PRACTICA 2.

SEPARACIN DE PIGMENTOS VEGETALES POR CROMATOGRAFIA DE PAPEL

Introduccin La cromatografa es un poderoso mtodo de separacin que tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia. La cromatografa en columna fue inventada y de nominada as, a principios del siglo xx por el botnico ruso Mikhail Tswett. El empleo la tcnica para separar varios pigmentos vegetales, tales como clorofilas y xantofilas, atreves de una columna de vidrio rellena con carbonato de calcio finamente dividido. Las especies separadas aparecan como bandas coloreadas en la columna, lo que justifica el nombre que eligi para el mtodo (del griego CHROMA que significa <<color>>, y GRAPHEIN que significa <<escribir>>.) La cromatografa es una tcnica de separacin extraordinariamente verstil que presenta distintas variantes. En toda separacin cromatografa hay dos fases (solida, liquida o gas) una mvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto intimo. La muestra se introduce en la fase mvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la mvil. Los componentes de la mezcla a separar se invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separacin. Si un componente esta la mayor parte del tiempo en la fase movil el producto se mueve rpidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho mas lenta. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente. Se dividen en tres categoras: Anlisis por elucin. Proceso por el cual el soluto es lavado por la columna aadiendo mas disolvente se llama elucin y es la forma ms corriente de hacer una separacin. Anlisis frontal. En este anlisis se alimenta continuamente a la columna con una solucin de la muestra. Por desplazamiento. Se introduce la muestra como una solucin. En una sola porcin pero se hacen que los componentes bajen por la columna por la adicin continua de una solucin que por la fase estacionaria que cualquier otro de los componentes de la muestra. La concentracin de cada uno de los componentes puede determinarse por las distancias del cronograma.

CROMATOGRAFIA SOBRE PAPEL Es un mtodo sencillo, ya que se emplea un papel filtro en lugar de una columna de relleno. Se acostumbra describir la trayectoria de un soluto en particular en funcin de retardo que se define como Rf= distancia del movimiento soluto entre distancia del movimiento de solvente

Prctica La fase mvil ser un disolvente apolar (mezcla de ter de petrleo/acetona/benceno en proporcin 85/10/5). La fase estacionaria, de naturaleza polar, ser el agua adsorbida en el papel de celulosa utilizado como soporte. La fase mvil ascender por el papel sin mezclarse con el agua, al tiempo que los pigmentos se irn separando en funcin de su polaridad. Los pigmentos ms polares se retendrn ms en la fase estacionaria, mientras que los ms apolares avanzarn ms rpido junto con la fase mvil. La movilidad de cada compuesto respecto al frente del disolvente tiene un valor caracterstico, en unas condiciones experimentales determinadas, que se conoce como coeficiente o factor de reparto (Rf).

Rf = Xp/Xd Xp= distancia alcanzada por el pigmento Xd= distancia alcanzada por el disolvente

Mtodo 1. Extraccin: en el papel de celulosa se dibujan 2 lneas con lpiz. Una a 2 cm de uno de los extremos y otra a 1 cm del otro extremo. Cortar una hoja de espinaca en tiras estrechas. colocar un trozo de hoja y machacarla sobre una superficie plana con las pinzas. Retirar los restos de hoja. Colocar una mancha sobre la lnea situada a 2 cm del papel de celulosa, repetir el proceso, hasta tener una mancha oscura de pigmentos en el papel. 2. Separacin: Tomar un tubo de ensayo seco de calibre grueso y aadir 3 mL de disolvente.

Tomar la tira de papel con la muestra de pigmentos y colgarla del tapn de corcho por el extremo opuesto a la muestra (por encima de la marca de 1 cm). Introducir la tira de papel en el tubo de manera que no toque las paredes y que el disolvente moje el extremo de la tira, pero sin llegar a tocar la muestra. Esperar a que el disolvente ascienda por capilaridad hasta aproximadamente la marca superior del papel. Sacar la tira del tubo, dejar secar y medir el Rf de cada mancha de pigmento que aparezca. Cuestiones A qu pigmento corresponde cada mancha y cules son sus Rf? Qu factores pueden afectar al Rf?

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