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Ciencias de la reproducción animal 230 (2021) 106771

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Ciencias de la reproducción animal

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Anomalías cromosómicas en perros con trastornos del

desarrollo sexual (DSD)

Isabella Szczerbala, Wojciech Nizanskib, Stanislav DzimiraC, Joanna

Nowacka-Woszuka, Joanna Stacheckaa, Janusz Biezynskid,
Zuzanna Ligockab, Dariusz Jagodkami, Hanna Fabian-KurzokF, Marek Switonskya,*
aDepartamento de Genética y Cría Animal, Universidad de Ciencias de la Vida de Poznan, Wolynska 33, 60-637, Poznan, Polonia
bDepartamento de Reproducción y Clínica de Animales de Granja, Universidad de Ciencias Ambientales y de la Vida de Wroclaw, Pl. Grunwaldzki 49, 50-366, Breslavia,
Polonia
C Departamento de Patología, Universidad de Ciencias Ambientales y de la Vida de Wroclaw, CK Norwida 31, 50-375, Wroclaw, Polonia
dDepartamento de Cirugía, Universidad de Ciencias Ambientales y de la Vida de Wroclaw, Pl. Grunwaldzki 51, 50-366, Breslavia, Polonia
miClínica Veterinaria AURA, Debowa 31, 86-065, Lochowo, Polonia
FClínica Veterinaria Ara SC, Plebiscytowa 7, 47-220, Kedzierzyn-Kozle, Polonia

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO ABSTRACTO

Palabras clave: Los trastornos del desarrollo sexual (DSD) causados por anomalías cromosómicas rara vez se diagnostican
aneuploidía en perros. En este informe, hay un enfoque en cinco casos de DSD en los que los perros tenían cariotipos
Fusión céntrica
anormales. Todos los animales fueron reconocidos por los propietarios como hembras, sin embargo, estos
intersexualidad
perros tenían una gran cantidad de defectos reproductivos. Entre estos, se observaron genitales externos
Translocación recíproca
anormales, como agrandamiento del clítoris, desarrollo anormal de los labios, ubicación anormal de la vulva
Cromosomas sexuales
y el orificio uretral, y otras anomalías en cuatro perros. Se realizaron evaluaciones de histología gonadal en
tres perros y se diagnosticaron la presencia de un ovario, testículos inactivos y ovotestis con calcificación en
los folículos ováricos. Los resultados del análisis citogenético indicaron que había los siguientes cariotipos: (a)
trisomía X en forma de mosaico (79,XXX/78,XX); (b) translocación robertsoniana en forma de mosaico
(77,XX,rob/78,XX); (c) translocación X/autosoma no mosaico (78,X,t(X; A)); (d) translocación X/autosoma en
forma de mosaico (78,X,t(X;A)/78,XX); y (e) quimerismo de leucocitos (78,XX/78,XY). Los hallazgos en el
presente estudio enfatizan que el análisis citogenético es esencial para dilucidar la patogénesis de DSD en
perros.

1. Introducción

Los trastornos del desarrollo sexual (DSD) son trastornos congénitos en los que hay inconsistencias en las características reproductivas
cromosómicas, gonadales y fenotípicas. Los DSD se clasifican en tres categorías principales en función de las características de los cromosomas sexuales:
XX DSD, XY DSD y cromosoma sexual DSD (Poth et al., 2010;Meyers Wallen, 2012). Estos son trastornos comunes que conducen a problemas
reproductivos en perros, generalmente esterilidad. La forma más común en perros es XX (SRY- negativo) DSD, caracterizado por virilización variable de
los genitales externos, presencia de útero y conducto deferente y testículos u ovotestículos (Nowacka-Woszuk et al., 2019;Albarella et al., 2020). Sin
embargo, rara vez se han informado anomalías cromosómicas asociadas con DSD en perros (Raudsepp

* Autor correspondiente.
Dirección de correo electrónico:marek.switonski@up.poznan.pl (M. Switonski).

