Universidad Autónoma de Chiapas

Escuela de Ciencias Químicas

Ocozocoautla
Licenciatura en Químico Farmacobiólogo

Proyecto de Investigación 1

Evaluación de los efectos de la activación de los receptores D4 de la corteza

del Núcleo Accumbens en la ingestión de una dieta palatable

DOCENTE:
MTRA. JOSSELIN CAROLINA CORZO GÓMEZ

INTEGRANTES:
NÚÑEZ GÓMEZ JESÚS WILFREDO
PÉREZ SÁNTIZ JUAN DIEGO

8° SEMESTRE

Ocozocoautla de Espinosa, Chiapas, Febrero de 2020

Contenido
IDEAS: ............................................................................................................................................... 2
INTRODUCCIÓN............................................................................................................................. 3
MARCO TEÓRICO ......................................................................................................................... 4
Sobrepeso y Obesidad ................................................................................................................... 4
Factores que conduce el desarrollo a obesidad ........................................................................... 4
Mecanismo fisiologicos a nivel cerebral ...................................................................................... 5
Dopamina .................................................................................................................................... 6
Glutamato .................................................................................................................................... 6
Circuito de la recompensa ............................................................................................................ 7
Núcleo Acummbens ....................................................................................................................... 7
Región Shell NAc........................................................................................................................ 7
PLANEAMIENTO DEL PROBLEMA: ......................................................................................... 8
JUSTIFICACIÓN ............................................................................................................................. 8
HIPÓTESIS ....................................................................................................................................... 9
METODOLOGÍA ........................................................................................................................... 10
Animales de laboratorio.............................................................................................................. 10
Fármacos ...................................................................................................................................... 10
Dieta y programa de restricción ................................................................................................ 10
Cirugía estereotaxica................................................................................................................... 10
REFERENCIAS .............................................................................................................................. 12

IDEAS:
• Activación de los Receptores D4 dopaminérgicos
• Núcleo de Accumbens Shell como parte del circuito de recompensa.
• Características de un alimento palatable o características hedónicas
• Glutamato y dopamina, en el control alimentario.
 INTRODUCCIÓN
Los problemas de obesidad a escala mundial ha alcanzado proporciones epidémicas,
y cada año mueren, como mínimo, 2.8 millones de personas a causa de la obesidad o
sobrepeso (OMS, 2017). A nivel mundial, el sobrepeso y la obesidad están vinculados con
un mayor número de muertes que la insuficiencia ponderal (OMS, 2018). Factores que
predispone el desarrollo de obesidad en las personas puede deberse a influencias
ambientales hasta alteraciones genéticas (Cooper & Al-Naser, 2006). Así como el
desequilibrio energético entre calorías consumidas y gastadas que se ha producido por un
aumento en la ingesta de alimentos hipercalóricos ricos en grasa, sal y azúcares, pero
pobres en vitaminas, minerales y otros micronutrientes. Además de esto, ha habido un
grave descenso en la actividad física diaria (Benítez Andrades, 2014).

Existen numerosas sustancias que actúan directa o indirectamente sobre centros específicos
hipotalámicos que regulan la saciedad y la ingesta de alimentos de acuerdo al homeostasis
energética. La neurotransmisión mediada por dopamina (molécula perteneciente a las
catecolaminas), está implicada en el control de una gran variedad de funciones como la
ingesta de alimentos y regulación energética (Gago-Calderón , 2017). Estudios realizados
por Tejas-Juárez, Mancilla-Díaz, Floran, & Escartín-Pérez (2010), demuestran que
activando los receptores D2 y D3 en el núcleo paraventricular hipotalámico (NPH) produce
efectos inhibitorios, disminuyendo la ingesta de alimento. Así mismo, en la corteza del
núcleo Accumbens (NAcS), posibilita la emisión de respuestas a estímulos tanto apetitivos
como aversivos y contribuyendo de manera sustancial en una interfase límbico-motora
(Fernández-Espejo, 2000).

