Unidad 7 - Formulacion y Estabilidad 2023 - Parte A

FORMULACIÓN Y
ESTABILIDAD DE
BIOFÁRMACOS.
Del API al PT
Cátedra de Biotecnología Farmacéutica

Facultad de Ciencias Exactas
Universidad Nacional de La Plata
1 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

TEMARIO
❖ Del API al Producto Terminado

❖ Consideraciones Farmacotécnicas de los Biofármacos
❖ Excipientes
❖ Envase primario
❖ Preformulación
❖ Estabilidad
❖ La Formulación; el granel de la solución formulada

❖ El fraccionamiento estéril y la liofilización.
❖ El acondicionamiento
❖ El control de calidad del producto terminado (PT)
❖ Tendencias
➢ Biofármacos de Segunda Generación

Desarrollo Desarrollo
del del
Desarrollo Selección
Upstream Downstream Desarrollo
del Sistema de
Analítico
Clonado Expresión Desarrollo de la
Formulación o Galénico
Bancos: Maestro y de Trabajo Escalado Validación
Validación de Proceso Transferencia QC
Transferencia a Producción
Proceso Productivo: Ciclo de Vida del Producto
Controles de Control de
Producción
Proceso Calidad
Aseguramiento Calificaciones
I&M
de la Calidad Validaciones

Proceso General
Expansión Celular
(Upstream)
API Impuro Aislamiento
Y Purificación
(Downstream)
API
Formulación (QQ)
y Llenado Aséptico
Liofilización Cierre -
Empaque
Producto Terminado
(Almacenam/Distribución)
Producción
I&D Registro
Comercial
Conocimiento
documentado
Preformulación: -Formulación de la solución

-Investigación de vías de degradación del Granel
principio activo y en una formulación: -Fraccionamiento Estéril en su
. Estudios de degradación Forzada. envase 1°.
-Estudio y Desarrollo de Formulaciones -Liofilización si corresponde.
candidatas. -Acondicionamiento 2rio y
-Desarrollo de la elaboración de Granel -
Conservación.
condiciones de Liofilización, si corresponde
-Estudios de estabilidad de las mismas en su -Seguimiento de Estabilidades
envase primario (acelerados y en tiempo real) sobre lotes de PT en tiempo Real.
. => Obtención Formula QQ
Validación del llenado aséptico/Liofilización. -Controles de Proceso (Granel,
Controles de Proceso y Especificaciones para Fraccionamiento Estéril,
el fraccionamiento estéril/Liofilización: Liofilización)

FORMULACIÓN DEL PRODUCTO FINAL
API con un grado de pureza entre 97–99%

Adición de excipientes
(substancias distintas al principio activo que estabilizan el producto
final o confieren las condiciones apropiadas a la forma farmacéutica)
Filtración Esterilizante del Producto Terminado (0.22 m)
Llenado aséptico en el envase primario
Liofilización, si el producto lo requiere
(La decisión de si el producto se comercializa en forma liquida o
polvo es dictaminada por cuan estable es la proteína en solución)
Determinación experimental (estudios de preformulación,

estabilidad), varias reacciones, sistema complejo.
Cada proteína se comporta distinto en solución.

Del API al PT aprobado
API Envase
(Sol. Concentrada Primario Envase
de la droga activa)
Primario
estéril Envase con
Taco sólido
Semielaborado
(Sol. Granel)
Cierre
hermético
Excipientes
Droga Potencia
Producto Lote. Elaboración
Terminado Fecha de Vto.
Otros: Ej.
a granel
Burbujeo de N2.
Envase
Secundario
PT - Producto
Terminado

Consideraciones a la hora de Desarrollar la Formulación de
un p.a. con los excipientes en el envase primario:
• Posibles vías de degradación del p.a.
• Evaluación de excipientes y sus propiedades (acordes a las

condiciones propias de la forma farmacéutica o en función de
características que disminuyan la degración del activo)
• Posibles interacciones entre el p.a. y los componentes de la

formulación y/o el envase primario.
• Necesidad de ensayos donde se estudien las vías de

degradación, los excipientes, sus cantidades y condiciones a
utilizar a fin de minimizarlas, así como las posibles interacciones
entre ellos (y con el envase),
• Necesidad de ensayos para demostrar que a lo largo del

tiempo ese principio activo se mantendrá activo en la
formulación en las condiciones de almacenamiento.

