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PRODUCCIÓN DE ANTIBIÓTICOS POR MICROORGANISMOS MARINOS

&IhI-IT5f D. ROSENE'EI-D- xxo CI-AUDE E. ZoBEI.L
8ix-ippa fnatilt'tion oj' Oceanogropltg, I niuerailg a/ C'ofi/orn?o, to Molla, Colij'omia

Recibido para su publicación el 17 de junio de 1947

El agua de mar inhibe la multiplicación de la mayoría de las bacterias no

marinas (Ko- flnek, 1927). ZoBell (1941) descubrió que sólo del 4 al 15 por
ciento de muchas bacterias procedentes de aceites, aguas residuales y otras fuentes
de agua dulce o terrestres formaban colonias en agar nutritivo preparado con agua
de mar y en un medio similar preparado con agua destilada. El agua de mar es
aho bactericida para muchas bacterias noomarinas, siendo los organismos
grampositivos más sensibles que las formas gramnegativas (Beard y ñleadowcroft,
1935; ZoBell, l93tI). Esto se demostró suspendiendo cultivos puros o mixtos de
bacterias de diversas fuentes de agua dulce en agua de mar u otras soluciones
minerales y determinando el porcentaje de supervivencia después de diferentes
períodos de tiempo. Aunque los organismos gramnegativos muestran resistencia a
la acción letal del agua de mar, su viabilidad en este medio varía ampliamente
entre las distintas especies de bacterias. En una investigación en la que se
emplearon bacterias entéricas, Trawinski (1929) informó de períodos de
supervivencia en agua de 8ea que oscilaban entre 12 horas para lshigella dgeentet
tae y 23 daya para lsalmonella enferitidis. Carpenter et of. (1938) observaron
que el agua de aea natural mataba al 80% de los organismos de las aguas
residuales en media hora.
Los efectos bacteriostáticos y bactericidas del agua de mar son superiores a los
que pueden explicarse por su salinidad o presión osmótica. El agua natural de Bea
no sólo es más bactericida que el agua de mar sintética (ZoBell, 1946; ZoBell y
Feltham, 1933), sino que también es más bactericida que el agua de mar tratada
térmicamente (Kiribayaahi y Aida, 1933; Waksman y Hotchkisg, 1937; ZoBell,
1936). De Giaxa (1889) observó que los patógenos perecen rápidamente en el agua
cruda de Bea, aunque pueden sobrevivir casi indefinidamente en el agua de mar
tratada térmicamente. Kraasilnikov (1938) comprobó que el agua del Mar Negro Descargado de http:s //journals .asm.org/journal/jb el 18 de noviembre de 2023 por
es germicida para las bacterias terrestres hasta que se hierve. Confirmó las
observaciones de Beard y Meadowcroft (1935) y ZoBell (1936) de que la
potencia bacteriológica del agua de mar disminuía pero no se destruía al pasarla
por filtros Berkefeld, Chamberland, Coors o similares.
A falta de las propiedades de los bacteriófagos, la propiedad bactericida del
agua de mar se atribuye principalmente a su contenido de sustancias antibióticas
producidas por los microorganismos. La observación de que el principio
bactericida se encuentra en mayor concentración en las muestras de agua de mar
recogidas recientemente de las zonas de máxima población bacteriana da
crédito a esta opinión. Las pruebas experimentales que se exponen a
continuación demuestran la producción de sustancias antibióticas por varias
especies de microorganismos nativos del mar.
' Contribuciones de la Institución Serippa de Oceanografía, Nueva Seriea No. 327. Este
documento es una contribución del Proyecto de Investigación del Instituto Americano del
Petróleo.
177.242.158.116.

° Dirección actual: California Research Corporation, La Habra, California.

393
394 W. D. BO8ENFELD Y C. E. ZoBELL [VOL. 54

RE8ULTB EXPERIMENTAL
Se ensayaron 58 cultivos puros de microorganismos marinos para determinar su
actividad antimicrobiana. Los cultivos empleados como antagoniato potencial
procedían de una colección descrita previamente por ZoBell y Upham (1944) y se
mantuvieron en un mediiun de la siguiente composición:
Peptona Difco.................................................................................................5.0 g
Extracto de levadura Difco............................................................................. .
.. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .....................................................................1.0 g
(NH')zO'..........................................................................................................1.0 g
FeSO,. (Nn,),sO,.6u,O..................................................................................0.18
Agua de mar envejecida (75 por ciento) ....... .. . . ....
1,tXDml

La solución se ajustó a un pH de 7,4 a 7,6 antes de esterilizarla en autoclave.