https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2021.106771
Recibido el 12 de enero de 2021; Recibido en forma revisada el 17 de mayo de 2021; Aceptado el 18 de mayo de 2021
Disponible en Internet el 19 de mayo de 2021
0378-4320/© 2021 El(los) autor(es). Publicado por Elsevier BV Este es un artículo de acceso abierto bajo la licencia CC BY
(http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).
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y Chowdhary, 2016;Szczerbal y Switonski, 2016). Esta falta de información probablemente se deba al pequeño número de instituciones/clínicas
en las que se realiza el diagnóstico citogenético de perros.
El cariotipo canino es un procedimiento difícil de realizar debido al gran número de cromosomas (2n = 78) y la morfología acrocéntrica de
todos los autosomas, que en su mayoría son de tamaño pequeño.Switonski et al., 1996). Solo los cromosomas sexuales están biarmados y se
distinguen claramente de los autosomas. Las mutaciones que son fácilmente reconocibles (p.ej, aneuploidías de cromosomas sexuales y
fusiones céntricas) han sido los trastornos que se han informado principalmente. Estos incluyen la monosomía X (Smith et al., 1989;Switonski
et al., 2003a), trisomía X (Switonski et al., 2000;O'Connor et al., 2011), cromosomas sexuales XXY (Reimann-Berg et al., 2008), y las
translocaciones robertsonianas más comúnmente observadas (fusiones céntricas) de diferentes autosomas (Mamá y Gilmore, 1971;Larsen et
al., 1978; Mayr et al., 1986;Switonski et al., 2003b,2011). Sin embargo, las translocaciones recíprocas entre autosomas no se han descrito
previamente, aunque se informó un solo caso de translocación entre un autosoma y un cromosoma X.Schelling et al., 2001). En el presente
estudio, describimos cinco nuevos casos de DSD en perros con un complemento cromosómico anormal.

2. Material y métodos

2.1. animales

Cinco perras fenotípicamente hembras fueron sometidas a un examen clínico y citogenético debido a anomalías en los tejidos reproductivos (tabla 1
). Estos perros fueron diagnosticados durante 2019 y 2020 entre 20 perras con genitales externos anormales o problemas de fertilidad. Algunos de los
perros habían sido castrados por un veterinario debido a recomendaciones médicas, de acuerdo con las prácticas veterinarias polacas estándar y con el
consentimiento de los dueños de los perros y la aprobación de la Comisión de Bioética local para el Cuidado y Uso de Animales en Poznan, Polonia
(certificado n.º 1 /2019).

2.2. Análisis citogenético

Las preparaciones citogenéticas se obtuvieron a partir de un cultivo de linfocitos a corto plazo y el complemento cromosómico se analizó mediante
tinción de Giemsa y bandas Q (QFQ). Para cada animal, se analizaron al menos 50 extensiones de metafase. Los cromosomas sexuales se identificaron
como resultado de la morfología de dos brazos. Hubo uso de fluorescencia.en el lugarhibridación (FISH) con sondas de pintura de cromosomas X e Y
caninos (amablemente proporcionada por el profesor MA Ferguson-Smith, Universidad de Cambridge, Reino Unido). Las sondas se marcaron con
biotina-16-dUTP o digoxigenina-11-dUTP mediante DOP-PCR y se detectaron con estreptavidina-Cy3 (GE Healthcare) (señal roja) o anti-digoxigenina-
fluoresceína (Roche Applied Science) (señal verde). Los cromosomas se contrastaron con Vectashield que contenía DAPI (Vector Laboratories). Las
evaluaciones microscópicas se realizaron con un microscopio Nikon E600 Eclipse (Melville, NY, EE. UU.), equipado con una cámara digital CCD refrigerada
y el software Lucia. Para estas determinaciones se utilizó la nomenclatura internacional de cromosomas caninos (Switonski et al., 1996).

2.3. Análisis molecular

El ADN se extrajo de muestras de sangre periférica con el uso del kit comercial Blood Mini (A&A Biotechnology) y de folículos
pilosos (Caso 5) con un kit Genomic a Mini (A&A Biotechnology). La presencia de Y-ligado (SRYyZFY) y ligado al X (ZFX) los genes se
determinaron mediante amplificación por PCR (SRY), seguido de RFLP (porZFYyZFX), como se ha descrito previamente (Switonski et
al., 2012;Szczerbal et al., 2016).
Se utilizaron procedimientos de PCR digital de gota (ddPCR) para determinar el polimorfismo de variación del número de copias (CNV) aguas arriba (el

tabla 1
Características de los perros con DSD.

