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PRESENTADO POR:
CAMILO
MARTHA
Tutor de Practica
ECAPMA- AGRONOMA
Noviembre 5 de 2017
Introduccin
En la prctica se realizaron cinco pruebas las cuales fueron: Anlisis de la ureasa, determinacin en
carbohidratos no estructurales en forrajes, por el mtodo de fenol-cido sulfrico, capacidad amortiguadora de
fluidos y suelos, materia orgnica, anlisis de nitrgeno no proteico, anlisis de ureasa, capacidad
amortiguadora y potencial amortiguador de muestras biolgicas y actividad cataltica de la catalasa
Objetivos
General
Especficos
ESTRUCTURALES NO ESTRUCTURALES
LIGNINA
CELULOSA
FIBRA
PECTINA
HEMICELULOSA
MARCO TEORICO
Los carbohidratos son una gran cantidad de azucares, almidones, celulosa y gomas que contienen carbono,
hidrogeno y oxgeno en cantidades similares.
La principal funcin de los carbohidratos es suministrar energa al cuerpo; especialmente al cerebro y al sistema
nervioso.
Es muy importante el reconocimiento de los carbohidratos para as saber en qu cantidades se encuentra en cada
alimento.
NOTA: Los carbohidratos no estructurales se refiere a los azucares, almidones, cidos orgnicos y pectina.
CALCULOS
Anexos
Tijeras Tubo de centrifuga, agitador de vidrio, centrifuga de laboratorio, filtro, hielo, Erlenmeyer, montaje de
titulacin, Tubos de ensayo, gramara digital
Permanganato de potasio (KMnO4), solucin fra de buffer fosfato (0,05M, pH 6,8-7,0) extractos de catalasa
(ECAT)
Procedimiento de extraccin.
Se trabaj con 3 muestras concentrado, (alimento para aves) verdura (apio) y suelo. (Tierra tamizada)
Se pesa muestras picada y pulverizadas: (se registran los pesos de las muestras en la tabla 2en la casilla Wm)
Muestras Centrifugadas
Concentrado suelo
Se retira el sobrante, se filtra y se mide el volumen y se registra. (El volumen se registra en la casilla Vf de la
tabla 2)
Se toman 5 ml para depositar en tubos de ensayo y se rotulan con las siglas EVCAT (extracto de verduras),
ECCAT (extracto de concentrado), ESCAT (extracto de suelo) y EBCAT (extracto blanco).
Se toman 4 tubos de ensayo y se asigna rtulos B, 1, 2 Y 3 luego se inicia a adicionar reactivos que se
encuentran en la siguiente tabla.
Tabla 1
Tubos de ensayo
Reactivos (mL)
B 1 2 3
H2O2 0,03M 4 4 4 4
Buffer fosfato 5 4 4 4
H2SO42N 1 0 0 0
EVCAT 0 1 0 0
ECCAT 0 0 1 0
ESCAT 0 0 0 1
A continuacin se alista el montaje de titulacin, se titulara con permanganato de potasio, y se anotara la cantidad
de permanganato utilizada para que el extracto se mantenga de color rosa durante 30 segundos
Una vez terminado el proceso se procede a realizar los clculos, con los datos registrados en la tabla 2
Tabla 2
Clculos.
Formula:
2,0027 g x 5,2 mL
2,0027 g x 5,2 mL
2,0027g x 5,2 mL
10,414g
2,0046g x 5mL
2,0046g x 5mL
2,0046g x 5 mL
10,023g
2,0044 g x 5,4 mL
ACAT= 0,4 x 0,01 x 10.00O mL moles de H2O2 =
2,0044g x 5,4 mL
2,0044g x 5,4 mL
10,823 g
Importancia Aplicabilidad
La catalasa descomponen el perxido de Desinfectante
hidrogeno en oxgeno y agua fundamental para
el buen funcionamiento de las clulas animal y
vegetal
La catalasa es una enzima que se encuentra en Esterilizador
las clulas de los tejidos animales y vegetales.
Los catalizadores naturales son enzimas que Antisepsia
aceleran o controlan una reaccin qumica.
Se puede realizar este anlisis cuando se manifiesta sntomas de una enfermedad llamada acatalasemia presenta
sntomas de ausencia de catalasa en los glbulos rojos y con severas infecciones gangrenosas de la boca y as
puede producir perdida de los dientes y graves destrucciones de los maxilares y regiones blanda que los cubre.
en plantas que produzcan un alto contenido de toxicidad para determinar la cantidad de perxido de hidrxido
que contiene y evitar posibles reacciones fuertes de las clulas.
Muestra de Suelo
Se tom aproximadamente 1 Libra de muestra de capa orgnica (primera capa hasta 10-15 cm de profundidad,
capa ms negra) posteriormente se empaco en bolsa Ziploc (bolsa con cierre hermtico).
