Reporte 7 Microbiología.

UNIVERSIDAD DE SONORA
D E P A R T A M E N T O D E C I E N C I A S Q U Í M I C O -
B I O L Ó G I C A S Y A G R O P E C U A R I A S
REPORTE
PRÁCTICA 8 y 9: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
DIFERENCIALES Y SELECTIVOS.
LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA.
DOCENTE LABORATORIO:
ANA PAOLA BALDERRAMA CARMONA.
EQUIPO 1:
ROCÍO ADRIANA CORRAL SANTILLANES.
221201949.
LORENA IRENE DIAZ ARANA.
215208805.
ZABEL CAMILA JOCOBI GEORGE.
221208189.
CYNTHIA AZUCENA MOROYOQUI CORRAL.
221211477.
ARIADNA ESTEFANIA RODRIGUEZ AMEZCUA.
221205235.
Blvd. Lázaro Cárdenas # 100, Colonia Francisco Villa, C.P. 85890. Tel. y Fax. (642) 425-99-69, Ext. 7011 y 7012. Navojoa Sonora,
México.
PRÁCTICA 8 Y 9: PREPARACIÓN DE
MEDIOS DE CULTIVO DIFERENCIALES Y
SELECTIVOS.
RESUMEN
OBJETIVO
 El alumno comprenderá el fundamento de los medios de cultivo selectivos y

aplicará las técnicas de preparación de agar Sal Manitol y agar Salmonella Shigella
para la identificación bacterias de interés clínico.
 El alumno comprenderá el fundamento de los medios de cultivo diferenciales y
aplicará las técnicas de preparación de agar EMB, agar ENDO y agar MacConkey
para la identificación de bacilos Gram negativos de interés clínico.
INTRODUCCIÓN
Los medios de cultivo selectivos son aquellos que además de incluir en su composición
factores que favorecen el desarrollo de determinadas especies, incorporan sustancias que
inhiben el crecimiento de microrganismos no deseados. Por lo tanto, los medios de cultivo
selectivos son útiles para el aislamiento e identificación de grupos específicos de bacterias.
Uno de los medios selectivos más utilizados en microbiología es el “agar Sal Manitol”
(MSA, por sus siglas en inglés), mismo que debido a su alta concentración de sal es útil
para el aislamiento y diferenciación de estafilococos a partir de muestras clínicas y diversos
materiales.
Otro medio selectivo utilizado con frecuencia es el “agar Salmonella Shigella” (agar SS),
que debido a su contenido de sales biliares y algunos otros componentes permite el
desarrollo además de la diferenciación de bacilos entéricos patógenos en especial de los
géneros Salmonella y Shigella a partir de muestras clínicas o alimentos contaminados.
Existe una gran variedad de medios de cultivo selectivos tanto en estado sólido como
líquido que gracias a su composición en particular suelen ser ideales para la recuperación
de un determinado patógeno a partir del aislamiento de muestras polimicrobianas.
Los medios de cultivo diferenciales son aquellos que permiten distinguir a partir de
diversos géneros o especies naturalmente relacionadas a un determinado microorganismo
ya sea por sus características morfológicas o propiedades bioquímicas.
México.
Los medios diferenciales incorporan sustancias químicas que posterior a la inoculación e

incubación de una muestra destacan alguna característica específica del crecimiento
bacteriano o producen un cambio particular en el medio que lo rodea con el propósito de
favorecer su diferenciación.
Algunos de los medios diferenciales mayormente utilizados en microbiología son el agar
“Eosina y Azul de metileno” (EMB, por sus siglas en inglés), el agar “ENDO” y el agar
“Mac Conkey”, los cuales por medio de su composición permiten la identificación
diferencial de algunas especies de bacilos Gram negativos de importancia clínica entre el
amplio grupo de las enterobacterias. Los medios diferenciales habitualmente también son
selectivos, es decir que son útiles tanto para la recuperación de un determinado patógeno
como para su identificación y diferenciación a partir del aislamiento de muestras
polimicrobianas.
MATERIAL
Equipo de protección personal ▪ Algodón y gasas