Caso Criar Edad fenotipo Histología de las gónadas Nivel de hormonas sexuales cariotipo
*

1 boston terrier 2 años genitales externos normales; los síntomas de ovario con cuerpo lúteo n/A Mosaicismo: 79,
estro ocurrieron una sola vez; prolapso vaginal XXX/78,XX

2 Americano 10 Estructura similar a vulva y pene sin ovotestis; calcificación de n/A Mosaicismo: 77,XX,
Staffordshire metro abertura uretral. los folículos ováricos robar/78,XX
Terrier
3 Tierras altas del oeste 2 años desarrollo anormal de los labios; clítoris la ovariohisterectomia fue n/A 78,X,t(X;2)
Terrier blanco agrandado; orificio uretral situado entre no hecho
la vulva y el ano
4 Doguillo 10 clítoris agrandado; fusión de labios; abertura testículo hipoplásico mi2: 28,0 pg/ml; PAG4: Mosaicismo: 78,X, t
metro uretral ubicada en lo profundo de la vagina; 0,43 ng/mL; T<0,05 ng/ (X;A)/78,XX
mL
5 Gran Danés 2 años prepucio subdesarrollado que se asemeja a la la ovariohisterectomia fue mi2: 9,81 pg/mL; PAG4 Leucocito
vulva con un pene rudimentario; pene no hecho :< 0,25 ng/ml; T<0,05 quimerismo: 78,
hipospadias ng/mL XX/78, XY
*
y: años; m: meses; na: no analizado.

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Figura 1.Genitales externos de perros con DSD; Caso 1: Boston Terrier con genitales externos normales (a); Caso 3: West Highland White Terrier con
orificio uretral (flecha), y vulva en posición perineal (bd); Caso 4: Pug con clítoris agrandado (e); Caso 5: Gran danés con prepucio subdesarrollado
parecido a vulva con pene rudimentario ubicado en posición típica de machos (f) e hipospadias peneano (flecha) (g).

Figura 2.Hallazgos con análisis FISH de cromosomas sexuales en la propagación de metafases de perros; Caso 1: 79,XXX (a); Caso 2: 77,XX,rob (b); Caso 3:
78,X, t (X;A) (c); Caso 4: 78,X, t(X;A) (d) y Caso 5: 78,XX/78,XY (e); Se usaron sondas de pintado de cromosomas X completos (señal roja) e Y (señal verde);
Rb: cromosoma derivado de la translocación robertsoniana; der X: cromosoma X derivado de la translocación; der A: un autosoma derivado de la
translocación (Para la interpretación de las referencias al color en la leyenda de esta figura, se remite al lector a la versión web de este artículo).

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Fig. 3.Histología gonadal de perros con DSD; Caso 1: un ovario con cuerpos lúteos (a); Caso 2: ovotestis (b) y calcificación del folículo ovárico (c); Caso 4: testículo sin
espermatogonias, pero con algunas células similares a espermatogonias (d); Nótese un intersticio más compacto que en los testículos normales.

llamada región CNVR1) o dentro de laSOX9gen (Exón 3) (Nowacka-Woszuk et al., 2019). ElHSD17B7se utilizó como gen de referencia. Dos enzimas de
restricción (BsuRyo yHaeIII) se usaron para la digestión del ADN genómico para mejorar la distribución de los amplicones en gotitas. Los procedimientos
de ddPCR se realizaron utilizando el protocolo del fabricante, con una temperatura de hibridación de 58◦C. Se usó un lector de gotas QX200 (Bio-Rad)
para detectar la fluorescencia y los resultados se analizaron usando el software Quantasoft (Bio-Rad).

2.4. Análisis histológico

Después de la cirugía, las gónadas se fijaron en formalina al 10 %. Hubo secciones de 5 μm de espesor de las gónadas teñidas con el
método de Masson-Goldner (hematoxilina y eosina) y los tejidos en los portaobjetos se analizaron con un microscopio óptico Olympus BX53
acoplado con una cámara Olympus UC90.

2.5. Análisis endocrinológico

Las muestras de sangre se recogieron en tubos sin tratar, se centrifugaron durante 5 min y se determinaron las cantidades séricas de
testosterona (T), progesterona (P4), y 17β-estradiol (E2) concentraciones. La evaluación se realizó utilizando un sistema de inmunoensayo
automatizado utilizando el ensayo de fluorescencia ligada a enzimas (ELFA) MINI VIDAS (Anckaert et al., 2002;Brugger et al., 2011;Gasser et al.,
2003).