Cuando se requería un medio sólido, se añadía un 2,0% de agar a esta solución
antes de la esterilización.
TABLA 1

9
Jfierococeus. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Aciinottipces . ... .....
Serrolio ... . ....
Pceudomonaz ............. . 16 0
Fibrio. . . . 11 0
f'fneobecIermi.. . . . 6 0
0
0

68 9

http:s //journals .asm.org/journal/jb el 18 de noviembre de 2023 por

Se probaron todas las especies de agua dulce o terrestre para garantizar su
crecimiento en este medio de agua de mar antes de someterlas a los efectos de los
antagonistas marinos. Tanto los inóculos antagonistas como los de p r u e b a se
tomaron de cultivos crecidos durante 48 horas a 27 C.
Los efectos antimicrobianos se estudiaron en placasB vertidas, cada una de las
cuales contenía 20 ml de agar nutritivo y estaba sembrada con 0,2 ml de un
cultivo de prueba. Una vez solidificado el medio, las especies marinas
investigadas se esparcieron sobre los cuadrantes de las placas, que se incubaron a
27 C. Las placas se examinaron a intervalos frecuentes durante un periodo de 17
díasa para comprobar la supresión del crecimiento de los orga- nismos de prueba,
evidenciada por las zonas claras adyacentes a las líneas de crecimiento de los
antagonistas marinos. En la tabla 1 se exponen los resultados obtenidos y se
resume la distribución de las especies antagonistas entre los distintos géneros
177.242.158.116.

investigados.
Aunque dos orgaaiomas antagonistas eran gramnegativos, la mayoría de las
especies que mostraron poderes inhibitorios eran miembros de los géneros
grampositivos Bacillus y 3fiicr .
Descargado
1947] ANTIBIONCS DEL AAIflNE 8CCROORGNISMO6 395

La susceptibilidad de los organismos de prueba se describe en las tablas 2, 3

y 4. De los 11 cultivos grampositivos empleados, sólo Staphylococcus aureus y
lStrepto-
CUADRO 2
Atifirnicrobfof espectro o/ morina Boinlluz apeiyiae

Baciltua anth.r'x::iz.... ...............

B.megatherium ...
B. inpcoides.....
B. subtilis ....
Corgnebacterium paeudodi phlheritum. . +
Microtoccuc roaeuz . . +
âf9co6ecteriuni i e e t i c 0 l e .
............. Proteus vulporis... .
................ efinonelle I
hitnorititzi..............

l - - -
staphglococcuz aureus.....

CUADRO 3
Especfrurri antimicrobiano de Micrococcuz zpeinez marinos

Bacilluz enfAroels ....................

B. iepet/teriom.......................
B. tnpcoidee ..........................
. . . . . ..

http:s //journals .asm.org/journal/jb el 18 de noviembre de 2023 por

Corgneboclerium p-eudodiphfherieum...
Microcoo':uz roreur.....
3f pcoòecferiom focticole.......... + - -
Profeta otzlpari8 ........... ..........
'Snftrionefie lppùitnurium......
6oxoino /uteo. .. -!- -1-
S5*geffo porodpsen/erioe ... .... - '

Streptococcus Jeecefir ................. - - '

• Especie no analizada.

coccuo faeoalis no sufrieron inhibición por una o más especies marinas. Se

probaron tres especies gramnegativas y ninguna de e l l a s fue susceptible.
Se i n t e n t ó demostrar la presencia del principio inhibidor en soluciones libres
177.242.158.116.

de células preparadas por filtración de los cultivos antagonistas. El sitio

Descargado
386 W. D. ROBENPELD Y € R. ZOBELL

Los organismos inhibidores se cultivaron en el caldo descrito anteriormente

durante períodos de 9 a 11 días, tras los cuales se pasaron por filtros Seitz o
Mandler. La reacción de todos los filtrados se aproximó a pH 8 y en cada caso
se ajustó a pH
7.2 antes del empleo de las soluciones estériles como agente inhibidor. Se
prepararon placas de vertido de organismos susceptibles de la manera ya
descrita. Se saturaron discos estériles de papel de filtro con los filtrados de los
cultivos y se aplicaron a las
CUADRO 4
Espectro antimicrobiano de microorganietnz marinos

