SEX REVERSAL SYNDROME (64,XY; SRY-POSITIVE) IN A MARE

DEMONSTRATING MASCULINE BEHAVIOUR

SÍNDROME DEL SEXO REVERSO

(64, XY, SRY-POSITIVO) EN UNA YEGUA
DEMOSTRANDO UN COMPORTAMIENTO
MASCULINO
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
CITOGENÉTICA
RAFAEL JOSE MINDIOLA
COD:732513
 SÍNDROME DE SEXO
REVERSO
• Es un grupo heterogéneo de
malformaciones descritos en el
desarrollo de la reproducción.
• fue diagnosticado en varios mamíferos.
• Síndrome de sexo reverso es la causa
principal de infertilidad yegua.
 GEN SRY

• El gen SRY es el que determina que las

aproximadamente 4000 células
germinales de los órganos genitales del
embrión empiecen a formar los
testículos, y así poder comenzar la
producción de espermatozoides.
• el análisis de la intersexualidad es
generalmente realizado con el uso de la
citogenética y las técnicas moleculares.
• El objetivo principal de la aproximación
molecular es el gen SRY.
• Hasta ahora, este gen no ha sido detectado en
el XX o XY. (Buoen et al.2000; Bugno et al. 2003)
• En este trabajo se describe un caso de una
yegua con un cariotipo masculino (64, XY), la
presencia del gen SRY y una alta
concentración de testosterona.
 MATERIALES Y MÉTODOS
• Una yegua pura sangre de 5 años de edad.
• Se sometió a Análisis citogenéticos y moleculares,
debido a  infertilidad y comportamiento
masculino.
• Examen Ultrasonido
 Falta del útero
 Gónadas y ubre hipoplásicas.
 Los órganos reproductores externos parecían
ser normales
 ANÁLISIS CITO GENÉTICO

• Se realizo un cultivo de linfocitos para lograr la

propagación de los cromosoma.
• Se uso Giemsa y el tinte del cromosoma X
con el uso de una sonda de pintura.
• Se aplico Fluorescencia in situ en el
cromosoma X.
 GENÉTICA MOLECULAR
• El ADN genómico se aisló de la sangre de la yegua con el
síndrome sexo reverso, y además de un caballo normal y
una yegua normal.

• Los fragmentos de genes SRY fueron amplificados con el

uso de cuatro pares de primers.

• Las reacciones de PCR con los dos pares cebadores (ESRY y

SRYP1/P2) . se realizaron de acuerdo a Bugno y otros.
(2003), y con primeres universales de acuerdo a Griffiths y
Tiwari (1993).

• Sobre la base de la secuencia del gen SRY equina; fue

diseñado el cuarto par primer - SRY-E, este abarca casi
toda la parte de codificación del gen (684 pb).
• Las secuencias primer fueron los siguientes:
SRY-E-F: 5’ AAT TTT CCC AACTCG TTA TCT TC 3’.
SRY-E-R: 5’ AGG GTG CGGTGT TGC TGC GAC 3’.
• El perfil de amplificación fue de la siguiente
manera:
95 C (Celsius) 5 min.
95 C, 30 s.
57 C, 40 s.
72 C, 1 min.
72 C, 7 min.
y en total 35 ciclos.
 GENÉTICA MOLECULAR

• El producto se analizó por electroforesis en

1,5% de gel de agarosa.
• Las muestras de ADN de la yegua con el
síndrome de sexo reverso y tres sementales
normales fueron secuenciados en el Instituto
de Bioquímica y Biofísica de la Academia Polaca
de Ciencias de Polonia.
• Fueron amplificados y digeridos con la
restricción HaeII.
 ENDOCRINOLOGÍA TÉCNICA

