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7: VISUALIZACIÓN DE CÉLULAS EPITELIALES DE LA

MUCOSA ORAL.

OBJETIVO

Visualización en el microscopio de las células de la epidermis bucal.

Reforzar el uso del microscopio.

INTRODUCCIÓN

En 1609 Galileo Galilei construyó el primer microscopio simple. De 1617

a 1619, apareció ya un microscopio de dos lentes con un solo objetivo convexo
y un ocular, cuyo autor se supone que fue el físico Cornelius Drebbel. Hoy en
día existe una gran variedad de microscopio como son el de fluorescencia, el
de campo oscuro, el de campo claro, el de luz ultravioleta... En nuestro
laboratorio utilizaremos el de campo claro o microscopio óptico, que se
denomina óptico porque la imagen aumentada es captada por el ojo. Además,
se compone de un sistema mecánico o montura, un sistema óptico y un
sistema de iluminación.

En esta práctica, utilizaremos el microscopio óptico para visualizar células

animales.

Si nos retrocedemos unos años, en 1665 Robert Hooke observó por primera
vez las células de tejido vegetal en un trozo de corcho con un microscopio de
50 aumentos construido por él mismo, y fue quien les dio esta denominación.
Hooke solo pudo visualizar células muertas, por lo que no pudo describir las
estructuras de su interior. Posterior a Hooke, Van Leeuwenhoek construyó un
microscopio de 200 aumentos, con el que visualizó pequeñas organismos vivos
del agua de una charca. Gracias a ello, se pudo ver por primera vez protozoos,
levaduras, espermatozoides, glóbulos rojos de la sangre, etc.

El concepto común de que la célula es la unidad básica de los seres

vivos se conoce con el nombre de Teoría Celular, enunciada por Schleiden y
Schwann en 1838 y la cual puede resumir en tres conceptos principales: la

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célula es la unidad estructural de los organismos
vivos, es la unidad funcional de los seres vivos y
todaslas células provienen de otras células
preexistentes.

FUNDAMENTO

Las células eucariotas son aquellas que se

caracterizan por presentar siempre un citoplasma
compartimentado por membranas lipídicas y un
núcleo celular organizado, que contiene el material
genético o ADN. De esta forma, se diferencian de las células procariotas, que
carecen de núcleo definido y cuyo material genético se encuentra disperso en
el citoplasma. No obstante, existen diversos tipos de células eucariotas entre
las que destacan las células animales y las vegetales.

Por una parte, la célula animal es una célula eucariota caracterizada por la
presencia de núcleo, membrana plasmática y citoplasma. Se diferencia de la
célula vegetal por la ausencia de pared celular y cloroplastos. Además, se
pueden encontrar vacuolas más pequeñas y más abundantes en comparación
con las de una célula vegetal. También pueden adoptar diversas formas y son
capaces de capturar y digerir otras sustancias.

Por otro lado, la célula vegetal es una célula eucariota que se caracteriza por la
presencia de una pared celular que le da soporte y protección, a la vez que
permite la comunicación celular. Al igual que la célula animal, presenta un
núcleo diferenciado, membrana y citoplasma. Sin embargo, la célula vegetal
contiene partes únicas que se encargan del proceso de la fotosíntesis
(cloroplasto), es algo fundamental, ya que permite a las plantas liberar el
oxígeno que los seres vivos necesitan para existir.

Para visualizar estas dos células de la mejor forma posible y poder

identificar el mayor número de componentes, se debe realizar la tinción de azul
de metileno. Esta tinción se utiliza para diferenciar organismos no
acidorresistentes, es decir, que no resisten al colorante de esta tinción. Por el
contrario, los organismos ácido resistentes, como el Mycobacterium, tienen

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paredes celulares casi impermeables, parecidas a la cera, que les confieren
mucha resistencia a las tinciones microbiológicas típicas. Estos organismos
requieren una tinción diferente, como el método de Ziehl-Neelsen o el método
de Kinyoun.

MATERIALES

Hisopo o palillo de dientes.

EPI (bata y guantes).

Portaobjeto.

Cubreobjeto.

Cristalizador.

Puentes de tinción.

Pipeta pasteur.

Vaso de precipitados.

REACTIVOS

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Azul de metileno.

Agua destilada.

Aceite de inmersión.

PROCEDIMIENTO

Visualización del siguiente video:

https://www.youtube.com/watch?v=0XZ4HtS3Dus&t=32s

1) Colocar el papel de filtro en la mesa de trabajo y, sobre éste, los materiales

que se vayan a utilizar.

2) Coger 2 portaobjetos y lavarlos con alcohol de 70º, agua corriente y agua

destilada como lavado final. Después del lavado secar con el trapo de
microfibra. Lavar las manos, y colocarse los guantes.

3) Realización de la práctica de las 2 muestras de epitelio bucal (una con

tinción y otra sin tinción):

I. Con un palillo de dientes o con un hisopo, raspar en el interior de nuestro

carrillo de forma que se impregne bien de saliva de esta zona.

II. Restregamos el palillo o el hisopo con la muestra en dos portaobjetos.

III. En uno de los portas, dispensamos una gota de agua destilada con la ayuda
de una pipeta Pasteur y colocamos un crubreobjetos.

IV. En el porta con epitelio bucal sobrante, realizar el mismo procedimiento que
para el anterior (paso III) pero sustituir la gota de agua destilada por una de
azul de metileno.

V. Tirar el palillo de dientes al contenedor de residuos orgánicos.

4) Coger el microscopio, enchufarlo y encenderlo.

5) Configurar la intensidad de la luz al máximo nivel, seleccionar el objetivo 4x y

bajar la platina.

6) Colocar la muestra y centrarla en un punto que resulte interesante.

7) Subir la platina, y enfocar la muestra con el macro y definir con el micro.

8) Enfocar bien la luz con el condensador y diafragma.

9) Cuando se visualice un punto interesante, seleccionar el objetivo 10x y

enfocar.

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10) Cuando se termine de visualizar la muestra con el objetivo de 10x, cambiar
la muestra por la del epitelio bucal sin teñir (repetir los pasos que van desde el
5 al 9). ¡OJO! Con la muestra bucal teñida sí alcanzamos el objetivo 40x.

11) Cuando se haya terminado con la práctica, despegar los cubreobjetos de

los portas.

12) Colocar todos los portaobjetos y los cubreobjetos utilizados en un

cristalizador con agua y alcohol, y dejarlos unos minutos.

13) Lavar los portas y los cubreobjetos con alcohol, agua corriente y agua
destilada.

14) Una vez terminada la práctica, limpiar el microscopio con papel de filtro y
alcohol de 70º.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

En esta foto de la muestra teñida con azul de metileno, podemos observar que
encima de las células de la mucosa oral hay colonias de bacterias (puntos
azules). Creo que son bacilos.

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Aquí podemos ver que el azul de metileno tiñe muy bien el núcleo y la
membrana celular, ya que se ven de un intenso color azul.

Aquí vemos células cuboidales de la mucosa oral sin teñir.

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Esto es una célula sin teñir que se ve muy clara.

CONCLUSIÓN

Como conclusión de esta práctica, vemos que el azul de metileno es un muy

buen aliado a la hora de visualizar el núcleo y la membrana celular, pero que
sin él también podemos verla.