Materiales y equipos.
Erienmeyer de 125 ml, pipetas graduadas de 10 ml , esptula metlica, agitador de video probeta graduada de
100 ml bureta de 25ml, Soporte universal, beaker de 250 ml, potencimetro, el equipo de titulacin, balanza
analtica espectrofotmetro, celdas espectrofotmetricas, Embudos, papel filtro, muestras de suelo.
Reactivos.
H2SO4 Concentrado K2CR207 1N7, H3PO4, difenilamina , FESO4 1N3 NAOH 0,1N, HCL 0,1 N fenolftalena,
Agua destilada y solucin buffer fosfato.
procedimiento.
1. carbono orgnico CO, Mtodo de titulacin volumtrica.
Se tomo muestra de acuerdo con las recomendaciones. Y se recolecto la informacin pertinente.
Informacin del suelo
Ubicacin del suelo: La Tebaida Quindo, Finca el edn
Altura sobre el nivel del mar: 1200
Textura: Franco arenoso
se tamizo la muestra, y se pes 0,40 g registrndose el valor como Wm y coloco en beaker de 200 ml.
Al cabo de este tiempo alistamos montaje de filtracin y filtramos con papel filtro hasta obtener 20 ml
de filtrado.
se tom 10 ml de filtrado y lo depositamos en un Erlenmeyer y se afor hasta 100 ml con agua destilada,
agitamos por 1 minuto.
agregamos 5 ml De cido fosfrico Concentrado, agitamos por 1 minuto y se dej reposar por 5
minutos.
Datos obtenidos
Clculos
Resultados
ANLISIS DE NITRGENO NO PROTEICO
Muchos organismos superiores no pueden obtener aminocidos de otras formas, ms que absorbindolos de la
dieta. Los cuales pueden ser convertir algunos aminocidos en otros diferentes.
Los compuestos que forman el NNP son los que contienen amonaco, nitritos y nitratos y otros como la urea,
el biuret o el cido rico.
Los organismos que lo pueden utilizar el NNP son los hongos, las plantas y algas, bacterias y organismos que
viven en simbiosis con ellos.
En la ganadera de rumiantes es de gran importancia ya que las grandes colonias de bacterias que contienen en
el rumen pueden convertir alimento con un bajo nivel de protena en uno suficientemente nutritivo gracias a la
adicin de NNP, normalmente en forma de urea. O el aprovechamiento de productos de muy poco valor como
alimento, como estircol de animales Mono gstricos como gallinas o cerdos.
E igual forma se utiliz muestra de pasto de la finca la Paz vereda la paloma del municipio de Armenia, a una
altura de 1540 msnm.
Reactivos utilizados:
Agua destilada
Se empez por secar el suelo y se tomaron de cada muestra 2,0 g pesados en gramera analtica, luego se
adiciono 20 ml de agua destilada fra y se agito por 1 minuto, se dejo reposar la mezcla por 15 min,
adicionalmente a cada muestra se adiciono 30 ml de solucin de ATA, posteriormente se agito por 1 minuto.
Al dejar reposar por 20 minutos a temperatura ambiente se filtr con papel filtro para medir el volumen
filtrado (Vf) que se encuentra en la tabla 1.
Tabla 1
FORRAJE 2,00 GR 20 ML 30 ML 44 ML
Se tomaron 5ml del filtrado de cada muestra, totalmente rotulados de la siguiente forma
Luego las muestras fueron cuantificadas en nitrgeno del filtrado por medio del mtodo espectrofotmetro de
Biuretlowry a una longitud de onda de ( )de 540 manmetros (nm) y calibrado o configurado con una solucin
de tubo blanco, los cuales se tomaron 4 tubos del ensayo rotulados de la siguiente forma
B: Blanco
ST: Estandar
Tabla 2.
TUBO DE ENSAYOS
B ST M-1 M-1
Reactivos (ml)
Agua destilada 2
Albumina 0,5% 2
FFNNP 2
FSNNP 2
Reactivo de Biuret 3 3 3 3
RESULTADOS ANALISIS
Tabla 3
De acuerdo a los resultados de estos anlisis podemos concluir los siguientes datos que se obtuvieron con las
muestras analizadas
RESULTADO FD
2m 45 ml 2gr 180
2m 44 ml 2gr 176
NITRGENO NO PROTEICO (NNP)
0,4952
Lista de reactivos: Ureasa al 0,1% buffer fosfato de pH = 7.0, urea 0.25M, HgCl2 al 1%, HCl 0.1N, indicador de Tashiro.
Procedimiento
Datos de peso:
Forraje 1 gramo
Se pes y se cortaron entre 8 y 10 cm divididos en dos recipientes cada uno don 0.5 gramos.
Concentrado: se
pesaron 0.5
gramos en dos
tubos de ensayo.