Una proteína en solución puede sufrir una variedad de modificaciones
o reacciones (covalentes y no covalentes) mientras se elabora o se
encuentra en su envase primario
Proteína - Proteína
Proteína – Medio acuoso
Proteína – Medio gaseoso
Proteína – Envase
Vías de
degradación
PERDIDA DE ACTIVIDAD BIOLÓGICA

(o aumento de un producto de
degradación tóxico)
Identificar las condiciones que reduzcan al mínimo la reactividad de la proteína
con respecto a todas las vías de degradación potenciales es el mayor desafío
del Desarrollo Galénico de Biofármacos
ALTERACIONES FÍSICAS y QUÍMICAS en las
PROTEINAS durante ELABORACION y/o
ALMACENAMIENTO del PRODUCTO TERMINADO
AGREGACIÓN DEAMIDACIÓN
ADSORCIÓN OXIDACIÓN
PRECIPITACIÓN Intercambio de DISULFUROS

Desnaturalización CLIVADO o PROTEÓLISIS
Vías de
degradación
PERDIDA DE ACTIVIDAD
BIOLÓGICA
(o aumento de un producto
de degradación tóxico)

AGREGACION
Problemas de conformación de proteínas pueden generar agregados solubles y/o
partículas insolubles (agregados grandes).
Los agregados son un problema importante ya que están asociados con una menor AB
(menor cantidad de sitios activos expuestos) y aumento de la inmunogenicidad.
En general se encuentran unidos por interacciones débiles.
Pueden producirse agregados irreversibles o reversibles y entre la misma proteína o
con proteínas utilizadas como excipientes.
La formación de agregados se ve facilitada por la agitación, Tº, pH, fuerza iónica,
procesos de concentración y exposición a interfases (líquido-aire, líquido-sólido).
Riesgo de desnaturalización y agregación en muchas de las operaciones del proceso,
incluso durante la formulación.
Aun así las proteínas pueden ser

estabilizadas contra la agregación
optimizando las condiciones de pH,
Tº, fuerza iónica y a través del uso
de surfactantes.
Detección: HPLC-SEC y/o Ej de estudio que realiza para evaluar cual es

SDS-PAGE (No reductor) el pH de menor formación de agregados
DEAMIDACIÓN
Hidrólisis de la amida de asparagina / glutamina (mucho menos reactiva) en

ambiente acuoso con formación de acido aspártico o glutámico.
(Aspartimida) Isoaspártico
Residuo Asparagina Residuo Aspártico
Deamidación y formación de imidas puede disminuir la actividad biológica.
Reacción especialmente promovida por altas Tº o pHs neutros-alcalinos o

extremadamente ácidos (a menudo es minimizado llevando el producto final a pH 4-5).
Reactividad depende los residuos cercanos a Asparagina.
Ruta de degradación común y la principal en algunas proteínas (Ej. Insulina)
Siguen una cinética de pseudo-primer orden.
En liofilizados esta minimizada esta reacción.
Detección: IEF, EC, Cromatografía intercambio Iónico.

ADSORCIÓN
Las proteínas son moléculas que superficialmente activas que tienden a adsorberse en
superficies líquido-sólido, líquido-aire, y las interfaces líquido - líquido.
Las proteínas se pliegan en una estructura tridimensional única, que consisten en un
núcleo hidrofóbico y un superficie hidrofílica expuesta al solvente.
La exposición suficiente del núcleo de una proteína en una superficie hidrofóbica puede
resultar en adsorción como consecuencia de:
Agitación, Temperatura o estrés inducida por pH . agregación
-La desnaturalización parcial no siempre es un

requisito necesario para la adsorción.
-Adsorción puede ocurrir a través de parches
hidrofóbicos en la superficie de las proteínas o
por medio de interacciones electrostáticas.
-Puede causar una apreciable pérdida de potencia en
formulaciones de baja concentración .
-Una segunda consecuencia es que la adsorción a interfaces mediada por
desnaturalización puede ser el paso inicial para la agregación irreversible en la solución

