriana a distintos antibióticos utilizando una metodología sencilla y
asequible a cualquier laboratorio de Microbiologia.
MATERIAL NECESARIO
PRUEBA INMUNOLOGICAS
Microbiologia; estas son altamente
sensibles y especificas. Entre las
Las Pruebas Serologicas son usadas principales pruebas Serologicas tenemos:
ampliamente en el diagnostico de Aglutinación, Precipitación, Floculación,
________________________
En esta practica se realiza la prueba de
Reacción de Aglutinación para
determinar grupos sanguíneos
Fijación de Complemento y humanos y el factor Rh.
Neutralización.
OBJETIVO.
MATERIALES:
Lancetas estériles
Alcohol antiséptico
Algodón
Palillos
Placa de Aglutinación
Antisueros ( Anti A, Anti B, Anti Rh).
Gotas de sangre de los diferentes grupos Sanguíneos.
PROCEDIMIENTO:
1. Limpie la yema del dedo del marcado B y una gota de suero Anti
corazón con un algodón humedecido Rh en el circulo marcado Rh.
en alcohol y déjelo secar. 5. Parta un palillo en dos y use cada
2. Haga una punción con la lanceta parte para mezclar las gotas que en
estéril. el circulo y luego agite la placa
3. Aplique suficiente presión al dedo inclinándola suavemente.
para facilitar la obtención de una 6. Examine las muestras
gota gruesa de sangre y colóquela en microscópicamente para evidenciar
cada uno de los tres círculos de las el aglutamiento de los glóbulos
placas de aglutinación. rojos.
4. Agregue una gota de suero Anti A 7. De acuerdo a la tabla de
en el circulo marcado A, una gota interpretación determine el grupo
de suero anti B en el circulo sanguíneo y el factor Rh.
________________________
CLASIFICACION
INTERNACIONAL ANTIGENO EN
LOS GLÓBULOS ANTICUERPOS
ROJOS EN EL SUERO
O
NINGUNO
ANTI A - ANTI B
A
A ANTI B
B
B
AB ANTI A
AB
NINGUNO
CLASIFICACION INTERNACIONAL
________________________
O
AB
NINGUNO
AB
ANTICUERPOS EN EL SUERO
ANTI A - ANTI B
ANTI B
ANTI A
NINGUNO
________________________
________________________
________________________