• La concentración de testosterona se
analizó con el uso de la técnica de
radioinmunoanálisis y el Espectro de
testosterona.
 S
D IO
TU
ES
• El análisis citogenético de caballos
intersexuales reveló un complemento
cromosómico masculino en todos los
diferenciales observados en la metafase.
• la tinción Giemsa de 30 metafases fueron
analizadas y en todos los 64 cromosomas se
encontró (27 dos- brazos y 37 de un brazo).
• La sonda de coloración hibridizó al
cromosoma X y una parte del cromosoma Y.
Cabe señalar que las pinturas aplicadas a la
sonda amplian el sector del Cromosoma Y.
Esto también se encontró en la propagación
en metafase, procedentes de machos
normales.
• El caso estudiado es muy diferente a otras yeguas con el
cromosoma complemento XY (SRY-negativo).

• El primer caso de la yegua XY con disgenesia gonadal,

estudiado con el uso de técnicas moleculares fue reportado
por Pailhoux (1995).

• Los autores aplicaron el análisis de Southern blot y no se

detectaron el dominio de la unión del ADN del gen SRY, pero el
gen ZFY estaba presente. Makinen (1999).

• También se describe como una yegua (64, XY SRY, negativo),

que no presentó un comportamiento masculino y en lugar de
las gónadas rudimentarias tenía vetas fibrosas.
• Un caso similar fue diagnosticado por Abe (1999) y
se sugirió que el gen SRY se ha eliminado y se ha
propiciado el desarrollo intersexual.

• Otra explicación de tal situación fue postulado por

Bugno (2003), quien también informó sobre las
yeguas XY y SRY-negativos con gónadas hipoplásicas
y un comportamiento femenino normal.

• Los autores especularon que la ausencia del gen SRY

podría ser el resultado de un cruce anormal entre
cromosomas X y Y durante la espermatogénesis del
macho.
 O S
A D
L T
S U
R E
Toda la sonda de coloración de cromosomas X fue
aplicada; se encontró en todos las 100 diferenciales
metafásicas y un cromosoma X y un Cromosoma Y.

Figura 2 cromosomas pintados con la sonda de cromosoma X todo

de no propagación de la metafase (64, XY) de la yegua intersexuales.
Los cromosomas X e Y se indican con flechas.
 Los fragmentos amplificados y digeridos de la ZFX
y los genes ZFY revelaron el mismo patrón para caballos
intersexuales y caballos normales.

Figura 4 El análisis molecular del gen SRY. Los productos de PCR después de
amplificación con SRYP1/P2 (618 pb) y SRYE (429 pb) pares de primers.
Carril 1, estándar de peso molecular (Gene Ruler TM 50 pb DNA Ladder, Fermentas), carriles 2 y 6,
el caballo de la intersexualidad, calles 3 y 7, yegua normal;
carriles 4 y 8, caballo normal, carriles 5 y 9, carriles de control.
 La Reacción de PCR con cuatro diferentes conjuntos de cebadores reveló
la presencia del gen SRY en el inter-sexo del caballo.

Figura 3 El análisis molecular de los genes ZFX / ZFY. La digestión de los productos de
PCR con la enzima de restricción HaeIII. Carril 1, el peso molecular estándar (Gene
Ruler TM 50 pb DNA Ladder, Fermentas); carril 2, el caballo intersexual (bandas de 448
pb y 403 pb), carril 3, yegua normal (banda de 403 pb), carril 4, semental normal
(bandas de 448 y 403 pb)
 CONCLUSIONES
• Los resultados también sugieren que esta yegua tenía
testículos. Los siguientes hechos apoyan esta hipótesis:
• (a) la presencia del cromosoma Y y el gen SRY.
(b) una concentración alta de la testosterona .
(c) comportamiento masculino.
• Teniendo en cuenta todos los datos, se asumió que se
trataba de un caso de síndrome de insensibilidad
andrógena.
• Sin embargo, nuevos estudios sobre la estructura molecular
del gen receptor de andrógenos son postulados para
confirmar que el caso observado de intersexualidad es
causada por una mutación de este gen.