OXIDACIÓN
Proceso mucho mas complejo que la deamidación. Numerosos reactivos y
catalizadores y con mecanismos complejos. Reacción poco predecible.
Pueden oxidarse el Triptofano, Tirosina, Histidina y Cisteína.
Pero el mas susceptible a la oxidación es el azufre de la metionina.
metionina sulfoxido sulfona

Agentes oxidantes: oxígeno del aire, también otros mas potentes como
peróxidos o hipoclorito, fotooxidación.
Oxidación de la metionina esta favorecida por la T°, bajos pH e iones metálicos
La oxidación se minimiza reemplazando el aire por un gas inerte como N2
Las metioninas mas susceptibles son las de la superficie.
La oxidación, sobre todo las de R internos, pueden llevar a perdida de AB.
Detección: HPLC-FR; mapa peptídico.

OXIDACION DE CISTEINAS
La oxidación por aire puede resultar en la formación de puentes disulfuro.
Intercambio de disulfuros puede causar disminución de la AB.
El intercambio de S-S intermolecular conlleva a la formación de agregados.
Detección: SDS-PAGE (No reductor). HPLC-FR (+/- reducción)

CLIVADO
El sitio principal de clivado es en la unión Asp-Yyy (C-terminal al Asp).

Reacción promovida por altas Tº o pHs extremos
Detección: SDS-PAGE. IEF. HPLC-FR/ SEC. N y C-terminal
OTRAS reacciones
▪ Isomerizaciones
▪ Reducciones
▪ b-eliminación
▪ Ciclación

EXCIPIENTES EN LA FORMULACIÓN DE BIOFÁRMACOS
Preservar la proteína en la solución (minimizando su degradación

tanto por vía física o química), a fin de conservar sus propiedades
fisicoquímicas, estructura y actividad biológica durante su periodo de
vida útil
Proteger la proteína de distintas reacciones y fenómenos

fisicoquímicos que se producen en los procesos de formulación
(homogenización de la solución final, liofilización, etc)
Dar las condiciones Biofarmaceúticas adecuadas según la

correspondiente vía de administración.
(en inyectables deben dar las condiciones de pH e isotonicidad
compatibles con los fluidos biológicos cuando sea posible)
Modular la Liberación del p.a. desde la forma farmacéutica

Si bien cada formulación es única, hay varios aspectos generales
respecto a la composición de los excipientes, tanto en las formulaciones de
proteínas en solución o liofilizadas
Una formulación líquida está generalmente compuesta por:

➢ Agente buffer
➢ Agente de tonicidad
➢ Estabilizante (que también puede servir como un agente de tonicidad)
➢ Agente Tensioactivo
➢ Antioxidante (sólo cuando la oxidación de proteínas es significativa).
➢ Preservante (principalmente para envases multidosis)
Una formulación liofilizada, por lo general, consta de:

➢ Agente buffer
➢ Agente de torta (bulking)
➢ Estabilizante
➢ Agente tensioactivo (en los casos donde la agregación durante la
etapa de liofilización o durante la reconstitución se convierte en un
problema)

Buffers
Mantiene el pH de la formulación a través de la vida útil del producto
También durante la liofilización y reconstitución del mismo
De ser posible (con la estabilidad del p.a.)

➢ Ajustar el pH de la formulación cercano a 7 para evitar irritación
➢ Utilizar capacidad buffer (b) de 0,01

Sales
El incremento de la fuerza iónica aumenta la solubilidad y estabiliza
físicamente (minimizan las interacciones electrostáticas entre
proteínas)
Proveen de la isotonicidad acorde a una formulación inyectable

Se debe alcanzar una osmolaridad de 300 mOsm o el equivalente a
una solución de NaCl de 0,9 % p/v

Sero-Albumina Humana (HSA)
Muy estable, usada como estabilizante en varias proteínas parenterales
muy activas.
Se adiciona en exceso (con respecto al p.a.): 1,0 a 2,5 mg/mL
Disminuye el nivel de adsorción del p.a. en las paredes del envase
primario (vidrio o butilo).
Blanco alternativo de
distintos agentes
deletéreos para el
principio activo.
Estabiliza
directamente la
estructura nativa del
principio activo.
Minimiza las
alteraciones durante Origen extractivo a partir de plasma (debe ser libre
el liofilizado. de VHB, VHC, HIV) y también recombinante
(Recombumin®).
Aminoácidos
Glicina es el mas empleado.