▪ (4) Portaobjetos nuevos (25 X 75 mm) ▪ Balanza analítica
▪ (2) Matraz Erlenmeyer (500 o 1000 mL) ▪ Autoclave de vapor
▪ (1) Probeta de (100 o 250 mL) ▪ Cinta adhesiva de papel (masking)
▪ (1) Mechero de Bunsen o Fisher ▪ Medio agar Sal Manitol
▪ (1) Asa microbiológica punta redonda ▪ Medio agar Salmonella Shigella
▪ Cajas de Petri nuevas estériles ▪ Reactivo de H2O2 (3%)
▪ (4) Hisopos de algodón ▪ Equipo para tinción de Gram
▪ Abatelenguas ▪ Bolsa para residuos RPBI
▪ Algodón y gasas
(3) Matraz Erlenmeyer (500 o 1000 mL) ▪ Cinta adhesiva de papel (masking)
▪ (1) Probeta (100 o 250 mL) ▪ Balanza analítica
▪ (1) Mechero de Bunsen o Fisher ▪ Autoclave de vapor
▪ (1) Asa microbiológica punta recta ▪ Equipo para tinción de Gram
▪ (1) Asa microbiológica punta redonda ▪ Medio agar EMB
▪ (6) Cajas de Petri nuevas estériles ▪ Medio agar ENDO
▪ (3) Portaobjetos nuevos (25 X 75 mm) ▪ Medio agar MacConkey
▪ (3) Hisopos de algodón ▪ Tubo con medio BHI (estéril)
▪ Papel estraza
México.
PROCEDIMIENTO
Preparación de agares Salmonella Shigella, EMB y Mcconkey.
Pesar la cantidad suficiente de agar SS,

EMB y Mcconkey; para preparar el volumen que
se requiera (2- 4 placas) de acuerdo con lo
recomendado por el fabricante.
Disolver dentro del matraz Erlenmeyer la cantidad pesada del medio en su volumen
correspondiente de agua destilada. Por seguridad la capacidad máxima del matraz debe ser
mínimo el doble del volumen de la preparación final.
México.
Introducir el material a esterilizar dentro de

la autoclave y cerrar la compuerta para
iniciar el proceso de esterilización de
acuerdo con las condiciones preestablecidas por el
proveedor o laboratorio (mínimo 15 min).
Retirar cuidadosamente el material de la autoclave, dejar enfriar sobre la mesa a

temperatura ambiente o en chorro de agua hasta aproximadamente 45°C (tolerable con el
dorso de la mano) y seguidamente distribuir en las placas en condiciones asépticas.
México.
Una vez que esté

solidificado el agar cerrar bien las tapas y repartir el total de placas entre los equipos en
partes iguales.
Inoculación de agar Salmonella Shigella,

EMB y McConkey :
Con un hisopo limpio tomar muestra de orina

o heces y descargar el inóculo en las dos
placas de agar SS, EMB y MacConkey para
llevar a cabo la técnica de aislamiento por estría
cruzada.
México.
Rotular cada placa Petri

directamente sobre
reverso (base) o por
medio de un pedazo de
cinta de papel, tipo
de medio, equipo,
grupo y fecha de
elaboración.
Incubar las placas de agar SS, EMB y MacConkey durante al menos 24 horas a 37 ºC.
México.
Verificar el crecimiento de colonias aisladas y anotar características macroscópicas

desarrolladas relevantes para la identificación del microorganismo.
Elegir una colonia aislada de cada medio de cultivo y realizar una tinción de Gram
para tomar nota sobre sus características microscópicas.
México.
Prueba catalasa en agar Sal y manitol
Con ayuda del asa microbiológica de punta redonda tomar una pequeña cantidad de
muestra del centro de la superficie de una colonia aislada de las placas con agar Sal Manitol
para colocarla sobre un portaobjetos limpio y seco.
Dejar caer una gota de reactivo de peróxido de hidrógeno (H2O2) sobre la muestra en el
portaobjetos y observar la formación inmediata de burbujas (liberación de gas) para
registrar el resultado como positivo o negativo.
México.
Disposición de Residuos Peligrosos Biológicos Infecciosos (RPBI)
Colocar las cajas Petri que contienen cultivos bacterianos en una bolsa específica para
microbiológicos, completar su registro en la bitácora de RPBI y esterilizar el material a 121
ºC por 30 min en autoclave (olla de presión). Finalmente desechar el material en la basura
ordinaria.
DIAGRAMA
México.
México.
México.
CONSIDERACIONES Y RECOMENDACIONES
Es obligatorio e imprescindible para todos los asistentes de la sesión el uso de equipo