3. Resultados

Los tejidos de todos los animales se evaluaron utilizando técnicas citogenéticas y moleculares, complementadas con enfoques histopatológicos y
endocrinológicos cuando fue posible (tres y dos casos, respectivamente;tabla 1). Las siguientes son descripciones detalladas de los animales.

3.1. Caso 1

Una hembra Boston Terrier de 2 años con genitales externos normales (Figura 1a) fue sometida a investigación clínica por prolapso
vaginal. Durante la consulta veterinaria se determinó que este animal había manifestado síntomas de estro en una ocasión anterior por lo que
fue derivado para evaluación genética.
Hallazgos del análisis de extensiones de metafase teñidas con Giemsa (norte=50) indicó que este animal tenía un complemento cromosómico
femenino normal (78,XX), sin embargo, se detectó una trisomía X (79,XXX) en dos extensiones de metafase (Supl. Fig. 1a). Para confirmar la presencia de
la línea celular trisómica, se realizó el procedimiento FISH con una sonda de pintura del cromosoma X completo (Figura 2a) con hallazgos que indicaban
que había una pequeña cantidad de mosaicismo de 79,XXX [5 %]/78,XX [95 %]. Los hallazgos de las evaluaciones histológicas indicaron que las gónadas
eran ovarios con cuerpos lúteos presentes en los tejidos gonadales (Fig. 3a).

3.2. Caso 2

Una American Staffordshire Terrier (10 meses de edad) tenía una vulva y una estructura similar a un pene y carecía de un orificio uretral. Los
hallazgos de la realización del análisis histológico de las gónadas indicaron que la estructura era un ovotestis (Fig. 3antes de Cristo). Las gónadas diferían
en tamaño en aproximadamente un 30 %. En la gónada más pequeña, la distribución de los componentes testicular y ovárico fue similar. En la periferia
de la gónada, dentro de la capa epitelial ovárica, había numerosos folículos ováricos de varios tamaños y clases. En el centro de algunos folículos en
crecimiento había focos de calcificación en la capa granular. En los ovotestis más grandes, el tejido testicular era más abundante (aproximadamente el
75 % de los tejidos gonadales) y estaba compuesto por túbulos seminales que no contenían espermatogonias con múltiples células somáticas
intratubulares. Las células intersticiales eran visibles en el estroma del tejido conjuntivo. Los tejidos ováricos que se encontraban en menor abundancia
en las gónadas se ubicaron circunferencialmente y se cubrieron con una monocapa de epitelio. En la abundante cantidad de tejido del estroma,

Las preparaciones de cromosomas se tiñeron con colorante Giemsa y hubo cromosomas sexuales femeninos (78,XX) en la mayoría de las
extensiones; sin embargo, en el 7 % de las extensiones hubo una translocación robertsoniana/fusión céntrica (77,XX,rob; figura complementaria 1b). Este
hallazgo se confirmó mediante la realización de procedimientos FISH con una sonda específica del cromosoma X (Figura 2b). Desafortunadamente,
debido al pequeño número de diseminaciones en metafase con la translocación presente y al pequeño tamaño de los autosomas relevantes, fue difícil
identificar los cromosomas involucrados. El cariotipo en mosaico de esta hembra se describió como: 77,XX,rob/78,XX.

3.3. Caso 3

Una hembra de West Highland White Terrier de 2 años tenía anomalías en los genitales externos. Se ubicó una vulva con clítoris
agrandado en posición perineal. Los labios estaban fusionados y la entrada vaginal tenía un 25 % del tamaño normal. El orificio
uretral estaba ubicado entre la vulva y el ano (Figura 1b–d). La perra había sido previamente diagnosticada de anestro primario.

6
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trastorno.
Los hallazgos del análisis citogenético de los cromosomas teñidos con Giemsa indicaron que este animal tenía un juego de cromosomas
femenino, pero la apariencia de un cromosoma X parecía ser anormal, siendo más largo y con una morfología metacéntrica, en lugar de
submetacéntrica (Supl. Fig. 1c). Al realizar procedimientos FISH con una sonda de pintura del cromosoma X completo, se detectó una
translocación recíproca entre el cromosoma X anormal y un autosoma: 78,X,t(X;A) (Figura 2C). El autosoma se identificó mediante el
procedimiento de bandas Q y se determinó que el cromosoma 2 (CFA2) era un componente en la translocación (Supl. Fig. 2). El cariotipo de
este perro se describió como 78,X,t(X;2)(p15;q23).