Estudios realizados en terminales de axones, membranas plasmáticas y vesiculares,

demostraron que el NAcS contaba con el 65% de la presencia del receptor D4, mientras que
en dendritas y espinas dendríticas solo el 22%, evidenciando así la implicación presináptica
de los RD4 (Svingos, Periasamy, & Pickel, 1999).

Los receptores dopaminérgicos D4 (RD4) se expresan presinápicamente en las neuronas

espinosas medianas del Núcleo Accumbens (Tejas-Juárez, Mancilla-Díaz, Floran, &
Escartín-Pérez, 2010). Por otro lado, el bloqueo de los receptores a glutamato NMDA,
AMPA y Kainato en el NAcS dan lugar a una respuesta a la alimentación, lo que sugiere
que dichos receptores pueden desempeñar un papel relevante en el control del
comportamiento alimentario (Maldonado-Irizarry, Swanson, & Kelley, 1995), tomando en
cuenta las investigaciones que son base para este trabajo se pretende evaluar el efecto de
bloqueo de los receptores de glutamato NMDA en NAcS bajo la condición de una dieta
palatable, así como evaluar los efectos de la activación de los receptores D4 del NAcS, y
evaluar el efecto de activación de los receptores D4 en NAcS y el bloqueo de los receptores
a glutamato NMDA, cuando se administra simultáneamente los fármacos a usar.

MARCO TEÓRICO
Sobrepeso y Obesidad
La obesidad ha alcanzado proporciones epidémicas a nivel mundial, y cada año mueren,
como mínimo, 2,8 millones de personas a causa de la obesidad o sobrepeso. Aunque
anteriormente se consideraba un problema confinado a los países de altos ingresos, en la
actualidad la obesidad también es prevalente en los países de ingresos bajos y medianos
(OMS, 2017). A nivel mundial, el sobrepeso y la obesidad están vinculados con un mayor
número de muertes que la insuficiencia ponderal (OMS, 2018).

Factores que conduce el desarrollo a obesidad

Las causas que conducen a la obesidad son diversas, pero el desequilibrio energético entre
calorías consumidas y gastadas que se ha producido por un aumento en la ingesta de
alimentos hipercalóricos ricos en grasa, sal y azúcares, pero pobres en vitaminas, minerales
y otros micronutrientes. Además de esto, ha habido un grave descenso en la actividad física
diaria (Benítez Andrades, 2014).

La creciente incidencia de esta patología de acuerdo a Tejas-Juárez, Mancilla-Díaz, Floran,

& Escartín-Pérez (2010); Cooper & Al-Naser (2006) una de las causas de la obesidad,
involucra factores como las alteraciones genéticas, conductuales y ambientales, lo que
conduce la prevalencia de esta enfermedad, y el desequilibrio del homeostasis energética es
la alteración más frecuente.

Para garantizar una nutrición adecuada, es necesario que el cerebro tenga un circuito
intrínseco que regule los niveles de varios nutrientes en la sangre y en las tiendas del cuerpo
(Saper, Chou, & Elmquist, 2010). Aunque dichos circuitos regulan los nutrientes que se
aprovechan de los alimentos, aparece las características de un alimento, ya que este juega
un papel fundamental en la ingesta alimentaria. Sin embargo, tales circuitos pueden llegar a
fallar, provocando que los mecanismos fisiológicos que regulan la ingesta de alimentos
quede disfuncional causando efectos, ya sea contrarios al que por naturaleza debe de hacer,
o ningún efecto.

Palatabilidad de un alimento

El sabor es más que una experiencia sensorial. Es un signo de valor nutricional o peligro
que ha evolucionado como mecanismo de supervivencia en mamíferos. La forma de
experimentar la comida no se limita a su sabor. El aroma, la vista, el oído e incluso el tacto
pueden afectar sustancialmente las preferencias alimentarias (Ribeiro & Santos, 2013) pues
se sabe que aquellos alimentos que presentan una percepción dulce o grasosa, es más
sabrosa que aquellos alimentos que carecen o portan cantidades mínimas de estos
nutrientes.

