UNIVERSIDAD AUTONOMA

CHAPINGO
Departamento de enseñanza, investigación y servicio en zootecnia

Biología celular

Reporte de practica
“Aparato de Golgi, tinción con técnica Da Fano”

Alumnas:
Reyes Bravo María Fernanda
Rodríguez Ramos Tayli Amayrani
Martínez Ocampo Balbi Yizreel

Grado: 5° Grupo: 6
Indice
Introducción ....................................................................................................................... 3

Objetivos............................................................................................................................ 4

Hipótesis ............................................................................................................................ 4

Material .............................................................................................................................. 5

Metodología ....................................................................................................................... 6

Resultados......................................................................................................................... 7

Discusión ........................................................................................................................... 9

Conclusión ....................................................................................................................... 10

Bibliografía ....................................................................................................................... 11
Introducción
El aparato de Golgi se encuentra generalmente localizado cerca del núcleo celular
y en células animales cercano a los centrosomas. Está formado por diminutos
sáculos envueltos por una membrana, aplanados y apilados a modo de platos.
Cada sáculo se denomina cisterna, las cisternas suelen medir alrededor de una
micra de diámetro. Como el resto de las membranas celulares, la que forma a las
cisternas consta de una bicapa fosfolipídica con gran variedad de proteínas
transmembranales. En cualquier circunstancia, salvo cuando la célula está en
división, las cisternas mantienen su disposición apilada característica.
Su principal función del aparato de Golgi la fabricación y empaquetamiento de las
proteínas y los lípidos, especialmente de aquellas proteínas destinadas a ser
exportadas por la célula[1].
El número de cisternas apiladas del AG varía dependiendo del tipo celular.
Algunas células animales contienen un apilamiento grande que puede estar
interconectado; generalmente se presentan cinco o seis cis- ternas, mientras que
en ciertas células de plantas puede haber cientos de pequeños apilamientos
denominados dictiosomas. En células de plantas y organismos inferiores, estos
apilamientos presentan a menudo 20 o más cisternas [1].
El complejo de Golgi desempeña un papel clave en el ensamblaje del componente
carbohidrato de las glucoproteínas y glucolípidos.
En el complejo de Golgi, como en el RER, la secuencia en la que los azúcares se
incorporan a los oligosacáridos está determinada por la disposición espacial de las
glucosiltransferasas específicas que entran en contacto con la proteína recién
sintetizada a medida que se mueve a través de la pila de Golgi. La enzima sia-
liltransferasa, por ejemplo, que coloca un ácido siálico en la posición terminal de la
cadena en células animales, se localiza en la cara trans de la pila de Golgi, como
se esperaría si las glucoproteínas recién sintetizadas se movieran de forma
continua hacia esta parte del organelo. En contraste con los eventos de
glucosilación que ocurren en el ER, que ensamblan un oligosacárido de núcleo
único, las etapas de glucosilación en el complejo de Golgi pueden ser bastante
variadas, produciendo dominios de carbohidratos de notable diversidad de
secuencias [2].
El epidídimo al encargarse de almacenar, proporcionar nutrientes y transportar los
espermatozoides, nos permite observar un gran número de aparatos de Golgi
dado que este se encarga del empaquetamiento de las proteínas, así como
también participa en la reabsorción de los espermas al morir.

Objetivos

• Observar los complejos de aparato de Golgi al teñir los cortes histológicos

con la técnica histoquímica de Da Fano.
• Observar e identificar con ayuda del microscopio los núcleos y el aparato de
Golgi.

Hipótesis

• Si el nitrato de plata reacciona con los fenoles, teñirá los que se encuentren
en el líquido endomembranoso del aparato de Golgi tiñéndolos de marrón
oscuro.
• La safranina al reaccionar con el ADN teñirá de rojo el núcleo celular
• Si en el epidídimo se necesitan una gran cantidad de nutrientes y proteínas
específicas para ello, habrá una gran cantidad de aparatos de Golgi en
estas células
• Si el ácido osmiúrico produce una sombra negra, teñirá de negro la
membrana del aparato de Golgi por ser rica en fosfolípidos y glucoproteínas
siendo permeable al reductor de Cajal.
Material

• Corte histológico de Epidídimo de conejo.

Fijador de Da Fano
• Nitrato de Cobalto.
• Formol 10%
• Agua destilada.
• Nitrato de plata 1%.

Reductor de cajal
• Hidroquinina
• Sulfito de Sodio.
• Hiposulfito de Sodio 10%.
• Cloruro de Oro.
• Safranina.
• Colorante verde.
• Tiosulfato de Na.
• Alcohol absoluto.
• Alcohol 96%.
• Xilol.
• Resina
• Porta objetos.
• Cubreobjetos.
• Pinzas.
Metodología
Demostración del Aparato de Golgi mediante la técnica de impregnación.
1. Se obtuvo el epidídimo, se fragmentarlo y fijó en fijador de Da Fano.
2. Lavamos en agua destilada.
3. Sumergimos en Nitrato de plata 1% (2 días).
4. Lavamos en agua destilada.
5. Sumergimos en reductor de Cajal.
6. Lavamos en agua destilada.