En preparaciones de interferones, Eritropoyetina, factor VIII, urokinase.
Adicionados en concentración de 0.5–5,0% p/v
Estabilizan por varios mecanismos:
reducen la adsorción superficial,
inhiben la formación de agregados
y directamente estabilizan la conformación en la desnaturalización por
calor
Otros aminoácidos utilizados: Alanina, Arginina, Lisina, Tirosina, etc.

Algunos también usados como buffer, antioxidantes y en liofilizados

Polioles y Carbohidratos
Sustancias como glicerol, manitol, sorbitol y propilenglicol han sido

utilizadas.
Los polioles estabilizan directamente las proteínas en solución y
también en liofilización.
Mientras que los carbohidratos como glucosa, sacarosa y trehalosa
son a menudo utilizados en los productos que se van a liofilizar para
proteger al p.a. de reacciones de degradación durante el proceso
de liofilización y proporcionar la masa física que forma el compacto
liofilizado (torta).

Surfactantes y polieteres
Como estabilizantes se utilizan bien

diluidos. Disminuyen la tendencia de las
proteínas a agregarse en las interfases
(proceso que puede conducir a la
desnaturalización) y entre si
En algunos casos aumentan la
solubilidad de las proteínas disueltas
Los polieteres disminuyen degradación
térmica
Algunos ejemplos son: polisorbato 80,
poloxamer (Copolímero de Polioxietileno-
Polioxipropileno), polietilenglicol
Ej. de estudio realizado para evaluar
que surfactante se utiliza para
minimizar la formación de agregados

Antioxidantes
Los hay de varios tipos, según el mecanismo:

❖ Agentes reductores
❖ Moléculas que reaccionan con los radicales de oxigeno
❖ Complejan metales (quelantes)
EDTA en rh-met-IL-1R (el mas usado), glutatión, tiosulfato de sodio.
Elección muy cuidadosa, pues por si mismos pueden provocar cambios

no deseados (reducción): interaccionar con algún radical, promover
oxidación en presencia de trazas de metales (acido ascórbico)
El mejor antioxidante en biofármacos es la prevención del daño

oxidativo en todo el proceso de manufactura y acondicionamiento.
Burbujeo constante de N2 durante la elaboración
Burbujeo constante de N2 durante el fraccionamiento de la solución final
Reemplazar el aire en la cabeza del vial por N2

Iones metálicos
Indeseados en la formulación de proteínas pues catalizan las reacciones

de oxidación
Aun así algunos Metales específicos se utilizan como cofactores proteicos
en suspensiones
Ej: zinc en suspensión de Insulina para formar complejos de coordinación.
Ca+2 en formulación de rhDNAasa (Pulmozine) y Factor VIII
Conservantes
Protección contra el posible crecimiento microbiano
Solo para formulaciones multidosis
Ej.: alcohol bencílico, meta-cresol
En liofilizados multidosis en el solvente de reconstitución (Ej: BWFI)
OTROS
Protamina: proteína nuclear pequeña rica en arginina que se adiciona a las
formulaciones cristalinas de Zn-insulina, logrando un descenso de la liberación
(y prolongación de la acción) de la insulina.

Cosolventes
Alguno péptidos no muy solubles como el leuprolide (análogo de

GnRH) son formulados con utilizando 100% cosolventes.
Se aprovecha esta interacción entre el cosolvente y la droga para
obtener una liberación sostenida.
Lupron Injection :
5 mg/mL for daily subcutaneous injection)
7.5 mg for monthly subcutaneous depot injection
72 mg yearly subcutaneous implant

Polímeros Biodegradables
Clase de excipientes también utilizados para obtener una

liberación sostenida de la droga terapéutica inyectada.

Insulinas: Ej de la Formulación como herramienta para
modular la liberación y la duración de la de Acción
Insulinas de Insulina LisPro
acción rápida
Insulina Regular
Insulinas de Isophano/ NPH (Ins-Zn Neutra

Protamina de Hagedorn)
acción intermedia
mezcla de cristalizada (ultra-
Insulinas de lenta) y amorfa (semilenta)
acción PZI (Zn protamina)
prolongada Ultralenta (cristalizada) /
Glargina / Detemir
Insulinas que
imitan el perfil
fisiológico de
liberación.