La relación que existe entre la palatabilidad de un alimento con la obesidad, es muy grande,
ya que se considera que todo alimento con grasa es más agradable para un individuo con
obesidad además que se ve más favorecida si posee características dulces.

Mecanismo fisiologicos a nivel cerebral

Estos mecanismos fisiológicos, ha demostrado que son participes en la regulación de la
ingesta de los alimentos, dichos procesos ocurren a nivel del sistema nervioso central
(SNC), los cuales múltiples señales y regiones contribuyen al control del comportamiento
de alimentación y la homeostasis energética. Por ejemplo, en el hipotálamo, el núcleo
paraventricular (PVN) recibe una serie de proyecciones con péptidos y neurotransmisores
para controlar la motivación homeostática para comer (Tejas-Juárez, Mancilla-Díaz, Floran,
& Escartín-Pérez, 2010).

A nivel cerebral y neuroquímico, existen numerosas sustancias que actúan directa o

indirectamente sobre centros específicos hipotalámicos que regulan la saciedad y la ingesta
de alimentos de acuerdo al homeostasis energética. La neurotransmisión mediada por
dopamina (molécula perteneciente a las catecolaminas), está implicada en el control de una
gran variedad de funciones como la ingesta de alimentos y regulación energética (Gago-
Calderón , 2017).

Dopamina
La dopamina, ejerce sus efectos al unirse a las dos familias de receptores dopaminérgicos,
los D1-like (subtipos D1 y D5) y D2-like (subtipos D2, D3 y D4). Las neuronas
dopaminérgicas se encuentran distribuidas en cuatro vías que incluyen diferentes áreas
cerebrales. El Sistema Mesolímbico, cuyos cuerpos celulares se originan en el núcleo
localizado en la porción ventral del cerebro medio y cuyos axones proyectan a la amígdala,
área septal y principalmente en el núcleo Accumbens (NAc) (Mata-Esquiviaz, 2012).

De acuerdo con los estudios realizados por Tejas-Juárez et al (2010), la activación de los
receptores D2 y D3 en el núcleo paraventricular hipotalámico (NPH) produce efectos
inhibitorios, disminuyendo la ingesta de alimento.

La activación del receptor D4 promueve el efecto opuesto, induciendo además la

disminución en la liberación de glutamato y retrasando la saciedad (Tejas et al., 2014).

Glutamato
Estudios realizados por Maldonado-Irizarry, Swanson, & Kelley, (1995), indican que el
bloqueo de los receptores a glutamato NMDA, AMPA y Kainato en el NAcS dan lugar a
una respuesta a la alimentación, lo que sugiere que dichos receptores pueden desempeñar
un papel relevante en el control del comportamiento alimentario.

Estos procesos de la inhibición o aumento de la saciedad deben estar regulada por

receptores ionotrópicos: AMPA, Kainato y NMDA.
Circuito de la recompensa
El sistema de recompensa mesolímbico funciona como un centro de recompensa donde
varios mensajeros químicos, que incluyen serotonina, encefalina, ácido γ-aminobutírico
(GABA), dopamina (DA), acetilcolina (ACh), entre otros, actúan juntos para proporcionar
una liberación de DA en el núcleo Accumbens (NAc).

Núcleo Acummbens
El núcleo Accumbens (NAc), forma parte del circuito de la recompensa, contiene neuronas
espinosas medianas cuyo neurotransmisor principal es ácido γ-aminobutírico .(GABA)
(Blas de la Peña, 2012).

Región Shell NAc

La región Shell del nucleo Accumbens (NacS), se caracteriza por recibir múltiples señales,
tanto dopaminérgicas desde el Área Tegmental Ventral (VTA), como glutamatérgicas
desde el hipocampo, la amígdala centromedial y corteza prefrontal, lo que posibilita la
emisión de respuestas a estímulos tanto apetitivos como aversivos y contribuyendo de
manera sustancial en una interfase límbico-motora (Fernández-Espejo, 2000).