protección personal antes de comenzar a manipular cualquier muestra.
RESULTADOS Y DISCUSION
Se nos explicó durante la hora de laboratorio la principal diferencia entre estos dos tipos de
medios, el medio selectivo ayuda en el crecimiento únicamente de un grupo de bacterias
determinadas e inhibe a otras, en cambio el diferencial nos ayuda a distinguir algunos tipos
de microorganismos por medio del crecimiento de colonias con colores diferentes. En
general, revisamos los principales ingredientes de los medios utilizados, tienen entre ellos
cosas en común como lo son las peptonas, las cuales aportarán aminoácidos, el Agar que
permite solidificar el medio, diferentes carbohidratos como la lactosa, manitol y sacarosa,
así como algunos contienen diferentes colorantes. También se nos explicó en el pintarrón
las posibles colonias que pueden crecer en cada medio y que color tienen.
Sal y manitol: Es un medio selectivo, contiene además de lo anterior una gran cantidad de
sal, permitiendo que crezcan los estafilococos gram + (ya sea epidermidis o aureus) el S.
aureus tiene la capacidad de fermentar el manitol, el medio se ve mas amarillo, en vez de
un rosa claro.
México.
Salmonella y Shigella: se describió como un medio medianamente selectivo y diferencial

para enterobacterias. Crecen la mayoría de las bacterias Salmonella y shigella y permite
distinguir la salmonella formando colonias de color negras y cecas, la shigella son de color
rosa o incoloras. Este medio contiene: lactosa, tiosulfato de sodio (y agua reacciona la
salmonella con el ácido sulfhídrico, olor fétido), citrato férrico y verde brillante como
colorante.
Mac Conkey: es un medio no tan diferencial y medianamente selectivo, crecen
microorganismos gram negativos y contiene lactosa, sal y colorantes rojo, cristalvioleta
indicador de pH, ya que hay m.o que fermentan mas la lactosa por lo que el color del medio
puede cambiar de rosa a amarillo.
EMB: eosina de azul de metileno, crecen microorganismos gram +, contiene lactosa y
sacarosa y crecen todas las enterobacterias.
En la práctica se manejarían muestras coprológicas y urológicas (utilizamos muestras de
dos niños diferentes una uro y una copro) por lo que se debe de tener en cuenta el uso de
protección física adecuada. También se explicó que de forma general se podían encontrar
bacterias Gram – en el sistema gastro intestinal, así como, en la práctica anterior era
común encontrar Gram + en el sistema respiratorio.
Se prepararon 200ml de Mac Conkey y EMB, así como 300ml de Salmonella y Shigela. No
se encontró el medio Endo y al momento de preparar sal y manitol se cuajaba por lo que no
se esterilizo y plaqueó, se usaron los Saboraud que quedaban de las primeras prácticas y
usamos también los caldos de BHI, aunque no se vio algún resultado, se cree que es por que
llevaban meses de ser preparados.
A las 24hrs se revisó el crecimiento de las placas que se dejaron en la incubadora, la
siguiente tabla resume el numero total de placas y cuales tuvieron crecimiento y cuales
características se observaron:
México.
Ese mismo día, se aplicó la tinción gram a aquellas que presentaron crecimiento así como
por cada color de las colonias:
México.
México.
Los caldos BHI no presentaron cambios físicos, por lo que no se les tomó foto (se
realizaron 5) y muchos urocultivos no presentaron crecimiento, las dos practicas se
realizaron en 3 días diferentes, en donde el día del laboratorio se prepararon medios, por
México.
lo cual Cynthia y yo (Ariadna) ayudamos al plaqueo junto con otros dos integrantes de
otros equipos, a las 24hr. las integrantes; Lorena, Cynthia y Ariadna duramos en
laboratorio de 7-11am, tiñendo las colonias con tinción gram y observando todas las que
tenían crecimiento (11 porta objetos de 5 placas diferentes, mayoría coprocultivo). Y para
el lunes las integrantes: Camila y Rocío revisaron si alguna placa tenia crecimiento, aunque
solo 1 urocultivo presentó crecimiento, solo se tomó una muestra. No creímos que fuera
necesario realizar la prueba de la catalasa (ya que creímos que era opcional) la cual consiste
en; sobre un portaobjetos dejar un crecimiento de colonia aislada y agregar peróxido de
hidrogeno, la catalasa es positiva al producir burbujas. Nos informamos por el equipo 3 que
si realizó una de urocultivo, que solo produjo escasas burbujas.
CONCLUSIÓN
En conclusión podemos decir que los medios de cultivo, en forma de medio selectivo, son
aquellos que contienen agentes que permiten el crecimiento de ciertas bacterias, además de
inhibir el crecimiento de otras. Los agentes inhibidores pueden ser fármacos
antimicrobianos, tintes o alcoholes. Un ejemplo de esto medios es el agar Sal y Manitol,
Fenol estos inhiben a todas las bacterias Gram (-) y las Gram (+) son las que crecen
específicamente Stafilococos, el Stafilococos soporta grandes cantidades de sal, de igual
manera está la Salmonella y Shigella, crecen la mayoría de las Gram (-) , contiene lactosa
(carbohidrato), tiosulfato, citrato férrico, es de un color verde brillante, tal y como se dio a
conocer en la clase teórica que se tuvo en el laboratorio.
De igual manera están los agares diferenciales el cual distingue entre diferentes tipos de
bacterias en función de la apariencia del cultivo. El medio diferencial contiene uno o más
factores que hacen que bacterias, con ciertas características metabólicos o de cultivo,
tengan una apariencia diferente a la de otras bacterias que crecen en la misma placa de agar,
tal y como es el agar EMB, cómo característica pudimos observar Inhibe Gram (+)
Contiene: Lactosa y Sacarosa, azul de metileno, Fosfato dipotasio, Eosina .