3.4. Caso 4

Un cachorro Pug (10 meses de edad) fue sometido a investigación clínica debido a un agrandamiento del clítoris (Figura 1mi). La entrada vaginal era
muy estrecha debido a la fusión de los labios con el clítoris. No había abertura uretral en el vestíbulo vaginal ni en el clítoris, estando la abertura dentro
del área craneal de la vagina. El animal no había expresado previamente estro u otros síntomas cíclicos estrales. Los hallazgos con los exámenes
ultrasonográficos indicaron que había una estructura longitudinal tubular que se asemejaba a un útero en la cavidad abdominal, ubicada cerca de la
vejiga. El diámetro de esta estructura era de aproximadamente 0,5 cm. Se detectaron estructuras ovales parecidas a gónadas caudales a cada riñón.
Como resultado de la realización de una ovariohisterectomía, se comprobó que había una estructura tubular parecida a un útero y gónadas parecidas a
testículos con un epidídimo.
Los hallazgos del análisis histológico indicaron que las gónadas eran testículos hipoplásicos. En los túbulos seminíferos se observaron células de
Sertoli y algunas células tipo espermatogonias. Se observaron células de Leydig en el estroma conectivo compacto (Fig. 3d). No se detectó tejido lúteo en
las gónadas. Las concentraciones de progesterona fueron basales (<1 ng/mL) y las concentraciones de testosterona también fueron basales (<0,05 ng/
mL), mientras que el E2La concentración en la sangre (28 pg/mL) fue similar a la de la fase folicular del ciclo estral en las perras (Concañón, 2011).

Los hallazgos del análisis de los cromosomas teñidos con Giemsa indicaron que este animal tenía cromosomas sexuales femeninos (78,XX); sin
embargo, el 5% de las células tenían un cromosoma X anormal. En las extensiones en metafase que contenían el cromosoma X anormal (2n = 78), había
un cromosoma marcador muy pequeño, pero en algunas extensiones el cromosoma marcador no era visible (2n = 77), lo que indica una pérdida durante
la mitosis (Fig. 1d). Como resultado de la realización de procedimientos FISH con una sonda de pintura del cromosoma X completo, se detectó una
translocación de casi todo el autosoma en el cromosoma X (Figura 2d). Debido a la pequeña abundancia de extensiones en las que hubo translocación,
no hubo una identificación inequívoca del autosoma involucrado. El cariotipo en mosaico de esta perra se describió como 78,X,t(X;A)/78,XX.

3.5. Caso 5

Una hembra de Gran Danés de 2 años que previamente había estado en anestro continuo fue el animal del Caso 5. Las características de la cabeza y
el cuerpo de este individuo fueron masculinizadas. Los genitales externos del perro estaban ubicados en una posición similar a la de los machos. El
prepucio subdesarrollado se asemejaba a una vulva y contenía un pene rudimentario, mientras que el orificio uretral se ubicaba en su superficie ventral,
característico del hipospadias peneano.Figura 1f,g). No había hueso del pene. En la región púbica, había un pliegue de piel que se asemejaba al escroto.
Los hallazgos como resultado de la realización de una evaluación ultrasónica fueron que había estructuras ovoides encapsuladas que se asemejaban a
gónadas caudales a cada riñón. Los resultados del análisis endocrinológico indicaron que no se producían esteroides gonadales. Desafortunadamente,
este individuo falleció poco después del examen debido a un tumor óseo, por lo que no fue posible el análisis histológico de las gónadas.

Los hallazgos del análisis citogenético de los leucocitos indicaron que había dos líneas celulares: 78,XX (54 %) y 78,XY (46 %) (Figura 2mi; Suplemento
Figura 1e). Los resultados de las cuantificaciones de hormonas esteroides indicaron que las concentraciones de testosterona y estrógenos eran basales.
Hubo indicaciones del diagnóstico de que había quimerismo leucocitario (78,XX/78,XY) para este perro.