Los receptores dopaminérgicos D4 (RD4) se expresan presinápicamente en las neuronas

espinosas medianas de la región Shell del núcleo Accumbens (NAcS) (Tejas-Juárez,
Mancilla-Díaz, Floran, & Escartín-Pérez, 2010). Estudios en NAcS, se demostró que el
65% de los receptores D4 se encontraban en terminales axonales, membranas plasmáticas
y vesiculares, mientras que en dendritas y espinas dendríticas solo el 22%, evidenciando así
la implicación presináptica de los RD4 (Svingos, Periasamy, & Pickel, 1999)
 PLANEAMIENTO DEL PROBLEMA:
La obesidad se ha convertido en una de las enfermedades con más prevalencia a nivel
mundial, afectando a gran parte de la población adulta e infantil. Es un factor de riesgo para
la ocurrencia de enfermedades crónicas, como son la diabetes y la hipertensión e inclusive
el cáncer. Aunque la obesidad puede ser causada por múltiples factores (genéticos,
alimenticios o conductuales, además de defectos metabólicos), es evidente que la
palatabilidad del alimento juega un papel preponderante en la ocurrencia de la ingesta
calórica excesiva.

Estudiar la relación entre el efecto de la activación de los RD4 y el bloqueo de los

receptores NMDA, por lo que se propone la siguiente pregunta de investigación: ¿La
activación de los receptores a glutamato NMDA prevendrá los efectos hiperfágicos de la
activación de los RD4 del NAcS sobre el consumo de una dieta palatable?

JUSTIFICACIÓN
Los resultados que se conocen al día de hoy, explican en parte los mecanismos a nivel
cerebral que participan en la modulación del comportamiento alimentario, tanto del hambre
como de la saciedad. Estos mecanismos se llevan a cabo a nivel del sistema nervioso
central (SNC), en regiones como el Núcleo de Accumbens (entre otras). La corteza del
Núcleo Accumbens (NAcS) forma parte del circuito de la recompensa y recibe
proyecciones GABAérgicas, glutamatérgicas y dopaminérgicas, de las cuales, esta última
es la principal implicada en los procesos mediante los cuales los estímulos adquieren su
calidad de satisfactorios y placenteros (por ejemplo, los alimentos que presenten alta
palatabilidad). Uno de los receptores a dopamina que se encuentra en el NAcS es el
Receptor D4 dopaminérgico (RD4). La activación del RD4 aumenta la ingesta de leche
condensada, sin embargo, se desconoce el mecanismo neuroquímico que facilita esta
conducta apetitiva. En estudios de microdiálisis in vivo en el NAcS, la activación de los
RD4 disminuye la liberación de glutamato, pero no de GABA y dopamina. Se ha descrito
que el glutamato contribuye con la regulación de la ingesta de los alimentos, ya que cuando
este neurotransmisor incrementa sus niveles en el NAcS, se favorece la saciedad. Estos
procesos de la inhibición o aumento de la saciedad deben estar regulada por receptores
ionotrópicos: AMPA, Kainato y NMDA.

Se busca evaluar la respuesta ante el bloqueo de los receptores NMDA, en la NAcS,

respondiendo si dicho receptor podrá prevenir la ingesta de alimentos, así como ver los
efectos cuando se usa un agonista PD-168,077 y antagonista selectivo AP5
simultáneamente, para ver si hubo inhibición de la saciedad.

HIPÓTESIS
Se espera que la activación de los RD4 en el NAcS aumentará la ingesta de alimento
palatable. Además, si los receptores a glutamato NMDA en el NAcS son los responsables
de inhibir la ingestión de alimento palatable, la activación de los receptores NMDA
prevendrá el efecto hiperfágico del agonista de los RD4. En caso contrario, si los efectos
del inhibitorios de la ingestión de alimento del glutamato en el NAcS son mediados por
receptores AMPA/Kainato, el aumento del consumo de la dieta palatable producido por la
activación de los RD4 no será modificada por la activación de los receptores NMDA en el
NAcS.

OBJETIVOS
Objetivo general
Evaluar el efecto de bloqueo de los receptores a glutamato NMDA en NAcS bajo la
ingestión de una dieta palatable.

Objetivos específicos
Evaluar los efectos de la activación de los receptores D4 del NAcS en la ingestión de una
dieta palatable.