Es de color morado
E.coli ---- verde brillante (fondo morado)

Salmonella---- Colonias color lilas bajita
Protero---- blancas.
Igualmente está el McConkey, el cual resultó ser un agar diferencial (medianamente)

Inhibe Gram (+)
Crece Gram (-)
Contiene: Peptonas, nutrientes, lactosa, sal, Rojo de fenol, cristal violeta.
Observado de igual manera tal y como se platicó en la clase teórica.
México.
Finalmente podemos decir que los medios diferencial y selectivo son tipos de medio de
cultivo utilizados para identificar y/o aislar cepas bacterianas
CONCLUSIONES INDIVIDUALES
Conclusión Práctica 8
En conclusión, en el Agar Sal y Manitol no funciono la preparación, así que para este tipo
de agar no pudimos obtener ninguna siembra, pero normalmente si realizamos la tinción de
Gram y la prueba de la catalasa esta daría de forma negativa. Este tipo de agar es selectivo
y es usado para el aislamiento de Staphylococcus aureus.
El Agar Salmonella y Shigella es un tipo de medio selectivo diferencial, en este tipo de agar
hicimos un coprocultivo, en donde obtuvimos características macroscópicas de colonias
mucoides rosas y transparentosas. En la tinción dio como resultado Gram positivo
(diplococos, bacilos tétrada) y Gram negativo (diplococos, bacilos). En el caso de la prueba
de la catalasa daría de forma negativa ya que no posee este tipo de enzima.
Conclusión Práctica 9
En conclusión, el Agar EMB es de mediamente selectivo y sirve como diferenciación de
bacilos Gram negativos (Enterobacterias). En este tipo de agar realizamos urocultivo y
coprocultivo, en donde obtuvimos características macroscópicas de diferentes muestras, en
algunas se observaron puntos negros, verdes y transparentes (muestra 5 y 6), colonias lilas,
negras verdes (muestra 7), colonias rojas y pocas verdes (muestra 8).
En el caso de la tinción de Gram, realice la de la muestra 5, y efectivamente dio de manera
negativa.
En el Agar MacConkey también realizamos urocultivo y coprocultivo, en donde obtuvimos
características macroscópicas de una muestra en donde se observó un punto negro, colonias
rosas y decoloración amarillas, en las demás muestras no hubo ningún tipo de crecimiento,
ya que probablemente no se realizó bien el estriado.
Rocio Adriana Corral Santillanes (221201949).
Lorena Irene Diaz Arana (215208805).
México.
En esta práctica observamos medios de cultivo, diferenciales y selectivos, como lo son