Se obtuvo un sobrenadante y precipitados (fibras grasas). Este dato es para medir el volumen
Una vez obtenido la sustancia a caer a la probeta se lleva a un tubo de ensayo rotulado.
CUANTIFICACION DE LA AU.
Mezcla de reactivos
Reactivos B St 1 2 3
(ml) / Tubos
Urea 0,25M 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0
Buffer 5,0 4,5 4,5 4,5 4,5
fosfatos
PH=7.0
HgCl 2 4 - - - -
(Gotas)
Ureasa 0,5% - 0,5 - - -
EHUA (ml) - - 0,5 - -
ESAU (ml) - - - 0,5 -
EFAU (ml) - - - - 0,5
Agitar los tubos (10 Seg), dejar en bao de maria a 37 Grados Centgrados, durante 20 min, al final
adicionar.
HgCl2 - 4 4 4 4
(Gotas)
Titulacin
Alistar el montaje de titulacin: lavar, purgar, cargar y enrasar la bureta con HCl 0,1 N.
Pasar la solucin del tubo blanco a un Erlenmeyer o Beaker y adicionar 3 gotas de indicador de color Tashiro, un
color azul-verdoso, es prueba positiva para el ion Amonio (NH4*).
Colocar el Erlenmeyer que contiene la solucin blanco, debajo la bureta y adicionar lentamente el HCl, hasta que
aparezca y permanezca un color rosada violceo.
Esto indica que los equivalentes - gramo del hidrxido de amonio fueron neutralizados por los equivalentes
gramos de cido clorhdrico.
Registrar en su tabla de datos, los ml de HCl gastados en la titulacin del blanco.
Repetir el procedimiento anterior, con el tubo Estndar y anotar lo ml empleados de HCl.
Continuar el proceso con los tubos 1,2 y 3, que contienen los extractos de suelo, harina y forraje; registrar los ml
gastados de HCl en la tabla de datos.
Reacciones
Tabla de Datos
Clculos
( )0.11000
=
2()
(18 16)0.11000
= =5
2()
10
=
5
( () ),
= =
()
=
()
( ),
= = .
Actividad Ureasica en el suelo (tubo 2)
( () ).
=
()
=
()
( ).
= =
()
( () ).
=
()
=
()
( ).
= =
AU
Estndar 5
Harina 7.5
Suelo 5
Forraje 5
NOTA:
No se us el factor de disolucin, no se aplica porque no se diluy, se usaron las muestras completas.
De actividad Ureasica para cada una de las muestras.
Materiales y equipos
- 3 Erlenmeyer de 125 ml
- Probeta graduada de 100 ml
- Bureta de 25 ml
- Soporte universal
- Beaker de 250 ml
- Muestra de leche
Reactivos
- NaOH 0,1N
- Fenolftalena
- Agua destilada
- Solucin buffer fosfato
Procedimiento
9- Cuando colocamos el primer Erlenmeyer para hacer la titulacin tememos que al adicional 0,2 mililitros
de NaOH 0,1N, la solucin se torna de color rosado.
10- Cuando colocamos el segundo Erlenmeyer con la solucin de buffer para hacer la titulacin tememos
que adicionamos los 25 ml de NaOH 0,1N, y la solucin no se torna rosada en ningn momento.
11- Cuando colocamos el tercer Erlenmeyer con la leche para hacer la titulacin tememos que al adicional
6,5 mililitros de NaOH 0,1N, la solucin se torna de color rosado.
Tabla de datos
CLCULOS
Capacidad amortiguadora
,
:
()
: 1
En esta muestra se realiz el proceso de titulacin, se adiciono el NaOH 0,1N a la solucin, pero no hubo ninguna
reaccin, esto nos indica que la solucin buffer no tiene capacidad de amortiguacin.
Muestra 3- leche
6,5 0,1 1000
:
20 ()
: 32,5
Conclusiones
La enzima catalasa est presente en muchos tipos de clulas y la funcin principal es proteger a la clulas del
efecto toxico del perxido de hidrogeno, esta enzima se encarga de descomponer el perxido de hidrogeno en
agua y oxigeno esenciales para vida de la clula. Esta actividad nos ayuda a determinar la cantidad de perxido
de hidrogeno que se encuentra en un tejido animal o vegetal de igual forma nos demuestra que cantidad de agua
y oxigeno pude proporciona por la cantidad de perxido de hidrogeno que se encuentra en dicho tejido.
Al analizar el contenido de toxicidad de un tejido vegetal o animal evitando suministros inadecuados y exagerados
de los tejidos con un alto grado de oxidacin.
Bibliografa
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sistema central. Obtenido de Edafologa.net: http://www.edafologia.net/revista/tomo3b/articulo99.pdf
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un Medio de Cultivo no Convencional . Biotecnologia, 15 No 2