Evaluar los efectos de activación de los receptores D4 en NAcS y el bloqueo de los

receptores a glutamato NMDA, en la ingestión de una dieta palatable, cuando se administra
simultáneamente cada fármaco.
 METODOLOGÍA
Animales de laboratorio
Ratas macho de la cepa Wistar (5 en total), con un peso entre los 300-330 gr al iniciar el
protocolo experimental. Las ratas se mantenían en cajas habitación individuales con el ciclo
luz/oscuridad de 12x12 horas invertido (las luces se apagaban a las 16:00 horas) y se
mantenía una temperatura de 21 ± 2 °C, con comida y agua ad libitum antes de la cirugía
estereotaxica. Todas las condiciones y procedimientos empleados, fueron en acorde a la
Norma Oficial Mexicana (NOM-062-ZOO-1999), el cual da las especificaciones técnicas
para la producción, cuidado y uso de los animales de laboratorio. Las ratas fueron
proporcionadas por el Bioterio de la FES-Iztacala.

Fármacos
PD168,077 (3-(4-[chlorophenyl] piperazin-1-yl)-methyl-1H-pyrrolo [2,3-B] pyridine
trihydrochloride) agonista de los RD4 (a una concentración de 0,1 µg), y AP5 ((2R)-amino-
5-phosphonovaleric acid) antagonista de los receptores NMDA (a una concentración de 2
µg).

Dieta y programa de restricción

Los sujetos experimentales fueron expuestos a un programa de restricción alimentaria
durante 6 días, el programa constó de dos partes: a) privación del alimento por 22 horas y
b) acceso al alimento por dos horas: alimento estándar (1 hora) y comida palatable (leche
condensada + 10 % de sacarosa; 1 hora). Se midió el peso corporal, además de que se
resgistro los pesos iniciales y finales del alimento sólido y de leche condensada. Una vez
que se alcanza estabilidad en la ingesta de ambos alimentos se procede a la inyección de los
fármacos.

Cirugía estereotaxica
Los sujetos se anestesiaron con una mezcla de ketamina y xilazina (112.5 mg/kg; 22.5
mg/kg, de peso respectivamente; ip). Se les implantó una cánula de acero inoxidable (23G,
15 mm de largo) en la corteza del núcleo Accumbens (AP: +1,5; LM: -0,6 relativo a
bregma y DV: -6,0 relativo a la dura madre). Al finalizar se les administró enrofloxacina
5% (im) como antibiótico Las ratas tuvieron 5 días de recuperación con alimento y agua ad
libitum durante 5 días.

Administración de fármacos intracanular

Se hizo una microinyección del fármaco, usando una jeringa Hamilton mediante un
microinyector adaptado (1.5 cm de longitud), el cual permaneció insertado en la cánula de
acero implantado durante la cirugía, siendo este el conducto y la guía para la perfusión del
fármaco, se administró antes de la evaluación de la ingesta de leche condensada de acuerdo
al siguiente procedimiento farmacológico: Vh+AP5 y PD-168,077+AP5. la administración
del farmaco fue bajo una velocidad de perfusión de 1 µl/min.

Registros conductuales
Los registros conductuales, se determinó después de la administración de los fármacos,
durante el ciclo de oscuridad se proporciona el alimento palatable evaluando la ingesta
promedio de consumo del alimento en una hora durante 6 días.

Histología
Al final de los procedimientos experimentales, las ratas fueron sacrificadas con una
sobredosis de pentobarbital sódico intraperitoneal, se extrajo el cerebro y se fijó en una
solución de formaldehido al 10% durante 24 horas. se hicieron cortes coronales de 300 µm
de grosor con ayuda de un vibratomo para la evaluación de los sitios de inyección de los
fármacos. Se tomaron en cuenta, los datos de aquellos animales que fueron inyectada en la
zona correcta de NAcS.
REFERENCIAS

Benítez Andrades, J. A. (2014). Vitónica. Obtenido de Factores que nos conducen a la

obesidad: https://www.vitonica.com/prevencion/factores-que-nos-conducen-a-la-
obesidad