ENVASE PRIMARIO
En general las soluciones conteniendo

proteínas se administran por vía parenteral. Los
elementos que contienen y permiten la
administración del producto son los
correspondientes a los inyectables
Viales, jeringas prellenadas, cartuchos

(carpules) y ampollas de vidrio neutro tipo I
Cartuchos de plástico (en sistemas
multidosis) y repuestos de bombas de
infusión
Tapones, stoppers, plungers,

combiseals de elastomeros
tipo bromobutilo o derivados
preferentemente teflonados
Precintos y combiseals de Aluminio.

Estudios de Preformulación:
INTERACCIONES ENTRE EL P.A. Y COMPONENTES
DE LA FORMULACIÓN Y/O EL ENVASE PRIMARIO
Adsorción del p.a. a la pared del vidrio

Alcalinización de la formulación por vidrio
Agregados no covalentes entre la albúmina y la proteína activa
Oxidación de p.a. por trazas de peróxidos en excipientes.

Estudios de Preformulación,
Precipitación (con deposito en tapón y partículas en suspensión) de
proteínas catalizado por W residual en la jeringas.
Liberación de compuestos siliconados del cuerpo de la jeringa.
Liberación de compuestos (lixiviados o leachables) de

componentes de los stoppers

Vidrio
Liberación de componentes del
envase primario dependiendo del
tiempo y de la temperatura
Peak Area Progretion Lot # 1
1000000
900000
800000
700000
Plástico
Peak Area
600000
500000
400000
300000
200000
40ºC/75%HR
100000 30ºC/65%HR
0 25ºC/60%HR Condition
0 5ºC
1 3 6
Month
5ºC 25ºC/60%HR 30ºC/65%HR 40ºC/75%HR

Estudios de Degradación Forzada (Stress)
Los estudios de degradación forzada no están diseñados para establecer

límites cualitativos o cuantitativos para cambios en el principio activo (API) o
producto farmacológico (DP).
En estos estudios de degradación forzada buscamos:
• Dilucidar posibles vías de degradación
• Identificar productos de degradación que pueden generarse

espontáneamente durante el almacenamiento y uso de drogas
para facilitar mejoras en el proceso de fabricación y formulaciones en
paralelo con estudios farmacéuticos acelerados.
• Se requieren pruebas de muestras estresadas para demostrar las
habilidades de las técnicas analíticas empleadas en los estudios de
estabilidad: Estabilidad del API y DP en solución
Detectar bajas concentraciones de productos de degradación
potencial
Detectar impurezas degradantes relacionados con el producto para
separar los degradantes relacionados con el producto de los
derivados de excipientes y placebo intacto. 3

Condiciones de Stress y análisis a una proteína (API)

Cromatografia de Exclusion
Molecular en distintas condiciones
de Stress a un API protéico
Análisis SDS-PAGE de muestras de API reducido

(R) y no reducido (NR) estresadas con luz UV y
condiciones de pH bajo:
calle 1: MWM; blanco: calles 2, 7 y 12;
Mat. de referencia: Carriles 3 (R), 6 (R), 8 (NR) y 11 (NR),
estrés bajo pH: Carriles 4 (R) y 9 (NR),
estrés UV: Calles 5 (R) y 10 ( NR).

Los estudios para obtener la formulación cuali y cuantitava mas estable,

suelen comenzar en los estudios de preformulacion (donde se incluyen
estudios de estrés como los que vimos antes pero también otros estudios):
Entre los objetivos mas importantes durante los estudios de

preformulación se busca definir los procesos que degradan y
disminuyen la integridad física y biológica de la molécula,
las condiciones donde se desarrollan y las velocidades de los
mismos,
así como la forma de minimizarlos en una formulación mediante el
uso de tales o cuales excipientes o formas de elaboración.
En estos estudios, los métodos analíticos para la droga de interés
son seleccionados y validados (que sea selectivo!).
INFORME FINAL remarcando los resultados encontrados.