7. Fijamos en Hiposulfito de sodio por 10 segundos.

8. Lavamos en agua destilada.
9. Se procesó con técnica histológica.
10. Se desparafinó y se hidrataron los cortes.
11. Sumergimos en cloruro de oro por 8 segundos.
12. Lavamos en agua destilada.
13. Sumergimos en Tiosulfato de Na por 1 minuto.
14. Lavamos en agua destilada.
15. Se agregó colorante de Safranina 6’.
16. Sin lavar, dejamos escurrir Verde Luz.
17. Lavamos con Alcohol Absoluto.
18. Técnica de deshidratación.
18.1 alcohol al 96% sobre el corte por 1 minuto (3
repeticiones).
18.2 Colocar alcohol absoluto sobre el corte por 1
minuto (3 repeticiones).
18.3 Colocar alcohol absoluto-xilol 50/50 por 1 minuto
(3 repeticiones). 4. Colocar Xilol por 1 minuto (3
repeticiones)

18. Montamos con resina y colocamos un cubreobjetos.

19. Dejamos secar y observamos.
Resultados
En esta práctica hicimos dos montajes de epidídimo de conejo de 8 micras
aproximadamente. Cómo resultado del primero, se lograron apreciar los núcleos y
los aparatos de golgi de las células.

Fotomicrografía con el objetivo Fotomicrografía con el objetivo

de 4x, no se aprecian con de 40x, aprecian con claridad las
claridad las estructuras, sin estructuras, los nucleos son de
embargo, las manchas rojas son color rojo y los A.G de color
los núcleos negro

Fotomicrografía con el objetivo

de 100x,no se aprecian con
claridad las estructuras, debido a
que a mayor ampliación, menor
nitidez, sin embargo los puntos
negros son los A.G. y los puntos
rojos son los núcleos
En la segunda muestra se observan los núcleos, pero los complejos de Golgi no
se perciben con claridad, debido a que en la preparación tuvimos un exceso de
nitrato de plata. La safranina tiñó a los núcleos de color rojo, mientras que el
nitrato de plata tiñó de color negro a los aparatos de Golgi.

Fotomicrografía con el objetivo Fotomicrografía con el objetivo

de 4x, no se aprecian con de 10x, no se aprecian con
claridad las estructuras, sin claridad las estructuras, sin
embargo las manchas rojas son embargo los puntos rojos son los
los núcleos. nucleos.

Fotomicrografía con el objetivo Fotomicrografía con el objetivo

de 40x, se aprecian con claridad
los nucleos de color rojo, los
aparatos de golgi no se persiben
de 100x, no se aprecian con
claridad las estructuras, debido a
que a mayor ampliación, menor
nitidez, sin embargo los puntos
rojos son los núcleos
Discusión

Comparamos los resultados con los del Técnico Saúl y en su corte se logran
observar con más contraste que en el nuestro, atribuimos esto a que nuestros
cortes estaban más impregnados de colorantes en otras zonas, probablemente
tuvimos que haber lavado por más tiempo los cortes.

Microfotografía de 40x de corte de un Microfotografía ampliada a 100x. Se

conducto del epidídimo de conejo. observan los núcleos en color rosa
fuerte y aparatos de Golgi en color
negro

Microfotografía a 40x de la zona intermedia Imagen tomada del atlas de histología

del epidídimo. Se señala en negro aparato de la UNAM utilizando técnica de Da
de Golgi y en rojo núcleo celular. Fano, donde se observa el citoplasma
en café amarillento y en color oscuro
aparatos de Golgi [3].
Conclusión

El aparato de Golgi es un orgánulo celular que ayuda en la fabricación y

empaquetamiento de las proteínas y los lípidos, para su uso en otros lugares
dentro y fuera de la célula. De acuerdo a lo visto en la práctica se cumplieron los
objetivos, pudimos observar los complejos de Golgi y los núcleos en el epidídimo
con la técnica de Da Fano, debido a que ahí se lleva de acabo la maduración, por
lo que hay presencia de muchas proteínas, en consecuente el aparato de Golgi se
encargará de empaquetar dichas proteínas. Dicho esto, aceptamos nuestras
hipótesis ya que al hacer reacciones el nitrato de plata con los fenoles, el aparato
de Golgi se tiñó de negro, al igual que, al momento de que la safranina entro en
reacción con el ADN tiñó de rojo los núcleos.
A través de la utilización de los colorantes, se ha logrado visualizar el aparato de
Golgi y los núcleos dentro de las células, permitiendo un análisis detallado de su
morfología, distribución y cantidad, así como también ha demostrado ser una
herramienta valiosa en la investigación, ya que, nos ayuda a comprender la
formación de membranas y la modificación de proteínas, se ha descubierto que
este aparato juega un papel en la migración y la adherencia celular, la fusión de
membranas, la modificación de lípidos y la regulación de la actividad de las
células.
Bibliografía
1. 1. Jiménez, L. Felipe, Merchant, Horacio. Biología celular y molecular. Pearson
Educación, México, 2003
2. KARP. Biología celular y molecular. Conceptos y experimentos. Octava edición.
3. Atlás de histología de la UNAM. Unam.mx. Recuperado el 27 de noviembre de
2023, de http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/atlas2013A/bio5/bio.html
4. Castañeda Ramírez, A. Manual de prácticas de fisiología animal. UACH.
Departamento de Zootecnia.