3.6. Análisis molecular

Análisis molecular de los genes ligados a Y (SRYyZFY) se realizó en animales para todos los casos. En los animales para cuatro casos (1, 2, 3
y 4) laSRYyZFYno fueron detectados (datos no mostrados). En el animal del Caso 5, los hallazgos con análisis de muestras de ADN de sangre y
folículos pilosos indicaron que había genes ligados a Y (SRY, ZFY) solo en las muestras de sangre (datos no mostrados). Este hallazgo se
confirmó cuando se realizó el análisis de quimerismo leucocitario (78,XX/78,XY).
Además, en dos perros se evaluó la CNV en la región que alberga laSOX9(Casos 2 y 4, con predominio de la línea celular XX), lo
que permitió excluir la asociación de este polimorfismo con DSD testicular u ovotesticular XX. Los resultados de la realización de las
evaluaciones ddPCR indicaron que había un número normal (2) de copias de laSOX9gen, mientras que en la región aguas arriba
(CNVR1), faltaba el fragmento polimórfico (0 copias) (Supl. Fig. 3).

4. Discusión

Las aneuploidías de los cromosomas sexuales, aunque se identifican fácilmente en los perros, rara vez se han informado (Mayers-Wallen, 2012). En el
presente estudio, se describió un nuevo caso de trisomía X en mosaico (79,XXX/78,XX) en una perra remitida para análisis citogenético. Los tres casos de
trisomía X canina informados anteriormente no eran mosaicos (79, XXX) y se diagnosticaron en hembras con genitales externos normales, pero con
patrones cíclicos estrales anormales o anestro primario que condujo a la infertilidad.Switonski et al., 2000;

7
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O'Connor et al., 2011).

El hallazgo más interesante en el presente estudio fue la identificación de dos casos de translocaciones de autosomas X. Uno de estos
ocurrió en una forma no mosaica, mientras que otro fue un caso en el que hubo mosaicismo. Debido a que los animales en ambos casos
tenían genitales externos anormales con un clítoris prominentemente agrandado y labios vaginales anormalmente desarrollados, estos
animales se sometieron a análisis citogenético. Solo un único caso de este tipo de translocación se ha informado previamente en perros,
donde se diagnosticó esta translocación en un macho de Yorkshire Terrier con genitales externos ambiguos (vulva y clítoris agrandado) y
ovotestes. Este perro tenía un cariotipo mosaico - 78,Y,t(X;A)/78,XY (Schelling et al., 2001). Las manifestaciones fenotípicas de las
translocaciones del autosoma X son variables y pueden depender de la localización de la rotura cromosómica en el cromosoma X, así como
del patrón de inactivación del X translocado. Además, un factor muy importante es si la translocación del autosoma X es equilibrado o
desequilibrado. En pacientes humanos, tales translocaciones a menudo se han asociado con amenorrea primaria y secundaria y disgenesia
gonadal, pero no se detectaron genitales externos anormales cuando hubo este tipo de translocación.Moysés-Oliveira et al., 2019).
Se ha informado quimerismo de leucocitos (XX/XY) en más de diez perras, incluidos dos informados anteriormente por el mismo grupo que realiza
las presentes evaluaciones (Szczerbal et al., 2014,2019). Cabe señalar que los genitales externos de las perras con quimerismo de leucocitos XX/XY
pueden diferir, pero la virilización es bastante común (Szczerbal y Switonski, 2021), como también se observó en el caso descrito en el presente estudio.
En concordancia con los presentes hallazgos, en un conocido síndrome de freemartin en el ganado bovino, que también está asociado con el
quimerismo leucocitario XX/XY, rara vez se observa este tipo de virilización.Pádula, 2005). El fenotipo de las perras con el quimerismo es bastante similar
al de las hereditarias testiculares u ovotesticulares XX (SRYnegativo) DSD (Nowacka-Woszuk et al., 2019). Hallazgos como resultado del diagnóstico
citogenético y evaluaciones para elSRYgen en las células sanguíneas y otros tejidos (p.ej, folículos pilosos) son muy importantes para un diagnóstico
fiable.
Las translocaciones robertsonianas (fusiones céntricas) son los reordenamientos cromosómicos más frecuentes informados en perros; sin
embargo, la concurrencia con el fenotipo DSD aparentemente es incidental.Dzimira et al., 2018). Sin embargo, existe un informe en el que se
pensaba que el fenotipo DSD en las perras estaba causado por la pérdida de la región centromérica del cromosoma CFA23, como resultado de
la fusión céntrica entre CFA5 y CFA23. Se sospechó que esta pérdida podría afectar la secuencia reguladora de los genes localizados en el
cromosoma CFA23 (FOXL2yCTNN1B) e involucrados en el desarrollo reproductivo (Switonski et al., 2011). Curiosamente, el animal con el
mosaicismo 77, XX, rob/78, XX en el presente estudio tenía trastornos del desarrollo reproductivo pronunciados. Este animal tenía una vulva
que contenía una estructura similar a un pene pero que carecía del tejido óseo típicamente presente en el pene del perro, y un ovotestículo
con una calcificación inusual dentro de los folículos ováricos. El cariotipo en mosaico, con muy pocas metafases con la fusión céntrica,
aparentemente no contribuyó al fenotipo DSD. Los antecedentes moleculares, por lo tanto, deben tenerse en cuenta al hacer estos
diagnósticos. La virilización de perros XX puede estar asociada con el número de copias delSOX9gen, así como con un mayor número de
copias en la región CNV (CNVR1) aguas arriba de este gen (Nowacka-Woszuk et al., 2019). En el presente estudio, sin embargo, no se
detectaron estas asociaciones.
Curiosamente, en el animal del Caso 2, hubo calcificación de los folículos ováricos. Esta calcificación ocurre en ovarios normales, así como
en animales con tumores de ovario. Hubo esta característica reportada en una etapa temprana de gonadoblastoma en pacientes humanos
con ovarios anormales (Clemente et al., 2020). Además, esta anomalía se presenta en varios tipos de disgenesia gonadal en pacientes con
cromosoma Y y en ovarios de mujeres con cariotipo femenino normal (46,XX), aunque con fenotipo virilizado (Kanagal et al., 2013). No hay
información sobre la calcificación ovárica en perros XX DSD, sin embargo, algunos de los animales con este trastorno pueden desarrollar un
gonadoblastoma (Dzimira et al., 2015).