Importante para desarrollo de formulación y soporte para registro

DESARROLLO DE FORMULACIONES –
ESTABILIDAD DE LAS MISMAS
En base a la información recabada en los estudios de preformulación (sensibildad

a condiciones extremas y probables vías de degradación, interacción con
excipientes, excipientes a usar, etc. ); se desarrollan distintas formulaciones
candidatas
Formulación 1: Formulación 2: Formulación 3: Formulación 4:
API…….........….100 UI API…….........….100 UI API…….........….100 UI API…….........….100 UI
Ag. Isotónico……x1 g Ag. Isotónico……x1 g Ag. Isotónico……x1 g Ag. Isotónico……x1 g
Buffer1……….……y1 g Buffer2……….……y2 g Buffer1……….……y1 g Buffer1……….……y1 g
Albumina……..…w1 g Albumina……..…w1 g Albumina……..…w1 g Albumina……..…w4 g
Tensioactivo1……z1g Tensioactivo1…..z1 g Tensioactivo3……z3g Tensioactivo1……z2g
Envase 1rio 1 Envase 1rio 1 Envase 1rio 1 Envase 1rio 1
Una primera evaluación a corto plazo de

la estabilidad de estas formulaciones es
Estudios de Estabilidad ensayada acelerando los procesos
degradativos al aumentar la T°

DESARROLLO DE FORMULACIONES –
ESTABILIDAD DE LAS MISMAS
Formul. 1 Formul. 2 Formul. 3 Formul. 4
Estudios de La potencia del API, los productos de degradación y otros

Estabilidad atributos de la formulación deben ser monitoreados a lo largo del
tiempo y de las condiciones estudiadas
t= 0
Se pueden realizar a temperaturas t= 3m
mayores a la de almacenamiento:
Estabilidades Aceleradas e intermedias. t= 6m
Se deben realizar a la Temperatura de t= 9m

Almacenamiento. Estabilidad “de
Estante” en tiempo real. t= 12m
Ej: 25° +/- 3
Formulación
Ej: 15° +/- 3 mas estable
Ej: 05° +/- 3
Formula
INFORME FINAL con los resultados cuali-cuanti
encontrados. Importante para justificar la
formulación final a registrar t= 24m
ESTABILIDAD
Estudios que deben demostrar el período de vida útil del medicamento en
las condiciones típicas de almacenamiento, distribución y administración.
Estudios de Estabilidad
Proveen evidencia de cómo varía la potencia o cantidad de una
droga a lo largo del tiempo (envejecimiento) bajo la influencia de
factores ambientales
Permiten establecer el periodo de vida útil cuando se almacena en

las condiciones recomendadas
Realizar los estudios según las normas internacionales vigentes
Disponer de un procedimiento para la realización de los estudios

de estabilidad

A tener en cuenta
• Consideraciones generales
• Selección de lotes
• Envase y Sistema de Cierre
• Almacenamiento
• Frecuencia de Análisis
• Especificaciones y Ensayos a realizar
• Evaluación de los resultados - Vida útil propuesta
• Continuidad de los resultados
Se hacen
ensayos a
Demostrar Estabilidad distintos t.
Físico-química, Microbiológica, Biofarmacéutica como los que
a lo largo del período de vida útil del producto vimos para
demostrar estas
cualidades

Selección de lotes
Mínimo 3 Lotes de Producto Terminado
Si es posible diferentes lotes de API
Al menos 2 deben ser escala piloto: 10 % del tamaño del lote productivo, con
instalaciones y equipos similares a los productivos
Sistema de Cierre-Envase
El producto envasado en el mismo material propuesto para la comercialización
y que garantice las mínimas alteraciones en la solución con el principio activo.
Almacenamiento
API: congelados o entre 2°C y 8°C
Productos Terminados
En solución entre 2°C y 8°C
Liofilizados a T° Ambiente
Zonas climáticas
I: Templado 20ºC / 45%HR II: Subtropical: 25ºC / 60%HR
III: Calido Seco 30ºC / 35HR IV: Calido Húmedo 30ºC / 70%HR

Condiciones para los Estudios de Estabilidad
Frecuencia de Análisis
Estudio de Estabilidad Natural: 0, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 36 meses
En acelerada es conveniente realizar 1 y 2 meses también

Diseños Reducidos
Bracketing: se basa en el análisis completo de los extremos. Se asume que si
los extremos cumplen las especificaciones, los niveles medios también lo harán
Matrixing. se basa en el análisis de combinaciones detal manera que le total de

las muestras se ve representada. Se asume que cada punto analizado
representa también los puntos que no se analizan

Especificaciones
Listado de ensayos y referencias con respecto a la metodología usada con

sus correspondientes criterios de aceptación
Los criterios de aceptación durante el periodo de vida útil pueden ser

diferentes de los de liberación del producto
Se deben analizar parámetros de Eficacia, Calidad y Seguridad del producto.