Blas de la Peña, M. (14 de Junio de 2012). Glucocorticoides e interacción de

neurotransmisores en el núcleo accumbens: efecto del enriquecimiento ambiental y
del envejecimiento. Obtenido de Tesis doctoral:
https://eprints.ucm.es/14564/1/T33263.pdf

Cooper, S., & Al-Naser, H. (2006). Dopaminergic control of food choice: contrasting effects
of SKF 38393 and quinpirole on high-palatability food preference in the rat.
Neuropharmacology., 50(8), 953-963. Obtenido de
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16549074

Fernández-Espejo, E. (2000). Cómo funciona el núcleo Accumbens?. Revisión. Revista de

Neurología, 30(9), 845-849. Obtenido de
http://alojamientos.us.es/dfmb/emilio/accumbens.pdf

Gago-Calderón , B. (2017). Interacción de los receptores dopaminérgicos D4 y opioides tipo

μ en el estriado: implicación en la fase inicial del consumo de morfina. Tesis
doctoral. Obtenido de Departamento de Biología Celular, Genética y Fisiología:
https://riuma.uma.es/xmlui/bitstream/handle/10630/2519/1711181x.pdf?sequen
ce=1&isAllowed=y

Maldonado-Irizarry, C., Swanson, C., & Kelley, A. (1995). Glutamate receptors in the
nucleus accumbens shell control feeding behavior via the lateral hypothalamus.
The Journal of Neurocience, 15(10), 6779-88. Obtenido de
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7472436
Mata-Esquiviaz, M. I. (20 de Junio de 2012). Evaluación de los niveles de dopamina y de los
receptores D2-like Dopaminergicos en las respuestas a estímulo motivacionales de
recompensa y de castigo en ratas. Obtenido de Tesis de maestria:
https://tesis.ipn.mx/jspui/bitstream/123456789/10179/1/260.pdf

OMS. (2017). 10 datos sobre la obesidad. Obtenido de Organización Mundial de la Salud:

https://www.who.int/features/factfiles/obesity/es/

OMS. (16 de Frebrero de 2018). Obesidad y Sobrepeso. Obtenido de Organización Mundial

de la Salud: https://www.who.int/es/news-room/fact-sheets/detail/obesity-and-
overweight

Ribeiro, G., & Santos, O. (2013). Recompensa alimentar: mecanismos envolvidos e

implicações para a obesidadeFood Reward: mechanisms involved and implications
for obesity. Revista Portuguesa de Endocrinologia, Diabetes e Metabolismo, 8(2),
82-88. Obtenido de
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1646343913000400#bib0205

Saper, C. B., Chou, T. C., & Elmquist, J. K. (2010). The Need to Feed: Homeostatic and
Hedonic Control of Eating. CelPress, 36(2), 199-211. Obtenido de
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0896627302009698

Svingos, A., Periasamy, S., & Pickel, V. (1999). Dopamine D4 receptors are strategically
localized for primary involvement in the presynaptic effects of dopamine in the rat
nucleus accumbens shell. Annals of the New York Academy of Sciences, 877, 679-
783. Obtenido de https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10415682

Tejas-Juárez, J. G., Mancilla-Díaz, J. M., Floran, B., & Escartín-Pérez, R. E. (2010). Los
receptores dopaminérgicos D2/D3 hipotalámicos participan en la regulación del
comportamiento alimentario. Revista Mexicana de Análisis de la Conducta, 36, 53-
69. Obtenido de
 https://www.researchgate.net/publication/262550802_Los_receptores_dopaminergico
s_D2D3_hipotalamicos_participan_en_la_regulacion_del_comportamiento_alimentario

Tejas Juárez, J. G., Cruz Martínez, A. M., López Alonso, V. E., García Iglesias, B.,
Mancilla Díaz, J. M., Florán Garduño, B., et al. (2014). Stimulation of dopamine D4
receptors in the paraventricular nucleus of the hypothalamus of male rats induces
hyperphagia: Involvement of glutamate. Physiology & Behavior, 272–281.