Bacilluz anlhratic................... ...... +

B.megoiherium ..... B. + +
"ipcoidea. . +
B. "obtilia .. .
Corpneboclerium peeudodi pblhericum........... ...
Micrococcuu rozetui...... ..
3fpcobocteritim lacticola ...
Pretesa rtilporis....
Salmonella lypiiimurium...... . . . . . . .. . .. . . . . . . . -

'Sfiipefie porodysetiterioe... ........................ - -

5taphglocotcuz aureus. . ..... - -
6. citreos... -
Sfre t0C0Ceu8 eece/ir.......... . ................. - -

CUADRO 6
Disminución de la actividad onlimicrobiana como consecuencia de la eulluqrze anlagimielica o de
la jtltrnfioa

http:s //journals .asm.org/journal/jb el 18 de noviembre de 2023 por

oomse seeccrzznt -- rs

Filtro Tetod Inhibido

Aclinomycea morinolimoeua Seitz 1

Bocilluz borborokoile8 Mandler 6 1
B. oòpsseus Seits 1
B. ihaloszokoiiez Seitz 'k Mandler 0
B. "ob "iorinor 8eits
fÌcr0eOc6tt8 mOf't fltG4fl6 Seitz 0
M. zedìmenieuz Mandler 0
Serrofie znorinoruòro Mandler 0

superficie de agar. Dichas placas se incubaron durante 6 díasa, durante los cuales
se examinaron con frecuencia para detectar la presencia de zonas de inhibición.
Los reaultaos figuran en la tabla 5.
177.242.158.116.

Las preparaciones sin células mostraron poca actividad antagonista. Aunque

estos resultados pueden sugerir que la sustancia inhibidora está íntimamente
asociada con su célula madre, existe la posibilidad de que el principio activo se
haya eliminado por adsorción en el filtro.
Descargado
19t7j ANTIBIO'I'IGB DE £ICROOROANIB2£8 MARINO 397

DI&CU8BION

No se han obtenido pruebas cuantitativas de la influencia de los

microorganismos marinos en las propiedades inhibitorias del agua de Bea. Sin
embargo, puede inferirse una presunta interrelación a partir de la incidencia de
especies antagonistas. El comportamiento de los cultivos antagonistas al
pasarlos por un filtro a prueba de gérmenes se asemeja al del agua de mar, ya
que ambos experimentan disminuciones similares en su potencia
antimicrobiana. Otras pruebas de esta correlación de la actividad se observan
en una comparación de los datos comunicados aquí con los que prueban el
efecto del agua de mar sobre las bacterias no marinas. De los seis organismos
que Krasailnikov (1938) demostró que eran inhibidos por el agua de mar sin
calentar y comunes a ambas investigaciones, sólo el 6fopfip- for nureus no
demostró una respuesta bacteriostática frente a las bacterias marinas. También
es significativo que la respuesta de las especies tetales a la inhibición por or-
ganismos marinos parece ser paralela a la reacción Gram. Esto concuerda con
la observación general de que las bacterias grampositivas son inhibidas con
mayor frecuencia por el agua de mar que las especies gramnegativas.
No se han aislado antibióticos específicos producidos por bacterias marinas.
aunque es evidente que varias especies de microorganismos autóctonos del
mar elaboran sustancias antimicrobianas. El estudio que aquí se presenta,
aunque de alcance muy limitado, sugiere que el medio marino debería
considerarse una fuente potencial de antibióticos.
6UAtMARY
De las 58 especies de microorganismos marinos analizadas, 9 han
demostrado actividad antibiótica contra formas no marinas. Los géneros
marinos más activamente antagonistas fueron Baaihuo y Microcooauc.
Las similitudes en el comportamiento del agua de mar y de los cultivos
marinos antagonistas indican que la actividad bacteriostática o bactericida de
la primera puede deberse, al menos en parte, a una flora autóctona de
organismos productores de antibióticos.
Se sugiere que el mar puede representar un reservorio de antegonista
http:s //journals .asm.org/journal/jb el 18 de noviembre de 2023 por
microbiana de posible importancia.
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