Particularidades para Biofármacos
Materia Prima (API) Intermediarios Producto Terminado
Perfil Indicativo de Estabilidad
• Potencia
• Pureza y Caracterización Molecular
• Esterilidad - Endotoxinas
• Aditivos o Excipientes críticos
• Apariencia
•Humedad / pH / Otros

Evaluación de los resultados - Vida útil propuesta.
Calcular Potencia (%SVD), Promedio,

Desviación Estándar e Intervalo de
Confianza para cada uno de los tiempos
de cada uno de los lotes
Calculo del limite inferior de confianza

Calculo periodo vida útil (t90) para c/lote
Combinación de los resultados

1º evaluar si los datos son agrupables (demostración de paralelismo e igualdad
de ordenada al origen y demostración de igualdad de varianza en los lotes para
c/punto); si no lo son: Vencimiento a partir del lote que tiene menor t90.

Cálculo del Período de Vida Útil
A partir de la Valoración o A partir de Productos de

Potencia Degradación


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FORMULACIÓN Y

Cátedra de Biotecnología Farmacéutica

1 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

❖ Del API al Producto Terminado

❖ La Formulación; el granel de la solución formulada

2 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

Bancos: Maestro y de Trabajo Escalado Validación

Validación de Proceso Transferencia QC

Proceso Productivo: Ciclo de Vida del Producto

3 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

Preformulación: -Formulación de la solución

5 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

API con un grado de pureza entre 97–99%

Determinación experimental (estudios de preformulación,

6 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

7 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

• Posibles vías de degradación del p.a.

• Evaluación de excipientes y sus propiedades (acordes a las

• Posibles interacciones entre el p.a. y los componentes de la

• Necesidad de ensayos donde se estudien las vías de

• Necesidad de ensayos para demostrar que a lo largo del

8 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

PERDIDA DE ACTIVIDAD BIOLÓGICA

PRECIPITACIÓN Intercambio de DISULFUROS

10 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

Aun así las proteínas pueden ser

Detección: HPLC-SEC y/o Ej de estudio que realiza para evaluar cual es

Hidrólisis de la amida de asparagina / glutamina (mucho menos reactiva) en

Reacción especialmente promovida por altas Tº o pHs neutros-alcalinos o

12 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

-La desnaturalización parcial no siempre es un

13 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

metionina sulfoxido sulfona

14 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

La oxidación por aire puede resultar en la formación de puentes disulfuro.

Intercambio de disulfuros puede causar disminución de la AB.

El intercambio de S-S intermolecular conlleva a la formación de agregados.

Detección: SDS-PAGE (No reductor). HPLC-FR (+/- reducción)

15 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

El sitio principal de clivado es en la unión Asp-Yyy (C-terminal al Asp).

Detección: SDS-PAGE. IEF. HPLC-FR/ SEC. N y C-terminal

16 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

Preservar la proteína en la solución (minimizando su degradación

Proteger la proteína de distintas reacciones y fenómenos

Dar las condiciones Biofarmaceúticas adecuadas según la

Modular la Liberación del p.a. desde la forma farmacéutica

17 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

Una formulación líquida está generalmente compuesta por:

Una formulación liofilizada, por lo general, consta de:

18 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

De ser posible (con la estabilidad del p.a.)

19 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

Proveen de la isotonicidad acorde a una formulación inyectable

20 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

Glicina es el mas empleado.

Otros aminoácidos utilizados: Alanina, Arginina, Lisina, Tirosina, etc.

22 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

Sustancias como glicerol, manitol, sorbitol y propilenglicol han sido

23 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

Como estabilizantes se utilizan bien

24 Biotecnología Farmacéutica – Cursada 2023

Los hay de varios tipos, según el mecanismo:

EDTA en rh-met-IL-1R (el mas usado), glutatión, tiosulfato de sodio.