5. Conclusión

Los hallazgos del presente estudio indican que existen diferentes anomalías cromosómicas en perros con DSD. Cuatro de los animales tenían:
mosaicismo XXX/XX, translocación del autosoma X en mosaico y no mosaico, y quimerismo de leucocitos XX/XY. Esto podría estar asociado con el
fenotipo DSD, mientras que la presencia de fusión céntrica en forma de mosaico podría ser una coincidencia. Estos hallazgos indican que además de un
DSD XX testicular u ovotesticular bastante común en esta especie (Nowacka-Woszuk et al., 2019;Szczerbal et al., 2019) las mutaciones cromosómicas
también son causas importantes de estos trastornos.
Se postula que la identificación del complemento cromosómico sexual debería ser la primera acción en el diagnóstico de DSD en perros. Aunque la
detección de un complemento anormal de cromosomas sexuales (aneuploidías y quimerismo XX/XY) es fácil de lograr, la identificación de
translocaciones que involucran estos cromosomas es más difícil, especialmente en el caso de mosaicismo con detección en solo una pequeña proporción
de metafases donde la mutación está presente. Por lo tanto, se recomienda el análisis de un mayor número de extensiones de metafase (al menos 50) y
el uso de procedimientos FISH con sondas específicas de cromosomas sexuales.

Declaración de contribución de autoría CRediT

Izabela Szczerbal:Conceptualización, Metodología, Investigación, Redacción, Visualización.Wojciech Nizanski:Recursos,

Investigación, Visualización.Estanislao Dzimira:Investigación. Visualización.Joanna Nowacka-Woszuk:Investigación, Visualización.
Joanna Stachecka:Investigación.Janusz Biezynski:Recursos, Investigación, Visualización.Zuzanna Ligocka:Investigación. Dariusz
Jagodka:Recursos, Investigación, Visualización.Hanna Fabian-Kurzok:Recursos, Investigación, Visualización.Marek Switonski:
Conceptualización, Metodología, Investigación, Redacción, Análisis formal.

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Declaración de interés en competencia

Los autores no reportan declaraciones de interés.

Agradecimientos

Este estudio fue financiado por el Centro Nacional de Ciencias de Polonia, proyecto no. 2016/23/B/NZ9/03424, y por el fondo estatutario del
Departamento de Genética y Cría Animal (no. 506.534.05.00), Universidad de Ciencias de la Vida de Poznan, Polonia. Deseamos agradecer a Zuzanna
Dudzinska-Bankowska por recolectar las muestras del perro DSD.

Apéndice A. Datos complementarios

El material complementario relacionado con este artículo se puede encontrar, en la versión en línea, en doi:https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.
2021.106771.

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