( EMB, endo, Salmonella Shigella, y Sal Manitol) a pesar de que la práctica fue muy
tediosa y larga, fue muy complaciente hacer los cultivos, tinciones, y observar en el
microscopio.
En esta práctica observamos los microorganismos, en diferentes tipos de agar, con colores y
colonias diferentes, también los diferentes ingredientes de cada agar, el tipo, y como crecen
las colonias.
Zabel Camila Jocobi George (221208189).
Cynthia Azucena Moroyoqui Corral (221211477).
En general fue una practica larga y pesada por la cantidad de tinciones y observaciones
microscópicas y macroscópicas que se realizaron a las 24hr. Se aprendió el uso que se le dá
a los medios selectivos (crecimiento únicamente de un grupo de bacterias determinadas e
inhibe a otras) y diferenciales (distinguir algunos tipos de microorganismos por medio del
crecimiento de colonias con colores diferentes), aunque me hubiera gustado también usar
sal y manitol para observar las características de las colonias que pueden crecer y
compararla con los otros medios preparados. La clase teórica fue muy interesante, por que
muchas veces en clase no se nos aclaran muchos conceptos o uso de los cultivos, por lo que
reforzamos, más en esta ocasión, se nos habló sobre los ingredientes de cada medio, el
crecimiento de bacterias que se pueden esperar dependiendo del medio de cultivo, y el
color o aspecto que adquieren las colonias, que es algo que incluí en los resultados y
discusión de esta práctica. De la primera practica del microscopio a esta practica se pudo
notar una gran diferencia y avance en el enfoque de muestras, recuerdo que se me
dificultaba y tardaba mucho en enfocar ahora me siento mas segura y se tarda menos
tiempo. De igual manera la tinción gram antes dejaba muchos residuos de safranina y ahora
se ven mejor al microscopio.
México.
Ariadna Estefania Rodriguez Amezcua (221205235).
REFERENCIAS
1. Castillón LG, Moreno GM, Navarro M, Gutiérrez E, Sánchez Reyna, Tequida M. Microbiología
general. Manual de prácticas. Universidad de Sonora. Colección textos académicos. 2013.
2. Barrero L. Microbiología clínica. En: Medios de cultivo de microorganismos. Madrid, España:
Síntesis S.A; 2017. p. 38-48.
México.

Reporte 7 Microbiología.

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Reporte 7 Microbiología.

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNIVERSIDAD DE SONORA

ANA PAOLA BALDERRAMA CARMONA.

 El alumno comprenderá el fundamento de los medios de cultivo selectivos y

Los medios diferenciales incorporan sustancias químicas que posterior a la inoculación e

Equipo de protección personal ▪ Algodón y gasas

Preparación de agares Salmonella Shigella, EMB y Mcconkey.

Pesar la cantidad suficiente de agar SS,

Introducir el material a esterilizar dentro de

Retirar cuidadosamente el material de la autoclave, dejar enfriar sobre la mesa a

Una vez que esté

Inoculación de agar Salmonella Shigella,

Con un hisopo limpio tomar muestra de orina

Rotular cada placa Petri

Verificar el crecimiento de colonias aisladas y anotar características macroscópicas

Prueba catalasa en agar Sal y manitol

Disposición de Residuos Peligrosos Biológicos Infecciosos (RPBI)

Es obligatorio e imprescindible para todos los asistentes de la sesión el uso de equipo

Salmonella y Shigella: se describió como un medio medianamente selectivo y diferencial

Contiene: Lactosa y Sacarosa, azul de metileno, Fosfato dipotasio, Eosina .

E.coli ---- verde brillante (fondo morado)

Igualmente está el McConkey, el cual resultó ser un agar diferencial (medianamente)

Rocio Adriana Corral Santillanes (221201949).

Lorena Irene Diaz Arana (215208805).

En esta práctica observamos medios de cultivo, diferenciales y selectivos, como lo son

Cynthia Azucena Moroyoqui Corral (221211477).

Ariadna Estefania Rodriguez Amezcua (221205235).

También podría gustarte